新《环保法》提升了企业绿色创新质量吗?——基于新《环保法》实施的准自然实验

以新《环保法》实施作为准自然实验,基于2012—2017年A股上市工业企业绿色专利被引用数量,探究新《环保法》的实施对企业绿色创新质量的影响。研究发现:新《环保法》的实施能够显著促进重污染行业企业绿色创新质量的提升,在进行一系列稳健性检验后,结论仍然成立。异质性分析表明:新《环保法》的实施能够显著促进东部地区企业、非国有企业以及成长期企业绿色创新质量的提升,而对中西部地区企业、国有企业以及成熟期企业绿色创新质量的影响不显著。机制分析发现:随着市场竞争程度的降低,新《环保法》的实施对企业绿色创新质量产生显著的负向影响。为提升微观企业绿色创新质量,提出适当提升市场竞争水平、实施差异化政策、营造更加公平的竞争环境、鼓励创新等政策建议。

武汉地铁8号线一期车辆车门安全回路典型故障分析及处理措施

车门是地铁车辆重要子系统,车门安全回路在保证运营安全的同时,因其串联开关触点多,设备故障率较高。以武汉地铁8号线一期车辆为例,研究车门安全回路原理及门控单元故障判断逻辑,分析安全回路典型故障,根据故障现象和原因对故障进行分类,分别提出处理措施,为后续维护人员排除同类故障提供思路。

刍议水库大坝安全监测自动化技术

水库大坝是水利工程中的一个重要环节,它的安全与否直接影响着下游地区的安全与社会的稳定。但传统大坝监测方法以人工观测为主,存在着监测频率较低,资料采集不及时以及监测精度不够高等问题。随着信息技术与传感器技术的飞速发展,水库大坝安全监测自动化监测技术应用也逐步推广开来。自动化监测技术采用多种传感器,数据采集系统以及通信网络等技术,可以实现全天候,全方位地监测大坝的运行情况,通过数据分析与预警系统来及时发现与处理存在的隐患。文章将对自动化技术在水库大坝安全监测中的主要应用内容及应用前景进行论述,旨在为有关方面的研究与应用提供借鉴。

蚕蛹抗氧化肽的制备及其体内外活性评价

该研究在酶解法和响应面法的基础上通过增加响应面法中的响应值来优化碱性蛋白酶酶解蚕蛹蛋白的工艺,以DPPH和ABTS+自由基清除率作为水解肽评估指标筛选并找到了一条抗氧化活性较强的酶解工艺流程。最优酶为碱性蛋白酶,最佳条件为pH值为9.0、温度为48℃、底物质量分数为4.1%、反应时间为2 h、酶质量分数为3.0%,与现有的工艺流程相比较缩短且降低了反应的时间和温度,且提升了体外抗氧化活性,其体外抗氧化活性达到了Vc的89.10%。在此基础上使用D-半乳糖引起的氧化应激小鼠模型评价了该蚕蛹肽在体内的抗氧化活性,低剂量组的蚕蛹肽即可使血清中CK、SOD、T-AOC、GSH-PX因子恢复至0.31、105.44、3.51、308.36 U/mL肝脏中MDA、SOD因子恢复至0.71 nmol/mL、77.40 U/mL均与模型组有显著差异(P<0.05)。综上通过双响应面法制备而得的蚕蛹肽不仅优化了工艺流程而且使得其抗氧化活性有所提升且在体内外均能发挥抗氧化活性,为蚕蛹蛋白肽的开发利用提供了实验依据。

Ca2＋离子对榛子过敏原Cor h 1二级结构和抗原活性影响研究

目的:研究Ca2+离子对非CaBPs蛋白类过敏原二级结构和抗原活性的影响。方法:以重组榛子主要过敏原Cor h 1为研究对象,用圆二色谱(CD)研究了系列浓度的Ca2+和EDTA各自存在情况下,不同蛋白浓度溶液中rCor h 1二级结构的变化及规律,并以榛子过敏患者血清为一抗,用ELISA实验分析了Ca2+和EDTA对rCor h 1抗原活性的影响。结果:在高浓度rCor h 1溶液中Ca2+的加入可以引起椭圆率的增加,而在低浓度的rCor h 1溶液中则引起椭圆率的降低;EDTA在高浓度和低浓度的rCor h 1溶液中均能引起rCor h 1二级结构相对含量的降低;椭圆率增加(或降低)的幅度与Ca2+、EDTA终浓度成正比。ELISA实验表明Ca2+和EDTA都能显著降低rCor h 1的抗原活性。结论:Ca2+离子可以显著影响rCor h 1的二级结构,降低其抗原活性,为非CaBPs蛋白类低致敏原的研究奠定了较好的前期研究基础。

