苏山猪系谱构建和群体遗传多样性分析

苏山猪是以大白猪和苏钟猪为亲本培育而成的新品种,因疾病流行和转群等因素影响,苏山猪群体存在遗传背景不清的问题,急需重建系谱,为苏山猪持续选种选育和推广提供依据。本研究采用18个基于短散布元件(Short Interspersed Elements,SINE)的逆转录转座子插入多态(Retrotransposon Insertion Polymorphisms,RIPs)标记在苏山猪群体进行PCR鉴定,对苏山猪进行系谱重建,以亲本群体长白猪、大白猪、二花脸猪、梅山猪为参考,进行遗传参数、遗传距离、系统发育和主成分分析,以进一步探究苏山猪的遗传多样性。基于非加权组平均法(Unweighted Pair-Group Method with Arithmetic Means,UPGMA)将苏山猪群体分为10个家系,苏山猪家系的多态信息含量(Polymorphic Information Content,PIC)范围为0.1605~0.2259,遗传分化指数(Wright'sF-statistics,Fst)的范围为0.0503~0.3848,近交系数(Wright's F-statistics,Fis)的范围为-0.3894~-0.2730,而其他亲本品种猪的PIC范围为0.0580~0.2485,Fst的范围为0.410 3~0.497 9,Fis的范围为-0.098 0~0.013 1。研究表明苏山猪群体遗传多样性丰富。此研究结果为苏山猪系谱构建和推广扩繁提供了一定的理论依据。

猪GH基因部分突变位点对生产性能的影响

本试验利用PCR -RFLPs技术 ,用MspⅠ ,ApaⅠ两种限制酶 ,检测了猪生长激素基因 +2 0 6～ +711位共5 0 6bp片段中的 [+2 95～ +30 0、+5 6 3～ +5 6 6 ]2处突变位点 ,分析了各多态位点在姜曲海猪中的分布及其与生产性能的关系。发现 :姜曲海猪中 ,MspⅠ酶切突变位点中的G1G2基因型和G2G2基因型个体的生产性能没有差异 ,不同日龄体重在两组间变化没有规律。ApaⅠ酶切突变位点G4G4基因型个体的 2 0日龄体重、45日龄体重高于G3G3/G3G4基因型个体 ,但差异不显著 ,G4G4基因型个体的 70日龄体重极显著高于G3G3/G3G4基因型个体 (P <0 .0 1)。G4G4基因型个体的 0～ 70日龄日增重也极显著高于G3G3/G3G4基因型个体 (P <0 .0 1)。这些结果显示GH基因有可能作为数量性状基因座的侯选基因。

猪POU1F1基因启动子区多态分析及其与生长性状的关联

【目的】获得猪POU1F1基因启动子区的多态信息,揭示其在不同品种中的分布特点,阐明其与生长性状的关联性。【方法】采用PCR克隆、DNA测序和PCR-RFLP技术进行POU1F1基因启动子区多态分析,利用一般线形模型分析其与生长性状的关联性。【结果】在POU1F1基因1.5 kb的启动子区域内发现5个多态位点;其中,5 bp短片段插入或缺失突变的A等位基因频率在引入品种猪中最高,在培育品种中中等,在中国地方品种最低。一般线形模型分析表明,该多态位点与猪的生长性状存在显著相关。多重比较分析发现,AA基因型个体的体高、体长、胸围和体重显著高于AB和BB基因型个体(P<0.05),而AB和BB基因型个体的体高、胸围和体重差异不显著(P>0.05),但AB基因型个体的体长显著高于BB基因型个体(P<0.05)。【结论】5 bp短片段插入或缺失突变的A等位基因是生长性状的优势等位基因,是生长性状可能的分子标记。

