翻转课堂结合团队学习在临床免疫学检验技术教学中的应用探索

目的:探讨翻转课堂结合TBL教学在临床免疫学检验技术课程中的应用效果。方法:以医学检验技术专业三年级学生作为研究对象,通过学生的随堂成绩和问卷调查,比较翻转课堂结合TBL教学和传统LBL教学法用于四年制医学检验专业的教学效果。结果:翻转课堂结合TBL教学方法能促进学生对知识的掌握,并能增强学生的团队协作能力。结论:翻转课堂结合TBL是一种适合本课程的教学方法。

HIV/AIDS患者NK细胞趋化因子受体表达研究

目的:探讨中国HIV/AIDS患者NK细胞表面趋化因子受体CXCR4、CCR5表达情况。方法:采用流式细胞仪分析HIV/AIDS患者外周血NK细胞表面趋化因子受体CCR5和CXCR4的表达。结果:未治疗典型HIV/AIDS患者NK细胞表面趋化因子受体CXCR4和CCR5与正常对照无显著差异(P >0 0 5 ) ,HIV长期不进展者NK细胞CCR5受体低于未治疗的典型HIV/AIDS患者(P <0 0 5 ) ,与正常对照相比无显著差异(P =0 0 5 ) ;HAART治疗组NK细胞趋化因子受体CCR5表达显著低于未治疗典型HIV/AIDS患者(P <0 0 1)。结论:趋化因子受体CCR5在NK细胞上表达的变化与疾病的不同阶段密切相连。

HIV感染者CD56^(dim)CD16^+NK细胞表面活化受体和抑制受体的变化

目的探讨中国HIV感染者、AIDS病人CD56dimCD16+NK细胞表面活化受体NKG2D、抑制受体NKG2A的表达情况。方法应用流式细胞仪分析HIV感染者、AIDS病人外周血CD56dimCD16+NK细胞表面活化受体NKG2D、抑制受体NKG2A的表达。结果 CD56dimCD16+NK细胞表面,NKG2D+NKG2A-的NK细胞水平在HIV组、AIDS组明显低于正常对照组(P<0.01);AIDS组显著低于HIV组(P<0.05);HAART治疗组明显高于AIDS组(P<0.01)。NKG2A+NKG2D-的NK细胞水平在HIV组、AIDS组都明显高于正常对照组,AIDS组显著高于HIV组(P<0.01);HAART治疗组明显低于AIDS组(P<0.01),与正常对照组、HIV组之间无显著差异。HIV感染者、AIDS病人NKG2A+NKG2D-的NK细胞水平与CD4+T细胞负相关(r=-0.42,P<0.05),与病毒载量正相关(r=0.37,P<0.05)。结论 HIV感染使机体NKG2D+NKG2A-NK细胞水平下降,NKG2A+NKG2D-NK细胞水平升高,导致NK功能受损,抗病毒治疗可逆转相应的细胞水平。同时检测NK细胞表面活化受体和抑制受体的表达有助于艾滋病疾病进程的研究。

人类滤泡树突状细胞增强HIV的感染

目的 :研究人类滤泡树突状细胞 (folliculardendriticcell,FDC)能否增强艾滋病病毒的感染 ,并探讨其可能机制。方法 :提取人扁桃体滤泡树突状细胞 ,与感染HIV 1IIIB的外周血淋巴细胞或扁桃体T淋巴细胞共培养 ,测定HIVP2 4含量 ,HIV 1envDNA及HIV 1nefRNA。结果 :FDC与感染HIV病毒的异体淋巴细胞共培养 ,P2 4抗原含量高于对照组 6～ 7倍 (P <0 0 1)。PCR结果显示FDC组HIV 1env基因扩增条带密度高于对照组。FDC与感染HIV病毒的自体T淋巴细胞共培养 ,P2 4抗原高于对照组 10倍以上 (P <0 0 1)。FDC与感染HIV病毒的异体淋巴细胞共培养 4或 6h ,可增加 2～ 3倍的HIV 1nefRNA的表达 (P <0 0 1)。结论 :人类滤泡树突状细胞能够增强HIV在淋巴细胞中的感染 ,其相关机制为FDC可促进HIV在淋巴细胞内的复制。

