锰诱导BV2细胞炎症活化与线粒体自噬有关

目的:探究锰诱导的BV2细胞炎症活化是否与线粒体自噬有关。方法:小鼠小胶质细胞BV2予以不同浓度锰暴露(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)12 h,并以1μg/mL脂多糖(LPS)为阳性对照组;刃天青法检测细胞活性;荧光探针检测溶酶体数量及荧光强度变化;透射电镜观察自噬变化;共聚焦显微镜观察溶酶体和线粒体荧光共定位的程度;蛋白免疫印迹(western blotting)实验检测不同浓度锰暴露12 h后细胞炎症蛋白NLRP3、自噬相关蛋白(p62、LC3-Ⅱ/Ⅰ)以及线粒体外膜蛋白VDAC1的表达水平;线粒体自噬抑制剂巴弗洛霉素A1预处理验证锰暴露对自噬流及上述炎症标志蛋白表达的影响。结果:BV2细胞染锰浓度≥50μmol/L时,BV2细胞存活率下降,NLRP3表达上调(P<0.01),溶酶体数量及与线粒体共定位显著增加(P<0.05);锰暴露组VDAC1和自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平下降,p62的蛋白表达水平升高(P<0.05);巴弗洛霉素A1预处理后,显著逆转除p62外的其他自噬标记蛋白表达(P<0.05)。结论:50~100μmol/L染毒剂量下,锰诱导BV2细胞炎症活化和线粒体自噬增加;巴弗洛霉素A1抑制线粒体自噬可促进锰暴露诱导的BV2细胞炎症活化。

牛磺酸影响人外周血T淋巴细胞增殖及分化功能的体外研究

目的:研究牛磺酸(Tau)对人外周血T淋巴细胞体外活化增殖及分化的影响及其作用机制。方法:无菌分离健康志愿者外周血淋巴细胞,建立植物凝集素(PHA)刺激T细胞体外活化增殖模型。实验设置对照组(control组)、PHA刺激组(PHA5μg/mL组)及Tau处理组(PHA+Tau 80 mmol/L组、PHA+Tau 160 mmol/L组)。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测T淋巴细胞增殖率;瑞—吉染色法观察细胞形态及计算转化率;实时荧光定量PCR检测T细胞增殖标志物Ki67,Th1转录因子T-bet及细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),Th2转录因子GATA-3及白介素-4/6(IL-4/6),凋亡相关因子Fas、FasL基因表达水平;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平。结果:与control组相比,PHA 5μg/mL组T淋巴细胞转化率、增殖率、增殖标志物Ki67、Th1相关因子T-bet、IFN-γ、TNF-α、凋亡相关因子Fas基因表达及胞内ROS水平升高(P<0.05),凋亡相关因子FasL基因,Th2相关因子GATA-3、IL-6基因表达水平降低(P<0.05)。与PHA 5μg/mL组相比,PHA+Tau 80 mmol/L组与PHA+Tau 160 mmol/L组T淋巴细胞转化率、增殖率、Ki67基因表达及胞内ROS水平均下降(P<0.05),Th2相关因子IL-4、IL-6基因表达水平均升高(P<0.05),Th1相关因子IFN-γ、FasL基因表达水平差异均无统计学意义(P>0.05),PHA+Tau 80 mmol/L组Th1相关因子T-bet、TNF-α、Th2相关因子GATA-3及Fas基因表达水平差异无统计学意义(P>0.05),PHA+Tau 160 mmol/L组Th1相关因子T-bet、TNF-α、Th2相关因子GATA-3及Fas基因表达水平升高(P<0.05)。结论:Tau可能通过下调Ki67表达和增强Fas-AICD途径抑制T细胞增殖转化,并可能通过降低胞内ROS含量,提高Th1/Th2活化水平,调节Th1/Th2平衡偏向Th1分化,发挥调节T淋巴细胞活化增殖及分化的作用。