精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的表达特性

【目的】揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律。【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,利用半定量RT-PCR分析其在初生至150d梅山公猪睾丸中的发育性表达特性。【结果】5个基因在梅山公母猪生殖道组织中呈现不同的表达特性。其中SPAG1在睾丸中表达丰度最高,在精囊腺、前列腺、附睾体、子宫角和输卵管呈现中等丰度表达,而在附睾尾、子宫颈和卵巢的表达信号较弱。SPAG5在睾丸中表达丰度最高,在前列腺、附睾体和子宫颈中表达信号较弱。而SPAG6在睾丸中高丰度表达,在输卵管中呈现中等丰度表达,在子宫角的表达信号很弱。SPAG11C在附睾体和睾丸中高水平表达,而SPAG11E则在附睾体和附睾尾中低水平表达。在成熟精子中只有SPAG11E有mRNA表达。SPAG1、SPAG5、SPAG6和SPAG11C基因在公猪睾丸中发育性表达分析表明,总体上所检测的4个精子抗原基因的表达水平都随着日龄增加而提高,但存在一些差异。其中SPAG1和SPAG11C呈现相似的表达规律,在初生和30日龄时表达相对较低,但在60、90、150日龄都有显著提高(P<0.05)。而SPAG5在初生和30日龄时表达也相对较低,在60和90日龄时均有显著提高(P<0.05),但150日龄时略有下降,但差异不显著。SPAG6在初生和30日龄时表达水平很低,至60日龄有显著提高(P<0.05),90日龄时维持这一水平,而到150日龄时则有显著下降(P<0.05)。【结论】SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E在梅山公母猪生殖道组织广泛表达,在睾丸组织中其mRNA表达水平变化与性发育相一致,SPAG11E在精子中存在低丰度mRNA表达。

5个品种猪生长激素基因座位多样性比较

试验利用PCR -RFLPs技术分析猪GH基因座位 +2 0 6～ +711位共 5 0 6bp片段中的多态位点 ,比较不同品种猪该座位的多样性差异 ,结果发现多样性程度以皮特兰猪群最高 ,梅山猪群最低 ,长白猪群居中 ,杜洛克和姜曲海猪群较高。该方法提示的多样性指数变化范围与蛋白质 (酶 )多样性指数相近 ,故PCR -RFLPs技术可作为多样性分析的有效方法 。

猪CatSperB和CatSperG基因的克隆、表达及生物信息学

【目的】揭示猪CatSperB和CatSperG基因的存在、蛋白的结构特征、进化关系及时空表达特性。【方法】利用电子和分子克隆技术鉴定猪CatSperB和CatSperG基因全长cDNA,并利用定性RT-PCR和荧光定量RT-PCR进行CatSperB和CatSperG基因的时空表达研究。【结果】①分别获得了3 508 bp CatSperB和3 715 bp CatSperG电子转录子,分别包含3 330和3 483 bp开放阅读框,并经TA克隆测序验证,其CDS序列与人、牛、马和狗等的CatSperB和CatSperG基因的序列相似性在80%以上;②CatSperB分子质量为125.79 kD,为稳定蛋白;CatSperG分子质量为133.40 kD,为不稳定蛋白;③CatSperB和CatSperG都包含7个通道蛋白保守的跨膜结构域,CatSperG蛋白C端含一个超螺旋结构,而CatSperB蛋白无明显的超螺旋结构信号;猪CatSperB和CatSperG与牛、狗和马的CatSperB和CatSperG蛋白同源关系较近,与人和小鼠的同源关系较远;④RT-PCR分析表明,CatSperB和CatSperG基因主要在睾丸中表达,但CatSperB在其它组织也有表达信号;⑤CatSperB和CatSperG基因mRNA表达水平在猪性发育的重要阶段,精子发生(60日龄)、初情期(90日龄)和性成熟(150日龄)前后都有显著提高(P<0.05)。【结论】获得了猪CatSperB和CatSperG基因的cDNA克隆及其一系列生物信息学参数,揭示了CatSperB和CatSperG蛋白含7个保守的跨膜结构域及不同物种间的进化关系,证实CatSperB和CatSperG基因主要在睾丸表达,且其mRNA表达变化与公猪的性发育相一致。

精浆浓度对17℃保存下猪精子活率和活力的影响

为了解精浆浓度对精子常温保存的影响,对含不同浓度精浆的商业化CXM稀释剂和自制稀释剂的精液于17℃下的保存效果进行比较。结果表明:当稀释剂为CXM时,25%精浆获得了最好的保存效果,含0、5%精浆也有较好的保存效果;而使用自制稀释剂时,含50%、75%精浆获得了较好的保存效果,其次是含25%精浆。说明在常温保存中一定浓度的精浆有利于维持精子的活力和活率,但这与稀释剂组成有关。在实际生产应用中,在稀释剂中约添加25%精浆对维持精子在常温保存中的活力和活率可能有较好效果。