人类滤泡树突状细胞的分离

目的 :为探讨人类滤泡树突细胞 (FDC)在HIV致病机制中的作用 ,摸索分离出提取人FDC的最佳方法。方法 :用胶原酶Ⅳ和DNA酶消化人扁桃体 ,Percoll连续梯度分层液分离含有FDC的细胞层 ,经MACS分选 ,得到富含FDC的细胞 ,用γ 射线将混有的B细胞、T细胞照射致死。结果 :流氏细胞仪分析FDC纯度约为 70 7% ,3H掺入法实验证明分离提取的细胞具有FDC细胞的活性 ,IL 6和IL 2的测定结果显示分离提取的细胞具有FDC的特征。结论 :此方法为一种行之有效的FDC分离提取方法 。

正常鼠和免疫鼠CD＿3AK细胞和LAK细胞杀伤活性的比较研究

实验取正常鼠和Ｐ＿（８１５）肿瘤细胞致敏的免疫鼠脾细胞，经抗ＣＤ＿３抗体与低剂量ＩＬ－２或高剂量ＩＬ－２分别诱生为ＣＤ＿３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞，用改良的乳酸脱氢酶释放法以Ｐ＿（８１５）细胞和ＹＡＣ－１细胞为靶细胞，测定ＣＤ＿３ＡＫ和ＬＡＫ细胞的杀伤活性。结果表明：正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ细胞对Ｐ＿（８１５）细胞的杀伤活性高于ＬＡＫ细胞，对ＹＡＣ－１细胞的杀伤活性低于ＬＡＫ细胞。免疫鼠ＬＡＫ细胞对Ｐ＿（８１５）细胞的杀伤活性明显增高，高于正常鼠ＬＡＫ细胞和免疫鼠ＣＤ＿３ＡＫ细胞。初步证明，ＣＤ＿３ＡＫ细胞具有很强的细胞毒作用，但不能取代ＬＡＫ细胞，免疫鼠ＬＡＫ细胞的应用仍然是重要的抗肿瘤手段。

早期半定量检测HIV-1 nef RNA的水平

目的 早期半定量检测HIV - 1nefRNA。方法 以nef基因引物nef6 ,nef7和β-actin基因引物BA1,BA4 在同一反应体系中对标本进行逆转录聚合酶链反应 ,用BIO - 1D软件对条带密度进行分析 ,半定量测定HIV - 1nefRNA水平。结果 所试 7例实验标本均扩增出HIV - 1nef和 β -actin的基因产物。且通过BIO - 1D软件分析条带密度 ,判断艾滋病病毒感染情况。结论 该方法灵敏 ,简便 ,经济 。

沈阳市高危人群艾滋病、梅毒、肝炎的调查分析

目的 了解辽宁省高危人群艾滋病、梅毒和肝炎的感染现状。方法 应用固相酶免疫测定（ELISA）法或间接血凝法分别检测了488名吸毒者、暗娼和 STD门诊患者及2 000例普通患者血清中 HIV抗体、HBsAg、抗-HBs、抗-HCV、抗梅毒抗体。结果 吸毒者丙型肝炎感染率为47.5％,显著高于暗娼（6.8％）和 STD门诊患者（1.4％）（P<0.01）;吸毒者、暗娼、STD门诊患者梅毒感染率均高于普通患者,且STD门诊梅毒感染率显著高于吸毒者（P<0.01）;吸毒者、暗娼、STD人群和普通患者各组间抗-HBs阳性率无显著差异（P>0.05）;本次调查未发现AIDS患者/HIV感染者。结论 辽宁省高危人群梅毒、丙型肝炎感染率较高,应加强高危人群管理,防止艾滋病在辽宁省的流行。

