前体mRNA剪接因子基因突变与视网膜色素变性的研究进展

视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)是一种遗传性进行性视细胞损伤性疾病,具有基因型和表型异质性。目前已鉴定的RP致病基因达到103个,其中有一类基因(PRPF3、PRPF4、PRPF6、PRPF8、PRPF31、SNRNP200、RP9和DHX38)与前体mRNA剪接相关,该类基因全身广泛表达,但其突变后引起RP这种组织特异性表型疾病的机制目前尚不清楚。现汇总近年来国内外研究进展,介绍前体mRNA的剪接过程、前体mRNA剪接因子在剪接过程中的作用及前体mRNA剪接因子导致RP的疾病模型,并探讨前体mRNA剪接因子突变导致RP的致病机制。

随意皮瓣修复眶周软组织缺损的体会

目的总结随意皮瓣修复眶周软组织缺损的临床经验。方法对65例患者应用随意皮瓣修复眶周软组织缺损,皮瓣设计蒂宽1.0～2.5cm,长度根据缺损范围确定,为1.0～3.5cm,长宽比例不超过2.5∶1。充分考虑到眶周各部位创口愈合后对眼睑运动功能的影响,设计尽量短小的附加切口且沿皮纹走行,同时结合患者的个性化要求,作皮瓣的合理设计和选择。结果3例术后有不同程度的皮瓣远端或边缘出现表皮暗红及水泡现象,经积极处理后皮瓣完全恢复;其余病例皮瓣完全成活。随访8个月～2年,创口无明显瘢痕,皮瓣与周围色泽协调一致,质地柔软,弹性良好,功能理想。结论随意皮瓣是修复眶周软组织缺损的理想方法之一。

Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究

目的 :研究 genistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶 (TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响 ,探索使用 genistein防治后发性白内障。 方法 :兔晶体上皮细胞培养 ,应用Casnetllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后 ,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化 ;同位素掺入法检测 genistein及bFGF作用后 ,兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化。结果 :不同浓度 genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降 ,genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高 ,genistein对PKC活性无明显抑制作用 ,但可抑制bFGF诱导的PKC活性升高。结论

染料木黄酮对实验性后发性白内障形成的影响

目的研究染料木黄酮对兔眼白内障术后后囊膜混浊形成的抑制作用。方法建立24眼兔眼白内障术后模型,分为对照组12眼和实验组12眼,实验组术中灌注液加入染料木黄酮。观察术后兔眼角膜、前房、后囊膜情况,术后2个月处死实验动物,行免疫组化检查。结果实验组与对照组术后裂隙灯下角膜、虹膜等组织无明显差异,术后2个月对照组6只兔眼出现不同程度周边部后囊膜混浊,3只兔眼出现瞳孔中央部后囊膜混浊;实验组2只兔眼出现周边部后囊膜混浊,2只兔眼出现瞳孔中央部后囊膜混浊。后囊膜PCNA染色阳性率实验组明显少于对照组(t=3.5,P<0.01)。结论染料木黄酮对兔眼白内障术后后发障具有一定抑制作用。

bFGF诱导人晶状体上皮细胞增殖过程中细胞外信号调节激酶的作用

目的:检测细胞外信号调节激酶(extracellular regulated kinase,ERK)在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导的人晶状体上皮细胞增殖过程中的表达与活化;检测ERK1/2特异性阻断剂PD98059对人晶状体上皮细胞增殖的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04体外培养,采用MTT比色法和[3H]-TdR掺入法检测ERK阻断剂PD98059对人晶状体上皮细胞活力和DNA合成的影响;Westernblot法测定bFGF对培养的人晶状体上皮细胞ERK,c-Jun氨基末端激酶(JNK),P38蛋白表达及PD98059对环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。结果:10μg/LbFGF能显著刺激人晶状体上皮细胞增生,1μmol/LPD98059即能显著抑制bFGF启动的HLEC增殖,其效应呈浓度依赖性(P<0.01)。10μg/LbFGF可激活ERK信号通路,诱导COX-2蛋白表达,其效应在30min内达到高峰,6h后逐渐减弱,此作用可被10μmol/LPD98059阻断;10μg/LbFGF对非磷酸化ERK,磷酸化和非磷酸化JNK及P38表达无明显影响。结论:有丝分裂原活性蛋白激酶信号传导通路中ERK磷酸化对bFGF启动的人晶状体上皮细胞增殖具有重要的调节作用。