猪POU1F1基因5’侧翼区克隆及序列分析

POU1F1基因是POU基因家族的成员之一,对哺乳动物的早期发育和相关基因启动表达起重要的调控作用。本文利用染色体步移技术,从长白猪基因组中首次克隆到了约1.5kb的POU1F1基因5’侧翼区序列,并利用相关软件对其进行了序列分析和物种间POU1F1基因5’侧翼区序列比对及进化树构建。结果表明所克隆的片段中含典型的TATA盒(-57)和类CAAT盒序列(-87)。TESS软件分析发现在启动子附近有一系列潜在的重要的转录因子结合位点。序列比对结果表明不同物种POU1F1基因的转录起始点上游-150bp区域保守性较强,可能是启动子的核心序列。其中猪与牛的同源性最高,其次是黑猩猩、人、狗,与大鼠、小鼠和鸡同源性较低,与斑马鱼序列同源性最低。同源序列主要集中在转录起始点上游-150bp至-1000bp区域。Vista中的MLAGAN程序构建的系统进化树真实反应了物种间进化关系。

猪mtDNA多态性的研究与应用

本文介绍了猪 mt DNA的结构 ,以及 mt DNA多态性的研究方法 ;综述了猪mt

动科专业《猪生产学》双语教学模式的探索

《猪生产学》是动科专业学生的专业课主干课程,在动物科学专业本、专科学生教育及研究生教育中占很大比重。本文对双语教学的优点、《猪生产学》双语教学主要方法、在教学中应用双语教学的注意要点、《猪生产学》目前存在问题及改进设想进行讨论。

动物性别控制技术研究与应用

１ 前 言 动物性别控制的目的在于在动物出生前即通过人工方法控制其性别。就畜牧生产而言，理想的性别比例具有重要的意义：①使群体中受性别限制的生产性状（如泌乳性状）和受性别影响的生产性状（如肉用性状、毛用性状等）获得更大的效益；②增加核心群选种中的选...

畜禽GH基因多态性与生产性能相关研究进展

简介了畜禽 GH基因和前 GH一级结构的特点 ,DNA基因多态性的研究方法 ,并对目前畜禽

SPMI基因在公母猪生殖道的时空表达特性研究

为揭示猪精子运动抑制因子(Seminal plasma motility inhibitor,SPMI)基因在公母猪生殖道的时空表达特性,本研究运用定性RT-PCR分析了SPMI在生殖道的组织表达谱,利用半定量RT-PCR技术分析了SPMI在公猪精囊腺和尿道球腺组织的发育性表达。定性RT-PCR分析结果发现,SPMI基因在精囊腺中的表达丰度最高,在尿道球腺和子宫角中呈中等丰度表达,在前列腺、子宫颈和卵巢中的表达较弱,在其它生殖道组织未检测到mR-NA表达。半定量RT-PCR分析结果显示,SPMI基因在公猪精囊腺和尿道球腺中的发育性表达规律相似,都在初生时即启动,表达水平随着日龄的增加不断提高,直至性成熟(150日龄)。其中SPMI基因在精囊腺中的表达在60、90和150日龄均有显著提高(P<0.05);而在尿道球腺中,SPMI基因的表达在30、90和150日龄均有显著提高(P<0.05),而60日龄的表达较30日龄时有所提高,但差异不显著(P>0.05)。这些结果提示SPMI基因在公母猪生殖道呈广泛表达,其发育性表达呈日龄依赖性特点,表达水平在初情期至性成熟期有显著提高。

影响猪精子介导基因转移效果的因素研究

为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响;PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。

畜禽生长激素基因多态性与生产性能相关研究进展

生长激素（ＧｒｏｗｔｈＨｏｒｍｏｎｅ，ＧＨ）是由垂体前叶分泌的单链多肽激素，它具有调节糖类、脂类和蛋白质三大类物质代谢的重要作用。在对各种动物进行的皮下埋植，注射外源ＧＨ等研究表明：ＧＨ对动物具有显著加快肌肉、骨骼生长，降低脂肪含量，促进生长发育，降...

