荧光定量PCR法鉴别蛤蚧定喘丸中醋鳖甲

目的建立蛤蚧定喘丸中醋鳖甲的DNA分子鉴定方法。方法根据鳖、佛罗里达鳖线粒体基因序列的差异设计特异性引物TS和AF,进行荧光定量PCR和方法学考察,然后对市售蛤蚧定喘丸中醋鳖甲进行鉴定。结果含有鳖、佛罗里达鳖的DNA样品仅与相应引物扩增后可检测到荧光信号,有特定温度单一峰,T_(m)分别为77.45、79.72℃。该方法的检测限为10 copies/μL,重复性较高(CV<1%)。10批蛤蚧定喘丸中有9批仅检出鳖DNA,被鉴定为正品;1批同时检出鳖DNA和佛罗里达鳖DNA,被鉴定为掺伪品。结论本研究所建立的方法可快速、可靠地鉴定蛤蚧定喘丸中醋鳖甲炮制品成分,有助于监管含醋鳖甲成方制剂的质量,并为成方制剂中动物药成分的专属性鉴定研究提供新途径。

不同海拔的大别山山核桃林地土壤性质和叶片营养元素分析

为了比较不同海拔大别山山核桃林地土壤性质和叶片营养元素的差异及相关性,为大别山山核桃林地科学施肥和养分管理提供参考,采用酸度计法、重铬酸钾容量法、半微量凯氏定氮法、碱解扩散法、盐酸氟化铵浸提-分光光度法和醋酸铵-火焰光度计法分别测定了不同海拔大别山山核桃林地0~30 cm土层p H、有机质、速效氮、速效磷、速效钾,采用原子吸收分光光度法测定了土壤和叶片的氮、磷、钾、钙、镁、锌含量,并进行显著性分析和相关性分析。结果表明:(1)不同海拔大别山山核桃林地土壤速效磷、全氮、全磷、全钾、钙、镁和锌含量存在显著性差异(P<0.05),大别山山核桃叶片钾、钙和镁含量存在显著性差异(P<0.05)。(2)不同海拔大别山山核桃林地土壤p H随着海拔升高而降低,而有机质和氮含量随着海拔升高而升高;叶片钾含量随海拔升高而升高,钙和镁含量则是随着海拔升高而降低,其余营养元素受海拔影响较小。(3)大别山山核桃叶片营养元素之间、土壤营养元素之间、以及叶片与土壤之间存在一定相关性,其中土壤间相关性达到显著水平的有2对,叶片间相关性达到显著水平的有4对,土壤和叶片间相关性达到显著水平的有2对(P<0.05)。大别山山核桃林地土壤平均p H值为5.18,偏酸性;有机质含量均值为5.07%;速效氮、速效磷含量较高,速效钾较匮乏;微量元素平均含量依次为Mg>Ca>Zn。建议增施生石灰进行土壤改良,减少氮肥施用,增施磷钾肥,尤其是钾肥,将化学肥料和有机肥料混合增施,保持土壤养分平衡。

声遗传学及其在军事医学中的应用

声遗传学是指利用声波激活细胞表面的机械敏感性离子通道(MSCs)蛋白,调控细胞行为及功能的新兴合成生物学技术。由于MSCs系统在细胞中广泛存在,且声遗传学具有无创性、强穿透性、高安全性、高精确度等优势,使得声遗传学在生物医学基础研究与临床应用等领域极具发展潜力,尤其在神经元调控、肿瘤机制研究、声动力治疗及听力损伤等方面。本文对声遗传学的基本原理、发展现状及其在噪声性听力损失防治研究中的应用进行综述,并总结和分析当前面临的挑战和未来发展方向,为声遗传学在军事医学领域的进一步深入研究和发展提供参考。

