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番鸭细小病毒与鹅细小病毒PCR鉴别诊断方法的建立 被引量:35
1
作者 刘家森 姜骞 +3 位作者 司昌德 甘一迪 韩凌霞 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期469-472,共4页
根据番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)基因组的非同源序列各设计了1对引物MDPVF1/R1和GPVF1/R1,建立了一种PCR方法,用该PCR方法分别对GPV、MDPV、鸭瘟病毒(DPV)、鸭肝炎病毒(DHV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、犬细小病毒(CPV)和猫泛白细胞... 根据番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)基因组的非同源序列各设计了1对引物MDPVF1/R1和GPVF1/R1,建立了一种PCR方法,用该PCR方法分别对GPV、MDPV、鸭瘟病毒(DPV)、鸭肝炎病毒(DHV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、犬细小病毒(CPV)和猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)的病毒培养物及其核酸进行扩增。结果,引物MDPVF1/R1仅特异性扩增出MDPV的900 bp核酸片段,引物GPVF1/R1仅特异性扩增出GPV的465 bp核酸片段。表明,建立的PCR方法可用于GPV和MDPV的鉴别诊断。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 鹅细小病毒 聚合酶链式反应 鉴别诊断
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鸭肝炎病毒Ⅰ型VP3基因的克隆及原核表达 被引量:11
2
作者 刘家森 甘一迪 +5 位作者 姜骞 孟庆文 韩凌霞 司昌德 刘娣 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期587-590,共4页
参照鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-Ⅰ)的基因组序列设计并合成了1对引物。通过RT-PCR方法扩增获得了DHV-Ⅰ病毒161/79/V结构蛋白VP3基因,并将VP3基因片段插入pGEX-6p-1表达载体,转化E.coli Rosetta-gami(DE3)pLysS。SDS-PAGE分析表明,经用0.1mmol... 参照鸭肝炎病毒Ⅰ型(DHV-Ⅰ)的基因组序列设计并合成了1对引物。通过RT-PCR方法扩增获得了DHV-Ⅰ病毒161/79/V结构蛋白VP3基因,并将VP3基因片段插入pGEX-6p-1表达载体,转化E.coli Rosetta-gami(DE3)pLysS。SDS-PAGE分析表明,经用0.1mmol/LIPTG于16℃诱导表达后,菌体裂解产物有特异的、分子质量约52ku的目的蛋白条带。Western-blotting检测表明,表达产物与DHV-Ⅰ阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒Ⅰ型 VP3基因 克隆 原核表达
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产气荚膜梭菌α毒素研究进展 被引量:5
3
作者 刘家森 刘怀然 +1 位作者 陈洪岩 李一经 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第5期27-29,共3页
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 细菌毒素 理化性质 作用机制 免疫原性 检测方法 致病因子
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SARS冠状病毒复制酶蛋白nsp8的原核表达 被引量:2
4
作者 刘家森 陈淑红 +3 位作者 刘怀然 孟庆文 庞海 孔宪刚 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期55-58,共4页
以SARS冠状病毒(BJ01株)基因组RNA为模板,经RT-PCR扩增得到SARS-CoVnsp8基因,并克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pNSP8E。pNSP8E转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出可溶性的GST-nsp8融合蛋白,经亲和层析和自剪切获得了... 以SARS冠状病毒(BJ01株)基因组RNA为模板,经RT-PCR扩增得到SARS-CoVnsp8基因,并克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pNSP8E。pNSP8E转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出可溶性的GST-nsp8融合蛋白,经亲和层析和自剪切获得了高纯度nsp8蛋白。以nsp8为抗原免疫家兔,制备了nsp8的多克隆抗体,为下一步研究其在病毒感染的细胞中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 SAILS冠状病毒 复制酶 表达 SARS冠状病毒 原核表达载体 酶蛋白 病毒复制 多克隆抗体 PCR扩增 重组质粒
