自噬在人肝癌细胞Huh7对仑伐替尼耐药中的调节作用

目的研究自噬在人肝癌细胞Huh7对仑伐替尼耐药中的调节作用。方法以人肝癌细胞Huh7为对象,采用低浓度逐渐递增联合长期给药的方式构建仑伐替尼耐药细胞模型Huh7-LR,以CCK-8实验和流式细胞术检测亲本细胞Huh7及耐药细胞Huh7-LR对仑伐替尼的敏感性,以Westernblot实验和GFP-mCherry-LC3质粒转染实验分别检测细胞中自噬效应蛋白Beclin-1、自噬接头蛋白sequestosome1(又名p62)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平和细胞自噬水平。通过饥饿诱导构建自噬激活细胞模型,以Westernblot实验和GFP-mCherry-LC3质粒转染实验分别检测细胞中p62蛋白表达水平和细胞自噬水平,以流式细胞术检测自噬激活对仑伐替尼敏感性的影响。结果与亲本细胞相比,Huh7-LR细胞的耐药指数为6.2,其p62蛋白的表达水平显著升高,凋亡率、Beclin-1蛋白的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均显著降低(P<0.05或P<0.01),自噬水平有所下降。自噬激活可显著升高Huh7-LR细胞中p62蛋白的表达水平(P<0.05)和自噬水平,并显著升高其凋亡率(P<0.05)。结论自噬参与了仑伐替尼耐药,激活自噬可一定程度逆转肝癌细胞对仑伐替尼耐药。

G6PD调控PI3K/Akt信号通路诱导肝癌细胞索拉非尼耐药的机制研究

目的 基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路研究葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)诱导肝癌细胞索拉非尼耐药的机制。方法 以肝癌细胞Huh7、索拉非尼耐药肝癌细胞Huh7-SR、G6PD稳定过表达的肝癌细胞Huh7-G6PD及其对照细胞Huh7-CT为研究对象,以索拉非尼或G6PD抑制剂(6-氨基烟酰胺)为干预药物,采用CCK-8法检测细胞活力,采用Western blot法检测G6PD蛋白表达水平及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的磷酸化水平,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果 与Huh7细胞比较,Huh7-SR细胞中G6PD的表达水平显著升高(P<0.05)。经6-氨基烟酰胺和索拉非尼联合干预后,Huh7-SR细胞存活率显著降低(P<0.01)。经索拉非尼干预后,与Huh7-CT细胞比较,Huh7-G6PD细胞存活率显著升高(P<0.01),凋亡率显著降低(P<0.01)。经6-氨基烟酰胺干预后,Huh7-SR细胞中PI3K、Akt蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。不加药物干预时,与Huh7-CT细胞比较,Huh7-G6PD细胞中PI3K、Akt蛋白的磷酸化水平均显著升高(P<0.01)。结论 G6PD可通过激活PI3K/Akt信号通路诱导肝癌细胞索拉非尼耐药。

机械工程自动化技术存在的问题及优化措施

机械工程自动化技术为工业社会的发展提供了动力,工业社会发展模式的优化也对机械工程自动化技术提出了更高的要求。基础支撑薄弱、科技含量不足等问题严重制约了机械工程自动化技术的有效应用,从而影响了社会经济的有效推进。因此,结合自身发展情况优化调整机械工程自动化技术,促进各种问题的解决,对社会的发展具有重要意义。

工程机械节能减排现状及发展新趋势

工程机械为社会各行、各领域提供必要的机械设备,但同时其节能减排工作也是企业关注的重点。因此,通过绿色设计与制造,能够完成工程机械制造生产的全周期控制,实现工程机械产业的转型。从原有的污染化生产,转变为节能减排化生产。绿色设计与制造理念中,要针对原材料、能源、劳动力,完成减量化的设计;在工艺与生产过程、装配与环保包装过程,实现资源再利用;在产品使用与维护过程中,再利用可用零部件、可修复改制零部件和可再生零部件;在产品退役或报废环节,实现产品的回收与拆解;并在最终处理时,确保废物最小化。

自动化技术在机械制造中的应用

随着时代的进步,科技发展也持之向前,我国综合国力的提升,注定会使我国各方面科技实现共同提升,很多设备实现更新换代,这些设备提供了我国社会建设基础,同时也保证我国生产力有扎实的力量后盾。因此,机械自动化技术一直以来都备受各界人士的关注,在制造业中发挥了巨大作用,实现生产效率的提升,为我国机械制造行业的发展贡献了持久动力,因此,本文就自动化技术在机械制造中的应用相关内容进行探讨与分析,仅供业界参考。

