左归降糖舒心方调控TLR4/NF-κB通路抑制糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化的机制研究

目的 基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路探讨左归降糖舒心方对糖尿病心肌病MKR小鼠心肌纤维化及炎症因子的影响。方法 以8周龄雄性MKR小鼠为实验对象,采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)40 mg/kg构建糖尿病心肌病模型,随机分为中药高剂量组[33.67 g/(kg·d)左归降糖舒心方2 g/mL]、中药低剂量组[16.84 g/(kg·d)左归降糖舒心方2 g/mL]、西药联合组[0.23 g/(kg·d)二甲双胍联合1.5 mg/(kg·d)依那普利]和模型组(等容量蒸馏水);另设FVB小鼠为空白对照组(等容量蒸馏水)。每组10只,连续给药8周后取材。收集尾静脉血液检测空腹血糖水平;采用HE、Masson染色观察心肌病理改变,电镜观察心肌组织超微结构变化;采用ELISA检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;采用Western blot法检测TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达情况;RT-qPCR及Western blot检测小鼠心肌组织Ⅰ型胶原(collagen type I,CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,CollagenⅢ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量增高(P<0.01);心肌细胞结构紊乱,胶原含量增加,心肌细胞重度退行性变;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达上调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA及蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01),中药高剂量组小鼠心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达增加(P<0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组和西药联合组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量均降低(P<0.01);心肌结构改善,胶原沉积减少;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达下调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA蛋白及mRNA表达下调(P<0.01)。与西药联合组比较,中药低剂量组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量均升高(P<0.01),心肌结构无明显改善,胶原沉积无显著减少;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达上调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA蛋白及mRNA表达上调(P<0.01)。结论 左归降糖舒心方能抑制心肌炎性反应、改善心肌细胞结构,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB通路、下调细胞炎症因子表达、抑制心肌纤维化有关。

基于CiteSpace的中性粒细胞在糖尿病领域研究进展可视化分析

目的本文旨在阐明中性粒细胞和糖尿病领域的发展以及中性粒细胞在糖尿病研究领域的演变特征、潜在趋势及研究热点。方法检索Web of Science(科学引文索引)中2010~2023年收录的中性粒细胞在糖尿病领域相关的2998篇文献,采用CiteSpace 6.1.R6对中性粒细胞在糖尿病领域的相关文献进行可视化分析。结果自2012年以来,有关这一主题的出版物迅速增长。Bayat Mohammad、Liu Tong、Amini Abdollah和Zhang Rui均为高产作者,有7篇相关领域的文章发表。中国和上海交通大学分别是发表论文最多的国家和机构。该领域最有影响力的期刊是《NATURE MEDICINE》。文献共被引分析显示,目前与糖尿病相关的主题中,焦点最高的是“extracellular trap(细胞外诱捕网)”“COVID-19 patient(新冠肺炎患者)”。关键词共现分析、聚类分析和关键词爆发分析表明,lymphocyte ratio(淋巴细胞比值)(13.08)、neutrophil extracellular trap(中性粒细胞胞外诱捕网)(7.2)是目前中性粒细胞和糖尿病领域研究最多的主题。这一领域的文献主要分布在“myocardial infarction(心肌梗死)”“endothelial(内皮细胞)”“oxidative stress(氧化应激)”和“apoptosis(细胞凋亡)”之间。结论本文运用CiteSpace对中性粒细胞在糖尿病领域的演变趋势进行分析,为研究人员今后开展糖尿病领域相关研究提供新思路。

黄芩-黄连药对及其活性成分治疗糖尿病肾病的作用机制研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病最常见的并发症之一,中医认为湿热内蕴是DN的关键病机,治法应以“清湿热”为主。黄芩-黄连药对是清湿热法的代表药对,现代研究表明该药对及其主要活性成分对DN具有治疗作用。梳理近年来黄芩-黄连药对及其主要活性成分的相关文献,从调节糖脂代谢紊乱、减少肾脏细胞凋亡、缓解肾脏炎症和纤维化、调节肠道微生物和调控基因转录等方面进行综述,为黄芩-黄连药对的临床运用和研发提供系统的理论依据。