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产气荚膜梭菌α毒素亚单位基因的表达及表达产物活性分析 被引量:4
5
作者 刘家森 刘怀然 +1 位作者 陈洪岩 李一经 《中国比较医学杂志》 CAS 2003年第6期332-335,共4页
含有产气荚膜梭菌α毒素基因序列的克隆载体pMD18TCα ,经BamHⅠ和HindⅢ内切酶双酶切后 ,将α毒素亚单位基因亚克隆到原核表达载体pET30b中 ,构建表达载体pET30bPα。经酶切和测序鉴定 ,α毒素基因中的90 0bp的片段正确插入到表达载体... 含有产气荚膜梭菌α毒素基因序列的克隆载体pMD18TCα ,经BamHⅠ和HindⅢ内切酶双酶切后 ,将α毒素亚单位基因亚克隆到原核表达载体pET30b中 ,构建表达载体pET30bPα。经酶切和测序鉴定 ,α毒素基因中的90 0bp的片段正确插入到表达载体中。重组菌株BL2 1(DE3)pET30bPα经IPTG诱导的表达产物经SDS PAGE和Western_blot分析 ,表达出大小为 38× 10 3的重组蛋白具有和α毒素阳性血清发生特异性的免疫反应。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 基因表达 克隆载体 免疫原性
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改良加压法子宫输卵管造影在输卵管阻塞性不孕症中的研究 被引量:1
6
作者 刘家森 尹新红 +2 位作者 刘海平 陈占雄 刘卫宾 《中国医药导刊》 2012年第12期2098-2099,共2页
目的:碘海醇属非离子造影剂,通过改良加压法加大剂量注射碘海醇,进行子宫输卵管造影(HSG),检查和治疗输卵管阻塞性不孕症,提高输卵管阻塞再通率和受孕率。方法:选择经常规子宫输卵管造影确诊存在输卵管阻塞性不孕症的患者263例,在无麻... 目的:碘海醇属非离子造影剂,通过改良加压法加大剂量注射碘海醇,进行子宫输卵管造影(HSG),检查和治疗输卵管阻塞性不孕症,提高输卵管阻塞再通率和受孕率。方法:选择经常规子宫输卵管造影确诊存在输卵管阻塞性不孕症的患者263例,在无麻醉下常规子宫腔内一次性导尿管插管,使用Zentith-1710自动推注系统,加压加大剂量向子宫腔内注射碘海醇进行子宫输卵管治疗性造影。与常规子宫输卵管造影后的受孕率比对分析。结果:经改良加压法注射碘海醇进行子宫输卵管治疗性造影检查,双侧输卵管通畅136例,占51.7%。一年后随访,有128例成功受孕,占48.7%。结论:改良加压、大剂量注射碘海醇检查和治疗输卵管阻塞性不孕症,较常规子宫输卵管造影治愈率明显提高,有较高的实用推广价值。 展开更多
关键词 改良加压法 碘海醇 输卵管阻塞性 不孕症
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腰椎间盘退行性变的CT与MRI的对比性研究 被引量:4
7
作者 刘家森 李幸姿 +1 位作者 董学宝 刘海平 《贵阳中医学院学报》 2013年第3期108-109,共2页
目的:比较腰椎间盘退行性变的CT与MRI诊断价值。方法:对本院68例腰椎间盘退行性变病人CT及MRI两种影像学检查情况进行比较。结果:68例腰椎间盘退行性变病人的CT及MRI检查显示,中度及重度椎间盘突出时硬膜囊分界清晰度MRI优于CT,差异具... 目的:比较腰椎间盘退行性变的CT与MRI诊断价值。方法:对本院68例腰椎间盘退行性变病人CT及MRI两种影像学检查情况进行比较。结果:68例腰椎间盘退行性变病人的CT及MRI检查显示,中度及重度椎间盘突出时硬膜囊分界清晰度MRI优于CT,差异具有统计学意义(P<0.05),椎间盘积气、髓核钙化的检出率CT优于MRI,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在腰椎间盘退行性变临床诊断中,CT及MRI各有优势,相辅相成,临床应用时应当依据患者具体病情进行选择。 展开更多
关键词 腰椎间盘 退行性变 CT MRI
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SARS冠状病毒非结构蛋白Nsp的原核表达
8
作者 刘家森 陈淑红 +3 位作者 刘怀然 孟庆文 庞海 孔宪刚 《中国病毒学》 CSCD 2005年第5期552-554,共3页