大别山山核桃坚果种仁主要营养及功能性成分含量变异分析

【目的】探讨不同地理种源大别山山核桃种仁主要营养物质及功能性成分多样性以及变异规律,为大别山山核桃种质资源利用提供参考。【方法】对大别山山核桃主产区19个天然种群198个单株的11个坚果种仁主要营养物质及功能性成分进行测定,进行单因素方差、多重比较、相关性、主成分等分析。【结果】大别山山核桃天然种群坚果种仁主要营养及功能性成分含量多样性丰富,单因素方差分析、多重比较表明大别山山核桃11个性状在种群间存在丰富变异(p<0.01);表型分化系数表明种群间平均分化系数为68.68%,种群间变异是主要变异来源。大别山山核桃营养及功能性成分含量变异幅度为2.30%~25.18%,平均变异系数为13.46%,其中脂肪含量的变异幅度最小,β-维生素E含量的变异幅度最大,JGXZ种群的多样性最为丰富;相关性分析表明种仁性状各成分之间达到显著相关的共10对,脂肪含量与其他组分的相关性最显著,淀粉、δ-维生素E含量与其他性状均不存在相关性;11个性状的主成分分析中前4个主成分的累计贡献率为78.742%,各营养及功能在成分中均占有重要位置。【结论】大别山山核桃天然种源种仁主要营养物质及功能性成分遗传变异丰富,选择育种潜力大,脂肪含量最为稳定;遗传多样性保护及种质资源收集应尽可能增加种群数量。

大别山山核桃林地土壤养分特征及肥力评价

[目的]探明大别山山核桃主产区林地土壤肥力状况,为大别山山核桃林地土壤管理和科学施肥提供依据。[方法]在金寨县、霍山县、罗田县大别山山核桃主产区采集土壤样本88个,以pH、有机质、全氮、全磷、全钾、碱解氮、有效磷、速效钾为评价指标,应用模糊综合评判法对土壤肥力进行评价,分析其含量及变异情况。[结果]大别山山核桃林区土壤pH平均值为5.19;土壤有机质、全磷、碱解氮、有效磷含量整体丰富,均值分别为53.11 g·kg^(−1)、0.99 g·kg^(−1)、179.41 mg·kg^(−1)和21.30 mg·kg^(−1),全氮平均值为1.02 g·kg^(−1),含量中等,全钾和速效钾含量相对缺乏,均值为8.24 g·kg^(−1)和71.52 mg·kg^(−1)。大别山山核桃林地土壤肥力综合指标值(IFI)均值为0.61,Ⅱ和Ⅲ级土壤均占50.00%。主成分分析表明,有机质、碱解氮、全磷、有效磷、pH和全钾是影响土壤综合肥力的最主要因素。[结论]大别山山核桃林地土壤综合肥力总体较高,有机质、碱解氮、磷素含量丰富,pH值呈酸性,钾素缺乏,土壤管理上应改良土壤提高pH值,增施钾肥、保持磷肥和减少氮肥使用。

基于基因分型测序(GBS)技术的堇叶紫金牛遗传结构分析

采用基因分型测序(GBS)技术对堇叶紫金牛[Ardisia violacea(T.Suzuki)W.Z.Fang et K.Yao]13个野生居群77份样本进行单核苷酸多态性(SNP)位点挖掘,在此基础上,对13个居群77份样本的遗传多样性、系统发育树、亲缘关系等进行分析。结果表明:共获得有效SNP位点246307个,每份样本检测到SNP位点1154~3789个。13个居群的观测杂合度为0.1569~0.4289,多态信息含量为0.0785~0.3244,核苷酸多样性指数为0.0002~0.0007,Tajima’s D值为0.2247~1.0936,Shannon’s多样性指数为0.2175~0.6649,表明堇叶紫金牛整体遗传多样性水平偏低。系统发育树、主成分分析和遗传结构分析结果显示77份样本可划分为6组。亲缘关系分析结果显示:居群内个体间的亲缘关系整体较近;居群间的亲缘关系与地理距离有一定的相关性。遗传分化和基因流分析结果显示:大部分居群间存在较高的遗传分化,各居群间存在一定程度的基因交流。综上所述,堇叶紫金牛13个居群的整体遗传多样性偏低,但居群间的遗传分化程度较高,这与居群间的地理距离较远、基因交流较少有关。建议优先保护安徽省黄山市祁门县牯牛降、浙江省舟山市定海区蔡家岙和浙江省宁波市象山县屠家园村3个遗传多样性较高的居群,并开展相关繁育工作以维持和扩大居群数量。

