油橄榄果实表型性状多样性分析

对西昌市油橄榄国家林木种质资源库中88个油橄榄(Olea europaea Linn.)品种果实的15个质量性状和15个数量性状进行比较,对果实数量性状进行相关性分析和主成分分析,并基于果实数量性状对供试油橄榄品种进行聚类分析。结果表明:果实质量性状的Shannon-Wiener多样性指数、Simpson多样性指数和Pielou均匀度指数变化范围分别为0.438~1.094、0.247~0.671和0.098~0.243,平均值分别为0.735、0.451和0.164;果实数量性状的Shannon-Wiener多样性指数、Simpson多样性指数和Pielou均匀度指数变化范围分别为1.830~2.047、0.811~0.864和0.409~0.458,平均值分别为1.965、0.845和0.439;并且,果实数量性状的生物多样性指数平均值明显高于质量性状。相关性分析结果表明:果实数量性状之间大多存在极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)相关性,并且多数性状之间为正相关。主成分分析结果表明:前4个主成分的累计贡献率为86.115%,基本体现了油橄榄果实表型性状的主要特征。聚类分析结果显示:供试油橄榄品种被分为3个类群,类群Ⅰ包含41个品种,具有果实和果核大、果柄长且粗的特点;类群Ⅱ包含22个品种,果实和果核大小居中;类群Ⅲ包含25个品种,具有果实和果核小、果柄短且细的特点。综上所述,供试油橄榄品种果实表型性状多样性较为丰富,且果实数量性状多样性高于质量性状。

油橄榄不同冠层果实性状及品质变化

旨在为提高油橄榄冠层生产力及其树体的整形修剪、病虫害防治提供理论依据,以四川省凉山州主栽油橄榄品种克罗莱卡、科拉蒂、阿布桑娜、鄂植8号为研究对象,研究了4个品种油橄榄上、中、下冠层的果实表型性状、含油率、含水率,橄榄油酸度(以游离油酸含量计)、脂肪酸组成及相对含量变化情况,并采用主成分分析和熵权优劣解距离法(EW-TOPSIS)进行综合评价。结果表明:随着冠层部位由下至上,不同品种油橄榄单果质量、横径、鲜果含油率和不饱和脂肪酸相对含量呈上升趋势,而果形指数、硬度、酸度和饱和脂肪酸相对含量呈下降趋势,不同品种油橄榄鲜果含水率均为树体上部最低;主成分分析和EW-TOPSIS评价结果表明,同一品种冠层上部的综合评价值最大,中部次之,下部最小,其中鄂植8号上部在主成分分析中综合得分最高,科拉蒂上部在EW-TOPSIS中综合得分指数最高。综上,油橄榄树冠层上部的果实性状和品质优于中、下部,在整形修剪过程中,应对不同的冠层进行不同程度的整形修剪,通过改善通风透光性提高冠层生产力,防治病虫害。

果胶降解相关酶与果实成熟软化

果胶降解相关酶广泛存在于植物体的各个部分,目前在果实组织中已发现多种,主要包括内切多聚半乳糖醛酸酶、外切多聚半乳糖醛酸酶、果胶甲酯酶、果胶裂解酶、β-半乳糖苷酶、α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶和鼠李糖半乳糖醛酸酶,此类酶能使果胶多糖发生降解,进而使细胞间失去黏结作用,胞壁结构瓦解,从而导致果实组织松弛,质地下降。综述了果胶降解相关酶及其相应基因对果实成熟软化作用的研究进展,同时对果实成熟软化研究中存在的问题和将来的研究方向进行了探讨。

一种从果树成熟叶片提取DNA的方法

针对果树成熟叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,以8个果树树种的秋季成熟叶片为材料,采用改进的CTAB法对其基因组总DNA进行了提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和AFLP分析。结果表明,该方法从8种果树的成熟叶片中均能提取出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均在1.8～2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物组合为EcoRI-TA/MseI-CTT,EcoRI-TT/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的果树成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。