基于转录组学探讨当归芍药散对db/db小鼠肾脏保护作用的潜在机制

目的基于转录组学和实验验证探究当归芍药散对db/db糖尿病肾病小鼠肾脏的保护机制。方法25只8周龄造模成功的db/db小鼠按体质量随机均分为模型组(20 mL/kg蒸馏水)、达格列净组(1.3 mg/kg)、当归芍药散低剂量组(8.39 g/kg)、当归芍药散中剂量组(16.77 g/kg)、当归芍药散高剂量组(33.54 g/kg),每组5只;另选5只同龄db/m小鼠作为空白组(20 mL/kg蒸馏水)。每组灌胃1次/d,连续6周。给药结束后,检测各组小鼠体质量、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、口服糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)的曲线下面积(area under thecurve,AUC);采用全自动生化分析仪检测尿白蛋白肌酐比值(urea albumin creatinine ratio,UACR)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC);采用肌酐比色法检测血肌酐(serum creatinine,Scr);采用尿素比色法检测小鼠血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN);采用HE染色观察肾脏组织病理形态;采用转录组学芯片技术检测小鼠肾组织差异基因,并对当归芍药散中剂量组差异基因进行KEGG富集分析;采用RT-PCR法检测表达量TPM>10的核心基因在肾脏组织中的mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、OGTT-AUC、FBG、UACR、Scr、BUN、TG、TC显著升高(P<0.01)。与模型组相比,达格列净组、当归芍药散各剂量组小鼠体质量、OGTT-AUC、FBG、UACR、Scr、BUN、TG、TC均降低(P<0.05,P<0.01)。与空白组相比,模型组共筛选出1129个差异基因,其中上调差异基因337个、下调差异基因792个。与模型组相比,当归芍药散共筛选出271个差异基因,其中上调差异基因195个、下调差异基因76个。空白组、模型组、当归芍药散中剂量组三组差异共表达基因57个,其中TPM>10的核心基因共12个,包括Gsta2、Cyp4a12a、Slc8a1、Abcc4、Cpeb4、Serpina1b、Npl、Aacs、Kap、Slc5a10、Tmem252、Ifi27l2a。12个核心基因的mRNA表达水平与转录组测序趋势相同。与模型组比较,当归芍药散中剂量组小鼠Gsta2、Abcc4、Slc8a1、NPL mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Slc5a10、Tmem252 mRNA表达水平下降(P<0.05)。当归芍药散中剂量组差异基因富集于药物代谢-细胞色素P450、谷胱甘肽代谢、活性氧等相关通路。结论当归芍药散具有改善糖尿病肾病预后的作用,其机制可能与调控Gsta2、Slc5a10、Abcc4、Slc8a1、Tmem252、Npl等基因表达,调控细胞色素P450、谷胱甘肽代谢、活性氧等信号通路相关。

骨骼肌特异性胰岛素样生长因子1及胰岛素双受体功能缺失鼠糖尿病发病及其相关炎症因子的变化

目的:临床研究表明,2型糖尿病及其并发症患者,均可出现炎症反应标志物的异常改变。观察骨骼肌胰岛素样生长因子1受体及胰岛素受体功能缺失转基因2型糖尿病小鼠的糖代谢及其相关炎症因子的变化。方法:实验于2005-11/2006-08在湖南中医药大学SPF实验动物中心及血管生物学实验室(国家三级实验室)完成。①实验材料:由美国国立卫生研究院(NIH)授权使用引进的10只MKR鼠,经自然交配后繁殖的子代28只及30只C57小鼠。②实验方法:对MKR鼠进行鉴定后,从MKR鼠子代出生第3周开始每周定时以电化学法血糖仪进行血糖检测。③实验评估:观察2月龄MKR鼠血糖及胰岛素的水平;双抗体夹心ELISA法检测3月龄MKR鼠细胞间黏附分子1、血管内皮黏附分子1、脂联素的变化。同期采用C57小鼠进行对照。结果:纳入由10只MKR鼠经自然交配后繁殖的子代28只,经鉴定后22只纳入实验观察;C57小鼠30只,相关炎症分子检测的实验中有2例因血液样本溶血剔除,其余均进入结果分析。①MKR鼠所有子代鼠均会出现长度为330bp的DNA片断,表明该MKR鼠后代能稳定遗传。②新生MKR鼠自出生3周开始,即出现显著的血糖增高,5周以后血糖则较稳定地维持在高水平。MKR鼠在2月龄时即表现出显著的高胰岛素血症及糖耐量低下,与C57对照组小鼠比较,差异具有非常显著性意义(P<0.01)。③MKR鼠的脂联素含量显著升高,而细胞间黏附分子1、血管内皮黏附分子1含量亦显著增高,与C57对照组小鼠相比,差异具有非常显著性意义(P<0.01)。结论:本文成功地引进了MKR模型,MKR鼠是目前一种非常良好的2型糖尿病动物模型,并具有明显的炎症反应特征。

