大鼠睾丸生精细胞发育的形态学研究

对７０例不同发育阶段（胚胎不同时期、新生期、未成熟期和成熟期）Ｗｉｓｔａｒ大鼠睾丸生殖细胞的发育进行了光镜和电镜研究。结果：１．根据时间、分布及形态结构等将生精细胞的发育过程初步分为原始生殖细胞、生殖母细胞、前精原细胞、早期精子发生及精子发生等５个阶段。２．胚胎１３ｄ原始生殖细胞间即可见到胞质桥前身；胚胎１９ｄ生殖母细胞间的胞质桥已明显且较多。说明雄性生殖细胞的胞质桥在精原细胞以前就已出现。３．自胚胎１７ｄ在生殖细胞和支持细胞间见到大量不典型的细胞连接。这种连接在以后各时期均可见到。除可能具有机械性连接作用外，可能尚有输送营养和传递信息的作用。

大鼠睾丸间质细胞发育的形态学研究及立体学定量分析

对６３例胚胎期至生后不同发育时期Ｗｉｓｔａｒ大鼠睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞进行光镜、电镜观察及立体学分析。结果表明：１．大鼠睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞从胚胎１５ｄ出现，１７ｄ初具分泌类固醇激素的结构特点。２．Ｌｅｙｄｉｇ细胞存在两个细胞增殖峰，一个在胚胎１７～１９ｄ，另一个在生后４周。两峰之间有一个低谷（约在生后第２周）。从胚胎至生后，细胞核的体密度逐渐减小，细胞质、线粒体及滑面内质网的体密度逐渐增大，脂滴的体密度呈现较大波动，在一定程度上反映了间质细胞的功能状态。３．生后第２周后，睾丸间质内明确见到明、暗两种细胞。

大鼠睾丸支持细胞发育的形态学研究

对７０例不同胎龄及生后不同发育阶段Ｗｉｓｔａｒ大鼠睾丸支持细胞的发育进行了光镜、电镜研究。结果：１．依形态学特点，将支持细胞的发育过程初步分为４期：分化前期（胚胎１１～１５ｄ）、分化期（胚胎１５ｄ～生后１至２周）、成熟前期（生后２周～青春期前）、成熟期（青春期后）。２．胚胎及新生时，在支持细胞间见到两侧胞膜紧密相贴及不典型的桥粒连接等；自生后４周，见到紧密连接。３．自胚胎１７ｄ至成熟以后，在支持细胞与其周围的生殖细胞间见到大量类似桥粒和类似中间连接等不典型的细胞连接。４．胚胎１９ｄ及新生期，睾丸索内除支持细胞及生殖细胞外，尚可见一种特殊的细胞。

人胚胎睾丸生殖细胞发育的组织学和超微结构研究

用光镜与电镜技术,对15例7至28周人胚胎睾丸生殖细胞的发育进行了研究.结果:(1)据时间、位置及形态结构特点,将生殖细胞的发育过程初步分为三个阶段,即原始生殖细胞阶段,生殖母细胞阶段和前精原细胞阶段.其中前精原细胞阶段又经历了早、中、晚三个时期,各期出现的时间有交错.(2)14周是胚胎生殖细胞发育的一个重要时期.生殖细胞的增殖高峰、退化高峰以及前精原细胞初次出现均在此期.此期生殖细胞间还见到细胞连接,说明生殖细胞在胚胎时期即出现同步分化的现象.

覆盆子提取物在HepG2细胞增殖和凋亡中的作用

目的：在美国，新鲜覆盆子属于普通水果，在中国则为“药食两用”植物的果实。覆盆子中含有大量植物化学物质，其中许多植物化学物质有抗氧化和抗肿瘤作用。该文报告了新鲜覆盆子提取物抑制HepG2 cell(人肝癌细胞系)增殖并诱导细胞凋亡的作用。方法：采用细胞增殖测定、Westem blot分析、免疫细胞化学、和TUNEL分析等方法。