nef RNA在人类免疫缺陷病毒早期感染检测中的应用

目的 为进行人类免疫缺陷病毒 (HIV)早期感染的检测 ,预防医院感染。方法 以 nef基因引物 nef6,nef7和 β-肌动蛋白 (actin)基因引物 BA1 ,BA4在同一反应体系中对标本进行逆转录聚合酶链反应 ,用 Kodak DigitalScience1D软件对条带密度进行分析 ,并对 PCR产物进行 Southern印迹杂交 ,以确定 PCR反应所得条带为 nef基因扩增产物。结果 所检测的 6例 HIV- 1抗体阴性 P2 4抗原阳性患者标本均扩增出 HIV- 1nef和 β-肌动蛋白的基因产物 ,通过 Kodak Digital Science1D软件分析得到各标本条带的密度比值 ,Southern印迹杂交证明 PCR反应条带确实为 HIV- 1nef基因扩增片段。结论 该方法简便、经济 ,可作为 HIV早期感染检测的一种辅助手段 ,防止医院内

CD_3AK细胞和LAK细胞的表型测定

用抗ＣＤ＿３抗体和低剂量ＩＬ－２以及单独用高剂量ＩＬ－２分别诱生正常鼠、免疫鼠脾细胞为ＣＤ＿３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞。用间接免疫荧光法和微云细胞毒实验两种方法测定培养４ｄ和９ｄ的细胞表型。结果：正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ和ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率均高于诱生前正常鼠脾细胞（Ｐ＜０．０１）。正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ细胞中，ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。免疫鼠ＣＤ＿３ＡＫ与正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ的表型相似，而免疫鼠ＬＡＫ细胞的ＣＤ＿８阳性细胞率显著增加，明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。

HIV感染者调节性T细胞表面B、T淋巴细胞衰减因子的表达研究

目的:对HIV感染者调节性T细胞(Regulatory T cell,Treg)上B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)的表达水平进行检测,并探讨其在HIV感染进程中的作用。方法:选取24例感染在一年之内的HIV早期感染者(Early HIV infected patients,EHI组)、14例感染超过一年的HIV慢性感染者(CD4+T计数>200 cells/μl,HIV组)、6例AIDS患者(CD4+T计数<200 cells/μl,AIDS组)和9例健康人作为对照,应用流式细胞仪检测不同时期感染者及健康对照者Treg细胞BTLA的表达水平,分析其与疾病进展及免疫活化的相关性。结果:随着HIV疾病进展,EHI组、HIV组及AIDS组Treg细胞BTLA表达水平依次升高,其中HIV组与AIDS组Treg细胞BTLA表达水平显著高于EHI组(P<0.05及P<0.01),AIDS组Treg细胞BTLA的表达水平高于健康对照(P<0.05);Treg细胞BTLA表达水平与CD4^+T淋巴细胞计数呈负相关(P<0.001),与病毒载量呈正相关(P<0.01);Treg细胞BTLA表达水平与活化CD4^+CD38^+T淋巴细胞及CD4^+HLA-DR^+T淋巴细胞呈正相关(P<0.001,P<0.001)。结论:HIV感染者Treg细胞BTLA表达升高,与疾病进展显著相关,提示其可能通过加强Treg细胞的抑制功能加速疾病进展,并为未来HIV感染的干预提供信息。

2 939例临床患者CD4^+CD8^+T淋巴细胞检测结果的回顾性分析

目的回顾分析中国医科大学附属第一医院2 939例临床患者外周血CD4+CD8+双阳性(DP)T细胞在不同疾病和年龄中异常的比例,初步探讨这群细胞对疾病辅助诊断的意义。方法应用流式细胞术检测并比较临床患者CD4+CD8+DP T细胞亚群百分含量的差异,CD4+CD8+DP T细胞百分含量>5%判定为异常。结果患呼吸、风湿免疫、肿瘤、感染、肾脏、皮肤等系统疾病的患者CD4+CD8+DP T细胞异常的比例高于健康对照;这些CD4+CD8+DP T细胞异常的患者中按年龄分组,高年龄组(>65岁)CD4+CD8+DP T细胞异常的比例显著高于低年龄组(≤65岁)(P<0.001),而健康对照CD4+CD8+DP T细胞异常的人群中,不同年龄组无统计学差异(P>0.05)。结论呼吸、风湿免疫、肿瘤、感染、肾脏、皮肤等系统疾病中CD4+CD8+DP T细胞异常的比例增加,且这些疾病的患者随着年龄的升高CD4+CD8+DP T细胞异常的比例亦增加(尤其患呼吸系统疾病和肿瘤的患者)。