阿司匹林对体外培养的人晶状体上皮细胞凋亡调节基因表达的影响

目的:研究阿司匹林(Asp)对培养的人晶状体上皮细胞(humanlens epithelial cells,hLEC)Bax,Bcl-2,caspase-3表达的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04传代培养,MTT比色法检测Asp对bFGF诱导的hLEC增殖的影响;Western-blot方法检测Asp作用1,3,6,12,24h后凋亡相关因子Bcl-2,Bax,caspses-3蛋白的表达。结果:Asp5mmol/L可明显抑制bFGF诱导的hLEC增殖(P<0.01),且抑制作用呈浓度依赖性。Western-blot结果显示,10mmol/LAsp作用1h后Bax蛋白表达增强,随着时间的延长,表达逐渐增加,6h达到高峰,24h后恢复至基础水平;而Bcl-2的表达与其相反,Asp作用1h后Bcl-2蛋白表达明显下降,6h降到最低点,然后有上升趋势。caspase-3的表达与Bax相似,Asp作用1h后caspase-3表达增加,6h达到高峰,持续24h仍有较高的表达。结论:凋亡因子Bcl-2,Bax,caspase-3参与了Asp诱导的人晶状体上皮细胞凋亡途径。Asp通过调节凋亡基因蛋白产物的表达,诱导hLEC的凋亡。

阿司匹林对人晶状体上皮细胞增殖及环氧合酶-2表达的影响

目的检测环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)增殖过程中的表达,以及阿司匹林对COX-2表达及细胞增殖的抑制作用。方法HLEC系SRA01/04传代培养,MTT比色和[3H]-TdR掺入实验检测阿司匹林对bFGF诱导的HLEC增殖和DNA合成的影响;采用逆转录聚合酶链反应和Westernblot法检测阿司匹林对COX-2mRNA和蛋白表达的影响。结果显微镜下可见,随着阿司匹林浓度增加,细胞形态学的改变逐渐明显。5mmol.L-1、10mmol.L-1、20mmol.L-1阿司匹林可明显抑制bFGF诱导的HLEC增殖,吸光度值分别是0.3662±0.0644、0.2378±0.0295、0.1898±0.0198,对照组为0.5200±0.0184,3组与对照组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.001),抑制作用呈浓度依赖性。[3H]-TdR掺入实验结果显示,阿司匹林对晶状体上皮细胞DNA合成具有抑制作用,药物浓度与[3H]-TdR掺入量呈负相关。逆转录聚合酶链反应及Westernblot结果提示10μg.L-1bFGF组电泳COX-2mRNA及蛋白呈阳性表达,10mmol.L-1阿司匹林与10μg.L-1bFGF共同作用组电泳未见有相应条带出现。结论阿司匹林能有效抑制bFGF诱导的HLEC的生长,这种作用可能是通过抑制COX-2的表达而实现的。

乳腺肿块微血管密度与血氧近红外光参数的实验研究

目的从组织微血管分布密度初探乳腺肿块血氧近红外光参数的可靠性。方法用近红外光TBO-I型双波长乳腺肿瘤检测仪,对检测的181例乳腺肿块进行近红外光血氧参数分类和病理切片检查明确肿块性质,并对其中20例恶性肿块和20例良性肿块进行免疫组织化学SP法检测乳腺肿块微血管密度,运用医学统计学方法分析近红外光血氧参数与微血管密度的相关性。结果(1)28例高血乳腺肿块微血管密度值和血含量值分别为24.56±8.110和1.891±0.850,12例低血乳腺肿块微血管密度值和血含量值分别为17.98±8.729和0.698±0.283,两者比较存在显著性差异(P<0.05);(2)40例乳腺肿块的微血管密度值与近红外光血含量值直线相关系数为r=0.4208(P<0.05)。结论乳腺良、恶性肿块局部微血管密度与其血含量近红外检测参数存在相关性,说明了近红外光血含量检测参数作为诊断乳腺癌标准的可靠性。

