红细胞血型意外抗体筛查专家共识

红细胞血型意外抗体是指正常ABO血型中除抗-A、抗-B之外的血型抗体,其广泛存在于妊娠、输血、移植、注射免疫原性物质或患有自身免疫性疾病的患者中,可造成血型鉴定和交叉配血困难并严重影响输血安全及输血疗效。本共识旨在进一步规范抗体筛查细胞要求、操作规程及临床意义,为临床安全有效 输血提供保障。

清开灵注射液保存血小板对体外大失血模型的纠正效果

目的探讨清开灵注射液保存血小板对体外大失血模型的纠正效果。方法取机采血小板8(人)份(≥250mL/份),每份等分成2×125mL;添加终浓度为1%清开灵注射液约1.25mL/份作为实验组22℃振荡保存;同时设对照组:取与实验组等量(份)机采血小板,不加清开灵注射液,同样保存条件。采用血液稀释法(全血∶生理盐水=1∶9)制备体外大失血模型,应用血栓弹力图(thrombelastography,TEG)检测指标及血常规指标对比、研究去白细胞悬浮红细胞、新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)与清开灵注射液保存血小板(简称实验组血小板)或对照组血小板按1∶1∶1比例对体外大失血模型的纠正效果。结果血小板保存至1、3、5d时,实验组和对照组血小板在对相同血样制备的体外大失血模型进行纠正,PLT(×10^(9)/L)从19~20分别升至68~72 vs.57~64(P<0.05),TEG-MA值(mm)由9.6~11.4分别升至49.1~58.3 vs.48.1~55.1(P<0.05),TEG-R值(min)由7.1~8.2降至3.9~4.6 vs.3.7~4.0(P>0.05);保存7~14d,实验血小板组:PLT(×10^(9)/L)从18纠正至56~62,TEG-MA值(mm)由10.4~12.1纠正至43.3~47.9,TEG-R值(min)由8.2~8.9纠正至3.6~5.5(P<0.05)。结论去白细胞悬浮红细胞、新鲜冰冻血浆和清开灵注射液保存血小板能够纠正体外大失血模型,提示清开灵注射液保存10 d的血小板具有纠正效果。

自身免疫性溶血性贫血的诊疗进展

自身免疫性溶血性贫血(autoimmune hemolytic anemia,AIHA)是由自身红细胞抗体介导的,以红细胞加速破坏为主要表现的溶血性疾病。AIHA的诊断主要依据直接抗人球蛋白试验(direct antiglobulin test,DAT)和溶血相关指标。AIHA的治疗方案由疾病的分型和病因决定,包括输血治疗,对症支持治疗及免疫治疗。在免疫治疗中,温抗体型AIHA一线治疗以糖皮质激素为主,二线治疗药物为利妥昔单抗,三线治疗方案为脾切除和细胞毒性免疫抑制剂;冷抗体型AIHA的一线治疗以利妥昔单抗为主,二线治疗为利妥昔单抗联合苯达莫司汀等方案,三线治疗为补体抑制剂。目前的治疗方案特异性不强,治疗效果欠佳,具有副作用。更多的新药包括福他替尼、Orilanolimab(SYNT 001)、Rozanolixizumab(UCB 7665)、Nipocalimab(M281)、PI3K抑制剂、维奈托克、奥法木单抗、阿仑单抗和达雷木单抗正在进行临床试验。此外,中药治疗可能为AIHA的治疗带来新的潜在突破点。

中国汉族Rh血型基因多态性观察

为了观察中国汉族非血缘关系随机个体和家系Rh血型的基因多态性 ,采用聚合酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)扩增技术 ,扩增Rh血型C/E基因 ,D基因外显子 ,内含子 2和 10 ,插入片段以及RhBox ,检测 16 0例Rh阳性个体 ,71例Rh阴性个体及 7个先证者为Rh阴性的家系的血样品。研究结果显示 ,带有C抗原的RhD阴性个体D基因结构具有多态性 ,D基因外显子有完整的、部分缺失和完全缺失的 3种形式 ;先证者为RhD阴性的家系中 ,大部分成员均出现插入片段和RhBox ,且在遗传上符合孟德尔遗传定律 ,插入片段或RhBox并未影响D基因的表达 ;全部RhD阴性和阳性个体中没有发现“正常的”RhD外显子 4。结论 :中国人带C抗原的RhD阴性者的基因结构具有多态性 ,具有完全缺失、部分缺失和不缺失 3种情况 ,并可能存在特殊的D(nf)Ce单体型 ;本组样本不能确定插入片段和RhBox与D基因表达有关 ,插入片段和RhBox的生物学功能尚需进一步研究 ;中国汉族的Rh血型基因序列不同于白种人 ,应建立本民族的Rh基因文库。

ABO血型基因分型及应用

目的 :研究ABO血型基因分型的意义。方法 :采用聚合酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)基因定型方法对ABO血型基因定型并观察其基因多态性分布特征和疑难血型检定。结果 :对已知ABO基因的DNA标本进行基因定型 ,证实文中的ABO基因定型方法可靠 ;对 10 4例健康、无血源关系的汉族个体ABO血型基因定型 ,结果与血清学所定表型完全符合 ;并用ABO基因分型技术解决临床输血前血型鉴定、产前胎儿血型鉴定、亲权试验及血清学亚型的正确性验证。结论

RhD基因外显子多态性观察

观察中国人RhD基因。方法 :采用PCR SSP技术 ,检测 32例血清学试验RhD阳性 ,44例RhD阴性者的D基因外显子。结果 :RhD阳性者D基因外显子无缺失 ,RhD阴性者D基因外显子有完全缺失 (6 1.4% )、部分缺失 (18.2 % )与无缺失 (2 0 .4% ) 3种类型。结论 :中国人RhD基因外显子具有多态性。