HIV感染者抗病毒治疗及性行为情况凋查

目的研究河南省高效抗逆转录病毒治疗效果和耐药情况,为防止耐药株流行提供理论依据。方法采用问卷调查方法,了解人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者人口学、治疗和漏服情况及安全套使用情况,RT-PCR和套式PCR扩增HIV pol区基因,双脱氧法测定逆转录酶和蛋白酶基因序列,与国际耐药数据库比对辨别耐药变异。结果本次调查人群文化程度较低,家庭经济条件差;治疗组病毒载量显著低于未治疗组(P<0.01);安全套使用率低(23.1%);服药依从性较差(72.2%):治疗人群中发现6例存在耐药突变,未治疗感染者发现1例存在耐药变异。结论抗病毒治疗初期疗效显著,耐药变异率低,但漏服和较低的安全套使用率将导致耐药变异快速产生和流行,应加强用药督导和安全套普及。

我国HIV／TB双重感染者血清细胞因子水平的研究

目的比较分析我国广西地区单纯结核(TB)患者、人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者及HIV/TB双重感染者(双感者)血清细胞因子水平。方法选择2010年4月至2010年9月间纳入广西地区未接受高效抗逆转录(HAART)治疗HIV/TB双感者15例、接受HAART治疗HIV/TB双感者5例、未治疗单纯HIV感染者13例、HAART治疗单纯HIV感染者4例、单纯TB患者10例及健康对照17例。使用Bio Plex悬浮芯片系统检测血清IL.2、IL.4、IL.6、IL.8、IL.10、IFN.γ、TNF.α、GM.CSF等8种细胞因子。结果与健康对照相比,单纯HIV感染者IL.8水平显著降低,单纯TB患者IL.10及TNF.α水平升高,HIV/TB双感者IL.10及TNF.α升高更加显著,结核痰涂片镜检阴性及阳性双感者间未见显著性差异。HIV/TB双感者与单纯HIV感染者相比,前炎性因子IL.6、IL.8、IFN.γ、TNF.α等显著升高。与未治疗者相比,接受治疗的HIV/TB双感者血清TNF.α水平出现下降趋势。结论TB与HIV单独及相互作用使单纯TB患者、HIV感染者及V/TB双感者体内细胞因子失衡,加速了疾病进展。

HIV/AIDS患者CD4^+ CD25^+ Foxp^(3+) CD45RO^+记忆性调节性T细胞变化研究

目的:对辽宁、吉林和河南等地HIV/AIDS患者记忆性调节性CD4+CD25+Foxp3+CD45RO+T细胞水平及与疾病进展相关性进行研究,探讨记忆性调节性T细胞在HIV感染疾病进程中发挥的作用。方法:选取74名HIV感染者(缓慢进展组、无症状HIV感染组、艾滋病组、抗病毒治疗组)及15例健康对照,应用流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+CD45RO+记忆性调节性T细胞表达水平,分析其与CD4+T细胞数量、病毒载量、淋巴细胞活化及凋亡水平的相关性。结果:HIV感染缓慢进展组及抗病毒治疗组CD4+CD25+Foxp3+CD45RO+调节性T细胞水平[(2.19±1.07)%,(2.66±1.78)%]明显低于无症状HIV感染组(4.05±2.30)%,艾滋病组(5.85±2.46)%,P<0.05,无症状HIV感染组(4.05±2.30)%及健康对照(3.18±1.17)%明显低于艾滋病组(5.85±2.46)%,P<0.05。未治疗HIV/AIDS患者CD4+CD25+Foxp3+CD45RO+记忆性调节性T细胞百分率与CD4+T细胞显著负相关(r=-0.690,P<0.001),与病毒载量明显正相关(r=0.401,P=0.002),与CD4+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+、CD8+CD38+细胞显著正相关(P<0.05),与CD4+CD95+、CD8+CD95+T细胞水平显著正相关(P<0.05)。结论:HIV感染者CD4+CD25+Foxp3+CD45RO+记忆性调节性T细胞百分率明显升高,与疾病进展及免疫损伤显著相关,是影响艾滋病疾病进展的重要因素之一。

