虚拟仿真实验在“病毒学检验”教学中的应用

病毒学检验是一门在病毒性传染病的诊断、防治中发挥重要作用的课程。作为卫生检验与检疫专业的主干课程,是提升学生综合职业能力和职业素养的关键。针对该课程的学习,不仅是在向学生传授理论知识,更重要的是在教学过程中帮助学生提升专业综合能力,其根本目标是帮助学生运用所学的理论知识解决实际问题。然而传统教学中,学生分析问题和解决问题的综合能力普遍不足。针对这一问题,浙江中医药大学始终坚持“学生中心、问题导向”的实验教学理念和“虚实结合、手脑共训”的教学设计,不断探索改进教学方式,以满足应用型人才专业综合能力的培养。通过分析虚拟仿真实验在病毒学检验教学中的开展情况,探讨虚拟仿真实验应用于病毒学检验课程教学的可行性。

麦冬须根主要活性成分研究

目的:研究麦冬须根的主要活性成分。方法:以块根为对照,测定所含主要活性成分。结果:麦冬须根中主要活性成分与块根基本一致,其中总多糖的含量(15.24%)低于块根(60.99%);须根总黄酮含量(0.110%)与块根(0.157%)相近;须根总皂苷的含量(8.43%)高于块根(2.54%)。结论:麦冬须根含有皂苷、多糖、黄酮等主要活性成分,可加以开发利用。

红曲霉菌胞外多糖的抗肿瘤活性研究

目的:研究红曲霉胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)的抗肿瘤活性,为阐明红曲胞外多糖的药理作用和临床应用奠定基础。方法:红曲霉菌经液体发酵培养后,醇沉提取发酵液中的胞外多糖并测定其含量;建立H22荷瘤小鼠模型,以胞外多糖的抑瘤率、小鼠的相对生长率和各脏器指数为指标,研究红曲胞外多糖的抗肿瘤活性。结果:中剂量100mg/(kg.d)红曲胞外多糖给药组的药理作用比较明显,抑瘤率达到了44.95%。结论:红曲霉胞外多糖有抗肿瘤作用,并且与剂量相关,但不成正向线性比例关系,而在适当给药剂量时所表现的效果比较明显。

植物内生菌在环境保护中的应用研究进展

植物内生菌作为天然的资源菌,在环境保护领域具有开发潜力。其可通过抗菌、营养竞争及合成次生代谢产物等阻止植物病虫害的发生,发挥生物防治作用,有望制备生防菌剂,以一种绿色环保的方式用于植物保护和农业生产。此外,植物内生菌可吸附重金属,产生各种酶类降解木质素,有望应用于污染治理。通过对近年来植物内生菌在生物防治、重金属吸附、木质素降解作用方面的研究成果来综述植物内生菌在环境保护领域的应用研究进展,对其发展趋势做出了展望。

中药防治脓毒症研究进展

脓毒症作为临床常见危重症,在临床仍缺乏非常有效的治疗方法和治疗药物。近年来在中医理论指导及现代药物研究方法的不断更新下,中药在治疗脓毒症方面的研究取得了显著成果。本文分别从单味中药、中药复方汤剂、中成药三个方面研究并总结了中药类药物对脓毒症引起的相关损害的治疗效果,为脓毒症临床治疗提供新思路。

药用植物内生菌促生与生防作用研究进展

我国幅员辽阔且气候多样,药用植物资源丰富的同时,蕴含着多样的内生菌资源。药用植物内生菌和其宿主植物作为一个共生体,在长期协同进化的过程中,已经形成互惠共存的关系。在药用植物生长过程中,内生菌既能通过促进植物对氮、磷、钾、铁等无机营养元素的吸收利用和生长激素的合成直接促进药用植物的生长,也能通过生物防治功能间接促进药用植物的生长。综述了近年来药用植物内生菌促生与生防作用的研究及应用,并对药用植物内生菌的发展趋势进行了展望。

