脱氢卡维丁的肠道转运特性研究

目的研究岩黄连生物碱中主要活性成分脱氢卡维丁的肠道转运特性。方法采用外翻肠囊模型,以单位面积渗透量及表观渗透系数为指标,研究不同质量浓度岩黄连生物碱中脱氢卡维丁在大鼠不同肠段的转运特性;采用Ca-co-2细胞单层模型研究脱氢卡维丁的双向跨膜转运行为及盐酸维拉帕米对其转运的影响。结果脱氢卡维丁在大鼠不同肠段部位的离体肠囊上均有转运,试验质量浓度下同一部位肠段的表观渗透系数无显著性差异;脱氢卡维丁在Ca-co-2细胞单层的双向转运存在显著性差异,加入盐酸维拉帕米后,吸收渗透系数显著增大。结论脱氢卡维丁的肠黏膜转运存在转运蛋白的外排机制,但在较高浓度范围内呈现被动转运特征。

去壁灵芝孢子粉片的含量测定与免疫调节及心脏保护功能研究

目的 研究并评价“仙芝3号”去壁灵芝孢子粉片的免疫调节和心脏保护作用。方法 首先运用UPLC-Q-TOFMS和比色法分析“仙芝3号”去壁灵芝孢子粉片的主要化学成分,考察其对斑马鱼巨噬细胞减少症模型、斑马鱼心衰模型、H_(2)O_(2)诱导的心肌及内皮细胞氧化应激模型、脂多糖诱导的小胶质细胞炎症模型的影响,通过巨噬细胞形成能力、巨噬细胞吞噬能力、抗神经炎症能力、心脏收缩舒张改善能力、抗心肌及内皮细胞氧化应激损伤能力等多个指标评估其免疫调节及心脏保护作用。结果 “仙芝3号”去壁灵芝孢子粉片可以提高巨噬细胞形成及吞噬能力,改善心脏收缩舒张功能,减少神经炎症并缓解心肌及内皮细胞因氧化应激而造成的损伤,从而起到免疫调节和心脏保护作用。结论 “仙芝3号”去壁灵芝孢子粉片有望用于免疫功能调节及心脏功能保护。

基于非酒精性脂肪肝细胞模型的荷叶水提物降脂作用机制研究

目的研究荷叶水提物、荷叶碱、原荷叶碱及脱氢荷叶碱对脂代谢通路AMPK/SREBP1/ACC1的影响。方法采用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)对荷叶水提物进行化学成分分析,并用FFA诱导的非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型和BODIPY染色进行胞内脂质蓄积情况检测,用Western Blotting分析AMPK、SREBP1及ACC1等蛋白的表达水平。结果从荷叶水提物中共鉴定出15种化合物,主要为生物碱类和黄酮类化合物。FFA诱导后,荷叶碱、原荷叶碱均能降低HepG2细胞内脂质含量,下调升脂蛋白SREBP1及p-ACC1,并上调降脂蛋白p-AMPK的表达水平。此外,荷叶碱、原荷叶碱与荷叶水提物联合可增强降脂效果。结论荷叶碱及原荷叶碱可能为荷叶水提物中的主要降脂成分,其作用机制与调控AMPK/SREBP1/ACC1通路有关。

基于UPLC-Q-TOF-MS和多元统计分析的白术道地性研究

目的对不同产地白术药材的化学成分进行系统分析,为白术的道地性研究提供依据。方法采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS),结合质谱分子网络技术,快速鉴定白术的主要化学成分。应用正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对安徽、河北、浙江的25批白术进行多元统计分析,用VIP值、t检验筛选出组间差异显著的指标性成分。结果不同产地的白术化学差异较为明显,共鉴定出10个差异化合物,其中浙江白术的姜黄烯、AtractylmacrolD、白术内酯Ⅲ、3β-羟基苍术酮、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅰ、β-Vatirenene和苍术酮等成分显著高于安徽或河北样品,可作为潜在的道地性标志物。结论本研究为全面评价白术药材的质量和道地性提供了依据,并发现不同产地白术的化学成分差异较大,可能与环境、品种和种植方式等有较大关系。

壳寡糖促进岩黄连总碱提取物中原小檗碱型生物碱成分肠道吸收的研究

目的:考察壳寡糖对岩黄连总碱提取物中原小檗碱型生物碱活性成分肠道吸收的促进作用。方法:采用大鼠在体肠单向灌流模型,研究添加不同浓度壳寡糖后岩黄连总碱中脱氢卡维丁、盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的吸收动力学参数变化,评价壳寡糖对药物成分肠道吸收的促进作用。结果:壳寡糖的浓度对3个活性指标成分在大鼠肠道的吸收速率常数(Ka)和有效渗透系数(Peff)具有不同程度的影响,在0.5%壳寡糖溶液中活性指标成分的Ka和Peff增加明显,呈现较强的吸收促进作用。结论:壳寡糖对岩黄连生物碱中原小檗碱型生物碱活性成分的肠道吸收有一定促进作用。