茵陈五苓散治疗高脂蛋白血症的临床与实验研究

以经方茵陈五苓散治疗高脂蛋白血症３０例，显效率６３．３％，总有效率９３．３％。同时采用绞股蓝总甙对照治疗３０例，显效率２０．０％，总有效率８６．７％。治疗组疗效明显优于对照组（Ｐ＜０．０１）。动物实验表明：该方预防及治疗给药均能显著地抑制高脂血症模型大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白浓度的升高，以及抑制低密度脂蛋白与高密度脂蛋白比值的升高（Ｐ＜０．０１）。此外，本方还具有显著地抗氧化作用，能使血中过氧化脂质含量降低，而谷胱苷肽过氧化物酶活性增强。

MKR转基因小鼠糖尿病发病特点的初步探讨

目的观察骨骼肌胰岛素样生长因子-1受体及胰岛素受体的功能缺失(Mouse overexpressing adominant-negative IGF-I receptor specifically in muscle,MKR mouse)转基因2型糖尿病小鼠的血糖及其生长情况。方法由美国国立卫生研究院(NIH)授权使用引进的MKR鼠,经自然交配后繁殖的子代作为研究对象,制备尾组织基因组DNA,经聚合酶链反应得到扩增产物,1%琼脂糖凝胶电泳观察鉴定。同时对MKR鼠子代出生后的血糖、体重、胰岛素定时检测。同期采用昆明种小鼠或C57野生型小鼠进行对照。结果MKR鼠所有子代鼠均会出现长度为330 bp的DNA片段,表明该MKR鼠后代能稳定遗传。新生MKR鼠自出生3周开始,即出现显著的血糖增高,5周以后血糖则较稳定地维持在高水平。与对照组小鼠同期的血糖比较,差异具有非常显著性意义(P<0.01)。其体重增长随年龄的增长而减慢,至4月龄时体重基本稳定,但无下降趋势。MKR鼠在2月龄时即表现出显著的高胰岛素血症及糖耐量低下,与对照组小鼠同期比较,亦具有非常显著性意义(P<0.01)。MKR鼠在生长过程中无自然死亡发生。结论MKR鼠是至今为止一种非常良好的2型糖尿病的动物模型。

左归复方对MKR转基因糖尿病小鼠糖代谢及相关炎症因子的影响

目的:观察左归复方干预治疗对骨骼肌胰岛素样生长因子-1及胰岛素双受体功能缺失(Mouse overexpressing a dominant-negative IGF-I receptor specifically in muscle,MKR mouse)转基因2型糖尿病小鼠的糖代谢及相关炎症因子细胞间黏附分子、血管细胞黏附分子的影响。方法:由美国国立卫生研究院(NIH)授权使用引进的MKR鼠,经自然交配后繁殖的子代作为研究对象。MKR小鼠经繁殖鉴定后,以左归复方给药30d进行干预治疗。结果:MKR鼠后代能稳定遗传。左归复方给药30天后,其高剂量具有显著的改善MKR鼠糖耐量异常、降低空腹血糖和改善高胰岛素血症的作用(P<0.05,P<0.01),并具有降低细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子(VCAM-1)水平的作用(P<0.01)。结论:我们成功地引进了MKR模型,MKR鼠是目前一种非常良好的2型糖尿病的动物模型。左归复方具有显著的改善MKR鼠糖代谢的作用,并具有降低与炎症反应相关的细胞间黏附分子和血管细胞黏附分子水平的作用。

骨骼肌特异性胰岛素样生长因子1及胰岛素双受体功能缺失所致小鼠2型糖尿病

目的观察骨骼肌胰岛素样生长因子1受体及胰岛素受体的功能缺失(MKR)转基因2型糖尿病小鼠的血糖及其生长情况。方法以MKR鼠自然交配繁殖的子代为研究对象,定时检测其血糖、体重、胰岛素。采用C57小鼠为对照。结果MKR鼠所有子代均出现长度为330bp的DNA片断,表明该MKR鼠后代能稳定遗传。新生MKR鼠自出生3周开始,血糖即显著增高,5周后血糖则稳定地维持在较高水平。其体重增长随年龄的增长而减慢,至4月龄时基本稳定。MKR鼠在2月龄时即表现出显著的高胰岛素血症及糖耐量减低,与对照组小鼠比较,差异有统计学意义(P<0.01)。MKR鼠在生长过程中无自然死亡发生。结论MKR鼠是研究2型糖尿病较好的动物模型之一。