基于HS-SPME-GC-MS结合电子鼻分析熟制小龙虾冻藏过程中风味动态变化

为探究冻藏时间对熟制小龙虾风味的影响,采用顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱法对冻藏过程中小龙虾虾肉和虾黄挥发性成分种类及含量进行检测,结合气味活度值筛选造成小龙虾风味劣变的关键成分。结果表明,电子鼻能够有效区分不同冻藏时间小龙虾的气味差异,虾肉及虾黄中的醇类、醛类、酮类、氮氧化物、烷烃类、硫化物含量均随着贮藏时间的延长呈上升趋势。冻藏4个月后,虾肉关键劣变成分为壬醛、戊醛,虾黄为己醛、壬醛,冻藏12个月后,虾肉及虾黄关键劣变成分主要包括己醛、庚醛、壬醛、戊醛、1-辛烯-3-醇和2,3-辛二酮。通过复配不同浓度的关键成分进行感官评价发现,随着熟制小龙虾冻藏时间的延长,异味强度不断增加。在此基础上建立的关键劣变成分定量检测方法可用于评价熟制小龙虾在冻藏过程中的风味变化。综上,冻藏过程中熟制小龙虾的风味劣变现象依然存在,本研究通过筛选关键挥发性成分并建立其定量检测方法,为控制熟制小龙虾冻藏过程中的风味劣变提供参考。

密度梯度离心法结合贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的:建立一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞的方法,观察成年大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性。方法:实验于2003-03/2004-05于哈尔滨医科大学组胚教研室完成。①用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化成年大鼠骨髓间充质干细胞。②采用倒置显微镜、透射电镜观察,免疫细胞化学法鉴定骨髓间充质干细胞膜抗原和细胞基质蛋白属性。③体外加成骨、成软骨诱导剂,14d分别做碱性磷酸酶组织化学、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,观察骨髓间充质干细胞的成骨分化及成软骨分化结果。结果:①成年大鼠骨髓间充质干细胞呈均一的成纤维细胞样,具有一般干细胞的超微结构特点。②广泛表达Vimentin,CD29,CD44,不表达CD14,CD34。③加入成骨诱导剂14d后,骨髓间充质干细胞呈多层重叠生长,现碱性磷酸酶强阳性,阳性率为90.5%。④经成软骨诱导后,Ⅱ型胶原免疫组化染色,诱导14d的骨髓间充质干细胞呈现广泛的棕褐色染色,在细胞密集处细胞周围可见黄褐色染色。结论:密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化成年大鼠骨髓间充质干细胞,用此种方法培养的细胞具有骨髓间充质干细胞的一般生物学特性。

大鼠胎脑神经细胞与胶原复合体移植对脑损伤的修复

目的:评价胶原蛋白(Collagen)的细胞相容性;研究胶原蛋白(C)与大鼠胎脑神经细胞(FBN)复合体(C-FBN)脑内移植对脑损伤的修复作用。方法:将大鼠FBN与胶原蛋白联合体外培养,进行光镜、扫描电镜观察。并将体外联合培养3～5d的C-FBN(移植前48h培养液中加入BrdU)移植到大脑皮质损伤模型的大鼠脑损伤部位,术后3,6,10,15及30d光镜、BrdU免疫细胞化学染色(ICC)、透射电镜观察脑组织对移植物的反应、移植细胞生长状态及载体在体内的降解情况等。结果:胶原蛋白对FBN生长无不良影响;脑组织对移植物无明显的免疫排斥反应;胶原蛋白与周围脑组织整合好,有血管长入移植物中;载体内有大量存活神经细胞,而且术后各时段都检出BrdU阳性细胞;移植区有突触形成;胶原蛋白海绵吸收、降解快,可诱导组织再生。结论:胶原具有良好的细胞相容性和组织相容性,是神经组织工程的一种较为理想的生物载体材料;生物材料与胎脑神经细胞联合培养移植是治疗脑损伤较有前途的新方法。