果树中基因枪法遗传转化的研究进展

目前,应用于果树遗传转化的方法主要有农杆菌介导法和DNA直接导入法。介绍了DNA直接导入法中基因枪转化技术的原理、类型和基因枪的轰击参数、受体材料、基因型、轰击前后的培养条件等对其遗传转化频率的影响,并系统地概述了基因枪法在选择标记基因、报告基因、改良果树性状相关基因、启动子及多基因遗传转化中的应用研究进展,同时对果树基因枪转化研究中存在的问题及应用前景进行了讨论。

SA、MeJA、ACC和苹果轮纹病病原菌诱导湖北海棠MhWRKY1基因的表达

【目的】从湖北海棠叶片中克隆MhWRKY1转录因子的全长cDNA序列,分析该基因在各种组织中(叶、茎、根)的表达特性,并分析SA、MeJA、ACC在叶、茎、根中诱导MhWRKY1基因的表达模式以及苹果轮纹病病原菌诱导条件下湖北海棠叶片中该基因的表达特性。【方法】利用电子克隆技术和RT-PCR验证相结合的方法,从SA诱导的湖北海棠全长cDNA文库中,克隆MhWRKY1转录因子的全长序列;利用生物信息学的方法对其进行结构和功能的初步分析;利用实时荧光定量RT-PCR技术分析该基因在不同组织中的表达以及在SA、MeJA、ACC和苹果轮纹病病原菌诱导下的表达特性。【结果】克隆了MhWRKY1基因的全长cDNA序列为1 338 bp,GenBank数据库登录号为FJ598139。生物信息学分析表明,该基因最大开放阅读框为993 bp,编码330个氨基酸。推导的氨基酸序列与杨树WRKY26、杨树WRKY20、大豆WRKY,马铃薯WRKY2、烟草WRKY、拟南芥WRKY7、水稻WRKY53的同源性分别为68%、68%、66%、60%,59%,49%和43%。该转录因子含有1个WRKY结构域,其N端含有1个WRKYGQK结构域,C端含有1个C2H2锌脂结构,属于第Ⅱ类型的转录因子。表达分析结果表明,MhWRKY1在叶和茎中的表达量较大,分别是根的4.81和3.75倍。在湖北海棠叶、茎、根中,SA、MeJA、ACC都可以诱导该基因的表达。另外,在所研究的72 h内,苹果轮纹病病原菌可以诱导该基因表达,且表达量在12 h达到最大,是未处理之前的9倍左右。【结论】MhWRKY1转录因子可能参与SA、MeJA和ET介导的植物抗病防卫反应的基本信号通路,并且参与对苹果轮纹病病原菌引起的防卫反应,在湖北海棠的的抗病过程中可能起着非常重要的作用。

适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法

以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。

一种改良的提取草莓属叶片总RNA的方法

探索一种新的适合草莓属(Fragariaspp.)组培苗、大田苗叶片总RNA的快速高效提取方法。试验以草莓叶片为材料,用改进的CTAB法对其RNA进行提取,并对提取的RNA进行了电泳检测、含量测定和RT-PCR检测。结果表明:用该RNA提取方法提取的RNA具有28 S rRNA、18 S rRNA和5.8 S rRNA 3条清晰的条带,且无降解。OD260/OD280在1.83至2.14之间,具有较高的纯度,且含量较高。用该RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经PCR扩增出现清晰的条带,说明该RNA提取方法提取的RNA可以满足进一步分子生物学试验的要求。

赤霉素在落叶果树生产中的应用

赤霉素在落叶果树上应用范围很广,具有诱导无子果实的形成、提高座果率、改善果实品质、防止落花落果、促进果实早熟、延迟果树花期、增加果品贮藏能力和打破休眠的调控作用。文章对其研究进展和作用机理进行了简要概述。

苹果无病毒树的生长和结果表现

连续 8年调查了富士、金矮生、甜黄魁及国光无病毒树的树高、冠径、干径、每株树的新枝总数、新枝总长等生长指标和进入初结果期的结果株率 ,均表明明显高于同品种、同树龄有病毒对照树。无病毒金矮生、富士和甜黄魁品种每株树的累积结果量分别比有病毒对照树高 54 .7%、45 .0 %和 41 .6 %。无病毒富士、金矮生及国光果实硬度明显大于相应品种的对照果 ;维生素C、总糖、总酸及果皮中花青苷含量均高于相应品种的对照。