脐血单个核细胞的分离及冻存

研究脐血采集后的放置、单个核细胞的分离、冻存等的影响因素。方法为血液采集后,离心分离单个核细胞,进行冷冻保存及复苏后洗涤。结果优选为采集后4℃或室温放置24小时内,羟乙基淀粉2次离心法分离单个核细胞,50％二甲亚砜加自身血浆为保护剂冻存、复苏后洗涤等程序。结论:本研究的优化方法可有效地保存脐血单个核细胞。

输血前试验中值得研讨的若干问题

输血前试验是临床避免输血反应的最后一道实验室关由，关乎临床输血的安全、有效。输血前试验的项目——ABO和RhD血型鉴定、抗体筛查及交叉配血——明确，试验操作并不困难，难的是遇到特殊情况或疑难标本时如何正确处理。

可溶性HLA-Ⅰ的检测及中国人正常值

目的：ｓＨＬＡⅠ可预测器官移植排斥反应及监控某些疾病。为了介绍ｓＨＬＡⅠ类抗原定量检测技术及中国人ｓＨＬＡⅠ正常值。方法：采用ＥＬＩＳＡ双抗夹心法，以Ｗ６／３２ｍＡｂ包被酶标板，加被检血清，再加β２ｍＨＲＰ及底物显色。以不同浓度ｓＨＬＡⅠ标准品的结果绘出标准曲线并测定１１３例正常人ｓＨＬＡⅠ含量。结果：ＥＬＩＳＡ法可以准确定量测定血清中ｓＨＬＡⅠ，中国人ｓＨＬＡⅠ正常值为７８９２７±５０６３２ｎｇ／ｍｌ。结论：ＥＬＩＳＡ法检测ｓＨＬＡⅠ具有特异、敏感及重复性。

Rhesus盒检测技术

为了研究Rhesus盒的检测技术及意义,根据RHD基因上游盒、下游盒及杂交盒的DNA序列特异性设计引物,用PCRSSP和错配PCR技术检测上游、下游和杂合的Rhesus盒。结果表明:DNA标准品验证本技术可靠,随机非血统关系RhD阳性者中,RHD+/RHD-型占9.00%,RHD+/RHD+型占91.00%;RhD阴性者中RHD+/RHD-型占26.14%,RHD+/RHD+型占3.92%,RHD-/RHD-型占69.94%。结论:Rhesus盒检测技术可用于分析RhD单倍型基因结构,用于遗传、临床输血及新生儿溶血病等研究。

用PCR-SSP对HLA-DQB作中分辨法分型

采用PCR-序列特异性引物技术(SSP)对HLA-DQB作中分辨法分型。该方法不仅可行,且操作简便快速,结果准确,适用于临床器官移植配型。

可溶性HLA-I检测技术和贮存血中可溶性HLA-I的浓度变化观察

本研究建立可溶性人类白细胞抗原 I类 (sHLA I)检测方法 ,并探讨贮存血中sHLA I浓度变化的意义。采用ELISA双抗夹心法定量检测 6 0例正常广东人血清中sHLA I水平和 2 0例献血员成分血中sHLA I含量。结果表明 :采用本技术时 ,可溶性HLA I最低检测限为 2 .84ng ml,批内变异系数为 5 .80 % ,批间变异系数为 9.0 0 % ,回收率≥ 98 5 7% ,广东人sHLA I平均值为 (6 99.5 4± 36 0 .10 )ng ml。贮存 2 8天的RBC和随机供者血小板的sHLA I的浓度明显高于其它成分血 ,并且与成分血中残存的白细胞数和贮存时间有关。结论 :用ELISA法检测可溶性HLA I灵敏、特异、稳定 ,在临床输血过程中可考虑选择性输注含有不同浓度可溶性HLA I的成分血。

HLA-DQB1 PCR-SSP基因分型技术

HLA-Ⅱ(DR,DQ,DP)配型对提高异基因骨髓移植存活率减少GVHD有重要意义。既往HLA-DQ采用血清学技术检定表型,近年国外转向基因分型,不少实验室已将其列为常规。国内近年来有人报告聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOP)。

中国汉族Rh(-)个体D基因完整者与C基因的关联调查

目的观察中国汉族非血缘关系随机个体和家系的Rh阴性D基因完整者与C基因间的关系。方法用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)扩增技术,扩增Rh血型C/E基因,D基因的外显子,检测192例RhD阳性个体,166例RhD阴性个体的血样品。结果192例RhD阳性个体,均有D基因8个外显子。在166例RhD阴性个体中,100例有ce/ce或ce/cE基因型的个体RHD外显子阴性;66例有Ce/Ce或Ce/ce基因型的个体中,34例RHD外显子完整,19例RHD外显子部分完整,13例RHD外显子阴性。结论中国人RhD阴性个体D基因完整者与C基因间可能存在联系,其在中国各民族、各地区Rh阴性个体中的发生频率和机制有待于进一步调查。

新疆维吾尔族Rh血型特征

本研究探讨新疆维吾尔族Rh血型特点。采用Rh血清学分型,改良抗球蛋白实验,氯仿/三氯乙烯吸收放散实验、RH上游盒、下游盒、杂合盒、D基因10个外显子,RHDψ假基因等检测1230份维吾尔族血样本。结果表明:RhD阴性频率为5.8%,未发现Del型。对72份RhD(-)样本进一步研究发现,ccee(57.02%)和Ccee(29.82%)表型,RHD-/RHD-基因型(94.44%)及D基因外显子全缺失型(91.12%)最常见。未发现RHDψ假基因。结论:我国新疆维吾洋族Rh血型兼有黄种人与白种人Rh特点。