大鼠FBN与胶原蛋白细胞载体联合培养及移植治疗脑损伤的实验研究

目的评价胶原蛋白(Collagen)的细胞相容性;研究胶原与大鼠胎脑神经细胞(FBN)复合体(C-FBN)脑内移植对脑损伤的修复作用。方法将大鼠FBN与Collagen联合体外培养,进行光镜、电镜观察,并将体外联合培养4天的C-FBN(移植前48h培养液中加入Brdu)移植到大脑皮质损伤模型的大鼠脑损伤部位,术后3d、6d、10d、15d及30d观察脑组织对移植物的反应、移植细胞生长状态及载体在体内的降解情况等。结果Collagen对FBN生长无不良影响;脑组织对移植物无明显的免疫排斥反应;Collagen与周围脑组织整合好,有血管长入移植物中;载体内有大量存活神经细胞,术后各时段都检出Brdu阳性细胞;Collagen吸收、降解快,可诱导组织再生。结论Collagen具有良好的细胞相容性和组织相容性,是神经组织工程的一种较为理想的生物载体材料;移植的FBN在脑内可以长时间存活。

昆明小鼠3.5d囊胚分离培养胚胎干细胞并诱导分化为胰岛素前体细胞的实验

目的:自囊胚内细胞团分离培养患者自身的胚胎干细胞并将其诱导分化为目的细胞可用于特定疾病的治疗。实验采用昆明小鼠3.5d囊胚分离培养胚胎干细胞,并将其诱导分化为胰岛素前体细胞。方法:实验于2005-09/2006-11在哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室完成。①选取妊娠3.5d昆明雌性小鼠123只,至13.5d时取11只用于胚胎成纤维细胞饲养层制备。剩余112只妊娠3.5d小鼠冲胚后,挑取扩展充分、囊胚内细胞团明显的囊胚采用胰酶+乙二胺四乙酸机械法分离培养胚胎干细胞,进行碱性磷酸酶染色和Oct-4免疫荧光染色鉴定。②在细菌培养皿的盖上用不含人重组白血病抑制因子的胚胎干细胞培养液制备液滴,选取生长旺盛、形态典型的胚胎干细胞集落,采用胰酶+乙二胺四乙酸机械法悬浮培养4d,形成拟胚体,行巢蛋白免疫荧光染色。③将胚胎干细胞诱导分化为胰岛素前体细胞,首先需要L-多聚赖氨酸和纤维粘连蛋白包被培养皿,然后用ITSFn筛选液(含5mg/L胰岛素、50mg/L转铁蛋白、30nmol/L亚硒酸钠、5mg/L纤维粘连蛋白的DMEM/F12培养液)筛选巢蛋白阳性细胞6d,碱性成纤维细胞生长因子扩增及初步诱导6d,再以烟碱诱导功能成熟的胰岛素前体细胞27d。应用DTZ染色、Insulin免疫荧光染色对诱导的细胞进行鉴定。结果:①胚胎干细胞的分离培养:将扩展充分的囊胚放置在饲养层上4d后,可见囊胚内细胞团自透明带中孵出,呈柱状生长,中央颜色深于周边,并将周边的饲养层细胞推开。胚胎干细胞传代后呈典型的克隆样生长,相差显微镜下折光性强。②胚胎干细胞碱性磷酸酶染色和Oct-4免疫荧光染色结果:两种染色均呈阳性表达。③拟胚体的形成及向巢蛋白阳性细胞的诱导:胚胎干细胞悬浮培养4d可形成拟胚体,经ITSFn筛选6d后可见90%巢蛋白阳性细胞。④巢蛋白阳性细胞向胰岛素前体细胞的分化:烟碱诱导6d后,上皮样细胞增多,细胞逐渐密集形成类胰岛样组织。诱导10dDTZ染色可见集落的边缘细胞被染成腥红色。诱导27dInsulin免疫荧光染色可见染色阳性细胞团簇。结论:采用昆明小鼠3.5d囊胚成功分离培养胚胎干细胞,并可以将胚胎干细胞诱导分化为胰岛素前体细胞。

大鼠骨髓间充质干细胞分化成心肌细胞的实验研究

目的 采用 5 氮杂胞苷 (5 aza)诱导骨髓间充质干细胞分化成心肌细胞。方法 分离培养骨髓间充质干细胞 ,采用密度为 1 .0 73的percoll分离液分离大鼠骨髓间充质干细胞并进行体外培养和连续传代 ,在第 3代细胞以5 氮杂胞苷进行诱导 ,用免疫组化的方法鉴定心肌特异性肌钙蛋白I的表达。结果 诱导前 ,骨髓间充质干细胞形态均一 ,呈多突起扁平形态 ,诱导后细胞形态发生变化 ,细胞之间形成连接 ,排列方向渐趋一致 ,免疫组化显示表达阳性。结论 5