桃野生种和地方品种种质资源亲缘关系的AFLP分析

利用AFLP技术对94份野生桃种质资源进行了DNA多态性分析,从64对E+2/M+3引物组合中筛选出9对引物用于扩增基因组DNA,共获得清晰可辨的236个标记,其中多态性标记为141个,多态性检出率为59.9%。UPGMA聚类结果显示,在遗传距离约为0.3267时,普通桃、陕甘山桃、光核桃3个种被聚为一类,与这3个种相近的为新疆桃,其次为甘肃桃,最远为山桃(白花山桃、红花山桃)。在遗传距离0.2178处,五月鲜扁干、白黏胡桃和珲春桃3份材料各自聚为一类。在遗传距离约0.1997处,普通桃又可明显分为4个组:组I包括原产于南方和西北地区的地方品种,且大部分南方蟠桃主要聚在此类;组II仅有油桃(甘肃酒泉)一个野生材料;组III包括野生毛桃和大部分原产于北方的地方品种,北方硬肉桃主要聚在这一类;组IV由白碧桃和白花山碧桃2个观赏桃品种组成。

砂梨EST-SSR引物开发及其应用

利用GenBank和GDR数据库中的995条梨EST序列开发砂梨SSR引物,并根据开发的EST-SSR引物对砂梨西子绿×喜水F1群体的遗传变异进行分析.结果发现：（1）60个SSR位点分布于54条EST序列中,占整个EST数据库的5.4%,其中二核苷酸重复基元出现频率最高,达51.7%,其次为三核苷酸重复基元占25%.23类重复基序中AT重复基序出现的频率最高,为32.3%.（2）利用开发的25对EST-SSR引物对西子绿×喜水F1群体的遗传变异分析结果表明,其中9对引物呈现多态性,多态性引物占设计引物的36%;多态性引物扩增产物在F1群体中的等位基因数（No）平均为2,有效等位基因数（Ne）平均为1.932 4,平均杂合度观测值（Ho）和期望杂合度（He）分别为1和0.480 9.

野生桃幼叶DNA提取方法的改良研究

以野生桃幼叶为材料,为适应AFLP分析要求,对常规SDS法、CTAB法、SDS-CTAB结合法以及改良CTAB法等4种基因组总DNA的提取方法的效果进行了比较研究。结果表明,常规SDS法难以去除桃幼叶组织中的蛋白质、多糖和酚类等杂质,使所提取的DNA呈黏稠状的浅褐色沉淀,难以溶解;CTAB法和SDS-CTAB结合法提取的桃基因组DNA,虽然蛋白质和酚类等杂质去除较干净,但对多糖类物质的去除能力仍然有限,且提取效果在品种间重复性较差;而改良CTAB法提取DNA完整性较好,杂质少,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化,通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析,完全满足实验要求。

不同继代培养次数对苹果八棱海棠离体培养和遗传转化的影响

以苹果八棱海棠离体新梢和幼叶为外植体,研究不同继代次数对其离体繁殖、再生和遗传转化的影响。结果表明,随着继代培养次数的增加,继代10次和48次的八棱海棠离体增殖倍数、生根能力、不定芽的再生频率、每外植体再生芽数和GUS基因瞬时表达率均显著高于继代5次的;继代10次的增殖倍数和GUS阳性率明显多于继代48次的,其它指标相互间差异不显著;说明继代10次的芽苗较适合用于八棱海棠离体培养的外殖体材料,其幼叶较适于遗传转化研究。

基于表型性状数量分类的梅品种遗传多样性分析

为了探明梅的亲缘关系和分析梅的遗传多样性,以南京农业大学梅种质资源圃保存的84个梅品种为试材,运用SPSS11.5对叶花果等31个表型性状进行Q聚类和主成分及因子分析,结果表明,欧氏距离2.58,84个梅品种分为5组,长农17等13个果梅品种为第1组;红梅等30个果梅品种为第2组;重叶梅等15个花梅品种为第3组;银红朱砂等9个花梅品种为第4组;小绿萼等17个花梅品种为第5组。透骨红居于花梅和果梅之间。31个表型性状中果实光亮度等10个性状对梅数量分类起重要作用。由此得出结论,花梅与果梅存在一定的遗传差异。