食品过敏原指纹图谱快速检测研究(一)——鲫鱼、鲢鱼总蛋白2-DE指纹图谱分析

目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法。分析鲫鱼和鲢鱼总蛋白2-DE(2- dimension electrophoresis)指纹图谱,确定食品过敏原指纹图谱快速检测的可行性。方法取新鲜鲫鱼和鲢鱼,去内脏和鱼鳞,在预冷的丙酮中搅碎,用丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,PBS透析,冻干得初提样品。用Clean—up Kit 试剂盒对两种鱼的总蛋白初提样品进行精提。双向电泳第一向IEF选择13 cm非线性胶条(pH=3-10),采用溶胀方法上样,达到平衡后转移胶条进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10％),银染,脱色后扫描图像进行计算机分析处理。结果 2-DE图像显示鲫鱼和鲢鱼总蛋白主要是中等分子量蛋白,呈弱酸性和弱碱性,其蛋白点既有相同点也有差异点。结论通过2-DE指纹图谱分析完全可以区分这两种不同的鱼类,对于差异性蛋白点可以给出明确的判定。

食品过敏原指纹图谱快速检测研究(三)——花生总蛋白 2- DE 指纹图谱和蛋白点 MALDI- TOF/MS分析

目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法。分析花生总蛋白2-DE(2-dimensionelectrophoresis)指纹图谱与蛋白点MALDI-TOF/MS分析联用的可行性。方法新鲜生花生去皮搅碎后丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,冻干得初提样品,试剂盒精提,双向电泳IEF选择11cm非线性胶条(pH=3-10)溶胀上样,平衡后转移胶条在电泳槽中进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10%),考染后扫描图像进行计算机分析处理,同时在胶上任意选择两个蛋白点切胶、脱色、消化后进行MALDI-TOF/MS分析。结果2-DE指纹谱图显示花生总蛋白的分布范围较窄,主要是一些中、小分子量的中性、弱酸和弱碱性蛋白,用PDQuest2-DAnalysis分析软件对此2-DE图谱分析可以发现其中共有178个特征性蛋白点。以花生总蛋白2-DE指纹图谱为基础,进一步对单个蛋白点进行MALDI-TOF/MS指纹图谱分析,结果显示每一个蛋白点都具有自己特征的分子量峰和图谱形状,无需进行肽片段混合物的分析、检索亦可完全区分不同的蛋白点,从而可以对食品过敏原进行更深入、更准确的指纹图谱检测。结论食品过敏原总蛋白2-DE指纹图谱与蛋白点MALDI-TOF/MS指纹图谱分析联用可以更好的进行食品过敏原指纹图谱快速检测研究。

地铁车辆空压机干燥器自主维修难点及对策——以武汉地铁阳逻线为例

以武汉地铁阳逻线为例,介绍地铁车辆空压机干燥器结构及工作原理,分析干燥器在架修自主维修过程中面临的主要问题及难点,针对各项问题提出相应对策,确保自主维修过程更加安全、经济、可靠,为后续地铁列车自主维修空气干燥器提供参考。

食品过敏原指纹图谱快速检测研究(二)——河虾总蛋白2-DE指纹图谱重现性分析

目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法。分析河虾总蛋白2-DE(2-DimensionElectrophoresis)指纹图谱的重现性,确定食品过敏原指纹图谱快速检测的可行性。方法新鲜河虾,去头和虾皮,搅碎后丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,冻干后为初提样品,试剂盒精提,双向电泳IEF选择11cm和13cm两种不同厂家、规格的非线性胶条(pH=3～10)溶胀上样,平衡后转移胶条在不同厂家、型号的电泳槽中进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10%),银染和考染后扫描图像进行计算机分析处理。结果2-DE谱图显示河虾总蛋白分布较广,其高丰度蛋白主要是一些大分子量酸性蛋白。不同电泳系统,选用不同规格的IPG胶条所得河虾总蛋白2-DE指纹谱图具有良好的重现性。银染灵敏度较高,更适合食品过敏原指纹图谱的快速检测。结论食品过敏原总蛋白2-DE指纹图谱具有良好的重现性和稳定性,可以用于食品过敏原的快速检测。

不同储藏时间笔架茶生物碱成分分析

本实验以三种储藏时间不同的笔架茶1#、2#和3#茶为原料,用热回流法和有机溶剂萃取法联用的方法提取其生物碱,分析了热回流时间(A)和料液比(B)对三种茶生物碱提取率的影响。用M arqu is等五种试剂对提取的生物碱进行鉴定分析,并用HPLC分析生物碱主要成分的含量。结果表明:笔架茶中生物碱的含量随储藏时间的延长而降低。A和B对储藏时间不同的三种笔架茶生物碱提取率的影响各不相同。沉淀及显色反应鉴定显示提取生物碱的主要成分为咖啡因,HPLC定量分析表明3#新茶生物碱中咖啡因含量最高(94.33%),1#陈茶咖啡因含量最低(75.76%)。