波前像差仪测量近视患者低阶像差的临床研究

目的:通过波前像差仪与自动验光仪、综合验光仪3种方法测量近视患者屈光状态结果的对比观察,探讨波前像差仪对低阶像差测量的准确性。方法:随机选取2005-06/2005-09来我院进行LASIK术前检查的近视患者67例100眼,分别应用波前像差仪、自动验光仪、综合验光仪对其球镜度数、柱镜度数、散光轴向测量后进行统计分析、比较。结果:波前像差仪、自动验光仪、综合验光仪3种方法测得的球镜度数分别为-6.18±2.77,-5.80±2.80,-5.88±2.72D;柱镜度数分别为-0.73±0.57,-0.75±0.59,-0.72±0.56D;散光轴向中位数分别为66.00°,45.50°,27.50°,四分位数间距分别为162.75°￣11.25°,160.00°～4.25°,161.00°～5.00°;等效球镜度分别为-6.55±2.90,-6.17±2.91,-6.24±2.81D;统计学上均无显著性差异。结论:波前像差仪在准确测量眼高阶像差的同时,能够准确地测量近视患者的低阶像差。

高度近视眼后房型ICL植入术后波前像差的改变

目的:观察高度近视眼有晶状体眼后房型人工晶状体植入后全眼及眼内波前像差的变化。方法:选择行有晶状体眼人工晶状体(implantable collamer lens,ICL)植入术的高度近视眼患者25例50眼,用尼德克波前像差仪测量患者6mm瞳孔区域内术前和术后1mo的波前像差值,对其进行配对t检验。结果:ICL植入眼术后1mo全眼总体波前像差(OPDTotal)、眼内总体波前像差(Internal Total)较术前明显下降(P<0.05)。全眼总体高阶波前像差(OPD High)、全眼总体球面像差(OPDT.SPH)、全眼总体彗差(OPDT.Coma)、全眼总体三叶草(OPDT.Trefoil)、眼内总体彗差(Internal T.Coma)较术前有不同程度升高,具有统计学意义(P<0.05)。角膜总体波前像差(C-Total)、角膜总体高阶波前像差(C-High)、角膜球差(C-T.Sph)、角膜彗差(C-T.Coma)、角膜四叶草(C-T.4Foil)较术前有不同程度升高,角膜三叶草(C-T.Trefoil)较术前明显下降,但差异均无统计学意义。结论:有晶状体眼后房型人工晶状体植入术虽然显著降低了高度近视眼的总体波前像差,但术眼球面像差、彗差、三叶草等高阶波前像差有不同程度增加。

不同培养方法对组织工程化小鼠角膜上皮构建影响的比较研究(英文)

目的:探讨滋养细胞在小鼠角膜上皮细胞复层化中的作用,并研究构建组织工程化角膜上皮的理想方法。方法:在Transwell气液界面培养系统中,分别采用接触滋养层培养法、分离滋养层培养法、复式滋养层培养法以及无滋养层培养法等4种方法进行组织工程化小鼠角膜上皮的重建。HE染色进行组织学观察,免疫荧光法检测p63、角蛋白19以及involucrin的表达。结果:接触滋养层培养法、分离滋养层培养法中,角膜上皮复层化为3-4层;复式滋养层培养法中,角膜上皮复层化达5-7层;而无滋养层培养法中,复层化仅为2-3层。复式滋养层培养法构建的小鼠角膜上皮,基底细胞层和基底细胞上层表达祖细胞标记p63和角蛋白19,角膜上皮全层均表达分化标记involucrin。结论:复式滋养层培养法为构建组织工程化小鼠角膜上皮的理想方法。

