红花总黄素对衰老模型小鼠肝线粒体的保护作用

目的 探讨小鼠肝线粒体膜磷脂组成的随龄变化及红花总黄素 (SY)对肝线粒体膜的保护作用。方法 采用HPLC法测定线粒体膜PC、PE、CL的含量 ,陈思峰法测定PLA2 活性 ,原子吸收法测定线粒体Ca2 +含量。结果 衰老模型组PC、PE、CL均明显降低 ;PLA2 活性随增龄而升高 ;线粒体Ca2 +含量中年组较青年组升高 (P <0 .0 5) ,而衰老模型组Ca2 +含量显著低于中年组 (P <0 .0 5)。SY可升高衰老模型组PC、PE、CL含量和线粒体Ca2 +含量 (P <0 .0 1 ) ;而显著降低衰老模型组PLA2 活性。结论 SY可显著改善衰老模型组肝线粒体膜磷脂的组成 。

发酵对半夏毒性和刺激性的影响

目的:比较发酵前后半夏的毒性和刺激性变化,为临床用药的安全性提供依据。方法:采用单次给药毒性实验法、家兔眼结膜刺激性实验方法和高效液相色谱法,测定半夏发酵前后的最大给药量(MLD)、刺激性和草酸钙针晶的含量。结果:半夏MLD为45.47 g﹒kg^(-1)﹒d^(-1),相当于临床人用量的252.61倍,发酵后的半夏MLD为39.42 g﹒kg^(-1)﹒d^(-1),相当于临床人用量的218.96倍;发酵后的半夏较半夏对家兔眼结膜的刺激性明显减弱,草酸钙针晶含量相对的减少。结论:临床规定项下的半夏及半夏曲用量不会导致中毒死亡,发酵可以缓和半夏的刺激性。

半夏曲对小鼠胃肠运动的影响

目的:观察半夏曲发酵前后对正常小鼠及脾虚积滞模型小鼠胃肠运动的影响。方法:以小肠推进率、胃排空率为指标,分别考察半夏曲发酵前后对正常小鼠及脾虚积滞模型小鼠胃肠道运动的影响;以小鼠胃肠道激素胃泌素和神经递质胆碱酯酶、一氧化氮为指标,考察半夏曲发酵前后对脾虚积滞模型小鼠胃肠道运动的影响。结果:半夏曲发酵后能提高正常小鼠及脾虚积滞模型小鼠小肠推进率及胃排空率(P<0.05);半夏曲发酵后能明显提高小鼠胃泌素、胆碱酯酶的分泌水平,降低一氧化氮的分泌水平(P<0.05);半夏曲发酵前对小鼠胃肠运动的影响不甚明显。结论:半夏曲发酵后较发酵前对小鼠胃肠道促进作用更强,可显著改善小鼠的消化功能,治疗脾虚积滞证可以选用半夏曲。

高压酒蒸黄连质量标准研究

目的:制定高压酒蒸黄连饮片的质量标准。方法:分别对高压酒蒸黄连饮片进行性状、薄层鉴别、显微鉴别、水分、总灰分和醇溶性浸出物测定;采用高效液相色谱法对酒蒸黄连饮片中的生物碱进行含量测定。结果:本品表面棕黄色至深棕色,微带焦斑,断面淡黄色至棕黄色,质硬,易折断;薄层鉴别与供试品和对照药材在相同位置有相同颜色的斑点;拟定酒蒸黄连饮片水分不得超过12.0%,总灰分不得超过3.5%,醇溶性浸出物不得少于15.0%;本品按干燥品计算,以盐酸小檗碱(C_(20)H_(18)ClNO_4)计,含小檗碱(C_(20)H_(17)NO_4)不得少于5.0%,含表小檗碱(C_(20)H_(17)NO_4)、黄连碱(C_(19)H_(13)NO_4)和巴马汀(C_(21)H_(21)NO_4)的总量不得少于3.3%。结论:初步建立了高压酒蒸黄连质量标准。

真菌基因组DNA的提取和通用PCR检测方法的建立

目的改良真菌基因组DNA的提取方法,建立真菌通用聚合酶链反应(PCR),为目前临床真菌感染的早期诊断、预防和治疗提供有效工具。方法参考前人报道的多种真菌基因组DNA的提取方法,作改良以确立本研究中所采纳的手段,并应用真菌核糖体DNA(rDNA)通用引物,以实验室保存的标准菌株及临床分离菌株来建立临床真菌感染检测用通用PCR。结果白念珠菌和烟曲霉在75℃温度下分别作用60和80 min可以完全被灭活。经目前多种破壁方法的探讨,发现对于白念珠菌(单细胞真菌)选用酶消化法,破壁效率高达98.29%,而烟曲霉(多细胞真菌)则需要酶消化法与打击器振荡法联合应用,其破壁率也可达66.68%,进一步用酚氯仿法抽提其基因组DNA,能够获得相对纯度高且有一定得量。当选择真菌rDNA ITS2区间的一对通用引物,通过PCR反应体系的优化,使得本研究中建立的通用PCR,对于白念珠菌和烟曲霉的检测下限分别为5个和9.7个,其PCR产物测序结果与数据库比对完全一致,同时选择临床分离的或实验室保存的其他真菌、细菌和病毒株进行验证,该方法仅针对真菌群,结合测序分析可以实现种属水平的鉴定。结论改良真菌基因组DNA提取后所建立的针对真菌rDNA的通用PCR敏感且特异,适宜实验室操作。