辽宁省未经治疗HIV-1感染者耐药变异本底研究

目的研究辽宁省未经抗病毒治疗的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染人群中耐药突变的发生和流行情况。方法提取辽宁省91例HIV-1感染者外周血基因组DNA,巢式PCR方法扩增pol区蛋白酶基因全序列与逆转录酶基因部分序列,直接进行序列测定。序列拼接后,递交HIVdb-Drug Resistance Algorithm进行耐药性分析。结果3株毒株在蛋白酶编码区含有M46I变异,在蛋白酶编码区次要变异普遍存在,由高到低依次为L63P(60.4%)及V77I(60.4%)、M36I/V(31.9%)、A71V/T(22.0%)、L10I(8.8%)和K20R(6.6%)。1株毒株在逆转录酶编码区含有M184I变异。结论约4.4%的感染者对至少一种我国现有的抗病毒药物耐药。辽宁省未经抗病毒治疗的HIV-1感染人群绝大部分为抗病毒治疗敏感人群,但应加强监测,防止耐药株流行。

HIV感染后CD4^+ T细胞表面NK相关受体表达的变化

目的研究人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染后CD4+T细胞表面NK相关受体表达的变化。方法选取25例未经高效抗逆转录病毒治疗的HIV感染者、11例AIDS患者、15例进行高效抗逆转录病毒治疗(highly activeantiretroviral therapy,HAART)者和13例HIV抗体阴性健康对照,用流式细胞仪检测研究对象外周血CD4+T细胞表面NKG2D、NKG2A和KIR3DL1的表达。结果 AIDS患者CD4+T细胞表面NKG2D表达的百分比显著高于其他各组,且NKG2D表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈负相关(R=-0.352,P<0.05),与HIV病毒载量呈正相关(R=0.426,P<0.05)。AIDS患者CD4+T表面NKG2A表达的百分比显著高于其他各组,NKG2A+NKG2D-表达的百分比显著高于其他各组,且NKG2A表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈负相关(R=-0.432,P<0.01)。结论 HIV感染机体后,CD4+T细胞NK相关受体表达变化与疾病进展相关。

HIV感染后CD8^+T细胞表面NK相关受体表达的变化

目的深入了解人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染后CD8+T细胞表面NK相关受体表达的变化。方法选取25例未经高效抗逆转录病毒治疗的HIV感染者、11例AIDS患者、15例进行高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)者和13例HIV抗体阴性健康对照,用流式细胞仪检测研究对象外周血CD8+T细胞表面NKG2D、NKG2A和KIR3DL1的表达。结果 HIV感染后CD8+T细胞表面NKG2D表达的百分比显著低于健康对照,NKG2D+NKG2A-表达的百分比随疾病进展逐渐下降,且NKG2D+NKG2A-表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈正相关。AIDS患者CD8+T细胞表达NKG2A显著高于其它各组,随着疾病的进展CD8+T细胞表达NKG2A+NKG2D-百分比逐渐上升,AIDS患者显著高于其它各组,经抗逆转录病毒治疗后下降至健康对照的水平,且NKG2A+NKG2D-表达的百分比与CD4+T细胞的绝对数量呈负相关。HIV感染后CD8+T细胞KIR3DL1+表达的百分比较健康对照并无显著差异。结论 HIV感染机体后,CD8+T细胞NK相关受体表达变化与疾病进展相关,抗病毒治疗后可恢复其变化。