ESR和FSH β基因对苏太猪断奶存活率影响的研究

采用PCR-RFLP,PCR-DSCP技术分析了苏太猪雌激素受体基因(ESR)和促卵泡素β亚基基因(FSHβ)的基因型对断奶存活率(LW)的影响。结果表明:ESR基因在初产母猪中,LW在ESR基因BB基因型和AA、AB基因型间存在显著的差异(P<0.05),且BB基因型>AB基因型>AA基因型。FSHβ各基因型,在初产母猪和经产母猪中对LW的影响均不显著(P>0.05)。合并基因型对初产和经产母猪LW的影响显著(P<0.05),在初产母猪中,BBBB、AABB、ABBB基因型为优秀的合并基因型,且合并基因型的遗传效应高于各个基因效应的简单加和。

姜曲海猪瘦肉型品系(零世代)仔猪背最长肌肌内脂肪酸组成及含量的研究

选取姜曲海猪瘦肉型品系(零世代)仔猪24头,按初生及15、30、45、60、75日龄分成6个阶段,每日龄段4头,分别屠宰后取3～5 g背最长肌,经甲酯化后用气相色谱法测定各日龄段的肌内脂肪酸含量。结果表明:饱和脂肪酸含量随着日龄的增长(初生～60日龄)而逐渐减少,60～75日龄又有所升高。不饱和脂肪酸含量在断奶前较稳定(600 mg·g-1左右),断奶～60日龄降至505.1 mg·g-1,此后又升高至75日龄的620.0 mg·g-1;不饱和脂肪酸(主要为单不饱和脂肪酸)含量较高,这是该品系猪肉质优良的种质特性指标之一。

鸡Mx蛋白基因诱变修饰及抗病活性

【目的】进一步研究鸡Mx蛋白第631位氨基酸的变异与鸡群抗病性的相关性。【方法】本实验利用PCR突变技术将鸡Mx蛋白基因的全长cDNA第2032位的碱基由G突变为A(既631位氨基酸的改变),并将突变的Mx基因插入真核表达载体pcDNA3.0,重组表达载体转染COS-Ⅰ细胞后,进行RT-PCR与间接免疫荧光(IFA)鉴定。【结果】对鸡Mx蛋白基因的cDNA进行PCR诱变修饰正确,构建了能够正确表达鸡Mx蛋白的重组真核表达载体;诱变修饰重组Mx蛋白对抗新城疫病毒(NDV)感染分析结果显示,重组Mx蛋白具有较强的抗新城疫病毒生物活性。【结论】为下一步研究鸡Mx蛋白的抗病机理与制备抗病转基因鸡奠定了坚实的基础。

致病性F18大肠杆菌黏附素受体易感性仔猪的体外鉴定

在PCR-RFLP方法分析了不同猪个体FUT1基因M307位点等位基因多态性的基础上，制备M307位点为GG和AG2种类型仔猪小肠上皮细胞分别与表达F18ab菌毛的野生型大肠杆菌、表达F18ac菌毛含fed操纵子全基因的重组大肠杆菌及表面分泌表达F18ab菌毛FedF亚单位的重组大肠杆菌进行体外黏附和黏附抑制试验。结果表明，上述野生菌或重组菌对GG和AG2种基因型的30～35日龄断奶仔猪小肠上皮细胞均具有较好的黏附能力。上述3种大肠杆菌分别与抗F18ab纯菌毛血清、F18ac纯菌毛血清及抗F18ab菌毛FedF亚单位单因子血清作用后．则丢失黏附小肠上皮细胞能力。而GG基因型的3日龄仔猪小肠上皮细胞不能很好的黏附上述野生菌或重组菌．但是可以很好地黏附表达987P菌毛的大肠杆菌。

ESR基因在苏姜猪世代选育中的遗传变异及与猪群繁殖性状的关联

【目的】探讨苏姜猪ESR基因的PvuⅡ酶切位点多态性在世代选育过程中的遗传变异及与猪群繁殖性状的关系。【方法】采用PCR-RFLP的方法对906头、2—6世代苏姜猪ESR基因PvuⅡ酶切位点的多态性进行分析,并采用最小二乘法和单因子方差分析该位点多态性与苏姜猪群的繁殖性状的关联效应。【结果】ESR基因在苏姜猪的第2—6世代中B等位基因频率呈现出不断增加的趋势,BB基因型个体从第三世代开始出现,并且频率呈现出上升的趋势。仅考虑公猪基因型时,与配母猪总产仔数、产活仔数及死胎数之间无显著差异,但不同基因型公、母猪交配后母猪产仔数则有显著差异(P<0.05)。【结论】ESR基因的PvuⅡ酶切位点的多态性对不同基因型公、母猪交配后母猪的产仔数有显著影响。