LC-MS快速分析紫苏水煎液中的主要化学成分

目的:采用液相色谱,结合四极杆飞行时间串联质谱(QTOF/MS)和离子阱质谱(IT/MS)2种质谱检测器,分析鉴定中药紫苏水煎液中的主要化学成分。方法:色谱柱为Zorbax SB-C18RRHD柱(4.6 mm×50 mm,1.8μm),以0.05%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 m L·min-1,柱温30℃,进样体积10μL;采用QTOF获取化合物的分子式,并用数据依赖扫描辨别质核比接近的离子碎片;结合IT/MS的多级质谱分析推断可能的结构并验证鉴定结果。结果:通过联合使用2种不同原理的质谱仪并参照数据库和文献资料从紫苏水煎液中鉴定了27个化合物,包括9个黄酮及其苷类成分,10个有机酸类成分,5个氨基酸、2个缩氨酸和1个核苷,其中4个成分经由对照品比对确证。结论:该方法通过联合使用QTOF/MS和IT/MS,为化合物的快速解析提供了更多数据,提高了分析的速度和准确性,为中药复杂组分的分析提供了一种可行的方法。

基于结肠癌HCT116细胞三维培养模型的灵芝水提物抗肿瘤活性研究

目的采用结肠癌HCT116细胞的二维(2D)和三维(3D)培养模型研究灵芝水提物(Ganoderma lucidum water extract,GLWE)的抗肿瘤作用。方法采用紫外-可见光分光光度法测定GLWE中灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLP)、三萜和甾醇的含量,HPLC分析GLP中水溶性单糖的组成和比例;以Matrigel基质胶为基质材料建立体外HCT116细胞3D培养模型,评价GLWE的抗肿瘤及辅助抗肿瘤活性;CCK-8法检测细胞活力;Real-time PCR检测细胞mRNA表达水平;Western blotting检测细胞蛋白表达水平。结果 GLWE中GLP和三萜及甾醇的含量分别为20.92%和7.18%,其中GLP主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、D-木糖、L-岩藻糖组成;GLWE和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)作用48 h可呈浓度依赖性抑制2D和3D培养的HCT116细胞增殖;与2D培养相比,3D培养的HCT116细胞中整合素β1(Integrin β1)和钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA的表达显著升高,并对GLWE和5-FU的敏感性降低;在HCT116细胞3D培养模型中,GLWE既可降低CDK2、CDK4和Bcl-2蛋白的表达,升高p21、p27、cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白的表达,还可显著降低Integrin β1和E-cadherin mRNA的表达,并加强5-FU的抗肿瘤活性。结论 GLWE通过抑制细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制3D培养的HCT116细胞增殖,并通过抑制Integrin β1和E-cadherin mRNA的表达增强5-FU的抗肿瘤活性。

不同制备工艺灵芝孢子粉抗血栓、改善心脏功能作用研究

目的采用斑马鱼模型,比较研究破壁灵芝孢子粉(wall-broken Ganoderma lucidum spore powder,BGLSP)和去壁灵芝孢子粉(wall-removed Ganoderma lucidum spore powder,RGLSP)对血栓形成预防作用及心脏功能改善作用。方法首先采用紫外可见分光光度法分别测定BGLSP、RGLSP中总多糖和总三萜的含量。其次,在野生型AB品系斑马鱼中进行药物毒性试验,确定灵芝孢子粉的最大耐受浓度。然后,分别用苯肼、花生四烯酸以及普纳替尼诱发斑马鱼血栓模型,并用BGLSP、RGLSP及阳性药干预。建模完成后,用邻联茴香胺进行染色,并用NIS-Elements DTM图像处理软件进行图像分析,计算斑马鱼心脏红细胞染色强度及预防血栓作用。此外,用维拉帕米诱发斑马鱼心衰模型,测定斑马鱼心脏扩大面积、静脉淤血面积、心输出量以及血流速度,定量评价灵芝孢子粉对维拉帕米诱发的斑马鱼心衰的心脏功能改善作用。结果RGLSP所含多糖和三萜类化合物的含量显著高于BGLSP(P<0.001),分别提高了11倍和5倍。苯肼、花生四烯酸和普纳替尼诱导后,斑马鱼心脏红细胞染色强度显著增高(P<0.01或P<0.001)。与模型对照组相比,BGLSP高剂量组显著抑制苯肼和普纳替尼诱发的斑马鱼血栓形成(P<0.05),并且能够显著提高心衰斑马鱼心脏扩大改善率和心输出量增加率(P<0.05或P<0.01);RGLSP低、中剂量组对苯肼、花生四烯酸和普纳替尼诱发斑马鱼血栓形成,及对维拉帕米诱发斑马鱼心衰均具有显著保护作用(P<0.05或P<0.01或P<0.001),并且保护作用强于BGLSP。结论BGLSP和RGLSP均具有显著的抗血栓及抗心衰作用,而RGLSP的药效作用更明显,可能与其较高的有效成分含量有关。