PI3K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复.放线菌酮(Chx)处理实验表明,阻断PI3K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加.进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的mRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性.但在SMMC-7721中分别转染PI3K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达.这些结果表明,PI3K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节.

中国人IL-18结合蛋白cDNA的克隆和序列分析

目的克隆人白介素 - 18结合蛋白 (h IL- 18BP)的 c DNA,以研究其结构与功能的关系。方法从中国汉族人的胎盘组织中提取总 RNA,以 RT- PCR方法扩增出全长 5 85个 bp的 IL- 18BP c DNA,将其与表达载体 pc DNA3连接 ,转化大肠杆菌 DH5 α,建立了 h IL- 18BP的 c DNA克隆。结果序列分析表明 ,与国外文献报道的人 IL- 18BP的 c DNA序列完全一致。结论 h IL- 18BP已成功地得到克隆。

开展大学生探索性实验项目优化创新性人才培养模式

高等教育的任务是培养具有创新精神和实践能力的高级专门人才。目前全国多数医学院校正建立多种渠道、多种机制鼓励大学生参与科研。扬州大学医学院基础医学实验教学中心通过开展大学生探索性实验项目,培养学生的创新意识、创新思维,提高学生分析问题、解决问题的能力,从而积极探索创新性人才实践教学改革,优化创新性人才培养模式。

人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析

目的研究IL-18结构与功能的关系。方法用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在。菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性。然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性。结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92%以上。突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%。结论在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用。

试谈慢性肾衰竭从瘀论治

本文在探讨CRF瘀血病理的形成与临床表现的基础上浅述慢性肾衰从瘀论治的体会。脾肾衰败、湿瘀浊毒潴留是CRF的基本病机环节,瘀血是主要病理因素之一,治疗应在辨证的基础上重视活血化瘀。

整合蛋白β1亚基过表达上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖(英文)

目的:研究整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及机制。方法:采用MTT及细胞流式测定观察整合蛋白β1亚基过表达对肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的影响。蛋白质印迹及RT-PCR检测细胞中p27的蛋白及mRNA的表达,并构建p27的RNA干扰质粒,转染整合蛋白β1亚基过表达细胞,再观察p27的表达变化对细胞增殖的影响。结果:整合蛋白β1亚基过表达可以抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,并将细胞阻滞在细胞周期的G1期。整合蛋白β1亚基过表达可以在蛋白水平上调p27的表达,但并不影响p27的mRNA水平。p27的RNA干扰质粒可明显抑制p27的表达,而且p27表达的下调可以阻止整合蛋白β1亚基过表达所引起的细胞增殖抑制。结论:整合蛋白β1亚基过表达通过上调p27抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖。

中医药治疗慢性肾功能不全研究概况

中医认为,慢性肾功能不全是人体气化功能渐衰至衰竭的过程,气化功能不仅与肾有关,与其他脏腑亦有关。慢性肾功能不全脾肾双亏,气血不足为发病之本,浊邪内蕴为标,湿瘀互结贯穿始终。中医采用辨证施治、复方、专方、保留灌肠等方法治疗,疗效显著。

白介素18结合蛋白研究进展

白介素 １８结合蛋白（ＩＬ-１８ＢＰ）是新近发现的一种糖蛋白；属免疫球蛋白超家族成员；目前已发现有６种ＩＬ—１８ＢＰ的同工蛋白。ＩＬ—１８ＢＰ可以在体内外有效抑制ＩＬ－１８的作用，因而被认为是ＩＬ-１８的天然拮抗剂。另外发现几种痘病毒编码的蛋白质与ＩＬ－１８ＢＰ有高度同源性，其病毒产物可减弱ＩＬ－１８诱导的Ｔｈｌ反应。利用ＩＬ－１８ＢＰ拮抗ＩＬ－１８的作用进行基因治疗将为某些自身免疫性疾病的治疗开辟一条新的途径。

细胞生物学和生物化学教学内容的交叉与衔接探讨

细胞生物学和生物化学都是医学基础课程,两者在内容上相互交叉,相互渗透。针对两门课程在教学内容上的交叉与衔接进行分析,并提出教师应根据课程定位、教学安排、学生的接受能力等方面选择教学内容。

医学留学生生物化学的教学体会

留学生教育不仅是我国加强教育文化对外合作交流的需要，也是高等教育国际化的重要组成部分。对印度留学生的生物化学理论及实验教学进行总结，从教学前准备、课堂教学及考核等方面提出一些体会。