大鼠胎脑神经细胞与几丁质多孔体、胶原蛋白海绵及明胶海绵生物相容性的实验研究

目的 评价大鼠胎脑神经细胞与几丁质多孔体、胶原蛋白海绵及明胶海绵的细胞相容性 ,为中枢神经组织工程材料的选择提供实验依据。方法 将大鼠胎脑神经细胞分别与几丁质多孔体、胶原蛋白海绵及明胶海绵联合体外培养 ,进行光、电镜观察 ,并测定 3种材料与细胞的吸附率。结果 神经细胞均能在 3种材料上贴附并生长 ,细胞吸附率分别为 31.5 4 %、30 .5 8%和 15 .5 4 % ,并且几丁质有促进细胞生长的作用。结论 几丁质、胶原蛋白及明胶 3种材料 ,尤其是几丁质 ,具有良好的神经细胞相容性 。

大鼠胎脑神经细胞与几丁质多孔体、胶原蛋白海绵及明胶海绵生物相容性的研究(英文)

目的:评价大鼠胎脑神经细胞与几丁质多孔体、胶原蛋白海绵及明胶海绵的细胞相容性,为中枢神经组织工程材料的选择提供实验依据。方法:将大鼠胎脑神经细胞分别与几丁质多孔体、胶原蛋白海绵及明胶海绵联合体外培养,进行光、电镜观察,并测定3种材料与细胞的吸附率。结果:神经细胞均能在3种材料上贴附并生长,细胞吸附率分别为31.54%,30.58%和15.54%,并且几丁质有促进细胞生长的作用。结论:几丁质、胶原蛋白及明胶3种材料,尤其是几丁质,具有良好的神经细胞相容性,有可能作为神经系统组织工程的载体应用于临床。

治疗性克隆在组织工程方面的研究现状

临床上许多疾病由于细胞老化或受到病损,而引起正常的生理功能发生障碍或丧失,严重威胁着人类的生命和健康,如帕金森综合征、糖尿病、皮肤烧伤等。目前治疗这些疾病的方法主要采用细胞、组织和器官移植,然而,供体来源不足和免疫排斥反应一直成为器官移植方面的有待解决的两个根本性问题。治疗性克隆是生物学界在20世纪90年代末取得的两个重大突破-体细胞克隆技术及干细胞培养技术结合后产生的医学奇迹。它的目的就是产生个性化的,在基因组成上与患者相同的胚胎干细胞(embryonicstemcell,ES),然后诱导ES分化为特定类型的可供移植的细胞或组织,来修复患者已丧失功能的组织或器官,达到完全治愈。常用的方法是:①利用体细胞核移植技术获得重构胚。②分离培养胚胎干细胞。③定向诱导分化胚胎干细胞,获得特定类型细胞。④目的细胞的分离纯化。⑤利用组织工程学的方法,把目的细胞构建成组织和器官。着重介绍治疗性克隆研究现状及最新使用方法,并对面临的问题作了概括性讨论。

干细胞治疗糖尿病的研究现状及未来

目的:综述干细胞治疗糖尿病的研究现状及未来发展。资料来源:应用计算机检索Pubmed2000-01/2006-11有关干细胞治疗糖尿病方面文献,检索词“diabetes mellitus and stem cell not review”,限定文章语言种类为English。资料选择:对检索到的干细胞治疗糖尿病相关文献进行整理,选取针对性强文章。同一领域文献则选择近期发表或权威杂志文章。资料提炼:共检索到359篇相关文献,有关胚胎干细胞、胰腺干细胞、造血干细胞、神经干细胞、骨髓基质干细胞在糖尿病方面研究文章50篇,其中29篇符合要求。资料综合:干细胞极强的自我更新能力和多向分化潜能为糖尿病的细胞治疗开辟了新途径,按其发育阶段不同可以将干细胞分为胚胎干细胞和胰腺干细胞、造血干细胞、神经干细胞、骨髓基质干细胞等成体干细胞。干细胞移植是治疗糖尿病的一条新途径。干细胞生成胰岛素分泌细胞前需要经过诱导分化、细胞选择和细胞成熟3个阶段。干细胞治疗糖尿病研究已取得一定进展,部分实验已纠正糖尿病动物的高血糖状态。结论:干细胞定向分化为胰岛β细胞研究为糖尿病患者点燃了新希望,其勿庸置疑的成为治疗糖尿病的最佳种子细胞。