泛耐药鲍曼不动杆菌质粒介导碳青霉烯酶的研究

目的了解泛耐药鲍曼不动杆菌（pan—drugresistantA．baumannii，PDR—AB）的耐药性和产耐药酶的情况及其耐药机制。方法收集泛耐药鲍曼不动杆菌3株，用纸片扩散法进行药敏测定；通过质粒接合试验、质粒提取实验、琼脂糖凝胶电泳、质粒消除试验等方法，研究细菌对碳青霉烯类耐药的分子机制。结果3株泛耐药鲍曼不动杆菌对包括亚胺培南（IMP）在内的常用抗菌药物均高度耐药。所有菌株接合试验均成功，接合子质粒条带相同。且经SDS质粒消除试验发现其对碳青霉烯类的耐药性随质粒的消除而丢失。结论碳青霉烯酶的产生是泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药的机制之一；其携带的耐药基因能通过质粒在细菌间传递。

脱脂牛奶低温法保存微生物菌种的研究

目的探索实验室常见菌种的最适合保藏方法.方法采用斜面低温法、半固体穿刺法、液体石蜡法、脱脂牛奶低温冻存法、冷冻干燥保存法进行研究,考察各方法保存后菌的存活时间和存活率.结果用斜面低温法、半固体穿刺法保藏6个月时菌种存活率在80%以上,但随后菌种迅速死亡存活率降低至0;液体石蜡法可保藏9～12个月.用脱脂牛奶低温冻存法保藏的菌种在2年后存活率仍达97.9%,且菌种的形态、生理特征基本未变.冷冻干燥保存2年后存活率100%.结论脱脂牛奶低温冻存法优于斜面低温法、半固体穿刺法等常规菌种保存法,保存2年后菌株存活率与冻干法比较无显著差异,且比冻干法操作简便,更容易开展.

麦芽纤维对UC小鼠肠道菌群的影响

目的:研究麦芽纤维对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道菌群的影响。方法:将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、自然恢复组、对照组(柳氮磺吡啶)和治疗组(麦芽纤维),每组8只。采用细菌培养的方法检测小鼠盲肠内容物中几种常见菌群的数量。结果:UC小鼠肠道内肠杆菌、肠球菌及产气荚膜梭菌数量增加,双歧杆菌和乳酸杆菌数量减少。经麦芽纤维治疗2周后,肠杆菌和肠球菌数量减少,双歧杆菌和乳酸杆菌数量明显增加。结论:麦芽纤维对UC小鼠肠道菌群具有良好的调控作用。

杭麦冬丛枝菌根真菌孢子的筛选及萌发研究

目的:研究杭麦冬根际菌根真菌孢子的筛选及萌发。方法:采集杭麦冬块根及其根际土壤。块根切片、透明、染色、脱色后镜检观察菌根真菌。土壤湿筛倾析-蔗糖离心法分离菌根孢子,并研究孢子的萌发。结果:麦冬块根内发现丰富的菌根真菌菌丝和泡囊,偶见丛枝。根际土壤分离鉴定了10种菌根孢子,球囊霉属和巨孢囊霉属为主要优势类群。球囊霉属孢子体外可萌发,能形成次级菌丝,但168h后自溶;含10～1000μg.mL-1的麦冬汁能促进孢子的萌发,100μg.mL-1时萌发率最高。结论:杭麦冬块根组织含丰富的丛枝菌根真菌,根际土壤含丰富菌根真菌孢子。菌根孢子实验条件下可萌发,但随后出现自溶,麦冬汁能促进萌发。