金嗓清音丸中僵蚕成分的特异性引物扩增鉴定

目的建立特异性引物扩增鉴定金嗓清音丸中僵蚕成分。方法根据家蚕、白僵菌、绿僵菌线粒体全基因序列差异设计特异性引物PM2、PB2、PA2,采用十六烷基三甲基溴化铵法、酚仿抽提法提取纯化总DNA,并以此为模板进行特异性引物扩增和方法学考察,产物以2%琼脂糖凝胶电泳检测。结果家蚕、白僵菌、绿僵菌DNA经PCR扩增后,分别在82、94、144 bp处产生条带,并且未观察到非特异性扩增条带。PM2、PB2、PA2对相应DNA的检测灵敏度分别为0.10、0.10、0.010 ng/μL。来自同一厂家的6批样品中同时检出家蚕、白僵菌DNA,但未检出绿僵菌DNA,而另外2批样品仅检出家蚕DNA。结论该方法方便可靠,专属性强,有助于更好地监控金嗓清音丸等含僵蚕中药成方制剂的质量,可为其临床用药的安全性和有效性提供保障,并为其他中成药中动物药的专属性鉴定提供参考。

山核桃寡核苷酸探针开发及其应用

【目的】利用山核桃全基因组测序数据,为山核桃开发一些寡核苷酸类型的染色体物理标记,并建立起山核桃寡核苷酸探针开发方法,以期为其他山核桃品种相关研究提供参考。【方法】以山核桃、湖南山核桃、云南山核桃、大别山山核桃、贵州山核桃、薄壳山核桃及喙核桃为材料,利用Tandem Repeat Finder软件分析山核桃基因组中的重复序列,按照Period size>4,Copy number>100,且Period size*Copy number>3000的筛选条件对重复序列进行筛选,根据筛选结果合成了约60条寡核苷酸探针,利用荧光原位杂交技术对这些探针进行筛选。【结果】1)sht-2、sht-3、sht-4、sht-5、sht-5S及sht-45S均可在山核桃染色体上产生相应的荧光信号,且sht-2、sht-3、sht-4及sht-5在山核桃染色体上的分布模式相同,有2对强弱不同的信号存在,sht-45S在山核桃染色体上有1对信号存在,sht-5S仅在山核桃单条染色体上有1个信号位点分布,这些探针均位于染色体的近着丝粒区域。2)sht-5的2对信号位点中,其中较强的1对位点与sht-45S的信号位点在山核桃染色体上分布位置完全重叠。3)45SrDNA与sht-45S在山核桃染色体上分布位置完全重叠,5SrDNA与sht-5S在山核桃染色体上的分布位置也完全重叠。4)sht-5在湖南山核桃、云南山核桃、大别山山核桃及贵州山核桃染色体上均有信号分布,且与山核桃分布模式相似,但sht-5在喙核桃及薄壳山核桃染色体上没有信号。5)sht-5S及sht-45S在湖南山核桃、云南山核桃、大别山山核桃、贵州山核桃及薄壳山核桃染色体上均有信号分布,但在喙核桃染色体上没有信号分布。6)sht-45S在湖南山核桃、大别山山核桃及贵州山核桃染色体上的分布模式相似,均只有1对位点存在,sht-45S在薄壳山核桃染色体上有2对位点存在,位于2对同源染色体的近着丝粒区域。7)sht-5S在云南山核桃、贵州山核桃、大别山山核桃及薄壳山核桃4个山核桃种染色体上的分布模式相似,均只有1对信号位点存在,位于1对同源染色体上的近着丝粒区域,在湖南山核桃染色体上有2种不同的分布模式,第一种分布模式具有1个单独的信号位点,第二种分布模式中,具有2个强弱不同的荧光信号,均位于染色体的近着丝粒区域。【结论】1)sht-2/3/4/5、sht-5S及sht-45S可作为分析山核桃、湖南山核桃、云南山核桃、大别山山核桃及贵州山核桃染色体的物理标记。2)sht-5S及sht-45S可代替质粒45SrDNA和5SrDNA,用来对山核桃、湖南山核桃、云南山核桃、大别山山核桃、薄壳山核桃及贵州山核桃染色体进行分析。

