第三代载药免疫脂质体及体内外寻靶研究

目的 研究载阿霉素第三代免疫脂质体的制备及体内外寻靶、抑瘤效果。方法 设计将人膀胱癌单抗与聚乙二醇羧酸 (PEG COOH)端相联 ,使构成的脂质体既充分发挥PEG的保护功能 ,延长药物血循环时间 ,又使单抗伸展在外部充分发挥其寻靶作用 ,即第三代免疫脂质体 (IML)。进而研究载抗癌药的免疫脂质体的制备方案 ,制备出阿霉素免疫脂质体 (IML ADM)使达到对药物高包封、高稳定 ,又不降低单抗活性的目的。以人膀胱癌靶细胞EJ和人直肠癌非靶细胞LOVO进行体外杀伤和体内肿瘤的抑瘤实验。结果 IML ADM对EJ细胞和LOVO细胞杀伤 ,及对EJ细胞移植瘤体的抑制与对照组比较均有显著性差异。

脂质体肝实质细胞靶向性研究

目的 脂质体经配体修饰后介导受体细胞 ,以达靶向给药。方法 肝实质细胞上无唾液酸糖蛋白受体(ASGP R)的配体无唾液酸胎球蛋白 (AF)修饰脂质体得AF SSL。将ASGP R重组于脂质双分子膜 (BLM)得ASGP R BLM ,与AF SSL相互作用 ,监测BLM膜电参数变化 ,确定受体 配体间识别反应 ;用3H标记方法测AF SSL与肝实质细胞在体内外靶向性 ;将AF SSL包抗癌药阿霉素 (ADM) ,考察其抗癌药效。结果 ASGP R BLM稳定时间随AF SSL加入量增加而缩短 ,表现出明显的量效关系 ,证明在ASGP R BLM与AF SSL之间有特异识别反应 ;体外AF SSL与肝实质细胞结合率明显高于无AF修饰脂质体SSL(在第 10和 90min时P <0 0 5 ,在第 3 0和 60min时P <0 0 1) ;抗肝癌疗效 ,AF SSL组大鼠存活期显著长于无AF修饰组 ,且对心、肾、肺的毒副作用小。结论 配体修饰脂质体达到主动靶向对应受体细胞是可行的 。

表面带电脂质体载药及对小鼠体内弓形虫的作用

表面电性是脂质体重要性质之一,本文用1,8-ANS作为探剂,采用荧光法和电泳法测定脂质体的表面电位。离子性药物的包封率及渗漏速度受脂质体表面电性影响,实验表明,脂质体表面电性和药物离子电性相反时,包封率高,渗漏速度慢。以小鼠感染弓形虫做模型,进行体内试验,证明脂质体载药显著优于游离药物的治疗效果。因弓形虫是细胞内寄生的原虫,凡有利于药物入胞的方法,可提高其疗效。此种模型试验简便、准确,其结果对载抗癌药脂质体研究可以借鉴。

PEG修饰脂膜对延长脂质体在血内循环时间的研究

研究目的是提高脂质体的稳定性，延长在血循环中的时间，增强在非ＲＥＳ部位的靶向性。将不同分子量的ＰＥＧ－ＰＥ（聚乙二醇单甲醚磷脂酰乙醇胺衍生物）掺入脂质体，比较其在体外的稳定性和体内的分布情况。结果表明，该类脂质体在血循环中的滞留时间显著延长。并且与ＰＥＧ的分子量有密切关系。本研究方法简便易行，从而省去同位素标记的困难，具有良好的应用前景。

水溶性药物的疏水性修饰及其重组型脂质体的研究

脂质体载水溶性药物出现的共同问题是药物的包封量低、稳定性差。本文以甲硝唑(Ⅰ)为水溶性药物模型,进行疏水性结构修饰,得其肉豆蔻酸酯(Ⅱ)前体药物,分别进行Ⅰ和Ⅱ的脂质体研究,结果表明Ⅱ在脂质体中的包封率较Ⅰ提高10倍以上,渗漏速率降至十分之一,制成含Ⅱ的脂质干膜,经超声分散,可得合乎要求的重组型脂质体,为解决脂质体载药的稳定性问题提供有效途径。体外抗阿米巴原虫试验,镜检观察到载药脂质体进入阿米巴原虫的细胞内,且100%抑制原虫所需剂量Ⅱ脂质体是Ⅰ游离药的二分之一。因此药物疏水化修饰是解决脂质体载水溶性药物稳定性问题的理想途径。

单克隆抗体修饰脂质体及体外寻靶研究

以阴道滴虫单克隆抗体为模型，用Ｎ－羟琥珀酰亚胺的活性酯使单抗衍生化，与棕榈酸相连，组装于脂质体上，约５０％的抗体与脂质体相结合。用间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）和细胞毒作用为指标，显示凌单抗修饰脂质体对阴道滴虫有特异性结合，从而证实单抗对脂质体修饰，体外寻靶是有效的。