绿原酸对人外周血T淋巴细胞体外增殖及免疫调节功能的影响

目的绿原酸对T淋巴细胞的影响尚不清楚。文中旨在探讨绿原酸对植物凝集素(PHA)刺激人外周血T淋巴细胞体外增殖及免疫调节功能的影响。方法采用Ficoll离心法分离人外周血单个核细胞,分为对照组、PHA组、PHA+绿原酸50μg/mL组、PHA+绿原酸100μg/mL组。CCK-8法检测细胞增殖,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态,实时荧光定量PCR检测T细胞增殖标志物Ki-67,Th1细胞因子IFN-γ、TNF-α,转录因子T-bet和Th2细胞因子IL-4、IL-13及转录因子GATA-3的mRNA表达水平;活性氧试剂盒检测细胞内ROS变化。结果与对照组比,PHA组刺激后T细胞明显增殖并转化为淋巴母细胞,增殖标志物Ki-67和Th1相关因子IFN-γ、TNF-α、T-bet mRNA表达水平明显升高(P<0.05),Th2相关因子IL-4、IL-13的表达上升(P>0.05),GATA-3 mRNA表达明显下降(P<0.01),胞内ROS水平明显增加(P<0.01);与PHA组比较,PHA+绿原酸50μg/mL组、PHA+绿原酸100μg/mL组处理后T细胞增殖、转化率和Ki-67、IFN-γ和T-bet mRNA表达水平显著降低(P<0.05),IL-4、IL-13、GATA-3 mRNA水平显著增加(P<0.05),胞内ROS水平明显降低(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论绿原酸可抑制人外周血T淋巴细胞体外增殖,并可能通过下调ROS水平、抑制Th1因子的表达促进Th2分化发挥免疫调节功能。

LCMT1过表达对M2型巨噬细胞极化的影响

目的:通过慢病毒载体构建亮氨酸羟基甲基转移酶1(LCMT1)过表达THP-1细胞株,探讨LCMT1对THP-1细胞和THP-1源性巨噬细胞M2型极化的调控作用。方法:利用慢病毒技术,构建LCMT1过表达载体。设置blank组、OE-control组和OE-LCMT1组。荧光显微镜观察各组细胞的绿色荧光,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况,实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测LCMT1 mRNA和蛋白表达水平以及PP2Ac甲基化相关蛋白表达水平。将THP-1细胞经100 nmol/L佛波酯(PMA)处理48 h后诱导分化为M0型巨噬细胞;M0型巨噬细胞经20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)刺激48 h,诱导分化为M2型巨噬细胞。实时荧光定量PCR检测M2型巨噬细胞极化标志物c型甘露糖受体1(MRC-1)、CC趋化因子配体22(CCL22)、树突状细胞特异性细胞间黏附分子结合非整合素(CD209)的mRNA表达。结果:与blank组相比,OE-control和OE-LCMT1组表达绿色荧光,OE-control组的增殖曲线下降(P<0.001),LCMT1和PP2Ac甲基化相关蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与OE-control组相比,OE-LCMT1组增殖曲线下降(P<0.05),LCMT1和PP2Ac甲基化蛋白表达升高(P<0.05),PPME-1和PP2Ac去甲基化蛋白表达降低(P<0.01),总PP2Ac蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与Blank M0组相比,Blank M2组的M2极化标志物MRC-1、CD209、CCL22 mRNA水平升高(P<0.05);与OE-control M2组比较,OE-LCMT1 M2组的M2极化标志物MRC-1、CD209、CCL22 mRNA水平降低(P<0.05)。结论:成功构建了LCMT1过表达的THP-1细胞株,LCMT1过表达可抑制THP-1细胞的增殖;维持总PP2Ac蛋白水平,增强PP2Ac甲基化并伴随PPME-1和PP2Ac去甲基化水平降低;下调M2型巨噬细胞极化标志物的表达,抑制M2型巨噬细胞极化。

