植物种多样性对生态系统功能的影响

采用8种1年生植物,利用室外盆栽方法构建的植物群落对物种多样性与群落生产力、杂草入侵性之间的关系及其潜在的作用机理进行了研究.结果表明,各物种单播时其生产力和抗杂草入侵能力都有较大差异.物种多样性与群落生产力之间不存在线性关系,而呈现单峰格局关系,即在一定范围内(本研究为4种),物种多样性对生产力增加有促进作用,超过该范围,物种多样性增加,群落生产力不再增加.但群落生产力和物种多样性均与杂草入侵量之间呈显著负相关关系.相对产量总和(RYT)分析表明,资源互补效应是本研究中所观察到的多样性-生产力、多样性-入侵性及生产力-入侵性关系的主要作用机理.

半衰期延长获得PAI-1抗性的t-PA突变体的构建、表达及特性分析

用基因重组及定位突变技术成功地构建了t-PA的K1区缺失突变体t-PAdelK1、PAI-1结合位点缺失突变体t-PA del(296—302)及两者的组合突变体t-PA del(K1,296—302),并在COS-7细胞中实现三者的暂时性表达,在CHO细胞中实现了t-PA del(K1,296—302)的稳定性表达。对表达产物的生物学特性分析表明,t-PA del(296—302)及t-PA del(K1,296—302)获得了PAI-1抗性,因时t-PA del(K1,296—302)在大鼠体内的半衰期延长约5倍,而与纤维蛋白的亲和力只略有下降。因此,此组合突变体有可能成为优于野生t-PA的新型溶栓剂候选株。

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳纤维蛋白自显影法检测不同分子量的纤溶酶原激活剂

ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）纤维蛋白显影方法是经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ将不同分子量的纤溶酶原激活剂（ＰＡ）分开，然后再转溶纤维蛋白板使之产生溶带而检测ＰＡ物质活性及分子大小的方法。此法与Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法比具有检测更简便、灵敏、快速的特点，且是活性检测，但其分子量分析精度不如Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法。本研究用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纤维蛋白自显影方法对本室表达的重组组织型－ｐＡ（ｒｔ－ＰＡ）及突变体Ｎｌｌ７Ｑ／Ｎｌ８４Ｑ／△（Ｋ２９６——Ｇ３０２）及标准尿激酶（ＵＫ）和ｒｔ－ＰＡ进行了分析鉴定。

SDS-PAGE纤维蛋白自显影法检测不同分子量的纤溶酶原激活剂

体内存在两种纤溶酶原激活剂(plasminogen activator, PA):血液中生理性的组织型纤溶酶原激活剂(t PA)及尿中的尿激酶型纤溶酶原激活剂(u PA)。它们通过将纤溶酶原转变成有活性的纤溶酶而启动纤溶过程使血栓溶解。目前模拟体内纤溶过程以纤维蛋白为底物的PA物质活性测定方法有纤维蛋白溶圈法和发光分析法。

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体FrGGI的构建、表达及特性分析

为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有PAI—1抗性的新型t-PA溶栓剂,利用基因重组及定位突变技术成功地构建了t-PA的K1、K2区糖基化位点消除,PAI-1结合位点缺失,F与E区连接序列His44～Ser50置换为纤粘蛋白Ⅰ型F区间连接序列GluSerLysProGluAlaGluGlu的t-PA的组合突变体FrGGI,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明,FrGGI在大鼠血浆中的半衰期延长了15倍,特异活性提高了40％,并获得了PAI-1抗性,是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。

人组织型纤溶酶原激活剂（t－PA）突变体FrGGI的构建、表达及特性分析

为了获得半衰期延长，特异活性提高及具有ＰＡＬ－１抗性的新型ｔ－ＰＡ溶栓剂，利用基因重组及定位突变技术构建了ｔ－ＰＡ的Ｋ１、Ｋ２区糖基化位点消除，ＰＡＩ－１结合位点缺失，Ｆ与Ｅ区连接序列Ｈｉｓ４４～Ｓｅｒ５０置换为纤粘蛋白Ⅰ型Ｆ区间连接序列ＧｌｕＳｅｒＬｙｓＰｒｏＧｌｕＡｌａＧｌｕＧｌｕ的ｔ－ＰＡ组合突变体ＦｒＧＧＩ，并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明，ＦｒＧＧＩ在大鼠血浆中的半衰期延长了１５倍，并获得了ＰＡＩ－１抗性，是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。

t-PA突变体的构建、表达及生物学特性分析

t-PA是纤溶系统的生理性激活剂,但它在血浆中半衰期甚短及活性可被天然快速抑制剂PAI-1抑制等生理特性成为其作为临床溶栓剂的主要缺陷。为了研制新型t-PA溶栓剂,本文根据t-PA结构与功能研究的最新信息,针对延长t-PA半衰期、提高特异活性及引入PAI-1抗性等,设计并构建了8种t-PA突变体。进而在COS-7及CHO细胞中进行了表达研究,并对突变体表达产物的特性进行了分析和评价。

鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片段的人源化分子设计

产生免疫原性的残基主要是位于蛋白表面的暴露残基，为了消除鼠抗体对人的免疫原性，利用表面再塑的方法对本室克隆的鼠抗人纤维蛋白抗体单链Ｆｖ片段进行了人源化分子设计．首先确定了鼠及人Ｆｖ片段的表面残基，在此基础上分析了鼠与人抗体Ｆｖ片段表面残基的差异，将存在差异的鼠抗体的表面残基换成人的，从而实现鼠抗体的人源化．提出了残基最高频率人源化及最相似链人源化两种分子设计方案．人源化的鼠抗人纤维蛋白抗体单链Ｆｖ片段的结构经Ｐｒｏｆｉｌｅｓ－３Ｄ检测证明合理，替换的表面残基的溶剂可及性未变，而且未对ＣＤＲｓ的空间构象产生明显影响，应不会影响与纤维蛋白的亲和力，为鼠抗体人源化实验研究奠定了基础．

纤溶系统的异常与血栓性疾病的关系及溶栓药物的发展方向

本文系统地介绍了血液中的纤维蛋白溶解系统(fibrinolytic system)的生理作用,以及它的异常在血栓性疾病发病中的作用。同时介绍了溶栓药物的现状及最新研究方向。 1 纤溶系统 纤溶系统是血液内与凝血系统相桔抗的多酶系统,在维持凝血与纤溶的动态平衡中起重要作用。其最重要的生理功能是降解血管壁上的纤维蛋白沉积物,维持血液在血管内的正常流动。

组织型纤溶酶原激活剂（t－PA）cDNA序列的测定

已经从ｍｅｌａｎｏｍａ细胞系中成功地获得了人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ，在此基础上用双脱氧终止法测定了ｔ－ＰＡｃＤＮＡ编码区全序列及３′非编码区部分序列，并发现与Ｐｅｎｎｉｃａ等发表的ｔ－ＰＡｃＤＮＡ序列相比，有两处差异，其一是第１７２５位核苷酸残基为Ｃ而非Ａ，并使此处序列与Ｐｅｎｎｉｃａ序列相比新产生一个ＳｔｙＩ切点，但由于差异发生在密码子第三位，没有引起编码的氨基酸变化；其二是第１７７７位核苷酸残基（终止密码子后第４位核苷酸残基）为Ｔ而非Ｇ，使与终止密码子相隔３个核苷酸残基处产生了一个新的ＴＧＡ，与Ｐｅｎｎｉｃａ序列相比此处的ＢｓｔＮＩ切点也消失了。

宋内氏福氏2a双价志贺氏菌芳香族氨基酸营养缺陷型减毒株的研究:Ⅰ.减毒株的构建

FS54是本室构建的宋内氏福氏2a双价志贺氏菌杂交株,有与志贺氏菌毒株相同的毒力。本研究通过遗传重组技术,给FS54株引入了aroD基因的转座子Tn10插入失活物(aroD∶∶Tn10),构建了FS54株的芳香族氨基酸营养缺陷型减毒株,并进一步去除了Tn10所携带的四环素抗性和宋内氏Ⅰ相大质粒(pSS120∶∶Tn5)上Tn5所携带的卡那霉素抗性,得到了宋内氏福氏2a双价志贺氏菌芳香族氨基酸营养缺陷型减毒株FS54—7b。

宋内氏福氏2a双价志贺氏菌芳香族氨基酸营养缺陷型减毒株的研究Ⅱ:生物学特性的研究

进一步对FS54—2、—3、—4、—5、—6、—7及—7b等双价减毒株的侵袭力、毒力、免疫原性与免疫保护性及遗传稳定性等进行了研究,证明双价减毒株仍保持了入侵肠上皮细胞的能力;小动物实验安全低毒;有很好的免疫原性,对小鼠有很好的双重免疫保护性。

干旱区覆膜滴灌条件下氮磷钾肥配施对加工番茄产量及光合特性的影响

在覆膜滴灌条件下,研究了氮磷钾肥的配施对加工番茄的产量及光合特性的影响。结果表明:(1)T3(N300kg/hm2P2O5210kg/hm2K2O150kg/hm2)、T5(N300kg/hm2P2O5105kg/hm2K2O75kg/hm2)的肥料配比及施用量适合于加工番茄的高产,产量分别达到111360kg/hm2、111450kg/hm2,但从经济效益分析T5的经济效益最好,每公顷比对照CK(N0kg/hm2P2O50kg/hm2K2O0kg/hm2)净增收2487元。(2)不同氮磷钾肥的配施对加工番茄的单叶净光合速率也有一定的影响,其中T5的两个峰值最高分别达到24.767、21.683umol/m2/s,7个处理的单叶净光合速率的日变化曲线基本均为双峰曲线,现对加工番茄的光合“午休”现象做初步的分析。

