混输脾基质细胞与骨髓细胞悬液在小鼠大剂量辐射损伤修复中的作用

Ｃ５７ＢＬ／６／小鼠经６０Ｃｏγ射线一次整体照射８Ｇｙ后，分成三组：（１）单纯照射８Ｇｙ组。（２）照射后单纯骨髓移植组，（３）照射后混输脾基质细胞（ＳＳＣ）与骨髓细胞（ＢＭＣ）组，以观察骨髓移植和回输脾基质细胞对大剂量照射后受体存活率及造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）的影响，并初步探讨其可能的机理。结果表明：单纯骨髓移植组受体存活率比单纯照射组高出２７％；而照射后混输ＳＳＣ组之存活率比单照射组高４７％，比单纯骨髓移植组高２２％（Ｐ＜０．０５）。混输ＳＳＣ可明显提高脾ＣＦＵ－Ｓ、ＣＦＵ－Ｆ及ＡＮＡＥ染色（＋）（－）细胞数。在体外混合培养中脾基质细胞对实质细胞增殖起支持与调节作用。

重组人GST/MCP-1融合蛋白纯化及其抗肿瘤作用的研究

从高表达GST/MCP-1的菌株纯化GST/MCP-1,其表达产物以包涵体形式存在.包涵体经分离洗涤后,探索了对其变性复性的最佳条件.复性后的样品经Glutathione Sepharose 4B一步亲合层析纯化,获得了具有生物学活性的SDS-PAGE纯的GST/MCP-1.Western Blot检测表明,纯化的GST/MCP-1可与MCP-1抗体发生特异反应.体外抗肿瘤试验表明,CST/MCP-1激活单核细胞及淋巴细胞后,具有抑制肿瘤细胞生长的能力.裸鼠抗肿瘤试验同样显示明显的抑制反应.上述结果提示MCP-1具有抗肿瘤能力.

小鼠胸腺基质细胞辐射损伤效应

体外研究胸腺基质细胞的特性及功能，发现不论是体外器官培养，还是液体单层培养，基质细胞都是在实质细胞退化死亡基础上不断增殖。单层培养可形成多角形细胞、纺锤形细胞及集落，器官培养可形成“细胞槽”滋养细胞等特殊结构。在基质细胞上可见有免疫细胞生长。在０．７５Ｇｙ及１．５Ｇｙ照射后，基质细胞（含基质祖细胞）与未照射组对比减少不明显，甚至有所增高，而４．０Ｇｙ和８．０Ｇｙ照射后其数量显著下降。胸腺基质祖细胞的Ｄ。值是２．３Ｇｙ，ｎ值是１．４。

氯化甲基汞对大鼠发育不同阶段脑染色质结构的影响

本文用Hewish和Burgoyne法分离纯化大鼠脑细胞核,采用脑细胞核缺口翻译分析法,探讨孕鼠于妊娠器官发生期,经腹腔连续给予5天氯化甲基汞(2mg/kg体重)后,对大鼠发育不同阶段脑染色质结构的影响。实验结果表明,接触氯化甲基汞组大鼠脑细胞核,分别经DNase 1和EcoR 1核酸内切酶消解后,进行核缺口翻译测定,生后3天大鼠脑细胞核,分别经两种酶处理后,其~3H—dAMP掺入量均明显低于相应未接触氯化甲基汞对照组。氯化甲基汞对大鼠发育过程中脑染色质结构的影响,可能与胎、幼鼠对甲基汞神经毒性的易感有密切关系。

T淋巴细胞辐射生物学效应研究的新进展

T淋巴细胞辐射生物学效应是辐射免疫学研究的重要内容。T淋巴细胞细胞数目减少、比例失调及功能损伤是中等以上剂量电离辐射后机体免疫学功能下降的主要原因,关系着急性放射损伤的治疗及预后。本文从T淋巴细胞的辐射敏感性、辐射对T淋巴细胞分化及分子表达的影响、T淋巴细胞间期死亡机制方面综述近年来的研究进展。

豚鼠淋巴结基质祖细胞的实验研究

豚鼠淋巴结单个核细胞体外单层培养形成CFU—F集落,其种植的细胞数与成集落数呈良好的线性关系;淋巴结基质祖细胞的Do值为2.8Gy,n值1.5;低浓度(10μg/ml)PHA对集落形成有一定的刺激效应,高浓度(40μg/ml)可抑制集落的形成;经对集落大小、所含细胞数及密度进行比较,说明CFU—F是非均质的,可能因存在不同的亚群。