食品过敏原的检测与分析

食品过敏已成为食品安全的一个极为严重的问题。本文中对现用的及前景看好的食品过敏原检测分析方法,如免疫学检测、PCR分析等方法的精确度、灵敏度、适用范围、重现性、限制性问题作了较为系统的综述。

蛇床子等中药抑制Aβ42多肽聚集活性研究

目的研究几种中药抑制Aβ42多肽聚集沉淀的活性。方法分别制备蛇床子等十二味中药的石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物,用ThT荧光光谱法和E.coli模型对各提取物进行Aβ42聚集抑制活性研究。结果苦参、蛇床子和陈皮乙酸乙酯提取物能够大大降低作用体系ThT荧光强度,同时在E.coli模型中可以显著促进E.coli细胞生长(超过阳性对照样品EGCG)。此外,川楝子石油醚提取物也具有较强活性。结论川楝子、苦参、蛇床子、陈皮等含有抑制Aβ42聚集沉淀的活性成分,可作为抗AD中药进行深入系统研究。

pH值和酶作用对鲩鱼过敏原免疫学活性的影响研究

目的研究pH值、胃蛋白酶和胰蛋白酶作用对鲩鱼过敏原免疫学活性的影响。方法采用不同Coca's液提取制备鲩鱼总蛋白,以鲩鱼过敏患者阳性血清为一抗用Western Blotting方法分析pH值、胃蛋白酶和胰蛋白酶以及多因素多重作用对鲩鱼过敏原免疫学特性的影响。结果HCl溶液、胃蛋白酶溶液、胰蛋白酶溶液以及多种因素的多重作用对鲩鱼蛋白均有不同程度的降解作用,且均可以显著降低鲩鱼过敏原的免疫学活性,但一些蛋白具有很高的稳定性,如M_r为35 000和23 000的蛋白。受制备过程的影响,鲩鱼蛋白中出现新的阳性过敏原条带,如M_r为27 000和20 000的阳性过敏原条带(pH 1.0 HCl溶液)。结论鲩鱼含有稳定性较高的潜在过敏原,该类潜在过敏原对热、酸、酶解等作用均有很强的耐受性。

基于罗丹明的水溶性Cu^(2+)传感探针的合成与性能

以罗丹明6G酰肼(R6GH)和4-(二乙氨基)水杨醛为试剂,通过席夫碱反应制备了一种新的传感探针R6GHS,并对探针的结构进行了表征分析。紫外-可见吸收和荧光光谱研究发现,该探针对Cu2+显示出高度的检测选择性,在乙腈-水(3∶7,体积比)Tris-HCl(pH值=7.0)缓冲溶液中,随着Cu2+的加入,探针螺环打开,可以明显地观察到溶液由无色变为红色,同时伴随鲜有的荧光淬灭现象,并且该响应过程迅速而且可逆,有望用于水质中Cu2+快速检测。

紫草素衍生物SYUNZ-7的抗肿瘤作用及其机制的初步研究

背景与目的:实验证明天然紫草素类化合物及其衍生物具有不同程度的细胞毒作用和抗肿瘤作用。本实验研究紫草素萘茜类衍生物[2或3,11-双苯硫基-6-异己萘茜]代号为SYUNZ-7的体内外抗肿瘤作用,并探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测SYUNZ-7对多种肿瘤细胞的体外抗增殖作用,并计算IC50值;用小鼠移植肿瘤模型和人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型进行SYUNZ-7的体内抗瘤实验;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化;免疫组化法检测SYUNZ-7对血管生成的影响。结果:SYUNZ-7对人肺癌细胞GLC-82、人鼻咽癌细胞CNE2、人口底癌细胞KB、人胃癌细胞MGC-803和人肝癌细胞HepG2的IC50值分别为(2.18±0.04)μg/ml、(4.17±0.09)μg/ml、(5.41±0.10)μg/ml、(6.41±0.14)μg/ml和(9.99±0.21)μg/ml。SYUNZ-7对GLC-82细胞的体外抗增殖作用最强。小鼠艾氏腹水癌EAC(实体型)抗瘤实验结果显示,在1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg和8mg/kg的剂量下SYUNZ-7的抑瘤率分别为(40.5±0.1)%、(50.9±2.3)%、(61.3±1.8)%和(65.6±7.4)%(P<0.01)。1mg/kg、2mg/kg和4mg/kg的SYUNZ-7对CNE2细胞裸小鼠移植瘤的抑瘤率分别为24.7%、38.3%和41.2%(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,SYUNZ-7能浓度依赖性和时间依赖性诱导CNE2细胞的凋亡;随着作用时间的延长或处理浓度的增加,SYUNZ-7可以阻滞CNE2细胞由S期向G2/M期转化。免疫组化结果显示:SYUNZ-7能够呈浓度依赖性抑制CNE2细胞裸小鼠移植瘤的血管生成。结论:紫草素萘茜类衍生物SYUNZ-7具有较强的体内外抗瘤作用,其抗瘤机制与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期和抑制血管生成有关。