ICL植入术对高度近视眼对比敏感度影响的研究

目的:研究有晶状体眼后房型人工晶状体(ICL)植入术对高度近视眼对比敏感度的影响。方法:选择行ICL植入术的高度近视眼患者27例52眼,用对比敏感度测试仪分别测试术前及术后1wk最佳矫正视力下的对比敏感度值。测试分为明视、明视眩光、暗视、暗视眩光四种模式,每种模式测试1.5,3,6,12,18c/deg五个空间频率。结果采用配对t检验进行统计学分析,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果:ICL植入术后1wk裸眼视力4.8558±0.6960,术后1mo裸眼视力4.9519±0.1513,术后3mo裸眼视力4.8865±0.5929。术后1wk;1,3mo裸眼视力较术前裸眼视力均明显提高(P<0.05)。术后明视、暗视、明视眩光、暗视眩光四种模式下空间频率为1.5,3,6,12,18c/deg对比敏感度值较术前均有明显提高(P<0.05)。结论:高度近视眼植入ICL后对比敏感度较术前明显提高,视功能得到显著改善。

胎牛血清对小鼠角膜上皮细胞生长和分化的影响(英文)

目的:探讨胎牛血清对小鼠角膜上皮细胞生长和分化的影响。方法:分别在无血清低钙培养基(KSFM)和含100mL/L胎牛血清的KSFM中培养小鼠角膜上皮细胞。比较两种培养基中角膜上皮细胞的群体倍增(PD)。通过RT-PCR和Western blotting方法检测p63、角蛋白19以及involucrin的表达。结果:在KSFM中,小鼠角膜上皮细胞可稳定传代超过25代,但在含胎牛血清的培养基中,细胞仅能存活3代。在KSFM中,培养细胞呈典型铺路石样外观,RT-PCR和Western blotting结果显示细胞表达p63、角蛋白19以及in-volucrin。当培养基中加入胎牛血清后,细胞形态明显增大,呈扁平状; involucrin表达显著增强。结论:胎牛血清可抑制小鼠角膜上皮细胞增生、诱导其分化。

TGF-β1基因转染可抑制人晶状体上皮细胞增殖

目的:探讨脂质体介导的TGF-β1基因(pEGFP-TGF-β1)转染对人晶状体上皮细胞(HLEC)系B3(HLEC-B3)增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:将pEGFP-TGF-β1转染HLEC-B3,观察细胞形态变化;采用生长曲线法、噻唑蓝比色法分析细胞增殖改变;使用流式细胞仪测定细胞凋亡变化、分析细胞周期改变(DNA倍体法)。结果:pEGFP-TGF-β1成功转染后,HLEC-B3逐渐变圆、脱壁。转染后24～48h细胞的增殖受到抑制,与相应对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);凋亡细胞比例(转染24h为(21.0±1.7)%,转染48h至(43.6±1.4)%明显升高,与相应对照组[24h为(0.42±0.06)%,48h为(0.60±0.02%)]比较,差异均有统计学意义(P<0.01);细胞出现G1期阻滞现象,表现为G1期细胞比例[转染24h为(72.0±1.9)%,转染48h为(74.7±2.2)%]增加和S期细胞比例[转染24h为(20.4±2.2)%,转染48h为(19.4±1.4)%]下降,与相应对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:pEGFP-TGF-β1可成功转染HLEC-B3,诱发细胞G1期阻滞,有效抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。

中老年患者干眼症临床分析

目的探讨中老年患者干眼症的临床特点及诊治要点。方法通过问卷调查、泪膜破裂时间(BUT)、SchirmerI试验、角膜荧光素染色以及DR-1泪膜干涉成像仪的检查,分析了60例(97只眼)中老年干眼症患者的临床资料。结果干眼症患者主要的眼部不适症状依次为眼疲劳(50.49%)、眼红(49.48%)、异物感(47.42%)、干涩感(39.18%)、分泌物(38.14%)、痒(29.90%)、水分过多感(21.65%)、烧灼感(9.28%)。SchirmerI试验结果为(11.10±3.14)mm,BUT试验结果为(3.12±1.05)s,角膜荧光素染色评分结果为1.26±0.37。干眼仪的敏感度为63.75%,特异度为49.84%。泪液蒸发过强型、泪液分泌减少合并泪液蒸发过强型、单纯泪液分泌减少型所占比例依次为63.92%、30.93%、5.15%。60例患者中曾经误诊为其他眼病者43例(71.7%)。结论眼科医生应掌握中老年患者干眼症的临床特点,重视症状、病史的询问以及传统的三项检查(SchirmerI试验、BUT试验、角膜荧光素染色),避免误诊误治。