重组人白细胞介素－6与肿瘤坏死因子突变体融合蛋白的构建及表达

针对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体明显增高的事实，根据ＴＮＦ结构与功能研究的最新信息，利用ＰＣＲ技术，对人ＴＮＦα基因进行了改造，并将其与人ＩＬ－６成熟肽编码区ｃＤＮＡ通过人工接头进行融合。融合蛋白在大肠杆菌中表达后，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，分子量约为３７ｋＤ；活性检测结果证实，该融合蛋白兼具有ＴＮＦ抗肿瘤活性和结合ＩＬ－６受体的能力，在高表达ＩＬ－６受体的人骨髓瘤细胞上测得的细胞毒活性较同样位点突变的ＴＮＦ高约３倍。

人参蜂王浆对正常和照射豚鼠造血免疫器官CFU-F影响的实验研究

骨髓及脾细胞体外培养中加不同浓度人参蜂王浆后培养8～12天,计数基质祖细胞集落(CFU-F)数。发现实验组形成的CFU-F小型集落明显高于对照组。培养1Gy照射的骨髓细胞,加入3.10^(-1)～3.10^(-3)g/ml人参蜂王浆后,细胞呈融合生长,认为人参蜂王浆对骨髓和脾细胞体外培养形成的小型CFU-F有成集落刺激作用,而对大型集落则相反。

造血基质干细胞的研究Ⅰ.原位骨髓的造血重建

用大剂量电离辐射破坏小鼠一侧肢体的骨髓造血组织,在完整机体调节下,伤肢造血重建很快完成。其重建造血机制,除了目前公认的体内其它未受损伤的造血组织内造血干细胞向伤肢迁徙、定居并增殖外,还有环境因素的作用。本文发现并提出在造血重建过程中,骨内膜或骨质内细胞成分很可能起有重要作用。它提示我们,作为支持造血实质细胞机能的微环境核心成分——基质细胞有可能起源于骨内膜或骨皮质。

小鼠免疫器官（胸腺、脾脏和淋巴结）成克隆基质祖细胞辐射敏感性的研究

用体外液体单层培养技术研究了小鼠胸腺、脾脏和淋巴结成克隆性基质祖细胞（ＣＦＵ－Ｆ）的辐射敏感性：胸腺ＣＦＵ－Ｆ的Ｄ０值为２．３Ｇｙ，ｎ值为１．５，脾脏为２．８Ｇｙ和１．２，雨淋巴结的则为２．７Ｇｙ及１．４。脾致密型ＣＦＵ－Ｆ亚群的Ｄ０值为２．１Ｇｙ，ｎ＝１．５；而松散型ＣＦＵ－Ｆ亚群的Ｄ０＝４．４Ｇｙ，ｎ＝１．２。这为大剂量辐射损伤混输基质细胞以提高受体免疫造血功能，提供了实验依据。

造血基质干细胞的研究——Ⅲ 骨皮质异位移植的造血重建

将除净骨髓细胞的骨皮质移植到同系小鼠皮下后4周,移植物髓腔内充满髓系造血组织。说明骨皮质内含有造血重建的主要诱导因素,即在异位移植造血重建过程中,骨皮质环境因素占有主导作用。骨皮质内的成骨细胞或骨母细胞不仅是骨的发生、成长及修复的主要成分,而且在特殊条件下,很可能还有支持造血恢复作用。这种作用大概是通过其自身增殖、分化形成特有的造血基质细胞或是分泌某种因子诱导宿主的造血干细胞和基质细胞定居而重建造血。

血小板生成素突变体融合蛋白表达及纯化研究

目的：用大肠杆菌融合蛋白表达载体pMAL—c2构建人血小板生成素突变体融合蛋白表达质粒pMAL-TPOM。方法：采用基因重组和表达、SD-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白纯化技术。结果：SDS-PAGE分析表明，IPTG诱导5h后大肠杆菌JM109表达到最高水平，约占大肠杆菌菌体总体蛋白的36．6％。除了大肠杆菌RR1不表达以外，大肠杆菌DH5a、H101均有较高水平的表达，表达产物血小板生成素突变体融合蛋白经SephacyIS-200和DEAE-SepharoseFF层析纯化后，蛋白纯度约为87．6％。结论：人血小板生成素突变体融合蛋白在大肠杆菌JM109、DH5a和H101中均获得高效表达。