酶水解柴胡皂苷B_(1)制备稀有前柴胡皂苷A的研究

目的通过酶水解柴胡皂苷B_(1)获取中药活性成分前柴胡皂苷A,并构建关键技术。方法以单因素试验考察水解酶、缓冲液pH值、酶/底物质量比、反应温度和反应时间等影响因素,并通过响应面实验设计对酶水解条件进行优化;此后,利用LC-MS、^(1)H-NMR、13 C-NMR确定产物的化学结构。结果柴胡皂苷B_(1)的最佳水解酶为蜗牛酶,在0.20 mol/L HAc-NaAC缓冲液(pH 4.5)中,当酶与柴胡皂苷B_(1)的质量比为30∶1时,于56℃下反应33 h后,水解率高达99.1%,产物经鉴定为前柴胡皂苷A。结论本研究构建的酶水解关键技术获取前柴胡皂苷A更便捷,不产生柴胡皂苷元副产物,反应过程中不使用无机酸,清洁环保,可为大量制备前柴胡皂苷A以开展药理药效研究奠定基础。

不同生态栽培模式对香榧幼龄期生长的影响

选择4种不同生态栽培模式,从保存率、梢生长、挂果量和造林成本等方面,对香榧幼龄期生长影响进行分析,筛选香榧生态栽培最佳模式。试验结果表明,4种栽培模式中保存率,3种乔木树种套种香榧均达到90%以上,山核桃与硬阔树之间显著性差异(P<0.05),与杉木、茶叶呈极显著性差异(P<0.01),茶叶林下香榧保存率87.84%;梢生长量以山核桃林下套种香榧最优,5 a平均生长量为20.68 cm,其中山核桃>硬阔>杉木>茶叶>迹地(CK);各处理间结果量差异极显著,其中山核桃>硬阔>杉木>茶叶>迹地(CK),山核桃林下,香榧1 a青果量最多;从造林成本来看,山核桃在林地清理、夏季遮阴和苗木补植等费用远远低于其他模式,与对照相比费用减少32.75%,其中山核桃<硬阔<杉木<茶叶<迹地(CK)。4种不同生态栽培模式下,山核桃林下套种香榧,具有保存率高、生长快、挂果早、成本低等特点,是践行“一亩山万元钱”的最佳模式。

山核桃不同器官矿质元素含量的动态变化

【目的】揭示山核桃结果枝叶片、雄花序和果实不同发育阶段N、P、K、Ca、Mg元素含量和累积量的周年动态变化及其相关性。【方法】以40 a生山核桃为试材,采用常规方法测定叶片、雄花序和果实中营养元素含量。【结果】山核桃不同器官营养元素的含量和累积量在不同生长发育阶段呈现一定规律的变化。叶片中N、P、K浓度随叶龄的增加而降低,Ca、Mg浓度随叶龄的增加而升高;雄花序中元素变化幅度较小,N、P、K浓度在生长早期出现小幅的上升,然后下降,Ca、Mg浓度则一直下降;果实中N、Ca、Mg浓度呈对数下降,K浓度坐果后相当一段时间维持在较高水平,然后下降,P浓度先快速下降,然后出现较大幅度的波动变化。叶片中矿质元素的浓度高于雄花序和果实。不同成熟器官中元素的累积量有一定差异,叶片中N、Ca累积量较高,K、Mg次之,P最小;雄花序和果实中,N、K累积量较高,Ca、Mg次之,P最小。器官间不同元素间相关性不同,N与其他元素的相关性最高,其次为P、K。【结论】山核桃对矿质元素的吸收和利用存在不同的效应,元素间的相关性与元素的移动性有一定的关系;叶片营养诊断的适宜时期为6月上旬至8月上旬,栽培上建议施好两次关键肥,分别为5月中下旬和8月下旬至9月上旬。