有晶状体眼后房型人工晶状体植入矫正高度近视对眼前节形态的影响

目的探讨有晶状体眼后房型人工晶状体植入术后眼前节结构形态及眼压的变化情况。方法选取中国医科大学附属第四医院眼科于2007年9月至2008年4月行双凹型可折叠单片型人工晶状体(implantable contact lens,ICL)植入术的30例(52眼)患者,均于术前1周及术后3个月利用超声生物显微镜对角膜中央厚度,中央前房深度,上方、下方、鼻侧及颞侧4个方向房角角度,ICL中央厚度,ICL距晶状体中央前表面的距离,晶状体中央厚度以及眼压等多个指标进行观察测量和统计学分析。结果术前及术后角膜中央厚度分别为(0.50±0.06)mm、(0.51±0.05)mm,二者相比差异无统计学意义(P>0.05);中央前房深度分别为(3.27±0.24)mm、(2.38±0.38)mm,二者相比差异有统计学意义(P<0.05);4个方向房角度数分别为:12点钟位(38.69°±12.17°、25.24°±7.10°)、3点钟位(39.49°±10.60°、22.36°±5.11°)、6点钟位(39.11°±9.02°、23.32°±5.26°)、9点钟位(41.32°±11.02°、23.38°±6.22°),术前及术后4个方向房角角度相比,差异均有统计学意义(P<0.05);晶状体中央厚度分别为(3.47±0.24)mm、(3.59±0.21)mm,眼压分别为(16.74±2.37)mmHg(1kPa=7.5mmHg)、(16.78±3.56)mmHg,二者相比差异均无统计学意义(P>0.05)。ICL中央平均厚度为(0.21±0.05)mm,距晶状体中央前表面的平均距离为(0.54±0.28)mm。结论有晶状体眼后房型人工晶状体具有矫正效果好、预测性好、可逆性等优点,初步临床观察显示近期效果较满意。

乳腺癌改良根治术后皮下积液的高危因素

目的：分析乳腺癌改良根治术后发生皮下积液的危险因素,并探讨相应的干预对策。方法：回顾分析2009年3月至2013年3月,我院收治的40例乳腺癌行改良根治术并发皮下积液的患者资料,同时搜集性别、民族相同、年龄相差3岁内未发生皮下积液行改良根治术的乳腺癌患者,配对的患者手术时间相差在一周内,手术操作均为同一医生和同一组护理人员,进行1∶2配对。对两组患者的年龄、民族、手术时间、肿瘤发生部位、肿瘤大小、手术切口类型及既往病史、用药等资料进行统计分析。随访患者术后皮下积液的情况。结果：对是否发生术后皮下积液的两组患者进行单因素和多因素影响分析,糖尿病（OR=1.886,95%CI：0.379~11.502）、淋巴结转移（OR=4.845,95%CI：1.465~16.342）、生物蛋白胶的使用（OR=0.302,95%CI：0.135~0.675）是乳腺癌改良根治术后发生皮下积液的危险因素。有基础疾病、淋巴结转移的乳腺癌改良根治术后发生皮下积液可能性是无基础病、无淋巴结转移患者的1.886倍、4.845倍。使用生物蛋白胶的乳腺癌改良根治术后发生皮下积液的可能性是不使用生物蛋白胶的0.302倍。乳腺肿瘤发生部位、肿瘤大小、手术切口类型与乳腺癌术后皮下积液无明显相关（P〉0.05）。结论：合并有基础疾病、淋巴结转移的乳腺癌患者行改良根治术后易发生皮下积液。使用生物蛋白胶的乳腺癌患者行改良根治术后发生皮下积液的可能性降低。肿瘤发生部位、肿瘤大小、手术切口类型与乳腺癌术后皮下积液无明显相关。