姜黄素的微生物转化产物体外抗低密度脂蛋白氧化作用

目的利用红曲霉菌对姜黄素进行微生物转化，研究姜黄素微生物转化总产物对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用，为进一步筛选新型高效的姜黄素类抗动脉硬化新药奠定基础。方法利用红曲霉菌固体发酵法对姜黄素进行微生物转化，设立只加姜黄素不接种菌体的底物对照和只接种菌体不加入姜黄素的菌体对照，乙酸乙酯提取转化产物。从血浆中分离低密度脂蛋白，建立低密度脂蛋白在Cu^2＋诱导下的无细胞氧化体系和巨噬细胞氧化体系，姜黄素转化产物进行氧化干预，以低密度脂蛋白在琼脂糖凝胶电泳的迁移距离及硫代巴比妥酸反应物含量作为低密度脂蛋白氧化的指标。结果姜黄素转化总产物在4—500mg／L浓度范围内（相当于含姜黄素0．04—5mg／L），能显著抑制Cu^2＋诱导下的低密度脂蛋白氧化，与菌体对照组相比差异有显著性（P〈0．001）；与底物对照比较在20mg／L和4mg／L浓度作用下差异有显著性（P〈0．001）。转化总产物作用小鼠巨噬细胞24h能显著抑制低密度脂蛋白的氧化，其迁移距离比氧化对照组明显缩短（P〈0．001）；姜黄素对照组在5mg／L时有明显的抑制作用；底物对照组和菌体对照组迁移距离与氧化对照组差异无显著性（P〉0．05），基本无抑制作用。转化总产物在4～500mg／L浓度范围内，能显著抑制小鼠巨噬细胞TBARS的产生，其抑制作用随着剂量的增大而增强。而底物对照组只在浓度为500mg／L和100mg／L（相当于含姜黄素5mg／L和1mg／L）、姜黄素对照组在浓度为5mg／L和1mg／L时有一定的抑制，菌体对照组则无抑制作用。转化总产物对巨噬细胞氧化体系低密度脂蛋白氧化的抑制作用。与底物对照组、菌体对照组相比差异有显著性（P〈0．001）。结论姜黄素经红曲霉菌转化后，对低密度脂蛋白的抗氧化作用显著增强，有望获得姜黄素类高效抗动脉硬化的新型化合物。

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌流行病学分析

目的了解耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药特点、临床分布及毒力因子的携带情况,为临床诊治提供参考依据方法收集临床分离的43株CRKP菌株,MALDI-TOF质谱仪进行菌株鉴定,Vitek-2compact进行药敏试验,黏液丝试验检测高黏液表型,对菌株毒力因子行PCR扩增和基因测序。结果43株CRKP菌株中,痰液、大便检出率最高,其次为血液、无菌体液;科室分布以丨CU为主,其次是血液内科;CRKP对妥布霉素、阿米卡星、替加环素及粘菌素耐药率稍低,分别为81.4%、76.4%、65.1%和11.6%,对其他药物耐药率均>90%。仅检测到1株荚膜血清型阳性菌株,为K5型;uge、wabG、ycf、entB、ureA及fimH毒力基因携带率最高,均>90%,未检出iroB、alls、magA和wcaG基因;毒力基因携带模式以uge+wabG+finiH+rmpA+ycf+ureA+ybtA+iutA+entB+rmpA2+iucA+peg-344为主,占44.2%;菌株Hcp、Ompk35和Ompk36基因携带率高,均>90%,结论CRKP多为广泛耐药菌株,大多携带多种毒力因子,且患者预后不佳,需引起临床重视,加强CRJCP菌株防控,合理选用抗生素。

微生物检验设计性实验临床模拟标本库的制备

为激发学生学习兴趣，系统培养学生分析和解决问题的能力，建立了临床细菌检验模拟标本库，用于临床微生物检验设计性实验教学，为学生进入临床实习打下良好基础。

鼻腔路径PM_(2.5)暴露致大鼠中耳炎症及听力损伤的研究

[目的]探讨鼻腔路径细颗粒物(particulate matter 2.5,PM_(2.5))暴露对SD大鼠中耳黏膜组织学改变和炎症水平的影响,以及与听力损伤的联系。[方法]32只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级健康雄性SD大鼠随机分为8组,正常对照组包括第1、3、5、14天处死的亚组和PM_(2.5)染毒组包括第1、3、5、14天处死的亚组。PM_(2.5)染毒组经软腭正中入路以1 mL·kg-1的剂量于咽鼓管开口处注射15 mg·mL-1的PM_(2.5)悬液,正常对照组注入相同剂量的磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)。连续干预7 d,于干预后第1、3、5、14天处死大鼠,进行指标检测。借助电耳镜观察染毒前后大鼠鼓膜形态变化;采用听觉诱发电位仪、声导抗中耳分析仪检测听性脑干诱发电位(auditory brainstem response,ABR)的反应阈值及40 dB nHL声刺激强度下Ⅲ波潜伏期变化、鼓室声导纳值及峰压值变化;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测中耳灌洗液(middle ear lavage fluid,MELF)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、粘蛋白5AC(mucin-5 subtype AC,MUC5AC)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达水平;采用流式细胞术检测灌洗液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的表达水平;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察中耳组织切片组织学变化。[结果]与正常对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠染毒后第3、5天鼓膜表面充血浑浊,少数耳内可见积液。与染毒前比较,染毒后第3、5天PM_(2.5)染毒组大鼠声导纳值和峰压值显著降低(P<0.01,P<0.0001);ABR反应阈值显著升高(P<0.01),40 dB nHL处潜伏期明显延迟(P<0.05,P<0.001)。与正常对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠MELF中IL-6、TNF-α、IFN-γ、MPO、VEGF、MUC5AC表达升高(P<0.01),其中IL-6、IFN-γ、VEGF、MPO、MUC5AC水平均于染毒后第5天达到高峰。HE染色显示,与正常对照组比较,PM_(2.5)染毒组大鼠染毒后第3、5天中耳黏膜增厚,炎性细胞浸润明显,第5天尤为明显,第14天各指标趋向正常。[结论]鼻腔路径PM_(2.5)暴露会对大鼠中耳造成急性炎症损伤伴有积液渗出,并引起听力功能下降。