关于机械电气一体化设备安装技术要点探析

当前机械电气一体化设备安装过程中存在预留电缆孔洞遗漏、设备运行时存在噪音等问题,为了避免这些问题的产生,应掌握机械电气一体化设备的安装技术要点,在施工前做好关键的准备活动,严格按照施工安装技术规范来进行机电一体化设备的安装工作,从而确保机电一体化设备的安装质量。本文主要针对机械电气一体化设备安装技术要点进行分析。

盾构掘进机及其液压技术的应用研究

随着经济的快速增长,中国对拉土机及其液压技术的发展越来越重视。为了进一步提高隧道建设工程的施工效率,重要的是要了解在混凝土施工项目中使用盾构掘进机的好处,充分利用盾构材料的自动化,避免过度施工造成的目标因素的负面影响,并减少人力和材料资源的损失。因此,该文件主要侧重于对综合盾构掘进机及其液压技术的分析,并提出了合理化建议。

工程机械液压缸内泄漏故障检测分析

液压支架是煤矿综采设备的重要组成部分,液压支架的可靠稳定运行可为采煤作业及检修作业提供安全的工作空间,因此液压支架的安全稳定运行直接关系到煤炭企业的安全生产及经济效益。由此可见,把液压支架的故障率降到最低有助于提高煤炭企业的经济效益,提升煤炭生产的安全性。

瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡及琥珀酸脱氢酶D表达的影响

目的探讨瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡及对琥珀酸脱氢酶D(SDHD)表达水平的影响,分析SDHD对肝癌细胞增殖及瑞戈非尼药物作用的影响。方法通过流式细胞术观察瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡的影响,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)观察瑞戈非尼对SDHD表达的影响。通过CCK-8实验及Edu实验检测SDHD对肝癌细胞增殖的影响,流式细胞术分析SDHD对瑞戈非尼药物作用的影响。通过Western blotting检测SDHD对AKT信号通路的影响,流式细胞术分析AKT信号通路抑制剂MK2206对SDHD促瑞戈非尼作用下细胞凋亡的影响。结果瑞戈非尼促进肝癌细胞凋亡,促进SDHD表达上调(P<0.05);过表达SDHD抑制肝癌细胞增殖(P<0.05),敲减SDHD促进肝癌细胞增殖(P<0.05);MK2206协同SDHD提高肝癌细胞在瑞戈非尼药物作用下的凋亡率(P<0.01)。结论瑞戈非尼可诱发肝癌细胞凋亡,促进SDHD表达上调;SDHD参与调控肝癌细胞增殖及瑞戈非尼药物作用,提示SDHD可能是肝癌治疗的新靶点。

肝癌患者来源异种移植瘤模型的建立及药物敏感性研究

目的通过建立肝癌患者来源的异种移植瘤模型(PDX)探究肝癌索拉菲尼敏感性相关的长链非编码RNA(lncRNA)。方法选取上海市第一人民医院2021年5月至2022年10月的17例肝癌标本建立PDX模型。PDX模型传代14 d后通过随机数表法分为对照组与索拉菲尼给药组。给药21 d,观察7 d后收取肿瘤组织,给药期间记录小鼠体重。根据公式:肿瘤生长抑制(TGI)指数=ΔT/ΔC,计算PDX肿瘤组织TGI指数并评价药物敏感性,通过lncRNA测序筛选肝内胆管癌(ICC)索拉菲尼敏感与耐药的差异lncRNA。在人ICC细胞系HuCCT1中转染小干扰RNA(siRNA)降低lncRNA SCDAL的表达,根据siRNA序列分组为ctr、si-1、si-2和si-3。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,根据给药浓度分组为0μmol/L(0.1%二甲基亚砜)、4μmol/L、10μmol/L。组间比较采用t检验,多组间两两比较采用单因素方差分析,Turkey事后检验确定组间差异。结果肝细胞肝癌(HCC)及ICC PDX模型鼠索拉非尼给药组与对照组体重差异无统计学意义[HCC:(24.72±2.21)g比(25.80±2.30)g,t=0.486,P>0.05;ICC:(24.87±4.30)g比(23.11±2.78)g,t=0.478,P>0.05];lncRNA SCDAL在PDX耐药样本中表达显著低于敏感组(|log2FoldChange|=Inf,P<0.05);Si-3敲减组lncRNA SCDAL相对表达量显著低于对照组(0.586±0.080比1.000±0.234,P<0.05)。索拉菲尼给药条件下敲减组细胞吸光度值显著高于对照组(4μmol/L:1.11±0.06比0.86±0.07,t=4.635,P<0.01;10μmol/L:0.52±0.03比0.42±0.02,t=4.389,P<0.05)。结论通过构建肝癌患者PDX模型并测序验证发现lncRNA SCDAL表达与ICC索拉菲尼敏感性呈正相关。