高效液相色谱法测定氨碘肽滴眼液中5种氨基酸的含量

目的采用HPLC法测定氨碘肽滴眼液中丝氨酸（Ser）、甘氨酸（Gly）、组氨酸（His）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）的含量。方法采用Ocean-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相A：乙腈-水（4∶1）,流动相B：0.1 mol·L-1乙酸钠-乙腈（97：3）;流速为1.0 mL·min-1;柱温：25℃;检测波长：254 nm;用异硫氰酸苯酯（PITC）作为柱前衍生化试剂,采用柱前衍生HPLC法进行分析。结果各种氨基酸能良好地分离,衍生化试剂对氨基酸分析无干扰;平均回收率在98%～102%,RSD均〈3%。结论该方法简便、准确、可靠,可用于氨碘肽滴眼液中氨基酸含量的检测。

有晶状体眼后房型人工晶状体植入术矫正高度近视术前、术后眼轴测量方式的选择

目的明确有晶状体眼后房型人工晶状体植入术前及术后眼轴长度在不同设定条件下测量结果的差异,确定术后眼轴测量的方式,为术后发生的白内障进行人工晶状体测算提供指导。方法选取行有晶状体眼后房型人工晶状体植入术患者70例(135眼),分别于术前1周及术后3个月行IOL-Master、A超测量眼轴长度。IOL-Master测量方式分别为正常眼(Phakic眼)及人工晶状体眼(Pseudophakic PMMA)模式;A超测量方式分别为正常眼及特殊眼模式,其中正常眼晶状体声速设为1641m·s-1,特殊眼晶状体声速设为1555m·s-1。将所得数据进行统计学分析。结果术前,A超测量眼轴长度为(27.81±0.22)mm,IOL-Master测量眼轴长度为(28.02±0.22)mm。术后,A超在正常眼模式下测量眼轴长度为(27.82±0.22)mm,与术前相比差异无统计学意义(P=0.425),特殊眼模式下为(26.40±0.21)mm,与术前相比差异有显著统计学意义(P=0.000);术后,IOL-Master在Phakic模式下测量眼轴长度为(28.01±0.22)mm,与术前相比差异无统计学意义(P=0.326),PseudophakicPMMA模式下为(28.12±0.22)mm,与术前相比差异有统计学意义(P=0.000)。结论有晶状体眼后房型人工晶状体植入术后眼轴长度随测量方式的变化而变化。但术前及术后均采用A超正常眼模式或IOL-Master正常眼模式测量则眼轴变化较小,且后者准确性较高。

角膜散光对干眼患者泪膜的影响

目的探讨角膜散光对干眼患者泪膜的影响。方法对临床确定为干眼的患者(除外其他任何眼病)进行电脑验光,筛查出存在散光的干眼患者和无任何散光的正视眼干眼患者,分别对其进行泪膜干涉成像仪检查(DR-1)、基础泪液分泌试验(SchirmerⅠtest,SⅠt)以及泪膜破裂时间测定(break-up time,BUT)。将所得到的数据进行统计学分析。结果散光的干眼患者与正视眼干眼患者DR-1及BUT结果比较其差异有统计学意义,但SⅠt结果差异无统计学意义;散光患者的DR-1及BUT、SⅠt结果与散光的屈光度之间不存在相关性;近视散光、远视散光患者的DR-1检查及BUT之间的差异无统计学意义;逆规和顺规散光患者相比其DR-1差异有统计学意义,BUT差异有统计学意义;斜轴和顺规散光患者相比其DR-1差异有统计学意义,BUT差异有统计学意义;逆规散光与斜轴散光的DR-1和BUT比较差异均无统计学意义。结论(1)角膜散光对干眼患者泪膜稳定性存在一定的影响;(2)逆规散光患者的泪膜稳定性较顺规散光和斜轴散光差。