浙麦冬根际菌根真菌多样性及土壤性状研究

目的:研究浙麦冬根际菌根真菌多样性以及种植地土壤性状。方法:用湿筛法获得麦冬根际土壤的丛枝菌根真菌孢子,计数孢子密度、物种丰富度及各物种的出现频率;分析浙麦冬种植地土壤性状及金属含量和农药残留。结果:浙麦冬根际土壤中丛枝菌根资源丰富,孢子密度平均824.33个/100g土壤,球囊霉属、巨孢囊霉属和无梗囊霉属为优势类群;菌种丰富度平均为5。丛枝菌根真菌孢子的分布呈明显的季节性变化。种植土壤含有丰富的钙、镁、锌、铜、铬等金属元素,无农药残留。结论:浙麦冬根际含有丰富的球囊霉属、巨孢囊霉属和无梗囊霉属等菌根真菌,其分布具有明显的季节性;根际土壤含有丰富的钙、镁、锌、铜、铬等金属元素。

基于提升岗位胜任能力的《病原微生物学检验》实验课堂教学模式探索

为了实现从学术型本科教育向应用型转变,探讨和构建基于提升检验岗位胜任能力的《病原微生物学检验》实验课堂教学模式。方法 建立学校教研室与医院检验科共建的教学体制、“检验科细菌室技能规范”为导向的实验训练模式、“培养应用能力为核心”的实验教学新方法、岗位胜任能力为准则的实验评测体系,以浙江中医药大学检验系学生为研究对象,考察近5年学生岗位胜任能力。结果 通过微生物实验技能的规范训练,学生实验考核优秀率大幅提升,学生科研及学科竞赛中对微生物的研究兴趣越来越浓厚;带动了检验系人才培养质量全面提升;实习单位和用人单位对我校检验系学生赞誉不断;毕业生综合满意度高,在全校各专业中名列前茅。结论 通过构建《病原微生物学检验》实验课堂教学模式,提升了学生检验岗位胜任能力,为应用型本科教育提供切实有效的教学手段,值得进一步完善和推广。

白及提取物体外抗流感病毒药效及其机理研究

目的:评价白及提取物体外抗流感病毒药效及研究其机理。方法:以病毒血凝效价及核酸量为指标,评价白及提取物在鸡胚模型的抗流感病毒作用。以流感病毒致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)及血凝抑制试验(HI)为指标,评价白及提取物抑制流感病毒的入侵作用及作用靶点。以CPE及病毒RNA合成量为指标,评价白及提取物对病毒复制及RNA合成的抑制作用。神经氨酸酶抑制(NAI)试验测定白及提取物对病毒NA活性的抑制作用。结果:鸡胚模型中,白及提取物各剂量组血凝滴度以及病毒核酸量与病毒对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。细胞实验中,白及水提物和醇提物均具有较好的抗病毒入侵效果,抑制率最高分别达到(87.04±7.81)%和(60.14±6.88)%;水提物通过干预MDCK细胞HA受体阻止病毒的入侵。白及水提物和白及醇提物均具有较好的抗流感病毒复制效果,与病毒对照组比较,白及提取物可显著降低病毒RNA的合成(P<0.01)。醇提物具有较好的神经氨酸酶抑制活性,NA-IC_(50)为16.0 mg/mL。结论:白及提取物通过抑制流感病毒与HA受体结合、干预病毒RNA合成及抑制神经氨酸酶活性发挥抗流感病毒作用。