红花黄色素对衰老模型小鼠脑细胞凋亡的影响

目的:探讨红花黄色素对衰老模型小鼠脑细胞凋亡及其相关因素的影响及其作用机制。方法:采用D—半乳糖制作衰老模型小鼠作研究对象,用大孔树脂法提取红花黄色素,同时观察不同剂量红花黄色素对脑细胞凋亡及Bcl—2的影响作用。结果:红花黄色素能显著降低脑细胞凋亡率,提高Bcl—2的表达,以大剂量和中剂量组效果比较显著(P<0.01,P<0.05)。结论:红花黄色素是红花延缓衰老作用的有效成分,衰老导致脑细胞凋亡大量出现,红花黄色素减少脑细胞凋亡率,以红花黄色素大剂量组效果最佳。

HPLC法同时测定杜仲3个药用部位中8种成分

目的建立HPLC法同时测定杜仲Eucommia ulmoides Oliver板皮、枝皮及叶中8种成分的含有量。方法分析采用Agilent Zorbax Eclipse C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1 m L/min;柱温30℃;检测波长208 nm（桃叶珊瑚苷、槲皮素）、238 nm（京尼平苷酸、京尼平苷、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷）和320 nm（绿原酸、咖啡酸）。结果桃叶珊瑚苷、槲皮素、京尼平苷酸、京尼平苷、京尼平、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸和咖啡酸分别在0.037 5~2.25、0.024 4~0.488、0.008 7~0.487 2、0.019 85~0.397、0.022 9~0.458、0.027 5~1.1、0.029 45~0.736、0.004 526~0.238 1μg范围内呈良好的线性关系。叶中黄酮和苯丙素含有量高于板皮,枝皮中木脂素含有量与板皮相当,而且这两个药用部位中环烯醚萜含有量都较高。结论在降血压和抗炎应用中,杜仲枝皮与叶可作为板皮的替代物。

改良选择性培养基在侵袭性真菌感染诊断中的探讨

目的通过改良培养基的营养和抑制能力,提高常规送检痰标本中真菌的检出率,为临床早期监测、诊断提供依据。方法通过观察白假丝酵母菌和烟曲霉标准菌株开始生长的时间、菌株开始产孢的时间及产孢时菌落直径,平行比较改良选择性培养基(Medium B)与实验室常规培养基[马铃薯培养基(PDA)、沙保弱培养基(SDA)、科马嘉显色培养基(CHROMagar)]对真菌检出能力的差异,并比较添加抗菌药物的Medium B(Medium B+)和CHROMagar平板抗污染菌的能力。实施临床血液恶性肿瘤和造血干细胞移植(HSCT)患者痰标本的随机跟踪分析。结果不同种类培养基真菌菌落开始生长、产孢以及接种后同一时间菌落直径即真菌分离能力由高至低依次为Medium B>PDA>SDA>CHROMagar;Medium B+能有效抑制痰标本中常见的致病菌,有利于痰标本中真菌的分离;随机跟踪的待检标本,有1例只在Medium B+中被检出。结论若选择一种选择性培养基用于血液恶性肿瘤和HSCT患者痰标本真菌的常规检测,Medium B+较佳;为了提高真菌检出率和准确性,推荐同时应用Medium B+和CHROMagar。

病毒microRNA研究进展

microRNA(miRNA)是一种含有约22个核苷酸的RNA分子,它可以介导基因表达的转录后调节,可调节细胞的生长、分化、凋亡、细胞周期和免疫反应等。已逐步发现多种病毒miRNA,该文就近年来病毒miRNA的研究进展作一综述。