人IL-18结合蛋白cDNA的克隆及其逆转录病毒载体的构建

目的 克隆人白细胞介素 - 18结合蛋白 (hIL - 18BP)的cDNA及构建hIL - 18BP逆转录病毒载体 ,以研究IL - 18BP与IL - 18相互作用的机制及自身免疫性疾病的基因治疗。方法 从中国汉族人胎盘组织中提取总RNA ,用RT -PCR方法扩增hIL - 18BPcDNA ,与载体pcDNA3连接 ,转化大肠杆菌DH5α。得到的重组质粒经鉴定正确后 ,再作为模板进行PCR。PCR产物插入逆转录病毒载体pLNCX中。结果 RT -PCR扩增出全长 5 85bp的hIL - 18BPcDNA ,2次酶切鉴定证明hIL - 18BP已分别与pcDNA3、pLNCX重组。 2次测序结果均与国外文献报道的hIL - 18BP的序列一致。结论 成功地克隆了中国人IL - 18BPcDNA ,并构建了重组hIL -

人白细胞介素18的原核表达及多克隆抗体的制备

目的 在原核系统中表达并纯化人白细胞介素 18(hIL 18) ,制备兔抗人白细胞介素 18多克隆抗体。方法 用RT PCR扩增出hIL 18的cDNA ,克隆到原核表达载体pJW2中 ,转化大肠杆菌JM10 1中诱导表达并纯化。用纯化的人白细胞介素 18免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果 克隆得到序列正确的hIL 18cDNA ,与载体连接后转化入大肠杆菌JM10 1中诱导表达并成功纯化 ,并用纯化的人白细胞介素 18成功制备了兔抗人白细胞介素 18多克隆抗体。

TLR3激动剂对B细胞功能的影响

目的观察TLR3激动剂Poly I:C对B细胞功能的影响,包括细胞增殖、共刺激分子表达、细胞因子和抗体的分泌情况。方法利用免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD19+B细胞,RT-PCR法证实其表达TLR3。体外用Poly I:C刺激B细胞一定时间后,CFSE分裂法检测B细胞增殖,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B细胞表面共刺激分子表达,CBA(cytometric bead ar-ray)法或ELISA法检测培养上清中细胞因子含量,CBA法检测B细胞分泌Ig的亚型。结果 Poly I:C可以促进B细胞增殖,上调B细胞表面CD40、CD80、CD86和MHC II类分子的表达,促进IL-6和TNF-α的高分泌,诱导IgG1κ抗体的产生。结论 Poly I:C可以通过促进增殖、细胞因子分泌,诱导抗体产生和上调共刺激分子表达等多方面调节B细胞功能。

裙带菜内生菌Bacillus sp. QD-4发酵液化学成分研究

目的研究裙带菜内生菌Bacillus sp.QD-4发酵液的化学成分。方法采用硅胶柱层析、羟丙基葡聚糖凝胶柱层析、薄层层析、反相高效液相色谱等方法对QD-4发酵液乙酸乙酯提取物进行分离纯化,并采用质谱、核磁共振谱等技术及文献比对的方法对化合物进行结构鉴定;采用改良Ellman法测定化合物对乙酰胆碱酯酶(ACh E)的抑制活性。结果从QD-4发酵液乙酸乙酯提取物中分离得到5种化合物:环-(L-亮氨酸-L-4-羟脯氨酸)(1)、环-(L-脯氨酸-L-酪氨酸)(2)、环-(甘氨酸-L-脯氨酸)(3)、环-(L-脯氨酸-D-酪氨酸)(4)和尿嘧啶(5)。在400μg/m L浓度下,化合物2和4对ACh E的抑制率分别为(11.62±2.29)%和(5.62±1.63)%。结论化合物2和4对Ach E具有一定的抑制活性,是Bacillus sp.QD-4发酵液抑制ACh E活性的物质基础。

膜型IL-15联合RAE-1ε增强小鼠NK细胞的杀伤活性

目的:探讨视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE-1ε)和膜型IL-15对小鼠NK细胞杀伤功能的影响。方法:前期研究以小鼠原B淋巴细胞株BaF3为基础构建了3株BaF3工程细胞株,即表达膜型IL-15的BaF3/mb15细胞、表达RAE-1ε的BaF3/RAE细胞和同时表达膜型IL-15和RAE-1ε的BaF3/mb15/RAE细胞。将γ射线灭活后的3株BaF3工程细胞株作为刺激细胞,分别刺激小鼠NK细胞。流式细胞术检测刺激后NK细胞表面分子的表达,胞内染色法检测NK细胞穿孔素和颗粒酶B的分泌,流式细胞术检测NK细胞对小鼠淋巴瘤YAC1细胞的杀伤活性。结果:与BaF3/mb15和BaF3/RAE细胞相比,BaF3/mb15/RAE细胞可有效上调NK细胞表面CD25、CD44、FasL和CD107a的表达,但对穿孔素和颗粒酶B的分泌没有明显刺激作用。当效靶比为20:1时,BaF3/mb15、BaF3/RAE和BaF3/mb15/RAE细胞刺激后NK细胞对靶细胞YAC1的杀伤率分别为(39.7±2.9)%、(45.3±2.3)%和(59.0±6.9)%,均高于BaF3组的(28.3±1.5)%(P<0.01),且BaF3/mb15/RAE组高于BaF3/mb15和BaF3/RAE组(P<0.05)。结论:膜型IL-15联合RAE-1ε可促进NK细胞活化并增强NK细胞的杀伤活性。