不同地理种源大别山山核桃坚果表型性状和脂肪酸组分分析

【目的】探明大别山山核桃天然种源的遗传变异。【方法】以9个地理种源的大别山山核桃为试材,对果实和坚果的11个表型性状和种仁脂肪酸组分及其变异进行分析。【结果】种源间11个表型性状均存在极显著性差异,变异系数3.23%~32.68%,其中果实鲜质量变异最大,鲜出子率次之,果径、出仁率、果形指数和果长相对稳定(CV【10%)。对11个表型性状间的相关性分析显示,性状间有18对达到显著性相关。种源间种仁脂肪总含量62.38%~67.18%,变异系数极小(CV=2.50%),但7种脂肪酸含量均存在极显著性差异。不饱和脂肪酸占脂肪酸总量的80.99%~93.09%,且变异系数较小(CV=4.74%)。脂肪酸中油酸含量最高,亚油酸次之,棕榈酸第三,存在'高油酸、高亚油酸、低棕榈酸'的优异种源。【结论】大别山山核桃天然种源坚果表型性状和脂肪酸组分遗传变异丰富,良种选育潜力大。

UF-100尿沉渣分析仪和显微镜检测尿液中管型的比较

目的 :探讨UF 10 0尿沉渣分析仪与显微镜检测管型的结果符合情况及影响因素。方法 :随机收集住院患者的晨尿标本 90 0份 ,用UF 10 0尿沉渣分析仪与显微镜分别检测尿液中管型 ,然后将两者的检测结果进行比较。结果 :90 0份标本中UF 10 0尿沉渣分析仪检测阳性的有 12 9例 ,显微镜镜检阳性的有 42例 ,两者检测结果不相符合的有 97例 ,占 10 .8% ,其中尿沉渣分析仪检测管型假阴性率为 0 .6% ,假阳性率为 10 .2 %。将UF 10 0尿沉渣分析仪与显微镜检测管型的阳性结果进行率的 χ2检验 ,P <0 .0 5。结论 :UF 10 0尿沉渣分析仪与显微镜检测管型有显著性差异 ,对UF 10 0尿沉渣分析仪检测管型阳性者仍需用显微镜复检 ,并对管型进一步分类 ,以提高报告结果的准确性。

超声法提取桑黄总黄酮的工艺研究

目的:研究超声法提取桑黄中总黄酮的最佳工艺。方法:设计正交试验,采用超声辅助提取,对桑黄中总黄酮的提取工艺进行研究。结果:以总黄酮提取率为指标,得出超声法提取桑黄总黄酮的最佳工艺为乙醇浓度70%,提取温度45℃,料液比1∶30,提取时间45 min。结论:该工艺提取桑黄中总黄酮,方法简单,耗时短,提取率高。

浙江种子植物2新记录种

报道了植物资源调查过程中发现的2种浙江地理分布新记录植物,分别为苦苣苔科Gesneriaceae的休宁小花苣苔Chiritopsis xiuningensis X.L.Liu&X.H.Guo和小檗科Berberidaceae的黔岭淫羊霍Epimedium leptorrhizum Stearn,其中小花苣苔属Chiritopsis W.T.Wang为浙江分布新记录属。

Mcl-1和Bax基因在2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征细胞凋亡中的调控作用

本研究探讨bcl-2基因家族成员调控2-甲氧基雌二醇(2-ME)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞凋亡的机制。用2-ME预处理MUTZ-1细胞,荧光比色法检测凋亡信号蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因—髓细胞白血病基因-1(mcl-1)和bcl-2相关X蛋白(bax)mRNA的表达。结果表明:与对照组相比,2-ME增强MUTZ-1细胞内caspase-3活性,并呈浓度和时间依赖性(p<0.05);随着2-ME浓度的增加,细胞内mcl-1mRNA表达下降(p<0.05),且mcl-1mRNA表达量与相应时间点caspase-3活性呈负相关(r=-0.992,p<0.01),而baxmRNA表达没有明显变化(p>0.05)。结论:2-ME可能通过下调mcl-1表达和增强caspase-3活性的途径来调控MDS细胞凋亡。