环胞苷前体药物脂质体的研究

环胞苷二棕榈酸酯在体内可被酯水解酶作用,释放出活性成分,是环胞苷的前体药物,选择脂质体做为此药的载体,与游离药物比较,动物吸收好,抗癌活性提高1.5倍,分解失效减缓,有效期延长3倍。显示出脂质体适于脂溶性药物载体的优越性。

新型药物载体—淀粉微球的合成及载药研究

本文研究了淀粉微球的合成、性质及载药,微球的平均粒径为10μm,以磷酸氯喹为模型用包埋法载药,证明淀粉微球是一类无毒、可靠、有效的药物载体,是微球剂中的一种新型式。

Preparation of Liposomes with Palmitic-Antibody andTargeting in Vitro

An anti-trichomonas vaginalis monoclonal antiboody was derivatized with palmitic acid using an activated ester of N-hydroxysuccinimide About 50% of the re-sulting antibody could be incorporated into liposomes.The liposomes showed specific binding to T. vaginalis by IFA and cytotoxicity tests. These results clearly demonstrated the effectiveness of targeting of liposomes modified by monoclonal antibody in vitro.

仿红细胞膜质体的研究

本项研究从仿红细胞出发，将增加双分子脂膜亲水性的PEG－PE（聚乙二醇与磷脂酰乙醇胺的衍生物）及增加双分子脂膜硬度的SM（神经鞘磷脂（掺入脂质体，比较其在体外稳定性，体内分布及清除半衰期，结果证明该类脂质体稳定性提高，体内被肝，脾清除减少，血循环中半衰期显著延长，本研究为脂质体载药至非网状内皮系统的靶向给药打下基础。

调整专业方向 改善教学环节 将教学改革推向深层次

我院教改工作主要从两方面入手,一是调整专业方向,二是改善教学环节,由此取得了可喜成果,适应了社会主义市场经济对人才的需要,提高了人才培养的质量。 一、调整专业方向。 当前,药品的研制面临由仿制到创新;由原料药为重点向原料药、制剂生产并重;由化学合成向化学、生物技术结合的战略转移。在药品的质量控制、合理、安全临床用药等方面都有迅速的发展,为药学人才培养提出了新的要求。为此,我院决定对现有专业进行调整,这项工作具有很强的学科性和政策性。 1.

血脑屏障体外实验模型的建立

目的 :应用培养的CBA/J小鼠脑血管内皮细胞 (brainmicrovascularendothelialcells,BMVEC)构建血脑屏障(blood brainbarrier,BBB)的体外实验模型。方法 :将BMVEC种植在明胶包被的 2 4孔板细胞插入器的微孔滤膜上培养至汇合状态 ,通过 4h液面渗漏实验、扫描和透射电镜、血脑屏障形成前后膜两侧的电阻以及辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase ,HRP)的通透性和RMP 7对血脑屏障通透性的调控作用来证实BBB的形成。结果 :BMVEC培养至汇合后 ,4h液面渗漏实验成为阳性 ;扫描电镜显示细胞形成单层 ,透射电镜证实细胞间形成紧密连接 ;跨细胞电阻 (thetransendothelialelectricalresistance ,TEER)分别为汇合前和人脐静脉内皮细胞的 3.2倍和 7.7倍 ;对HRP的通透率分别为前对照组的 1 3.4 %和 6 .7% ;RMP 7处理使HRP在BBB的通透率增加了 2 .7倍。结论 :构建的BBB体外模型在形态学、电阻和通透性方面具备了BBB的基本特性 。

血栓靶向尿激酶脂质体的制备及其体内溶栓效果

目的 制备血栓靶向的尿激酶脂质体 ,并在大鼠颈总动脉血栓模型上考察其溶栓情况。方法 通过液相合成法合成出靶向于血栓的特异性配体H Arg Gly Asp Ser OH (RGDS) ,并将其与monocarboxylpoly (ethyleneglycol)35 0 0distearoylphosphatidylethalnolamine (DSPE PEG350 0 COOH)偶联后插入到脂质体双层膜中得到血栓靶向尿激酶脂质体 ;通过制备方法的改进 ,以氢化豆磷脂在室温下制备尿激酶脂质体 ;在大鼠颈总动脉血栓模型上 ,考察了血栓靶向脂质体的体内溶栓效果。结果 所得的尿激酶脂质体包封率高、粒径小 ,稳定性好 ;与空白对照组的栓重相比 ,在相同剂量 (6 0kU·kg- 1 ,小剂量 )下 ,游离尿激酶组几乎无任何改变 ,尿激酶脂质体组血栓重量稍有减轻但无显著性差异 ,血栓靶向尿激酶脂质体组血栓重量明显减轻 (P <0 0 0 1) ;干重时的情况略有不同。与同剂量的普通脂质体相比 ,血栓靶向尿激酶脂质体溶栓效果显著改善 (湿重时P <0 0 1,干重时P <0 0 5 ) ,表现出明显的靶向溶栓能力。