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)组合突变体FrGGl在CHO细胞中的高效表达

为了得到ｔＰＡ组合突变体ＦｒＧＧＩ在ＣＨＯ细胞中的高效表达，将表达质粒筛选基因启动子上游的增强子（ｅｎｈａｎｃｅｒ）去除，构建了ＦｒＧＧＩ真核表达质粒ｐＺＬＦｒＧＧＩ。酶切线性化后，采用大剂量ＤＮＡ电击介导法，转染ｄｈｆｒ基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞系（ＣＨＯｄｈｆｒ－）。氨甲喋呤（ＭＴＸ）筛选转染细胞，混合加压，挑选克隆，在１×１０－７ｍｏｌ／ＬＭＴＸ压力下，获得表达水平达１５００～２５００ＩＵ／１０６细胞·２４ｈ的细胞株。此细胞株表达水平稳定，形态良好，倍增时间约为３６ｈ，且有进一步提高表达水平的潜能。

低剂量γ线对胚胎发育的影响

用致畸实验方法结合胎脑组织学光镜检查,首次发现怀孕13天Wistar大鼠受1.0 Gy照射,胎鼠(20天胎龄)端脑的部分颞叶皮质细胞分层紊乱,集成许多细胞团块,表现出与嗅、内脏有关的古皮质区对射线敏感。研究结果还表明:0.25 Gy组未见影响胚胎发育;0.5、1.0 Gy使胎鼠发育迟缓、脑重下降,呈剂量依赖关系。

蛋白质空间结构预测

早在70年代,Anfinsen就提出蛋白质分子的一级序列决定其空间结构的论断,这一论断得到多次实验证实并被人们广泛接受,成为蛋白质结构预测的理论基础。由于蛋白质分子的结晶非常困难,因此蛋白质三维结构预测成为目前了解蛋白质结构信息的重要手段,这一研究领域也成为蛋白质工程研究的一个非常活跃的方向。

鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片断的三维结构模建

用Biosym公司开发的计算机辅助分子设计系统模建了鼠抗人纤维蛋白抗体Fv片断的三维结构。Fv是由重链可变区(Vh)和轻链可变区(Vl)两个结构域组成的具有抗原结合能力的最小抗体片断。先分别模建了Vh和Vl两个结构域,然后搭建出Fv片断的整体三维结构,并对模建的结构进行了分子力学和动力学优化。对结构的合理性验证显示模建结构是合理的。本研究为鼠抗人纤维蛋白抗体Fv片断的人源化的分子设计打下了基础。

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体在CHO细胞中表达产物的纯化研究

目的 :为了从细胞株培养液中纯化长半衰期的t PA组合突变体FrGGI。方法 :采用高表达克隆细胞株 ,进行大量培养 ,收集 2 4h细胞培养液为初始材料 ,利用t PAK2区含有Lysine结合位点的特性和Zn2 +与蛋白质中咪唑、巯基等基团螯合作用 ,经Lysine Sepharose 4B亲和层析和Zn2 + Sepharose 4B金属螯合层析二步组合纯化。结果 :获得高比活的FrGGI,为研究该突变体生物学特性及推广应用奠定基础。结论 :利用赖氨酸和锌离子柱二步组合纯化方法 ,可有效地分离纯化t

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)突变体在CHO细胞中的高效表达

构建了二氢叶酸还原酶(dhfr)选择基因启动子上游无增强子(cnhancer)的组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)组合突变体FrGGI真核表达质粒pZLFrGGI。将pZLFrGGI酶切线性化,采用大剂量DNA电击介导法,转染dhfr基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-dhfr^-)。用氨甲喋呤(MTX)筛选转染细胞。混合加压后,挑选克隆,在1×10^(-7)mol/L MTX压力下,得到了表达水平达1500～2500IU/10~6细胞·24小时的细胞株。此细胞株表达水平稳定,形态良好,倍增时间为36小时,且有进一步提高表达水平的潜能,有望发展为工程细胞株。

赵庄矿边角煤矸石充填开采技术研究

针对赵庄矿矸石充填开采工作面C5301的具体地质条件,采用"简支梁"理论分析和确定充填开采参数,采用三次充填开采回收煤柱;确定了C5301工作面的巷道布置方式和回采设备;同时分析确定了矸石充填方案。经过经济技术分析,在赵庄矿进行矸石充填开采在技术上是合理的,在经济上是可行的,并为类似条件下的推广应用提供了经验。