The gene of nonstructural protein 9 of SARS-coronavirus(SARS-CoV) was amplified using PCR from the product derivated from reverse transcription of SARS-CoV genome RNA,and was inserted into the multiple cloning sites o... The gene of nonstructural protein 9 of SARS-coronavirus(SARS-CoV) was amplified using PCR from the product derivated from reverse transcription of SARS-CoV genome RNA,and was inserted into the multiple cloning sites of the expression vector pGEX-6p-1.Recombinant strain induced with IPTG expressed the specific soluble protein.The nsp9 protein was harvested and purified by affinity chromatography and processed by prescission protease.Polyclonal serum against the nsp9 protein was raised in rabbit. 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 复制酶 表达
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基于同态加密和边缘计算的关键目标人脸识别方案
9
作者 刘家森 王绪安 +2 位作者 余丹 李龙 赵臻 《信息安全研究》 CSCD 北大核心 2024年第11期1004-1011,共8页
随着我国综合国力和国际地位的提升,越来越多的重大国际活动在我国一线城市举办,如成都大运会和杭州亚运会,庞大的人流量和复杂的人群类别给我国安保队伍造成了不小的安保压力.由于传统的人脸识别系统是在明文状态下在中心服务器中实现... 随着我国综合国力和国际地位的提升,越来越多的重大国际活动在我国一线城市举办,如成都大运会和杭州亚运会,庞大的人流量和复杂的人群类别给我国安保队伍造成了不小的安保压力.由于传统的人脸识别系统是在明文状态下在中心服务器中实现人脸识别,并依赖传统国密算法保证安全性,这对整个系统的计算效率和安全性都无法给予充分保障.为此,基于CKKS同态加密方案和Insightface人脸识别算法,提出了一种支持边缘计算的关键目标人脸识别方案.首先利用CKKS同态加密方案对关键目标人脸特征进行加密,并将密文数据分配给各个前端监控设备,之后由前端监控设备负责提取现场人群的人脸特征,并计算与密文数据库的匹配度,最后将密文计算结果返回至中心服务器并进行解密.实验结果表明,该方案在LFW数据集上阈值为1.23时,密文中的识别准确率为98.2116%,证明该方案的可靠性. 展开更多
关键词 重大安保活动 关键目标识别 CKKS同态加密算法 Insightface算法 边缘计算
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基于改进Swin Transformer的中心点目标检测算法
10
作者 刘家森 黄俊 《计算机科学》 CSCD 北大核心 2024年第6期264-271,共8页
针对Swin Transformer在提取局部特征信息和特征表达能力上存在的不足,提出了一种基于改进Swin Transformer的中心点目标检测算法,以提高其在目标检测方面的性能。通过调整网络结构和引入反卷积模块来增强网络对局部特征信息的提取能力... 针对Swin Transformer在提取局部特征信息和特征表达能力上存在的不足,提出了一种基于改进Swin Transformer的中心点目标检测算法,以提高其在目标检测方面的性能。通过调整网络结构和引入反卷积模块来增强网络对局部特征信息的提取能力,利用自适应二维高斯核和回归头模块检测目标中心点来增强特征表达能力,并在Swin Transformer block模块中加入dropout激活函数,以缓解网络过拟合问题。在Pascal VOC和MS COCO 2017数据集上分别对改进后的算法进行验证,实验结果表明,改进后的Swin Transformer算法在Pascal VOC数据集上的精确度达到了81.1%,在MS COCO数据集上的精确度达到了37.2%,明显优于其他主流目标检测算法。 展开更多
关键词 深度学习 图像处理 目标检测 反卷积 Swin Transformer
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常见疾病的X线片诊断
11
作者 刘家森 陈占雄 崔文 《中国卫生产业》 2011年第11期116-116,共1页
X线是在真空管内由高速行进的电子流突然被钨靶阻挡所产生,故产生X线必须具备游离的电子群、电子群高速行进和高速行进的电子群突然受阻3个条件。X线摄影作用能使胶片感光,经过X线照射与未经照射的部分胶片的乳胶的溴化银放出的银离子... X线是在真空管内由高速行进的电子流突然被钨靶阻挡所产生,故产生X线必须具备游离的电子群、电子群高速行进和高速行进的电子群突然受阻3个条件。X线摄影作用能使胶片感光,经过X线照射与未经照射的部分胶片的乳胶的溴化银放出的银离子有差异,构成了反映组织密度不同的影像,这是X线摄影检查的基础,文章主要探讨了常见疾病X线的诊断。 展开更多
