聚氨酯服装面料革染色工艺

采用分散染料对聚氨酯服装面料革染色,通过单因素试验分析了染料用量、助剂用量、浴比、染色温度及保温时间等对染色K/S值的影响;并用正交试验优化染色工艺为:染料3%(omf)、匀染剂0.5 g/L、分散剂1 g/L、冰醋酸0.6 g/L,浴比1∶40,染色温度130oC,保温时间20 min。经优化工艺处理后,染色聚氨酯合成革的各项性能基本达到服用要求。

160例非人源细胞系的种间交叉污染情况分析

目的分析常见的非人源细胞系种间交叉污染情况。方法收集160例常见的非人源细胞系,提取基因组DNA,通过PCR法鉴定其来源种属,判断是否存在种属间的交叉污染。对可疑细胞进一步通过染色体分析确认其来源种属。结果 160例非人源细胞中,有6个细胞系的种属鉴定结果与预期种属不符,其中1例大鼠来源细胞混入了人来源细胞,其余5例种属不正确,认定为错误细胞。结论细胞系的种属鉴定是细胞质量控制的不可或缺的环节,只有经过完整质控的细胞才能作为实验材料,用于科学研究和应用。

饲养层细胞作用机制研究进展

饲养层细胞法被广泛应用于干细胞及其他哺乳动物细胞的体外培养,通过分泌生长因子和物理支持可以一定程度模拟细胞增殖的体内环境。根据培养目的的不同,可以有选择性的挑选饲养层细胞种类、处理方法,或通过基因编辑对饲养层细胞进行改良,从而达到最佳的培养效果。

凤凰水库坝体混凝土工程中常见裂缝的预防措施

混凝土重力坝大体积混凝土的裂缝产生是一个普遍存在而又难以解决的问题。对安吉凤凰水库坝体混凝土工程中常见一些裂缝问题进行分析探讨,并针对具体情况提出一些预防措施。

浅谈某水闸闸门板改造施工设计优化

本文简要分析了某水闸闸门板的损坏原因,主要是水锤影响,提出了改造方案,并对闸门板改造优化等有关问题进行了探讨。

临安回水防洪堤地下车库深基坑支护施工技术

临安市回水防洪堤地下车库开挖深度7 m,属深基坑,地质均为透水砂砾层,车库位置紧邻锦溪河和地下污水管,汛期河中水位较高,渗水量较大。就施工中如何做好基坑围护、排水和降水等技术问题作简要阐述,并提出相应的安全监测和基坑围护应急措施。

浅谈清水混凝土施工技术在曹娥江大闸闸墩中的应用

随着经济发展和施工技术水平的提高,人们越来越追求建筑和环境的和谐与美观,对工程的外观质量提出了更高的要求。清水混凝土又称装饰混凝土,20世纪90年代在国内建筑工程上开始推广应用,由于其一次成型、不剔凿修补、无须装饰、外观光洁、质朴自然等特点,被越来越多地采用。本文就清水混凝土施工技术在曹娥江大闸闸墩中的良好应用作了详细阐述。

国有企业改制股权设置的探索与实践

本文对省属国有中小企业改制后,由公司管理层与职工共同持股的企业,股权设置的原则、程序、方法等实践进行探索。

现代学徒制人才培养 第三方评价质量评价机制的构建策略

现代学徒制是国家引导提倡的全新一种实践教育,是 以生(徒)为本,实现生(徒)的个性化发展,继而促进人才培 养质量的提高。现代学徒制人才培养质量第三方评价因其具有客 观、公正、权威等特性,成为职业教育人才培养质量评价监管的 核心。本文从分析当前职业教育第三方评价的意义、存在的主要 问题入手,提出了构建完善且全面的现代学徒制人才培养质量第 三方评价机制的策略,对实现“以评促教、以评促该”目的。

胃肠道间质瘤细胞系建立及其对C-KIT下游抑制剂敏感性研究

目的随着胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors, GIST)诊出率不断升高,靶向抑制剂相关研究亟待开展,但国内可利用的GIST模型十分有限。本研究旨在建立人GIST细胞模型,探讨靶向抑制剂作用。方法利用手术切除的人GIST腹膜转移灶组织1例进行体外原代培养,连续传代培养>20代进行鉴定,绘制增殖周期生长曲线。免疫细胞化学检测CD117和DOG-1表达,进行染色体核型分析,PCR法检测C-KIT基因与PDGFRA基因突变,CCK8法观察C-KIT 2种通路抑制剂效果,皮下接种BABL/c-nu裸鼠检测致瘤性,PCR法进行种属鉴定及支原体检测,短串联重复序列(short tandem repeats, STR)检测鉴定细胞身份。结果可在体外连续传代的人胃肠道间质瘤细胞命名为PUMC-GIST-1,连续传代后细胞可见分枝,呈神经细胞样生长,传代后于第5天到达平台期;CD117和DOG-1表达均阳性;不同代数细胞染色体核型有变化,在38~48条;细胞C-KIT基因11号外显子5'端突变热点区有突变V559D,PDGFRA基因12号外显子CCG-CCA突变。单独用药结果显示,不同浓度GDC-0941处理48 h后,PUMC-GIST-1 (F=8.96,P<0.001)和GIST-430细胞(F=3.19,P=0.03)增殖能力均下降,差异有统计学意义;不同浓度AZD-6244处理48h后,PUMC-GIST-1细胞增殖能力整体呈现上升趋势,差异有统计学意义,F=9.78,P<0.001;GIST-430细胞增殖能力整体呈现下降趋势,差异有统计学意义,F=6.61,P<0.001。联合用药结果显示,PUMC-GIST-1增殖能力减弱,阴性对照组和5μmol/L AZD+5μmol/L GDC组吸光度(A)值分别为0.41±0.01和0.37±0.03,差异有统计学意义,F=3.30,P=0.007;GIST-430增殖能力减弱,阴性对照组和5μmol/L AZD+5μmol/L GDC组吸光度(A)值分别为2.12±0.11和0.13±0.01,差异有统计学意义,F=158.61,P<0. 001。PUMC-GIST-1较GIST-430对联合用药低敏感。当AZD与GDC浓度分别为5μmol/L时二者具有协同抑制作用,金正均Q值检验PUMC-GIST-1与GIST-430的q值分别为3.08与3.91,均>1.15。裸鼠体内接种不成瘤;PUMC-GIST-1种属鉴定为人源性,STR结果与原代一致,无支原体污染。结论建立了C-KIT突变的PUMC-GIST-1细胞系,该细胞系对C-KIT靶向药低敏感,为胃肠肿瘤研究提供了新型细胞系。