NKG2D配体RAE1ε对乳腺癌细胞4T1衍生MDSC功能的影响

目的:探讨表达小鼠NKG2D配体之一视黄酸早期转录因子1ε(retinoic acid early transcript 1ε,RAE1ε)的原B淋巴细胞Ba F3对乳腺癌细胞株4T1成瘤小鼠来源的髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)功能的影响。方法:以小鼠原B淋巴细胞株Ba F3为基础,构建表达RAE1ε的Ba F3-RAE1ε细胞以及表达空质粒的Ba F3-mock对照细胞。通过4T1原位肿瘤模型诱导产生CD11b+Gr-1+MDSC,将Ba F3-mock细胞和Ba F3-RAE1ε细胞作为刺激细胞,分别与脾MDSC共培养,流式细胞术检测MDSC表面CD40、CD80、F4/80、CD11c的表达和MDSC内活性氧(ROS)的水平;ELISA法检测共培养上清液IL-10、IL-4和IFN-γ的含量;Griess法检测共培养上清液一氮化氮(NO)的浓度。磁珠分选共培养体系中的MDSC,检测裂解后精氨酸酶的活性;另外,将分选后的MDSC与抗CD3/抗CD28抗体活化的脾细胞共培养,CFSE法检测活化的CD3+CD8+T细胞增殖情况。结果:成功获得4T1原位肿瘤模型来源的小鼠脾MDSC。与Ba F3-mock细胞相比,Ba F3-RAE1ε细胞刺激对MDSC分泌IL-4、IFN-γ、IL-10和NO的水平没有明显影响(P>0.05);对MDSC表达CD40、CD80、F4/80、CD11c和ROS也没有显著影响(P>0.05)。与Ba F3-mock细胞相比,Ba F3-RAE1ε细胞刺激显著提高MDSC的精氨酸酶活性(156.166±1.209 vs 110.135±7.356,P<0.01),并明显增强MDSC对CD8+T细胞增殖的抑制作用。结论:RAE-1ε在体外增强4T1成瘤小鼠来源的MDSC的抑制功能。

Fabry病合并Ⅱ型狼疮性肾炎1例并文献复习

Fabry病是一种x连锁隐性遗传性疾病,因溶酶体水解酶α-半乳糖苷酶A（α-Gal A）活性缺陷导致糖（神经）鞘脂代谢异常而致病,常可累及肾脏、心脏、皮肤、眼睛等多系统。系统性红斑狼疮（systematic lupus erythematosis,SLE）作为一种自身免疫性疾病亦可累及全身多个系统。 Fabry病属于少见病,部分病例临床表现隐匿,在我国的误诊率和漏诊率均较高,与SLE合并存在更是极为罕见,并且大大增加了疾病诊断的复杂性。最近,我科确诊了1例Fabry病合并Ⅱ型狼疮性肾炎的病例。本文通过对其临床特征及肾组织病理学特点进行分析并复习相关文献,探讨两者之间的可能联系。

对临床医学专业基础医学教学的几点思考

就临床医学专业的基础医学教学中,对基础医学课程体系、基础与临床的联系、基础医学中的PBL教学以及人文社会科学、行为科学与医学学科的结合等内容进行了讨论。

人体组织学与医学生物化学之间的交叉渗透

人体组织学和医学生物化学都是重要的基础医学学位课程,但一门是形态学课程,一门是机能学课程。对人体组织学和医学生物化学之间交叉渗透的知识点进行详细总结,并以培养卓越医生的模块教学为例,提出学科交叉、知识整合的重要性,从而提高教学质量。

缺氧对神经细胞缺氧诱导因子-1αmRNA表达的影响

目的 揭示在缺氧状态下神经细胞缺氧诱导因子 - 1α(HIF - 1α)mRNA表达的时空规律。方法 对分离的新生SD大鼠大脑皮质神经细胞分别进行常规和缺氧培养 ,采用定量逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)检测神经细胞在不同缺氧时间HIF - 1αmRNA的表达。结果 神经细胞在常氧下HIF - 1αmRNA有极低的表达 ,在缺氧30min时表达量显著上升 ,6 0min达到高峰 ,90min后逐渐下降。与对照组比较 ,各缺氧组HIF - 1αmRNA的表达均有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 神经细胞在缺氧早期HIF - 1αmRNA表达有短暂。