关键词 诊断 疾病诊断 影像学 X射线诊断
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犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量:17
12
作者 李慕瑶 姜骞 +3 位作者 刘家森 司昌德 韩凌霞 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期218-222,共5页
根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET-30a载体中,构建了原核表达载体pET-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western-blotting证明该重组蛋白具... 根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET-30a载体中,构建了原核表达载体pET-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western-blotting证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为15.8 ng/孔,血清的最佳稀释倍数为1∶100,建立了检测CPV血清抗体的间接ELISA方法。 展开更多
关键词 VP2基因 原核表达 纯化 间接ELISA
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国内部分地区多杀性巴氏杆菌荚膜血清型和基因型的研究 被引量:21
13
作者 王林柏 孙久鹤 +5 位作者 郭东春 曹培丽 刘家森 刘春国 刘大飞 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期116-119,共4页
为了解国内部分地区不同动物多杀性巴氏杆菌(P.multicida)流行情况,本研究以36株P.multicida为研究对象,通过多重荚膜PCR、多位点序列分型(MLST)和脂多糖多重PCR(LPS-m PCR)对其荚膜型和基因型进行鉴定。采用多重荚膜PCR方法将36株细菌... 为了解国内部分地区不同动物多杀性巴氏杆菌(P.multicida)流行情况,本研究以36株P.multicida为研究对象,通过多重荚膜PCR、多位点序列分型(MLST)和脂多糖多重PCR(LPS-m PCR)对其荚膜型和基因型进行鉴定。采用多重荚膜PCR方法将36株细菌的荚膜血清型分为A、B和D 3种,其中禽源P.multicida主要以A为主;以LPS-m PCR方法将P.multicida分为L1、L2、L3和L6 4种LPS基因型,禽源P.multicida主要为L1型;通过MLST技术将P.multicida分为ST-129、ST-8、ST-58、ST-5、ST-13、ST-50和ST-122 7种ST型,禽源P.multicida主要为ST-129型。本研究为P.multicida的流行病学监测和基因多样性提供了技术支撑。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 多位点序列分型 脂多糖多重PCR LPS基因型
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犬瘟热重组N蛋白抗原间接ELISA方法的建立及应用 被引量:13
14
作者 姜骞 周洁 +6 位作者 刘家森 李慕瑶 司昌德 韩凌霞 孟庆文 陈洪岩 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期225-228,232,共5页
本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDV ELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为45 min,羊抗犬酶标抗体稀释... 本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDV ELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为45 min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2 000,作用时间为60 min,S/P值≥0.208者判为阳性,S/P值≤0.16者判为阴性,介于两者之间者判为可疑。该抗原不与犬细小病毒、犬传染性肝炎、犬副粘病毒、犬波特氏杆菌等4种疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数均小于15%,具有良好的重复性;检测血清样品96份,与进口诊断试剂盒的符合率为97.1%。本研究为现地免疫犬群抗体检测和进行CDV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 重组N蛋白 间接ELISA
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禽多杀性巴氏杆菌PCR诊断方法的建立 被引量:15