小麦和荞麦过敏原的分离与免疫学特性初步鉴定

为了提取、分离小麦(Triticum aestivum)和荞麦(Fagopyrum esculentum)的主要过敏原并对其免疫学特性进行鉴定,以磷酸盐缓冲液(PBS)制备小麦和荞麦总蛋白粗提液,通过SDS-PAGE分析总蛋白组成,利用麦类食品过敏患者血清中的IgE能特异性结合过敏原的特性,通过免疫印迹(Western-Blotting)鉴定其中的过敏原成分,然后用离子交换层析(DE-52)对总蛋白进行初步分离,并用Western-Blotting鉴定分离后组份的免疫学特性。SDS-PAGE分析显示,小麦蛋白条带共有18条,其中主要条带有12条(55、42、39、36、29、27、23、21、18、15、12、9 kD);荞麦蛋白条带共有17条,其中主要条带有8条(55、44、36、32、22、16、13、10kD)。Western-Blotting鉴定表明,小麦阳性条带有9条(36、32、29、26、23、18、15、12、9 kD),其中23 kD的过敏原特异性最强;荞麦阳性条带有5条(55、36、32、292、2 kD),其中22 kD的过敏原特异性最强。DE-52阴离子交换层析分离后经Western-Blotting分析显示,分离后过敏原的相对含量均有显著提高,且依然具有较强的免疫学活性,如经纯化后荞麦22 kD的过敏原相对含量由10.73%提高到21.07%。初步鉴定出小麦的主要过敏原为23 kD蛋白,而荞麦的主要过敏原为22 kD蛋白。

儿童过敏患者致敏原筛查及相关因素分析

目的研究深圳市儿童常见过敏原的致敏情况,为儿童过敏性疾病的防治提供科学依据。方法应用全自动体外免疫诊断仪(UniCAP100)对2 276例儿童患者进行9种常见吸入性和8种常见食入性过敏原体外免疫测试,计算各种过敏原的致敏阳性率,分析儿童过敏的季节性分布和过敏原对不同性别儿童的致敏差异。结果吸入性过敏原中粉尘螨、屋尘螨和屋尘为主要过敏原,致敏阳性率分别为76.02%,75.46%和62.37%。其他依次为蟑螂、蛾、苋科、白千层、木麻黄和桑树。食入性过敏原中主要过敏原为鸡蛋和牛奶,致敏阳性率分别为49.58%和46.66%%;其他依次为小麦、虾、花生、黄豆、螃蟹和鱼。过敏原对儿童致敏季节性分布分析显示,一年中初冬(11,12月)和春季(3,4月)2个时期为过敏性疾病的高发期。结论在深圳市,粉尘螨、屋尘螨和屋尘是主要的儿童吸入性过敏原,鸡蛋和牛奶是主要的儿童食入性过敏原,总体上吸入性过敏原的危害性大于食入性过敏原。对儿童过敏性疾病的防治重点在入冬和春季2个时期。

家蚕变应原tropomyosin基因的克隆表达、纯化及其免疫学活性鉴定

目的对家蚕过敏原tropomyosin基因进行克隆表达,鉴定其免疫学活性。方法本研究提取家蚕总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出tropomyosin片段,其长度为858bp,编码286个氨基酸。通过连入载体PET28a在大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)菌株中通过IPTG诱导得到重组家蚕原肌球蛋白。重组家蚕原肌球蛋白经过6His-tag蛋白纯化系统分离、纯化。经Westernblot检测该重组蛋白与家蚕过敏患者血清中IgE的反应性。结果19个病人血清反应中,有5个呈阳性,阳性率为26%。结论成功克隆表达了家蚕tropomyosin基因,经免疫学鉴定发现其具有过敏原性。

美洲大蠊Per a7基因的克隆、表达及免疫学鉴定

根据原肌球蛋白基因序列设计引物,以我国南方地区美洲大蠊Periplaneta americanaRNA为模板,用RT-PCR方法扩增出852bp的全长编码片段,经序列分析发现该基因与NCBI公布的Per a7有3个核苷酸发生改变。将目的片段克隆到pET24a(+)表达载体中,在大肠杆菌BL21Star获得表达,融合蛋白的分子量约为33kD。利用蟑螂过敏性患者血清对表达产物进行Western blotting检测,出现明显的识别条带,说明表达产物具有IgE结合活性。