成脂诱导剂通过PP2Ac调控人肝星状细胞活化的体外研究

目的:研究成脂诱导剂MDI对活化的人肝星状细胞的作用及其机制。方法:体外培养人肝星状细胞系LX-2细胞,实验分为4组,即空白对照组、溶剂对照组、重组人转化生长因子β1(TGF-β1)组、TGF-β1+MDI组。油红O染色法检测细胞内脂滴变化,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肝纤维化标志物肌动蛋白α2(ACTA2)、Ⅰ型胶原蛋白α1(COL1A1)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)基因相对表达量。线粒体特异性荧光探针检测TGF-β1/MDI干预后LX-2细胞内线粒体数量的变化。采用western blotting法检测各组蛋白磷酸酶2A催化性C亚基(PP2Ac)蛋白表达。结果:与空白对照组和溶剂对照组比较,TGF-β1组LX-2细胞胞体增大、呈多边形且胞质增多、未见明显脂滴、线粒体数量增加,肝纤维化标志物ACTA2、COL1A1和TIMP-1mRNA表达水平以及PP2Ac去甲基化蛋白表达水平升高(均P<0.01)。与TGF-β1组比较,TGF-β1+MDI组细胞变小、胞质内小脂滴数量增加、线粒体数量减少,ACTA2、COL1A1和TIMP-1 m RNA表达水平以及PP2Ac去甲基化蛋白表达水平降低(均P<0.05)。结论:TGF-β1和MDI可能通过调控肝星状细胞的PP2Ac去甲基化水平调控人肝星状细胞活化,且与脂质生成以及线粒体数量有关。

牛磺酸促进线粒体自噬抑制M2型巨噬细胞极化

目的研究牛磺酸对M2型巨噬细胞抑炎极化的调控作用,初步探索线粒体自噬在其中的作用机制。方法人外周血的单核细胞系THP-1细胞经100 nmol/L佛波酯(PMA)处理48 h后诱导分化为M0型巨噬细胞;M0型巨噬细胞经20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)刺激48 h,诱导极化为M2型巨噬细胞;加入(40、80)mmol/L牛磺酸与IL-4共处理M2巨噬细胞48 h。实时荧光定量PCR检测M2型巨噬细胞极化相关标志物C型甘露糖受体1(MRC-1)、CC趋化因子配体22(CCL22)、树突状细胞特异性细胞间黏附分子结合非整合素(CD209)的mRNA表达;多功能酶标仪及激光共聚焦显微镜检测和观察线粒体、溶酶体数量变化,JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位水平;Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导激酶1(PINK1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达。结果M0极化为M2时,MRC-1、CCL22、CD209 mRNA表达水平明显上升;线粒体数量和线粒体膜电位增加;溶酶体数量减少;PINK1蛋白表达水平增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降。40 mmol/L、80 mmol/L牛磺酸分别处理后,MRC-1、CCL22、CD209的mRNA水平明显下降;线粒体数量和线粒体膜电位下降;溶酶体数量增加;PINK1水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加,与牛磺酸浓度呈剂量依赖性。结论牛磺酸通过降低线粒体膜电位,促进线粒体自噬,减少细胞的线粒体数量,抑制M2型巨噬细胞极化相关标志物的表达,负调控M2型巨噬细胞极化,避免过度抑炎极化。

苯的代谢产物氢醌改变细胞氧化还原状态诱导TNF-α表达

学教研室,公共卫生学院,第一附属医院,广西南宁530021;[摘要]目的:研究苯的代谢产物氢醌(HQ)对HL-60细胞TNF-α产生和细胞活性的影响,并探讨这种影响是否通过氧化还原调节来实现。方法:HL-60细胞用不同浓度HQ刺激24h后,收集细胞及培养液上清,检测细胞内活性氧、氧化型/还原型谷胱甘肽含量,CCK8检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,ELISA法检测TNF-α含量。结果:5μmol/LHQ即可诱导GSH水平增高,抑制HL-60细胞增殖,但对GSH/GSSG比例,TNF-α表达及细胞凋亡无显著影响。50、100μmol/LHQ可破坏细胞内氧化还原状态,GSH/GSSG比例下降,TNF-α表达增高,显著抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸能拮抗HQ诱导的TNF-α表达、增殖抑制及细胞凋亡。结论:HQ可通过改变HL-60细胞内氧化还原状态诱导TNF-α表达,导致细胞凋亡。