15
作者 亓英芳 刘家森 +2 位作者 张在平 刘思国 曲连东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第7期68-69,共2页
关键词 PCR技术 禽多杀性巴氏杆菌 诊断方法 现代分子生物学 病原检测 生物信息学 禽巴氏杆菌
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3株鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因VP1的克隆及序列分析 被引量:10
16
作者 甘一迪 刘家森 +6 位作者 姜骞 郭东春 司昌德 孟庆文 韩凌霞 刘娣 曲连东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期952-957,共6页
通过RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒DHV-1:161/79/V、YH、HN株的VP1基因的核苷酸序列。系统发育分析表明,3株病毒与已发表的DHV-1结构基因VP1核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.7%~96.9%和95.4%~96.6%,与DHV-1变异株核苷酸和氨基酸序列的相似... 通过RT-PCR方法扩增鸭肝炎病毒DHV-1:161/79/V、YH、HN株的VP1基因的核苷酸序列。系统发育分析表明,3株病毒与已发表的DHV-1结构基因VP1核苷酸和氨基酸的同源性分别为92.7%~96.9%和95.4%~96.6%,与DHV-1变异株核苷酸和氨基酸序列的相似性均分别低于75%和88%,表明3株病毒属于DHV-1,与变异株是不同的血清型。强毒DHV-1:161/79/V的VP1蛋白第49和第183位氨基酸为T和H,弱毒DHV-1:YH、HN为S和Q,推测这2处位点的改变可能与病毒的强弱有关 DHV-1和其变异株的VP1蛋白均没有保守的RGD序列 变异株N-DHV:90D、04G在第50和51位比DHV-1多2个氨基酸(Q和D),在第147和185位各缺失1个氨基酸(E和L),而在变异株DHV:AP-03337、AP-04009、AP-04114、AP-04203的第145和146位比DHV-1多了2个氨基酸(G、G) 不同血清型的鸭肝炎病毒在46-64位、95-149位、180-223位抗原指数差别较大,推测这些位点的改变可能影响病毒的生物学特性。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒(DHV) VP1基因 序列分析
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禽白血病劳斯肉瘤病毒衣壳蛋白P27基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:6
17
作者 乔彩霞 关云涛 +5 位作者 陈洪岩 刘怀然 蔡雪辉 李昌文 葛俊伟 刘家森 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期169-173,共5页
从人工感染禽白血病劳斯肉瘤病毒的SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物中提取RNA,通过RT_PCR方法扩增出720bp的gagP27基因片段,克隆至pMD18_T载体,酶切鉴定后进行序列测定和分析,表明该片段编码序列与国外RSV分离株(JO2342)的同源性达97 3... 从人工感染禽白血病劳斯肉瘤病毒的SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物中提取RNA,通过RT_PCR方法扩增出720bp的gagP27基因片段,克隆至pMD18_T载体,酶切鉴定后进行序列测定和分析,表明该片段编码序列与国外RSV分离株(JO2342)的同源性达97 3%。将该片段亚克隆至pGEX_6P_1原核表达载体,转化受体菌BL_21,经IPTG诱导表达,12%SDS_PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,证明目的基因得到高效表达,所表达蛋白是大小为56kD的融合蛋白,占菌体总蛋白的23%。表达产物经GlutathionSpharose4B树脂亲和层析法纯化后,每100mL菌液最终可获得5mg重组P27蛋白,蛋白纯度在90%以上。用兔抗自然P27蛋白阳性血清进行Westernblot检测,表明重组P27蛋白有抗原反应活性。用纯化的重组P27蛋白免疫兔子制备多克隆抗体,产生的抗体与禽白血病全病毒抗原可以发生特异性反应。所制备的重组P27蛋白和多克隆抗体将为禽白血病的诊断及ELISA试剂盒的研制奠定基础。 展开更多
关键词 禽白血病 禽劳斯肉瘤病毒 P27基因 克隆 表达 多克隆抗体
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犬细小病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用 被引量:9
18
