曾普华基于“癌毒致虚”及“态靶辨证”辨治胰腺癌

文章旨在探讨曾普华教授“癌毒致虚”和“态靶辨证”治疗胰腺癌的临证经验。胰腺癌的恶性程度极高,其总体五年生存率不到5%。外因多为湿邪入侵,内因多为长期七情郁结或饮食不节导致肝脾受损、脏腑失和,进而导致湿热互结、瘀毒内蕴,形成癥瘕。中医药联合手术、放化疗能发挥减毒增效、抗复发和转移作用,实现“带瘤生存”,提高患者的远期生存率和生活质量。曾普华教授在恶性肿瘤防治领域经验丰富,对中医药治胰腺癌有独特见解。曾师认为“癌毒”大多是由大量尼古丁摄入、高脂高胆固醇饮食、急慢性胰腺炎等多种病理因素胶结而成的,进而导致机体多功能紊乱,抵抗力低下。癌毒与正虚互结变生诸证,导致恶病质的发生,形成恶性循环。基于“癌毒致虚”和“态靶辨证”理论指导,曾普华教授总结胰腺癌常见临床证型可分为湿阻态、瘀毒态、正虚态,治疗上将整体调态与微观打靶相结合,以茵陈五苓散、膈下逐瘀汤、十全大补汤为基本方。固本消积饮可作为胰腺癌肝郁脾虚,瘀毒内结证的靶方,紧扣恶心呕吐、黄疸、腹胀腹痛、恶性腹水、恶液质等常见并发症以及术后、放疗、化疗、靶向免疫治疗导致的相关症状,参考现代药理研究选用态靶同调药物,获得较好的临床疗效。

甲型副伤寒沙门菌套式PCR检测方法的研究

目的 探讨套式聚合酶链反应(Nested polymerase chain reaction,Nested-PCR)快速检测伤寒杆菌的实验方法。方法 根据副甲伤寒杆菌鞭毛抗原基因DNA核苷酸序列设计特异寡核苷酸引物，建立套式PCR技术，对1株伤寒杆菌及5株非伤寒杆菌进行扩增。结果 除副甲伤寒杆菌出现343bp的特异性扩增区带外，其他5株非伤寒杆菌均为阴性。结论 Nested-PCR是一种快速、敏感、特异检测伤寒杆菌的方法，为伤寒的临床早期诊断和及时治疗提供客观依据。

甲型肝炎的流行病学和免疫预防

本文分析了甲型肝炎(HA)流行病学新特点,并就新型HA疫苗的免疫预防措施等有关情况作一简述。

应用多重引物PCR方法检测O157：H7毒力基因的初步研究

目的 研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157：H7毒力的复合RSR方法。方法 选用针对大肠杆菌O157：H7志贺样毒素I、Ⅱ的两对引物，在同一扩增体系中进行PCR，检测不同来源的大肠杆菌O157：H7及E．coli ATEEE5922株。结果 EHEC O157：H7 933W株扩增出两条志贺样毒素基因产物，而E．coli ATOC25922株和EHEC O157：H7 97-l-68的扩增结果均为阴性。结论 应用多重引物RCR方法检测大肠杆菌O157：H7毒力基因，简便、快速、特异、敏感，对流行病学调查分析、制定预防和控制对策有重要的参考价值。

中国五省市甲型肝炎病毒基因分型的研究

为了解甲型肝炎 (甲肝 )病毒 (HAV)在中国几个城市的基因型分布 ,选择浙江杭州、江苏启东、安徽铜陵、云南昆明和上海市等的甲肝病人粪便标本或血清标本 ,以逆转录 -套式聚合酶链反应 (RT nPCR)扩增合成HAVVP1/2A交接区基因区 ,并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果表明 ,从这些城市甲肝病人分离到的 17株HAV株均属基因Ⅰ型 ,为IA和IB亚型 ;所有HAV株间核苷酸差异均小于 15 % ,但约 5 0 %HAV株株间核苷酸差异大于 7 5 % ,说明中国流行或散发的HAV株可能有基因IA、IB亚型同时存在。该项研究结果将为HAV的分子流行病学追踪调查提供方法和依据。