TLR家族及其功能研究进展

由于TLR能识别病原体 ,从而在病原体入侵机体的早期即启动天然免疫 ,提示其在抗感染中的重要作用。至今已发现的TLR家族中的TLR1～ 10 ,其中TLR1～ 5的结构已经被确定 ,而对于TLR的功能 ,现今对TLR在细菌内毒素 (LPS)作用下引起的免疫毒理学作用的研究较为深入 ,提示TLR对由病原体引起的免疫病理损伤有重要的作用。随着研究的深入 ,发现TLR在促进细胞因子的合成与释放 ,引发炎症反应 ;促进免疫细胞膜表面表达相关免疫分子 ,促进免疫细胞的成熟和功能化 ;抗病毒感染 ;调节免疫应答 ;诱导一氧化氮 (NO)依赖性杀菌活性 ;

组织蛋白酶B在化疗药物Etoposide作用后肝癌细胞中表达的研究

目的初步探讨组织蛋白酶B(CB)在化疗药物Etoposide作用后肝癌细胞中的表达及其意义。方法MTT法检测不同浓度(0~600μg/ml)Etoposide作用24h后HepG2细胞存活率,琼脂糖电泳法检测细胞凋亡DNA片段化,荧光定量PCR检测CB表达水平。结果不同浓度(2.4~600μg/ml)Etoposide作用HepG2细胞24h后细胞存活率显著下降,且与药物浓度呈负相关(R=-0.81,P=0.00);琼脂糖电泳法检测细胞凋亡DNA片段化未见典型梯状条带,CB表达水平增加(2.8±0.43)^(3.91±0.02)倍,与对照组比较差异有统计学意义(P=0.00),并与细胞存活率呈负相关(r=-0.94,P=0.00)。结论CB在Etoposide作用后HepG2细胞表达增高,提示药物治疗后有可能通过激活CB表达而促进残留肿瘤细胞的侵袭和转移。

用班主任角色助力临床医学本科教改班学习——以“医学免疫学”为例

临床医学教改班是我国追赶国际医学教育的步伐,建立起具有中国特色,与国际医学教育实质等效的医学专业认证制度必需的一项有挑战的医学教育改革。利用班主任角色,把学习辅导融入班主任工作。结合教改班教改课程设计要求,建立强有力的教改教学团队;开展因材/才施教的教学训练;依托教改,拓展教学成果,培养更多卓越医学生的同时,积极帮助后进生进步。连续4年的学习辅导工作对临床医学本科教改班学习起到了良好的促进作用。

利用TBL等混合教学模式提高实验教学质量——以“临床免疫学检验技术”为例

医学检验本科的学习时间从5年减为4年,教学时间明显缩短。我们采用以TBL为主的混合式教学设计,分基础实验、综合性实验、探索性实验三个层次对原来的"临床免疫学检验"实验课程做了新的设计改革,各层次之间紧密联系,起到承前启后,逐步提升和训练学生检验技术和实验设计分析能力的目标。该项改革和实践在稳定了"临床免疫学检验技术"实践教学效果的同时,提高了四年制医学检验本科的专业培养质量。

6株NDV鄱阳株对肝癌细胞杀伤作用的初步研究

目的:研究从江西鄱阳湖野鸭分离的6株NDV对肝癌细胞的杀伤效应,进一步筛选NDV溶瘤毒株。方法:用MTT法研究6株NDV鄱阳株对两株传代肝癌细胞株Novikoff和HepG-2及一株正常肝细胞株HL-7702的杀伤效应。结果:6株NDV鄱阳株对肝癌细胞株Novikoff和HepG-2有显著杀伤效应,而对人正常肝细胞HL-7702无明显影响;病毒对细胞的杀伤活性与病毒作用剂量和病毒作用时间成正比;病毒在肝癌细胞中有明显复制增殖现象;Novikoff肝癌细胞对NDV敏感性强于HepG-2肝癌细胞。结论:6株NDV鄱阳株对Novikoff及HepG-2肝癌细胞产生显著的杀伤作用,而对正常肝细胞HL-7702未见明显影响。