氢化与非氢化卵磷脂对阿霉素脂质体体内外稳定性的影响

目的 研究卵磷脂 (EPC)和氢化卵磷脂 (HEPC)对阿霉素脂质体的体外泄漏及体内循环时间的影响。方法 用透析法考察EPC及HEPC普通脂质体在 3 7℃小牛血清及 3 7℃ ,2 0℃和 4℃PBS中的药物泄漏情况 ;用高效液相色谱法研究了EPC和HEPC长循环脂质体在大鼠体内的药物动力学。结果 在 3 7℃小牛血清中HEPC脂质体较EPC脂质体泄漏慢 ,而在PBS中则结果相反 ;大鼠体内药物动力学研究结果表明 ,HEPC长循环脂质体在血中的平均驻留时间 (MRT)较EPC长循环脂质体长得多 ( 2 3 3hvs 12 0h)。

氨基酸表面活性剂的合成及对脂双层膜的修饰

本文以月桂酰氯与L-精氨酸反应,其产物和甲醇、干燥氯化氢反应,得到N~α—月桂酰—L—精氨酸甲酯(LAM),用以修饰磷脂双分子膜,实验证明,用此膜包载药物具有提高包封率,增加稳定性的作用。

淀粉纳米粒包载小分子抗癌药物的研究

目的 研究淀粉纳米粒包载小分子抗癌药物的载药情况。方法 建立模型药物甲氨蝶呤及盐酸阿糖胞苷的含量测定方法 ,用吸附法与改进包埋法制备载药淀粉纳米粒 ,测定粒子的粒度、药物的包封率 ,并测定纳米粒的药物释放曲线。结果 两种模型药物的含量测定方法的回收率、精密度及稳定性均能满足测定要求。测定不同方法及不同球药比制备的甲氨蝶呤包封率在 (2 5 .4± 4 .7) %～ (45 .6± 4 .5) % ,盐酸阿糖胞苷在 (8.6± 2 .5) %～ (1 7.1± 3 .4) %。甲氨蝶呤纳米粒释放药物的t50为 0 .1 8～ 0 .85h ,盐酸阿糖胞苷为 0 .1 7～ 0 .2 1h。结论 小分子药物的淀粉纳米粒以骨架扩散机制释放药物 ,对于水溶性极好的药物 ,纳米粒的包封率低 ,释放快 。

可生物降解药物载体——淀粉纳米粒的研究

目的 以可溶性淀粉这一价廉易得的可生物降解材料为原料制备纳米粒子 ,并考察相关制备因素对其理化性质的影响。方法 采用反相乳液聚合法 ,以三氯氧磷为交联剂 ,制备淀粉纳米粒子 (SNP) ,并考察其合成工艺 ,测定其粒度分布、红外光谱、磷含量、降解性等。结果 油水相比与淀粉液浓度是影响粒度分布的主要因素 ,由红外光谱可初步确定磷在SNP的价键类型。结论 以三氯氧磷为交联剂 ,反相乳液聚合法制备SNP具有很好的理化性质。

具有活性羧基末端的长循环脂质体的制备和分布

目的 研究长循环免疫脂质体 (immunoliposomes,IML)的制备方法 ,体外靶细胞杀伤活性和在小鼠体内的组织分布。方法 合成和纯化了 1个带末端羧基的磷脂酰乙醇胺 (PE)的聚乙二醇衍生物 (DPPE PEG30 0 0 COOH) ,掺入脂质体中制成长循环脂质体 ;通过羧基活泼酯化 ,将膀胱癌单克隆抗体BDI 1或小鼠IgG共价连接到该脂质体表面制成免疫脂质体 ,体外肿瘤细胞杀伤实验检测载阿霉素免疫脂质体 (ADM BDI 1 IML)特异杀伤靶细胞的能力。用同位素氚示踪法测量免疫脂质体在小鼠的组织分布。结果 抗体在脂质体上的结合率可达 30 %。体外肿瘤细胞杀伤实验证明载阿霉素免疫脂质体有选择性杀伤靶细胞人膀胱癌细胞EJ的能力。和普通脂质体相比 ,免疫脂质体在血中的滞留时间明显延长 ,并减少了在肝、脾的聚集。结论 长循环免疫脂质体在血中有较长的滞留时间 ,在体外有特异寻靶活性 ,载阿霉素免疫脂质体有选择性杀伤靶细胞的活性 。

两性霉素B脂质体的制备及稳定性研究

采用薄膜 -超声法制备了两性霉素 B脂质体 ,稳定性考察的结果表明 ,制得的两性霉素 B脂质体在较低温度(4°C)条件下贮存时能保持良好的物理和化学稳定性 ;在近似生理条件下能较长时间地保持比较完整的脂质体结构 ,稳定性良好。

阿昔洛韦药质体的制备和性质

合成了琥珀酰阿昔洛韦单硬脂酸甘油酯,用四氢呋喃注入法得到药质体。透射电镜观察和激光散射检测表明药质体是纳米粒度的囊泡,呈负电;差示扫描量热法测得其凝胶-液晶相变温度为50℃。离心和加热对药质体稳定性影响较小,可用加热法灭菌。冷冻和冻干会破坏药质体结构。两亲性的药质体单体分子可插入家兔红细胞膜,并引起溶血,但全血中的血浆蛋白可吸附药质体或干扰其与红细胞的作用,减少溶血反应。