HPV多重感染与宫颈癌患者临床病理学特征分析

目的:对宫颈癌患者中HPV感染率及型别分布进行研究,探讨宫颈癌患者HPV多重感染与临床病理特征的关系。方法:选取2008年9月至2009年4月浙江省肿瘤医院因宫颈癌就诊且有临床病理确诊的患者171例,采用导流杂交基因芯片技术对HPV感染进行基因诊断和分型,并进一步比较HPV多重感染、单一感染、无感染者在年龄、临床分期、病理类型和淋巴结转移上的差异。结果:171例宫颈癌患者中HPV感染者为122例(71.35%),其中单一感染者103例(60.2%)、多重感染者19例(11.1%);HPV多重感染中以二重感染最常见(15例)、三重感染及四重感染各2例。单一感染主要是HPV16、18、58,多重感染主要是HPV16+58/52。无论是单一感染还是多重感染,均以含HPV16为主要的感染型别。年龄≥52岁宫颈癌患者中HPV多重感染的比例明显高于.<52岁患者,且两者存在显著性差异(P<0.05)。在临床分期、病理分型及淋巴结转移上,HPV多重感染与单一感染或无感染者之间均无差异。结论:HPV多重感染与宫颈癌患者年龄有关,但与临床分期、病理类型、淋巴结转移等预后因子均无关系,可能是独立的预后预测因子。导流杂交基因芯片技术适合临床筛查HPV感染及对HPV进行基因分型。

MicroRNA-31在食管鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系

背景与目的:研究发现,许多微小RNA(microRNAs,miRNAs)与恶性肿瘤密切相关,其中miR-31(microRNA-31)在许多肿瘤中呈异常改变。中国是食管鳞状上皮细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)最高发的地区之一。本研究旨在调查miR-31在ESCC中的表达水平与临床病理学因素以及预后的关系。方法:采用实时反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)技术检测食管癌细胞株KYSE410、EC1和EC9706,以及81例ESCC组织和癌旁正常组织中miR-31的表达水平。结果与临床资料和随访结果结合作统计分析。结果:在3株ESCC细胞株以及75.31%的ESCC组织中,miR-31表达上调。并且miR-31的高表达与更严重的淋巴结转移(P=0.043)、更深的浸润深度(P=0.002)以及更晚期的病理分期有关(P=0.027),而与其他临床病理学因素无关(P>0.05)。此外,miR-31的高表达与较差的无进展生存期(progression-free survival,PFS)有关(Kaplan-Meier分析P=0.014,多变量Cox分析P=0.021)。结论:miR-31可能是ESCC一项新的诊断和预后评价指标。

肺癌患者淋巴细胞亚群在外周血中的表达及其与预后的关系

背景与目的肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,本研究旨在探讨肺癌患者外周血中淋巴细胞亚群的表达及与预后的关系。方法采用流式细胞仪检测221例原发性肺癌首诊患者外周血淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD25+、CD44+及NK细胞所占比例,并与96例健康人的血标本对比,结合临床及随访资料进行统计分析。结果与健康对照组对比,肺癌患者淋巴细胞亚群8项指标中CD3+及CD8+明显低于健康对照组,CD4+/CD8+、CD19+、CD25+、CD44+及NK细胞明显高于健康对照组(P<0.05)。与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)相比,小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)的CD8+明显升高而CD4+和CD4+/CD8+明显下降(P<0.05)。化疗后与化疗前相比CD3+明显上升,NK细胞、CD19+及CD44+明显下降(P<0.05),其中CD44+在化疗后表达不升高者有生存优势(P=0.021),而其余3项指标与患者预期生存无关。结论肺癌患者外周血淋巴细胞亚群普遍发生改变,CD44+在化疗后的改变可能与预后相关。