小檗碱对C3H10t_(1/2)细胞增殖与成脂分化的影响

目的:探讨小檗碱对小鼠胚胎间充质干细胞C3H10t_(1/2)细胞增殖和成脂分化的影响。方法:采用MTS法对细胞增殖情况进行检测,同时通过油红O染色,异丙醇溶解法检测细胞成脂分化情况,GPO-PAP酶法检测细胞中甘油三酯(TG)含量,RT-PCR检测成脂分化关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和分化标志物脂肪型脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein,FABP4)mRNA的表达。结果:小檗碱浓度在50μmol/L以下,可促进C3H10t_(1/2)细胞的增殖;当小檗碱浓度达到10μmol/L时可显著抑制C3H10t_(1/2)细胞成脂分化及甘油三酯的堆积,并呈一定的剂量依赖性;10μmol/L小檗碱处理组C3H10t_(1/2)细胞PPARγmRNA表达在诱导分化第4、7、10天显著降低(P<0.05或P<0.01),C/EBPαmRNA的表达在分化第1、7、10天显著降低(P<0.05或P<0.01),FABP4 mRNA的表达在分化第10天显著降低(P<0.05)。结论:小檗碱能够促进C3H10t_(1/2)细胞增殖,并能够抑制其成脂分化。

三叶青地上部分提取物对H22荷瘤小鼠的抗转移作用

目的探讨三叶青地上部分提取物对H22荷瘤小鼠的抗转移作用。方法将H22荷瘤小鼠随机分为空白组,模型组,玉米油组,环磷酰胺组(40 mg/kg),多糖低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),醇提物低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),干预21 d后,检测各组小鼠肿瘤生长、胸腺指数、脾脏指数、肝脏指数、肿瘤远端肺及淋巴道转移灶数,ELISA法检测各组小鼠血清TNF-α、IL-6、IL-2、IFN-γ水平,HE染色观察各组小鼠肿瘤组织病理学变化。结果与模型组、玉米油组比较,多糖各剂量组小鼠胸腺指数及抑制肿瘤远端肺转移和淋巴道转移能力增加(P<0.05,P<0.01),多糖高剂量组抑瘤率为43.07%,血清TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-γ水平升高(P<0.05,P<0.01);与环磷酰胺组比较,多糖各剂量组小鼠胸腺指数升高(P<0.01)。HE染色显示,各给药组小鼠肿瘤组织均可见坏死区域,多糖各剂量组肿瘤细胞坏死现象更为明显。结论三叶青地上部分多糖可能通过免疫调节、抑制肿瘤远端转移、促进肿瘤细胞坏死而发挥对H22荷瘤小鼠的抗转移作用。

山核桃叶黄酮对高营养饮食去卵巢大鼠脂肪异位的改善作用研究

目的:研究山核桃叶黄酮对高营养饮食诱导的去卵巢SD大鼠脂肪组织异位沉积的干预作用。方法:用高营养饲料喂养去卵巢SD大鼠,给予山核桃叶黄酮灌胃2个月,处死计算大鼠腹部脂肪系数、主动脉弓脂肪系数;制作主动脉弓血管、肝脏组织、腹部脂肪组织石蜡切片HE染色,观察脂肪这些部位的聚积和脂肪细胞的形态;检测血清总胆固醇(TC)、血清甘油三酯(TG)、肝脏组织TG、肝脏游离脂肪酸(FFA);通过Q-PCR和Western blot检测脂肪组织过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA和蛋白表达。结果:山核桃叶黄酮能显著降低模型大鼠腹部脂肪系数、主动脉弓脂肪系数及血清TC、TG和肝脏TG、FFA含量及腹部脂肪PPARγ mRNA蛋白表达(P<0.05或P<0.01),减少肝脏细胞内脂滴数量、主动脉弓血管壁脂肪聚集及腹部脂肪细胞直径,改善血管壁光滑平整程度。结论:山核桃叶黄酮可改善高营养饮食诱导的去卵巢肥胖SD大鼠主动脉弓血管周围、肝脏和腹部的脂肪异位沉积,其作用机制可能与调节PPARγ表达,减少FFA释放,减少FFA向TG转化有关。