一种新型的混合平面结构电导率传感器的设计与实现

基于水体-电极系统的机理分析,设计并实现了一种新型的电导率传感器。传感器采用平面矩形线圈与叉指电极混合结构。通过搭建自动化实验平台,采用交流阻抗技术,对研制的传感器进行实测,以获得传感器在不同溶液、不同频率信号激励下的阻抗数据。经过与商用电导率传感器进行数据拟合,找出了阻抗数据与电导率之间的函数关系。实验证明,该电导率传感器是一种灵敏度高、稳定性强的测量工具,其测量精度达到了商用传感器标准,为水溶液电导率的测量提供了一个低成本的解决方案。

左归降糖方治非胰岛素依赖型糖尿病临床研究

左归降糖方系明·张景岳阴阳互济法的代表方左归饮、左归丸化裁组成。用本方治疗３３例非胰岛素依赖型糖尿病，并设对照组２０例对比观察。结果表明：总有效率治疗组为８４．４％，而对照组为６５％，二组比较，差异具有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。左归降糖方能够显著改善患者的临床症状，降低血糖，而其作用机理可能与该方降低糖基化产物，提高胰岛素敏感性，从而减轻胰岛素抵抗有关。

左归双降方对葡萄糖、胰岛素、低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的干预作用

目的 观察左归双降方提取液对葡萄糖(Glu)、胰岛素(Ins)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)联合诱导下血管内皮细胞损伤的干预作用与作用机理。方法 以人脐带静脉内皮细胞株 ECV-304 为受试对象,以不同浓度的Glu、Ins、ox-LDL 联合作用 24 h,建立了一种糖尿病血管并发症的体外内皮细胞损伤模型,并在此基础上观测左归双降方提取液(ZGSJF)对该细胞损伤模型的调节作用。各试验组细胞继续培养 48 h 后分别检测细胞活性及其细胞培养液中的内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)以及细胞粘附因子(ICAM-1)的含量。结果 细胞继续培养 48h 后,模型组较正常组细胞活力明显下降(P<0.01),ET-1 及 ICAM-1 含量明显升高(P<0.01),NO 含量明显下降(P<0.01)。而不同剂量的 ZGSJF 给药后能显著改善细胞活力(与模型组比较,P<0.05),降低 ET、ICAM-1 及升高 NO 含量(与模型组比较,P<0.01),且显著优于对照药达美康。结论 左归双降方对血管内皮细胞具有一定的保护作用,而这一作用可能是通过促进内皮细胞分泌舒张性因子 NO、减少血管收缩因子 ET-1 的分泌、抑制与炎症反应相关的细胞粘附过程等途径,从而改善糖尿病合并高血压的血管损伤。

明清医家对张景岳阴阳互济法及其左、右归方的探析

张景岳作为明代杰出的医学大家，在《内经》及王冰对阴阳互济法则论述的基础上，首次明确地将这一法则贯彻到阴阳精气水火不足证的立法组方中，而其中最具代表性的当属左、右归丸、饮。此后，众多明清医家对阴阳互济法及左、右归方从多方面进行了阐释及临床应用，对后学颇有启迪。

茵陈五苓散对高脂蛋白血症及其脂质过氧化影响的实验研究

张仲景方茵陈玉苓散预防及治疗给药均能明显抑制高脂模型大鼠血清总胆固醇(Tch)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL—C)含量及低密度脂蛋白胆固醇/高密度脂蛋白胆固醇(LDL-C/HDL-C)比值的升高。该方拆方析因分析表明,茵陈与五苓散均能明显降低高胆固醇小鼠血Tch含量,而茵陈五苓散系茵陈与五苓散独立的联合作用。此外,本方还具有显著的抗氧化作用,能使血中血浆丙二醛(MDA)含量降低、全血谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-PX)活性增强。

用于水质硝酸盐浓度在线检测的电磁传感器设计

近年来水质污染的深层次问题逐渐显露,无机污染物尤其是硝酸盐或者亚硝酸盐对人类的健康造成了严重威胁。本文将曲状电磁线圈和叉指电容结合起来,设计了一种新型的平面电磁传感器,实现了水体中的硝酸盐浓度在线监测。基于COMSOL Multiphysics 3.5a软件对多种不同参数的传感器进行建模仿真,最终确定最佳传感器模型,为进一步研究水质监测系统中的传感器模块奠定了基础。