RASSF1A在食管鳞癌组织中的表达、甲基化状态及其与预后之间的关系

目的:探讨RASSF1A基因的异常表达与食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)发生发展的关系.方法:应用实时RT-PCR方法及实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应技术,分别检测49例ESCC患者癌组织及癌旁正常组织中RASSF1A基因的转录表达情况和启动子区域5'-CpG岛的甲基化状态.分析RASSF1A基因在ESCC中的转录表达情况、甲基化状态及与临床病理因素、预后之间的关系.结果:在49例ESCC标本中,有26(53.06%)例RASSF1A mRNA表达下调,RASSF1A mRNA在食管鳞癌组织及相应的癌旁正常组织中的表达存在显著统计学差异(P<0.05),RASSF1A mRNA的表达缺失与ESCC患者的淋巴结转移、临床TNM分期及不良预后均存在显著相关性(均P<0.05);有38(77.60%)例RASSF1A基因启动子区域5'-CpG岛高甲基化,与之相对应的癌旁正常组织中仅有3(6.10%)例,两者差异有统计学意义(P<0.05),RASSF1A基因的高甲基化状态与淋巴结转移、临床TNM分期及不良预后均存在显著相关性(均P<0.05);在26例RASSF1A基因转录表达缺失的ESCC组织中有24例发生了启动子区域5'-CpG岛的高甲基化,RASSF1A基因在ESCC中的转录表达缺失与其启动子5'-CpG岛高甲基化显著相关(P<0.05).结论:RASSF1A基因启动子5'-CpG岛高甲基化在ESCC是一高频分子事件,与该基因的转录表达缺失显著相关,是其转录表达缺失的主要机制之一.

MicroRNA-29b在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨MicroRNA-29b(miR-29b)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达情况,并分析miR-29b与食管鳞癌临床病理特征及预后之间的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应法(real-time quantitative PCR,qPCR)检测84例ESCC组织和癌旁正常组织中miR-29b的表达差异,并分析miR-29b表达情况与食管鳞癌患者的临床病理特征、预后的相关性。结果 miR-29b不同程度低表达48例(57.2%),正常表达28例(33.3%),高表达8例(9.5%)。不吸烟患者癌组织中miR-29b相对表达水平低于吸烟者(P<0.05);miR-29b相对低表达患者的肿瘤浸润程度低,TNM分期早(P<0.05);miR-29b相对低表达患者的无瘤生存期较非低表达患者长(P<0.05);miR-29b表达情况和肿瘤家族史是影响食管鳞癌患者生存的独立因素(P<0.05)。结论 miR-29b相对正常组织低表达能减缓食管癌进展和改善预后,miR-29b低表达可能起着抑癌因子的作用,检测miR-29b表达情况可能对食管癌进展和预后具有一定临床意义。

血清Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原含量对肝纤维化诊断的临床意义

为了探讨血清胶原在肝纤维化中的诊断价值，本文检测了７０例急性肝炎（ＡＨ），６０例慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ），８０例慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）３０例肝硬化（ＬＣ）和３９例正常人的血清，Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ胶原含量，并对全部患者进行肝活检和肝组织切片的ＨＥ染色并分级，同时与透明质酸（ＨＡ）及层粘连蛋白（ＬＮ）比较。结果显示：ＣＡＨ和ＬＣ组血清，型胶原，ＨＡ及ＬＮ含量显著高于ＣＰＨ，ＡＨ和正常对照组（Ｐ〈０．

复治晚期非小细胞肺癌EGFR-TKI治疗失败后培美曲塞与多西他赛挽救性化疗的疗效比较

目的比较复治晚期非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗失败后用培美曲塞或多西他赛挽救性化疗的疗效及毒副反应。方法 120例复治晚期NSCLC患者于EGFR-TKI治疗失败后分别接受培美曲塞(500mg/m2,d1)或多西他赛(75mg/m2,d1)的挽救性化疗,均21天为1周期。记录并比较两者的疗效和预后。结果培美曲塞组和多西他赛组的有效率(RR)分别为13.4%和5.3%(P=0.307),疾病控制率(DCR)分别为58.5%和42.1%(P=0.093),中位无进展生存期(PFS)分别为2.83个月和2.10个月(P=0.862),中位总生存期(OS)分别为8.40个月和9.10个月(P=0.527)。EGFR-TKI治疗有效和挽救性化疗前行为状态评分(PS)≤1者的中位PFS较长。培美曲塞组1～4级中性粒细胞减少的发生率低于多西他赛组,分别为41.5%和65.8%(P=0.013)。在非血液学毒性方面两组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论复治晚期NSCLC TKI治疗失败后用培美曲塞或多西他赛挽救性化疗,部分患者仍可以获益,两组疗效相当,且大部分患者能够耐受化疗的毒副反应。对于EGFR-TKI治疗有效、挽救性化疗前PS评分较好的患者,有可能从挽救性化疗中获益更大。