造血基质干细胞的研究——Ⅳ.骨髓造血重建的细胞来源

通过对原位及异位移植股骨骨髓造血重建过程的研究,我们发现了移植物的骨内膜或骨皮质及骨小梁内细胞在诱导造血恢复上起着重要作用;骨皮质內含有造血微环境中的全部因素。本文观察了移植的骨皮质内造血重建的动态变化过程。即首先是基质细胞增殖、分化,包括骨小梁及血窦的形成,然后出现造血细胞增生。初步认为,作为诱导造血重建的环境因素的主要成分基质细胞来源于骨皮质。推断在正常机体中,骨髓内分化的基质细胞执行着支持实质细胞正常功能的作用,处于未分化的Go期的母细胞,则作为后备力量储存在骨皮质或骨小梁内(骨内膜细胞为中间阶段)。在整体调节下,二者保持着动态平衡状态。

电离辐射对免疫活性细胞及白细胞介素产生的影响

介绍了电离辐射对免疫活性细胞及白细胞介素产生的影响,认为参与机体免疫反应的细胞及白细胞介素产生细胞对辐射的敏感性不同.探讨辐射对它们的影响,对于了解辐射免疫调节有一定意义.

辐射致癌的分子生物学研究近况

流行病学和动物实验的大量数据揭示,当照射剂量超过一定范围时,肿瘤发病率和病死率增高.电离辐射通过直接和间接作用引起DNA单、双链断裂,亦可使糖和碱基受损,进而与蛋白质发生交联.正常人体细胞中存在的数十种癌基因,约70%靠近染色体脆弱位点.辐射造成的对称和非对称型染色体畸变,其断裂末端发生错误重结合,或一旦启动原癌基因,造成细胞分子失控,即可能导致恶变.

人单核细胞趋化蛋白-15'端翻译起始区的改构及其表达

应用ＰＣＲ技术优化人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）基因的５端翻译起始区，并将其亚克隆入大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中，经ＤＮＡ测序证实优化成功，且在大肠杆菌中表达出ＭＣＰ－１蛋白，表达产物约占菌体总蛋白的１０％左右，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明，表达产物可与ＭＣＰ－１抗体发生特异性反应。

人单核细胞趋化蛋白-1在大肠杆菌中的高效表达及其生物学活性

利用PCR和DNA重组技术，将人单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）cDNA克隆在表达载体pGEX－2T中，表达产物GST／MCP－1占菌体总蛋白的50％，且以无活性的包涵体形式存在。经变复性，GlutathioneSepharose4B亲合柱层析纯化，融合蛋白达到电泳纯，且具有MCP－1趋化活性。体内外抗肿瘤试验结果表明，GST／MCP－1激活单核细胞和淋巴细胞后可抑制肿瘤细胞生长，提示MCP－1可能成为肿瘤辅助治疗的一个候选药物。

小鼠淋巴结基质细胞特性及其在辐射损伤修复中的作用

不论是体外器官培养,还是液体单层细胞培养,基质细胞都是在实质细胞退化死亡基础上不断增殖。单层培养时可观察到多角形及纺锤形细胞散在分布,也可形成集落或单层。器官培养时可形成“滋养细胞”等。在淋巴结基质细胞上可见有造血免疫细胞生长,说明在培养条件下基质细胞可支持实质细胞的生长。0.75Gy照射后,基质细胞(合基质祖细胞)与未照射组对比没有减少,甚至有所增加,而1.5Gy、4.0Gy和8.0Gy照射后其数量显著下降。淋巴结基质祖细胞的D_0值是2.7Gy,n值是1.

人单核细胞趋化蛋白—1融合表达质粒的构建

目的：用大肠杆菌融合蛋白表达载体pGEX—2T构建人单核细胞趋化蛋白—1融合表达质性pGT—MCP—1。方法：采用PCR技术和DNA重组技术。结果：将编码人单核细胞趋化蛋白—1（MCP—1）基因克隆至融合表达载体pGEX—2T中，DNA测序证实正确。结论：获得融合表达质粒pGT—MCP—1，为进一步研究MCP—1的高效表达奠定了基础。

利用RT-PCR从人胎肝获得血小板生成素cDNA

采用反转录-PCR（RT-PCR）技术，成功地从人胎肝细胞mRNA中获得了血小板生成素（TPO）信号肽和成熟肽编码区cDNA。序列分析表明，该cDNA序列与DeSauveg等报道的人TPO相应的核苷酸序列完全一致，为TPO基因工程的进一步研究打下基础。