锰对神经细胞超微结构的影响

目的为探讨锰(Mn)神经毒性的作用机制,利用原代培养的神经细胞模型,探讨不同浓度Mn对神经细胞超微结构的影响。方法新生Wistar大鼠大脑皮层神经细胞原代培养,不同浓度Mn染毒,以MTT试验结果作细胞存活曲线。选取3个MTT试验结果差异有显著性差异的点值设定染Mn的低、中、高剂量组,透射电镜观察各组超微结构改变。结果01mmolL染Mn24h神经细胞存活率与对照组比较,差异无显著性,04～8mmolL染Mn后24h神经细胞存活率明显下降且存在剂量反应关系。以01、04、1mmolL为染Mn低、中、高剂量组,透射电镜显示各剂量组超微结构改变特征不同。低剂量组见粗面内质网增生,中剂量组以胞核改变最为明显,高剂量组以溶酶体改变为主。结论Mn在体外可剂量依赖性地引起神经细胞死亡,不同浓度Mn作用引起细胞超微结构改变的特征不同。

医学微生物学实验教学模式改革的探索

为调动学生学习微生物学的积极性和主动性,更好地培养学生综合能力和创新能力,从广西医科大学两个年级本科学生中各选一个班进行了微生物学实验教学模式改革,获得了较好的效果。同时针对改革探索过程中存在的问题,提出了改进的一些措施。

用山羊血代替绵羊血进行补体结合试验的探讨

用山羊血代替绵羊血进行补体结合试验的探讨黄企光唐深刘瑾杨润友（广西医科大学微生物学与免疫学教研室南宁５３００２１）补体结合试验是测定抗原、抗体滴度的经典方法。广泛应用于免疫学、病毒学、细菌学、肿瘤学等方面，是医学、兽医学工作者应该掌握的实验方法。经典...

氢醌抑制HL-60细胞分化上调过氧化物酶2-Cys过氧化物氧还蛋白表达

目的研究氢醌（HQ）对HL-60细胞向单核系、粒系分化的影响。方法 HQ 1,5和50μmo·lL^-1分别与豆蔻酰佛波醇乙酯（PMA）20 nmol·L^-1或1.25%DMSO共同处理细胞,分别于48和96 h收集细胞。通过观察细胞形态、硝基四氮唑蓝还原反应鉴定细胞分化;CCK-8检测细胞增殖,荧光定量PCR检测2-Cys过氧化物氧还蛋白（Prxs）基因表达的变化;Western印迹检测2-Cys Prxs蛋白表达的变化。结果在HQ1-50μmol·L^-1作用下,HL-60细胞向单核系分化受到抑制;HQ1和5μmol·L^-1对DMSO诱导的粒系分化无影响,但HQ50μmol·L^-1可抑制细胞向粒系分化。HQ5和50μmol·L^-1与诱导剂的共同作用可以抑制HL-60细胞增殖。与正常对照组比较,PMA和DMSO组2-Cys Prxs基因表达水平均有降低的趋势,HQ1,5和50μmol.L^-1＋PMA20 nmol·L^-1组PrxⅠ,PrxⅢ和PrxⅣ各个基因表达水平与PMA组比较均有增高的趋势;DMSO诱导分化组中仅HQ 50μmol·L^-1＋1.25%DMSO组PrxⅠ和PrxⅢ基因表达水平与单独DMSO组比较显著增高（P〈0.05）。结论 HQ1和5μmol.L^-1可以抑制HL-60细胞向单核系分化,HQ50μmol·L^-1可抑制细胞向粒系分化,并上调PrxⅠ和PrxⅢ基因的表达。