建立cDNA微矩阵基因芯片技术并分析食管癌细胞系Eca109基因表达谱

为筛选食管癌相关基因,建立并应用cDNA微矩阵技术分析了食管癌细胞系ECa109基因表达谱。结果显示,在886条基因中,ECa109细胞系与正常食管上皮细胞间存在显著差异表达的基因有107条(12.08%),其中表达上调的51条(5.76%),表达下调的56条(6.32%)。定量RT-PCR验证其中2个基因的表达水平,结果一致。建立T7 RNA聚合酶扩增技术,并对比分析了无扩增样品的基因表达谱,两者表现了较好的吻合性,这为cD-NA微阵技术分析原发性食管癌微量肿瘤细胞的基因差异表达谱提供了方法学。食管癌细胞株ECa109基因表达谱的分析也使我们对食管癌病变机制有了一个初步的了解。

microRNA在食管癌中的特征

microRNAs(miRNA)是一类长19-22个核苷酸的内源性非编码的小分子RNA,通过对靶基因转录后水平的负调控,几乎参与了体内所有的基本信号传导途径.最近发现microRNA与肿瘤的发生、分化、转移及复发等密切相关.食管癌发生过程中microRNA的改变已成为目前的研究热点,为食管癌的早期诊断、治疗和预后提供了新的手段.microRNA有望成为肿瘤诊断新的生物学标志和肿瘤基因治疗的新靶点.本文着重介绍microRNA的产生、作用机制、与肿瘤的关系、检测方法及其在食管癌的诊断、分期和生物治疗方面的潜在作用.

肿瘤抑制基因DNA甲基化与宫颈癌研究进展

子宫颈癌居女性恶性肿瘤发病率第二位,严重威胁着女性的生命和健康。实验发现,表观遗传学改变与人类多种肿瘤有着密切的关系,而肿瘤抑制基因DNA甲基化则是宫颈癌中常见的表观遗传学现象,与宫颈癌发生发展有着密不可分的联系。肿瘤抑制基因DNA甲基化研究将为宫颈癌发生机制研究,宫颈癌筛查及治疗提供新思路。

p53在食管癌中的研究进展

p53作为抑癌基因,通过调节DNA修复、调控细胞周期、抑制血管生成及诱导细胞凋亡等机制,在机体组织细胞的生长、发育和分化过程中起着重要作用。食管癌是中国消化系统常见恶性肿瘤之一,大量研究证实,p53对食管鳞癌的作用机制、早期诊断、治疗和评估预后具有重要意义,此文就这些方面的研究进展作一综述。

食管癌基因表达谱及其与细胞分化的相关性研究

目的:研究原发性食管癌基因表达谱,筛选与肿瘤细胞分化相关的基因,旨在寻找或定位食管癌分化相关基因,加深对其癌变分子机制的了解.方法:应用基因芯片技术对15例ESCC癌组织和正常组织的mRNA进行检测,并用生物信息学对检测结果进行分析.结果:在886条目的基因中有110(12.42%)条至少2次出现差异表达,与肿瘤分化直接相关的基因有16条(1.81%),其中表达上调的9条(1.02%),表达下调的7条(0.79%).结论:高通量的基因芯片技术筛选出大量的ESCC相关基因,从中可分析出与肿瘤分化相关的基因.对这些相关基因功能的验证将有助于找到ESCC发生、发展的关键基因或通路,并可作为ESCC诊断的指标和治疗的靶点.

霍乱弧菌小川型在人胆汁中存活和变异及其血清型别转换的分子生物学研究

〔目的〕追踪观察霍乱弧菌小川型流行株在离体人胆汁样本中的存活和L型变异状况 ;探索小川型在其抗体作用下对转换为稻叶型的发生频度和其对Ctx基因的影响 ;为改善当前霍乱防治工作提供实验依据。〔方法〕对保存染菌胆汁样本进行细菌和L型测数、鉴定。以抗体软琼脂法诱导血清型别转换 ;以蔗糖半固体平板检测细菌趋化性。用PCR和测序法比较转型前后的肠毒素基因改变。〔结果〕在 2份染菌人胆汁中 ,发现 1份存活达 2 2年 ,其总菌数为 2 .5× 10 3 cfu/ml,其中L型构成比为 32 %。 3株小川型流行株在人胆汁及抗体作用下 ,转换为稻叶型发生频度为 2 %～ 6 % ;酶切电泳显示转型前后其Ctx基因图型相似 ,经CtxAB测序后 ,差异≤ 7Nt(7/12 2 6 ) ,显示有一定的变异。 3株转型前后细菌的化学趋化性未见显著改变。〔结论〕为霍乱弧菌在某些患者胆囊中长期存活而成为慢性带菌者提供了实验依据。