作者 姜骞 李慕瑶 +6 位作者 刘家森 司昌德 葛艳华 郭东春 韩凌霞 孟庆文 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期141-144,共4页
本研究以纯化的犬细小病毒(CPV)重组VP2蛋白为包被抗原,建立了检测CPV抗体的间接ELISA方法,其抗原包被浓度为0.158μg/mL;待检血清稀释倍数为1∶100,作用时间为60min;羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2000,作用时间为60min;底物作用时间为10... 本研究以纯化的犬细小病毒(CPV)重组VP2蛋白为包被抗原,建立了检测CPV抗体的间接ELISA方法,其抗原包被浓度为0.158μg/mL;待检血清稀释倍数为1∶100,作用时间为60min;羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2000,作用时间为60min;底物作用时间为10min;判定标准为S/P≥0.282时为阳性,S/P≤0.226时为阴性。该方法与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬副粘病毒病、犬波特氏杆菌病等4种犬常见传染病阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于15%,显示该方法具有良好的重复性;与商品化CPVELISA试剂盒进行比较,符合率为96.5%。本研究为现地免疫犬群抗体监测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 犬细小病毒 重组VP2蛋白 间接ELISA
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抗犬瘟热病毒重组核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:9
19
作者 周洁 姜骞 +6 位作者 张洪英 刘家森 刘立奎 陈洪岩 韩凌霞 司昌德 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期528-532,共5页
以纯化的重组犬瘟热病毒(CDV)N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术获得两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为A4C6C12和A5B8H7间接ELISA检测腹水效价分别为1:106、1:105;亚类鉴定结果分别为IgG2a、IgG2b,轻... 以纯化的重组犬瘟热病毒(CDV)N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术获得两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为A4C6C12和A5B8H7间接ELISA检测腹水效价分别为1:106、1:105;亚类鉴定结果分别为IgG2a、IgG2b,轻链均为K型;Western blot和ELISA分析结果显示2株单克隆抗体均能与重组N蛋白和CDV发生反应,而与犬细小病毒及犬腺病毒等无交叉反应;ELISA叠加试验的增值结果表明两株单克隆抗体识别的抗原位点不同.特异性抗CDV-rN的单克隆抗体的获得,为进一步用于临床诊断研究奠定了基础. 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 重组核衣壳蛋白 单克隆抗体
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产肠毒素大肠杆菌双重PCR检测方法的建立 被引量:10
20
作者 曲泽慧 陈佩佩 +6 位作者 张爱芹 郭东春 林欢 姜骞 刘家森 师东方 曲连东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期65-68,共4页
为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314bp;最终确定dNTP终浓... 为了快速检测和鉴定产肠毒素大肠杆菌菌毛(K88和K99)基因,本研究设计合成了针对K88、K99的2对特异性引物,对扩增条件进行优化,建立了检测K88和K99的双重PCR方法。该方法对K88、K99基因的扩增产物大小分别为237和314bp;最终确定dNTP终浓度0.4mmol/L,K88、K99的引物终浓度均为25μmol/L,退火温度为52℃。试验结果表明,该方法具有良好的灵敏性和特异性。用所建立的双重PCR方法对实验室分离的23株大肠杆菌进行检测,结果显示,K88单重PCR阳性2株,K99单重PCR阳性3株,K88和K99双重PCR阳性5株。本研究建立的双重PCR检测方法为致幼畜腹泻产肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供了方法。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 双重PCR K88菌毛 K99菌毛
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