梅REMAP分子标记技术体系的优化及其应用

通过分析构成梅REMAP分子标记技术体系的主要成分适宜浓度、SSR引物选择性碱基的添加以及RE-MAP-PCR扩增产物检测的非变性PAGE最佳浓度,建立了适合梅REMAP分子标记的技术体系,并对24个梅品种的遗传多样性进行了分析。结果表明:(1)适宜梅REMAP-PCR的反应体系为:25.0μL总体积中,基因组DNA40.0 ng2、.5 mmol/L MgCl21.5μL、2.5 mmol/L dNTPs 2.0μL、10×PCR Buffer(TaKaRa)2.5μL、TaqDNA聚合酶1.5 U、10μmol/L LTR引物1.0μL、10μmol/L SSR引物1.0μL,且SSR引物的3′端加碱基可明显提高RE-MAP的扩增效果,但碱基数量无明显影响。(2)5.0%非变性PAGE电泳条带数量多,扩增范围广(300～2 000bp),且各品种扩增产物均可显示,能够清晰地反映品种间的多态性。(3)24个梅品种的遗传多样性分析显示,花梅的绿萼型及朱砂型分别聚在一起,这与形态学分类的结果一致,证明建立的REMAP技术体系的有效性和可行性。

离体条件下葡萄砧木‘5BB’植株再生体系研究

以葡萄砧木‘5BB’组培苗为试材,研究不同外植体类型、基本培养基、植物生长调节剂的种类及其浓度组合对‘5BB’植株再生的影响。结果表明:MS基本培养基为适合叶柄不定芽再生的基本培养基;着生于顶端第2、3节位的叶柄为适宜的外植体;适于叶柄不定芽再生的植物生长调节剂种类及质量浓度组合为2.5 mg/L BA+0.05mg/L IBA;叶柄不定芽再生率最高可达到43.33%。

桃种质资源亲缘关系的研究进展

种质资源是现代育种和生物技术研究的物质基础。桃种质资源亲缘关系的研究将为探讨桃的起源、进化、分类、育种和资源利用提供科学依据。本文从形态学、细胞学、孢粉学、生物化学及DNA分子标记等几个方面综述了桃种质资源亲缘关系的研究进展,探讨了桃种质资源亲缘关系的研究现状、前景及尚需解决的问题,并就进一步开展桃种质资源亲缘关系的研究进行了分析,提出桃种质野生种、近缘野生种及不同栽培品种群间的分子系统学关系是今后研究的重点。

山梨醇对李果肉组织总RNA提取的影响

探讨了不同浓度的山梨醇清洗溶液对李果肉组织中RNA提取效果的影响。经琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT-PCR等方法对RNA质量和产率进行了分析,结果表明:李果肉组织研磨后用山梨醇清洗溶液处理有利于总RNA的提取,而不添加山梨醇的清洗溶液,提取液中检测不到RNA,当清洗溶液中山梨醇浓度为1.10mol/L时,李果肉组织总RNA的产率明显高于山梨醇浓度为0.35 mol/L和3.00 mol/L时的产率;以不同贮藏天数的李果实为试材提取总RNA,其结果是一致的;通过RT-PCR扩增蛋白延伸因子EF-2基因,结果证明本试验提取的总RNA可以用于基因转录表达特性分析。

梅(Prunus mume)IRAP分子标记技术体系的建立

基于梅Ty1-copia类逆转座子的长末端重复序列信息设计IRAP引物,通过五因素四水平L16(45)的完全随机正交试验、不同浓度PAGE胶等的研究,建立了适合梅IRAP标记的技术体系。结果表明,体系总体积25μL,其中基因组DNA 30 ng、25 mmol·L-1 MgCl2 2.0μL、2.5 mmol·L-1 dNTPs 2.5μL、10×PCR Buffer 2.5μL、Taq DNA聚合酶1.0 U、10μmol·L-1 LTR引物1.0μL,加ddH2O至25μL为最优IRAP的PCR反应体系,以及6.0%和8.0%浓度的非变性PAGE胶均适于IRAP多态性检测。这为进一步利用IRAP分子标记研究梅的遗传多样性和亲缘关系等奠定坚实的基础。