血清1,3-β-D葡聚糖和半乳甘露聚糖检测对造血干细胞移植受者侵袭性真菌感染的诊断意义

目的:评价血清1,3-β-D葡聚糖(BDG)检测(G试验)和半乳甘露聚糖检测(GM试验)对造血干细胞移植(HSCT)受者侵袭性真菌感染(IFI)的诊断价值。方法:采用Platelia Aspergillus酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒和GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒对64例HSCT受者移植后每周2次同时进行血清GM试验和G试验,并根据欧洲癌症研究治疗组织/真菌病研究组(EORTC/MSG)的诊断标准定义临床诊断真菌感染病例,对两种检测方法的检测结果作ROC曲线分析,采用χ2检验对GM试验不同阳性阈值之间及GM与G试验之间诊断结果的一致性进行分析。结果:单次GMⅠ值>0.7和G试验BDG质量浓度>26.0pg/L分别为GM和G试验阳性折点时曲线下面积最大,两者灵敏度分别为87.0%、69.6%,特异度分别为92.7%%和85.4%。单次GMⅠ值>0.7与连续2次GMⅠ值>0.5的结果一致性较差(Kappa=0.308,P<0.05);GM与G试验结果的一致性较好(Kappa=0.446,P>0.05)。结论:GM试验和G试验是诊断IFI可靠的诊断方法,两者对IFI临床诊断意义的一致性较好;采用一次试验检测时,选择GM试验更为理想,且以单次GMⅠ>0.7作为阳性阈值为佳。

红花黄色素对老龄小鼠肝线粒体氧化损伤保护作用的实验研究

目的:探讨老龄小鼠肝线粒体结构和功能的增龄性改变和红花黄色素(Safflower Yellow Pigment,SYP)对肝线粒体抗氧化损伤的保护作用。方法:以衰老小鼠为研究对象,测定了肝线粒体丙二醛(MDA)含量,Mn—超氧化物歧化酶(Mn—SOD)活性,Ca^(2+)—ATPase 活性、复合体Ⅰ及复合体Ⅱ+Ⅲ活性,观察不同剂量 SYP 对上述各指标的影响。结果:老年组肝线粒体 Mn—SOD 活性、Ca^(2+)—ATPase 活性、复活体Ⅰ和复合体Ⅱ+Ⅲ活性显著降低,而 MDA 含量升高;SYP 大、中剂量组可升高 Mn—SOD、Ca^(2+)—ATPase、复合体Ⅰ及复合体Ⅱ+Ⅲ活性。结论:红花黄色素通过提高机体抗氧化能力、保护复合体酶活性、改善细胞内钙离子超载而起到延缓衰老的作用。

红花黄色素对老龄小鼠肝线粒体保护作用的实验研究

目的:探讨老龄小鼠肝线粒体结构和功能的增龄性改变和红花黄色素(safflower yellow pigment,SYP)对肝线粒体膜抗衰老的保护作用。方法:采用高效液相色谱法测定老、中、青不同年龄组小鼠肝线粒体匀浆中磷脂主要成分磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇氨(PE)、心磷脂(CL)的相对含量,来研究不同剂量SYP对上述各指标的影响。结果:肝线粒体磷脂PC、PE和CL 的相对含量老年组低于青、中年组,大剂量SYP可使老龄组磷脂含量恢复至中年组状态。结论:红花黄色素通过抑制肝线粒体磷脂的脂质过氧化起到抗衰老的作用。

竹沥的研究现状与思考

目的:为竹沥的深入研究开发提供参考。方法:通过对古代和现代文献的梳理,从竹沥的炮制历史沿革、基源、工艺、化学成分、质量标准、药效等方面进行了分析,发现其中的问题,并提出解决思路。结果:竹沥的炮制最早可追溯到梁代,以淡竹沥一直沿用至今,现在存在有多种竹子品种(淡竹、粉绿竹、苦竹、慈竹等)入药的现象。对竹沥化学成分的研究主要是不同品种的竹沥以及不同工艺竹沥中的氨基酸、酚类、有机酸、无机元素等成分变化研究,并没有对竹沥的药效物质基础进行全面研究,且其质量标准有待提升。虽然进行了传统的炮制工艺与现代工艺在化学成分方面的比较研究,但是未对其药效物质基础方面进行对比研究。对竹沥的药效研究仅涉及止咳、化痰功效,其镇惊、利窍、治消渴等功效的药理作用未见相关报道。结论:今后可从规范竹沥的名称、基源、炮制工艺参数,提高质量标准,加强药效物质基础研究,改进传统工艺和提升装备水平等方面进行深入研究。

六神曲最佳发酵周期研究

目的:探讨不同发酵时间六神曲中淀粉酶、糖化酶、蛋白酶活力的动态变化规律,验证六神曲样品对小鼠肠胃运动的影响,为六神曲最佳发酵周期的确定提供依据。方法:取8批六神曲每天发酵样品,分别测定其中淀粉酶、糖化酶、蛋白酶的活力,选择最佳发酵天数。此后选取最佳天数的六神曲进行药效学验证。结果:淀粉酶、糖化酶活力在第4天达到峰值,蛋白酶活力到第5天达到峰值,以第4天样品进行药效学研究发现其对小鼠肠胃运动有显著影响,同时能显著升高食积模型小鼠的胃泌素、胆碱酯酶含量,降低血清NO含量。结论:六神曲发酵第4天,综合酶活力较高,且经验证有较好的消食作用,因此其最佳发酵时间为第4天左右。