靶向HER2嵌合抗原受体修饰T细胞的构建及其特异性杀伤肿瘤的作用

目的以靶向HER2的人源化单克隆抗体H1．2scFv为基础构建第三代嵌合抗原受体（CAR），并探讨CAR修饰的T淋巴细胞（CAR—T）对HER2高表达肿瘤的杀伤作用。方法运用分子克隆方法将CAR的表达框和H1．2scFv装人慢病毒表达载体，利用慢病毒载体将H1—2CAR基因转导至T淋巴细胞构建CAR．T细胞，通过酶联免疫吸附测定检测细胞因子白细胞介素2的表达，通过LDH释放实验检测CAR—T细胞杀伤肿瘤细胞的效率。最后用NOD／SCID小鼠移植瘤模型来检测CAR．T细胞在体内杀伤肿瘤细胞的能力。结果成功构建了靶向HER2的第三代嵌合抗原受体H1—2CAR表达载体，该载体转染的H1—2CAR—T细胞能与HER2’的肿瘤细胞结合并提高了细胞因子白细胞介素2的释放。在本研究中Hi一2CAR—T细胞与HER2高表达的肿瘤细胞相互作用时白细胞介素2分泌量可达到1000¨g／L以上，而外周血单个核细胞与肿瘤细胞相互作用时基本上不分泌白细胞介素2。在体外肿瘤细胞培养体系中，H1—2CAR—T细胞对HER2高表达肿瘤细胞的杀伤率明显高于HER2低／不表达的细胞。当效靶比为20：1时，H1—2CAR—T细胞对HER2高表达的乳腺癌细胞SK—BR-3的杀伤率可以达到（90．1±2．8）％．而H1．2CAR—T对HER2阴性的乳腺癌细胞MDA—MB-231的杀伤率只有（13．5±4．7）％。在NOD／SCID小鼠体内，CAR．T细胞治疗组乳腺癌移植瘤的生长速度减慢，实验结束时H1-2CAR—T细胞治疗组肿瘤质量平均为（0．74-0．1）g，未转染T细胞治疗组为（1．2±0．2）g，PBS组为（1．2±0．2）g。H1—2CAR—T治疗组与未转染T细胞治疗组相比较有明显差异（P〈0．05），而未转染T细胞治疗组与PBS治疗组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论靶向HER2的H1．2CAR．T细胞能特异性杀伤HER2高表达的肿瘤细胞，为CAR—T靶向治疗HER2’的肿瘤提供了研究基础。

Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株的建立

目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株，并验证Cas9的基因编辑活性，以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞（Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7）、人胆管癌细胞（RBE）和人胆囊癌细胞（GBC-SD）中，分别感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo、pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro和Cas9m1.1，挑选单细胞克隆培养扩增。提取基因组DNA和总蛋白后，通过基因组聚合酶链反应（PCR）和Western blot验证Cas9的稳定表达。选取其中3个细胞株并感染Lv-EF1α-mCherry，流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞，再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA，细胞扩增后，通过基因组PCR、荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况。结果筛选到100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株，其中表达Cas9-Neo的细胞35株，表达Cas9-Puro的细胞25株，表达突变型Cas9的细胞40株。建立了3株mCherry稳定表达的细胞系Huh7-mCas9-M、PLC/PRF/5-Cas9-M和SK-HEP-1-Cas9-M。基因组PCR和测序显示，同时感染2种gRNA的细胞基因组内存在mCherry片段缺失。荧光显微镜下，同时感染2种gRNA的细胞可以观察到mCherry－EGFP＋细胞。流式细胞仪检测结果显示，mCherry－EGFP＋细胞占0.3%～93.6%。结论成功建立了100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株，其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。

“英bye-bye”布熊乐队

星期天,小女孩英英做完作业,就去找玩具玩。她在玩具筐中翻个不停,翻着翻着,看见自己的布熊娃娃又旧又脏。"真难看。"她边说边摇头,顺手就把布熊扔了出去。布熊被摔疼了,伤心地哭了起来。老鼠咪咪正好路过,就关切地问:"布熊妹妹,你怎么啦?"布熊说:"主人嫌我难看,把我扔了出来,我被摔得快散架了……呜呜……"咪咪说:"别伤心,我们老鼠尖嘴猴腮,人类不是也说我们很难看吗?但我过得很快乐,

水利工程施工阶段变更的影响分析及建议

通过对设计变更概念的阐述,结合浙江省山区小流域农业生态工程在施工过程中出现的不同变更原因产生的影响,进行合理化分析与建议,并着重强调加强设计变更的管理对规范各参建单位的行为,确保工程质量和工期,控制工程造价都具有十分重要的意义。