昆明小鼠胚胎成纤维细胞分离培养及应用

目的探讨昆明小鼠胚胎成纤维细胞培养及应用。方法取昆明小鼠胚胎分离成纤维细胞,用丝裂霉素C处理成纤维细胞为胚胎干细胞制备饲养层,消化贴壁成纤维细胞为核移植提供供体细胞。结果13.5d、14.5d、15.5d孕鼠均可分离出成纤维细胞,14.5d孕鼠制作的成纤维细胞形态规则,3-5代成纤维细胞经处理可作饲养层,可作核移植供体细胞。结论昆明小鼠可分离成纤维细胞,用于饲养层制作及核移植供体细胞。

胶原蛋白与胎脑神经细胞移植入脑缺血大鼠的形态学研究

目的 观察胶原蛋白 (Collagen)与胎脑神经细胞 (FBN)联合培养 2天后 ,神经细胞与胶原蛋白的吸附情况 ;观察胶原蛋白与胎脑神经细胞 (CFBN)移植入脑缺血大鼠后神经细胞的生长情况。方法 取孕 14天的胎脑神经细胞接种在胶原蛋白上 ;制备大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ;将CFBN植入到脑缺血大鼠中 ,将移植的大鼠分别在 2、6、10、30天进行光镜和电镜观察。结果 CFBN植入 2天后 ,机体产生轻微的免疫反应 ,部分中性粒细胞和淋巴细胞浸润 ,6天后免疫反应消失。HE和尼氏染色可见实验组植入神经细胞生长良好。结论 CFBN在脑缺血大鼠中生长良好 。

淫羊藿苷对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响

目的研究淫羊藿苷(ICA)不同作用浓度及不同作用时间对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的抑制作用。方法采用MTT法观察ICA对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响;应用ICA诱导小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化,油红O染色测定细胞内脂质含量,观察ICA对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果 67μg/m L ICA对细胞增殖起抑制作用,持续至96 h并达到最大;30μg/m L和15μg/m L ICA在72 h、96 h对细胞增殖起抑制作用。结论较高浓度ICA对3T3-L1前脂肪细胞的分化有抑制作用,而低浓度ICA对3T3-L1前脂肪细胞的分化作用不明显。

Quercetin对HepG_2细胞的抑制作用及PDGFR-β的表达

目的 探讨植物化学物质槲皮素 (Quercetin)对人类肝癌细胞HepG2 的抑制作用和血小板衍生生长因子 β受体 (PDGFR β)表达的关系。 方法 采用免疫组化SABC法观察Quercetin抑制HepG2 中PDGFR β表达 ,并采用透射电镜观察Quercetin作用后HepG2 细胞的凋亡情况。结果 细胞增殖率检测表明Quercetin可以抑制HepG2 细胞的增殖 ,且呈剂量依赖性 ;Quercetin可以抑制HepG2 细胞PDGFR β的表达 ,且呈剂量依赖性 ;透射电镜下可见凋亡小体。结论 槲皮素对HepG2 细胞增殖有明显抑制作用 ,其机制可能是诱导PDGFR β的增加 ,再通过PDGFR

显微操作针制作相关问题的探讨

显微操作针是显微操作中必备的工具之一,其制作的好坏直接影响操作的成败,本文介绍了显微操作针的清洗硅化,显微操作针的拉制、锻造,持卵针口径的煅烧,piezo注射针的锻针、烤弯,手动注射针磨尖、拔尖等方法,及一些在显微操作针制作过程中的可能影响因素和注意事项加以总结,以供实验参考。