九蒸九晒人参质量标准研究

目的:建立九蒸九晒人参的质量标准。方法:采用经验、显微鉴别法对该饮片性状、粉末显微特征进行描述;采用薄层色谱法,分别以人参皂苷Rh4、20S-人参皂苷Rg3及20R-人参皂苷Rg3作为对照,对该饮片进行定性鉴别,检查了水分和总灰分;参考《中国药典》(2015年版)人参总皂苷的方法建立了特征图谱,HPLC条件为Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)(4.6mm×150mm,5μm),乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱,0min(30%A),80min(80%A),检测波长203nm,柱温25℃,流速0.8mL/min,进样量20μL,以20S-人参皂苷Rg3、20R-人参皂苷Rg3、人参皂苷Rk1和人参皂苷Rg5色谱峰保留时间与人参皂苷Rh4保留时间的比值,确定该饮片特征图谱;采用紫外分光光度法,对该饮片的人参总皂苷含量进行测定。结果:该饮片性状、粉末显微鉴别、薄层鉴别方法具有较好的专属性,水分为6.88%～10.22%,总灰分为3.18%～3.51%,特征图谱方法可靠,人参总皂苷含量为2.4854%～3.0964%。结论:根据实验结果建立了九蒸九晒人参的质量标准,其定性定量方法可靠,结果准确科学,所建标准可以用于九蒸九晒人参的质量控制。

六神曲发酵前制备工艺研究

目的:在《卫生部药品标准中药成方制剂第十九册》六神曲标准规定的基础上,对六神曲发酵前的制备工艺过程,进行最优工艺参数优选。方法:采用正交试验法以槲皮素、绿原酸的含量以及干膏率进行综合评分为指标,优化选择三味植物药最佳煎煮工艺;采用单因素考察法对苦杏仁赤小豆的粉碎工艺进行优化;通过软材制备情况确定药液浓缩终点。结果:六神曲七味原料药,苦杏仁、赤小豆混合,过2号筛粉碎成粗粉,与面粉、麦麸混匀,另取辣蓼、青蒿、苍耳草加12倍量水,浸泡30分钟,煎煮1小时,用200目滤布板框滤过,滤液浓缩成清膏(原生药6.5倍量水),趁热与上述药粉拌匀。结论:六神曲发酵发酵前原料药材处理工艺可经量化处理。

显微鉴别法区分六神曲及三种伪品

目的:对六神曲及市面上三种六神曲伪品进行比较鉴别,为六神曲补充检验提供依据,以保证市场上六神曲的质量。方法:采用显微鉴别的方法,对六神曲及三种伪品粉末进行鉴别。结果:六神曲正品含有面粉、麦麸、苦杏仁、赤小豆的特征成分及大量菌丝,且不含青蒿、辣廖、苍耳草的特征成分。伪品一(三种原料药材不提取)含有青蒿、辣廖、苍耳草的特征成分,伪品二(不加苦杏仁)不含苦杏仁特征成分,伪品三(不发酵)不含菌丝。结论:该方法可以有效鉴别六神曲及所述三种伪品。

康复馨牙膏主要药效学研究

目的:研究康复馨牙膏的抗炎、镇痛、止血、促进溃疡愈合等主要药效。方法:采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶致大鼠足肿胀两种动物模型,考察康复馨牙膏的抗炎作用;采用醋酸致小鼠扭体反应模型考察其镇痛的效果;采用对小鼠手术致肝脏创面出血的模型,考察其止血的效果;采用苯酚致大鼠口腔黏膜溃疡的模型,考察不同浓度的康复馨牙膏促进溃疡愈合的作用。结果:康复馨牙膏可抑制小鼠耳廓肿、大鼠足肿胀,有减少醋酸引起的小鼠扭体次数的趋势,缩短小鼠手术致肝脏创面出血的时间,有促进大鼠实验性口腔溃疡愈合的作用。结论:初步证明康复馨牙膏具有抗炎、消肿、止血和促进溃疡愈合的作用。

红花黄色素对衰老模型小鼠肝线粒体膜磷脂影响的实验研究

目的 :探讨小鼠肝线粒体膜磷脂组成的随龄变化及红花黄色素对其的影响。方法 :采用HPLC法测定线粒体膜PC、PE、CL的含量 ,陈思峰法测定PLA2 活性。结果 :衰老模型组PC、PE、CL均明显降低 ;PLA2 活性随增龄而升高。SYP可升高衰老模型组PC、PE、CL含量 ;显著降低衰老模型组PLA2 活性。结论 :D -半乳糖模型出现拟衰老时线粒体膜磷脂改变特征 ,SYP可显著改善肝线粒体膜磷脂的组成。