2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞凋亡机制的研究(英文)

为了研究2-甲氧基雌二醇(methoxyestradiol,2-ME)诱导骨髓增生异常综合征-难治性贫血伴原始细胞增多型(MDS-RAEB)细胞株MUTZ-1细胞凋亡的机制,将不同浓度的2-甲氧基雌二醇分别与MUTZ-1细胞在体外培养,同时设二甲亚砜和空白对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定2-ME对MUTZ-1细胞的生长抑制率,瑞氏-姬姆萨染色后观察2-ME引起细胞的形态学改变,流式细胞术分析细胞周期和凋亡率的变化,贝克曼全自动生化分析仪(synchron clinical system LX20)检测培养上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LD)的变化,DNA凝胶电泳验证2-ME诱导的细胞凋亡。结果表明:2-ME对MUTZ-1细胞的增殖具有明显的抑制作用,该细胞凋亡率明显升高,并呈现时间和剂量依赖性,经统计学处理与对照组相比较有显著性差异(P<0.05)。4μmol/L2-ME作用MUTZ-1细胞12小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞形态特征;2-ME作用24小时后MUTZ-1细胞出现G2/M期阻滞;培养上清液中LD含量与对照组相比明显升高,差异具有显著性(P<0.05);4μmol/L2-ME作用MUTZ-1细胞48小时后,DNA凝胶电泳可见明显的DNA梯形条带。结论:2-ME对骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1有较强的抗肿瘤效应,可能与细胞G2/M期阻滞引起的细胞凋亡有关;2-ME是一种有发展潜力的治疗骨髓异常综合征的药物。

RP-HPLC测定香椿叶中芸香苷的含量

目的建立1种测定香椿叶中芸香苷含量的反相高效液相色谱法,为其内在质量控制提供参考。方法采用Thermo ODS Hypersil column色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(16∶84),流速为1.0mL/min,检测波长为254nm,柱温为25℃。结果在以上色谱条件下,供试品溶液中的芸香苷与干扰成分完全分离,其在0.0104 4～0.261 0mg/mL范围内线性关系良好(r=1),重复性实验RSD=1.77%(n=6),平均加样回收率为96.9%～98.7%(n=3),RSD为3.56%～4.42%;试验测得2个批次香椿叶中芸香苷的含量分别为(0.673±0.010)mg/g和(0.498±0.005)mg/g。结论该方法准确,快速,重复性好,可用于香椿叶中芸香苷的含量测定。

高野山龙头草——中国唇形科植物新记录

报道了中国唇形科龙头草属一新分布种——高野山龙头草。该种的主要特点：植株矮小，高10～20cm，茎细弱，不具匍匐茎；花萼筒状，具15脉，花冠二唇形，下唇中裂片舌状，具有紫红色斑块，顶端2浅裂，侧裂片长圆形，长为中裂片的1／3；子房4裂，被毛。凭证标本保存于浙江农林大学标本馆（ZJFC）。

2-甲氧基雌二醇对SKM-1细胞凋亡中bcl-2/bax表达的影响

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡过程中bcl-2/bax表达的影响。方法 2-ME与SKM-1细胞共同培养,流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期;RT-PCR技术检测bcl-2和bax mRNA表达。结果 1~8μmol/L 2-ME作用后,SKM-1细胞凋亡率上升呈剂量依赖性;细胞被阻滞于G2/M期;细胞bcl-2 mRNA表达量下调,bax mRNA表达量上调。结论 2-ME诱导SKM-1细胞凋亡与细胞G2/M期阻滞和bcl-2/bax比率下降有关。