防己茯苓汤加减对大鼠肾系膜细胞增殖及基质金属蛋白酶-2的影响

目的:观察防己茯苓汤加减方是否具有干预肿瘤坏死因子诱导后肾小球系膜细胞增殖的作用及对基质金属蛋白酶MMP-2的影响。方法:采用大鼠肾小球系膜细胞培养进行体外研究,用肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激系膜细胞增殖,再加入不同浓度防己茯苓汤加减方提取液对细胞进行干预,用MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,用ELISA法测定细胞培养液中肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶(MMP-2)的含量。结果:加入防己茯苓汤加减方提取液后,系膜细胞的增殖程度受到显著抑制(P<0.05),流式细胞仪DNA图示S期细胞数显著减少(P<0.05)。细胞培养液中MMP-2的表达增强(P<0.05)。结论:防己茯苓汤加减方对肿瘤坏死因子诱导后肾小球系膜细胞的增殖具有抑制作用,并可影响肾小球系膜细胞MMP-2的表达,进而调整细胞外基质(ECM)的合成与降解。

左归双降方对实验性糖尿病合并高血压大鼠血管内皮功能及降钙素基因相关肽的影响

目的 :观察实验性糖尿病合并高血压大鼠的血管内皮功能障碍、活性多肽的变化以及阴阳互济法组方的左归双降方 (ZGSJF)的干预作用。方法 :以手术致大鼠双侧肾动脉狭窄、小剂量链脲佐菌素腹腔注射及喂饲高热量饲料造成实验性糖尿病合并高血压模型。通过放射免疫法及硝酸还原酶反应法分别检测血中内皮素 (ET)、降钙素基因相关肽 (CGRP .)、一氧化氮 (NO)的含量。结果 :治疗 30d时 ,模型组大鼠血中ET含量显著升高 ;NO及CGRP含量显著降低 ;ZGSJF组治疗给药后ET含量明显降低 ,NO及CGRP含量明显增加。结论 :该实验性糖尿病合并高血压大鼠存在着明显的血管内皮功能障碍及降钙素基因相关肽的异常改变 。

防己茯苓汤加减对TNF-α诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及PAI-1含量的影响

目的观察防己茯苓汤加减方是否具有干预肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导后肾小球系膜细胞增殖的作用及对纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的影响。从而为临床运用此方治疗慢性肾脏病提供实验依据。方法采用大鼠肾小球系膜细胞培养进行体外研究,用TNF-α刺激系膜细胞增殖,再加入不同浓度防己茯苓汤加减方提取液对细胞进行干预,用MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,用ELISA法测定细胞培养液中肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的含量。结果加入防己茯苓汤加减方提取液后,系膜细胞的增殖程度受到显著抑制(P<0.05),流式细胞仪DNA图示S期细胞数显著减少(P<0.05)。细胞培养液中PAI-1的表达受到抑制(P<0.05)。结论防己茯苓汤加减方对TNF-α诱导后肾小球系膜细胞的增殖具有抑制作用,并可影响肾小球系膜细胞PAI-1的表达,进而调整细胞外基质(ECM)的合成与降解。

白虎加人参汤的古代文献考证及现代临床应用

目的:对古代文献中白虎加人参汤的历史沿革、药量、药物基原与炮制方法、制法与煎服法及主治病证等进行考证,并总结白虎加人参汤的现代临床主治疾病。方法:检索第五版中华医典数据库、中医智库、湖南中医药大学读秀数据库等中医古籍数据库,以“白虎加人参汤”“白虎加参汤”“人参白虎汤”“化斑汤”为关键词,总结古代文献中有关白虎加人参汤的药物组成、用量、炮制方法、制法、煎服法及主治病证等。再以中国知网数据库为基础,以“白虎加人参汤”为主题词进行检索,统计白虎加人参汤现代临床应用病证。结果:共收集到442条有关白虎加人参汤记载的文献数据,涉及167部医书,筛选出明确记载白虎加人参汤药物组成、用量、炮制方法、制法、煎服法等详细内容的古籍共84部。可得到白虎加人参汤药物组成及用量为盐知母82.8 g,生石膏(打碎)220.8 g,炒甘草27.6 g,人参27.6 g或41.4 g,粳米110 g;煎服方法为加水2 000 mL,先煮石膏20~30 min,再加入余下药物,煮至粳米熟,总共煎取药液600 mL,过滤去滓,将600 mL药液分3次温服,其中人参可另煎后将参汁兑服;主治病症为中暍(中暑)、膈消、消渴等。白虎加人参汤在现代临床应用中可用于治疗多系统疾病,其中以内分泌系统的糖尿病居多。结论:通过对白虎加人参汤的古代文献及现代临床应用文献进行考证挖掘,可为白虎加人参汤的现代临床应用提供一定的参考依据。