5-甲基-7-甲氧基异黄酮绿色合成工艺研究

以3,5-二羟基甲苯为原料,经Hoesch反应得到2,4-二羟基-6-甲基脱氧安息香,再经环合反应得到5-甲基-7-羟基异黄酮,使用绿色合成试剂碳酸二甲酯经甲氧基化反应得到5-甲基-7-甲氧基异黄酮,并获得最佳工艺条件,最优条件下三步反应总收率达47.8%。

犬腹部外伤合并海水浸泡后应用血浆救治的研究

目的探讨犬腹部外伤合并海水浸泡后高渗及低温因素对其出凝血系统的影响,并观察在一般急救处理同时加用血浆救治的效果,为海战伤早期救治提供实验依据。方法将24只犬作腹部开放伤动物模型后,随机均分为3组,每组8只。对照组:不用海水浸泡;普通治疗组:经海水浸泡后打捞出水,给予一般的急救处理;血浆组:经海水浸泡后打捞出水,给予一般的急救处理,同时输注血浆。记录各组生存时间、体温、平均动脉压、血浆渗透压、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(KFTT)、D-二聚体、凝血因子Ⅱ等变化以及脏器病理特点。结果海水浸泡后动物PT、KPTT明显延长,D-二聚体增加,凝血因子Ⅱ减少。动物生存时间,血浆组(45.6±12.5h)明显长于对照组(13.6±2.8h)和普通治疗组(18.6±3.2h),组间有显著性差异(P<0.05);致伤后12h平均动脉压,血浆组(105.33±31.81mmHg)高于对照组(49.29±31.89mmHg)和普通治疗组(73.50±27.02mmHg),组间有显著性差异(P<0.05);血浆组与对照组、普通治疗组比较,凝血功能得到改善,纤溶激活减少。结论腹部伤合并海水浸泡后可引起凝血系统激活,微小血栓形成,在普通治疗的基础上早期输注血浆可以改善预后,纠正凝血功能障碍,减轻休克,是减少早期死亡的有效治疗手段,具有重要的临床意义。

参麦注射液对腹部开放伤合并海水浸泡犬血气和凝血的影响

目的探讨犬腹部伤合并海水浸泡后高渗及低温因素对其机体血气和凝血的影响及观察参麦注射液的治疗作用,为制订海战伤早期救治提供实验依据。方法将24只犬做腹部开放伤动物模型后,随机分为三组,每组8只。对照组:腹部伤后用海水浸泡;普通治疗组:经海水浸泡后打捞出水,给予一般的急救处理;参麦治疗组:经海水浸泡后打捞出水,除给予一般的急救处理外,同时输注参麦注射液。检测指标包括:平均动脉压(MAP)、血气分析(pH、PO2、PCO2)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、内皮素-1(ET-1)。结果海水浸泡后动物MAP、pH值、PO2降低,PT、APTT明显延长,PCO2、FIB、ET-1增加。参麦注射液治疗后,MAP短暂升高,PO2明显高于对照组和普通治疗组,ET-1明显低于对照组和普通治疗组,PCO2明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);PT、APTT在参麦治疗组和普通治疗组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论腹腔外伤合并海水浸泡可引起机体低氧血症、高碳酸血症、酸中毒、休克、凝血功能障碍和血栓形成。参麦注射液具有改善微循环、提高组织抗缺氧能力、抑制血小板聚集和血栓形成及抗休克作用,在腹部外伤合并海水浸泡的救治中有很好的治疗作用。

健康人与非白血病性血象异常患者骨髓中巨核细胞的比较

目的探讨非白血病性血细胞异常患者骨髓内巨核细胞染色方法、形态分类与数量的表现在疾病诊断与鉴别诊断中的意义。方法收集造血干细胞移植体检及(或)排除白血病外的血细胞异常的患者骨髓细胞涂片共1482例,分别行瑞氏-姬姆萨(W-G)、过碘酸-雪夫反应(PAS)和巨核细胞酶标组化(SPA,CD_(41)^+)染色,显微镜下将1.5cm×3.0cm面积内巨核细胞行形态分类,比较不同疾病骨髓中巨核细胞的亚类与数量。结果辨认颗粒、产板和Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型巨,W-G、PAS和SPA染色,差异无显著性;辨认原、幼巨PAS>SPA>W-G;辨认Ⅰ型巨SPA>PAS>W-G。巨核细胞总数最多者是ITP,其次hyS>Evans>PV>MDS>PTT;比健康人稍多,MegA>ACD>IDA>MF>MA>AIHA>TTP>PNH,比健康人少甚至为0者是PRCA和AA;原、幼巨增多的疾病有hyS>MegA>MF>PNH>Evans;ITP患者主要为颗粒巨增多、产板型减少,其中26.9%的患者未见产板型;与ITP类似的还有Evans和PNH;hyS与健康人比,颗粒和产板型巨均增多,检出率100%;病态型巨核数量MDS>ITP>MegA>Evans>PV>hyS>AIHA>ACD>PNH>MA>MF>PTT>IDA>PRCA;MDS为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型病态巨均增多,其他疾病少见Ⅰ型,增多者多为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型病态巨增多,Ⅰ型巨MDS>PV>MF>MegA>ITP>Evans>ACD。结论观察正常巨核时用PAS染色,观察病态巨核细胞时用SPA染色。病态巨虽不是MDS所特有,但数量和检出率对诊断有重要意义。

伴有绒毛淋巴细胞的脾淋巴瘤1例并文献复习

伴有绒毛淋巴细胞的脾淋巴瘤是一种少见的淋巴瘤,临床症状无特异性,易误诊,外周血淋巴细胞 增多和出现绒毛淋巴细胞是脾淋巴瘤的特征之一,脾切除是治疗首选。

纳升电喷雾毛细管液相色谱-串联质谱鉴定K562细胞株中混合蛋白质

用标准蛋白质混合物建立了一种适用于低丰度混合蛋白质及其异构体分离与鉴定的蛋白质组学方法。通过IPG胶条等电聚焦分离蛋白质,染色后进行混合胶内酶切,采用纳升电喷雾毛细管液相色谱-串联质谱“散弹法(shot-gun)”分析酶切产物,并进行数据库检索鉴定蛋白质。运用该方法从K562细胞株样品中鉴定出14种具有重要功能的蛋白质,部分蛋白质同时在多个条带中出现,可能是异构体。肽段及其碎片离子的平均质量偏差小于0.05 U,综合得分大都远远超过有效值。该方法灵敏、准确度高、分辨率高、省时、便于操作,在鉴定蛋白质异构体方面有优势。

外周血造血干细胞不同保存方法的比较

目的:为造血干细胞低温保存选择合适的方法。方法:20例外周血单个核细胞加入DMSO或DMSO加HES,-80℃冰箱(简称冰箱)或程控降温,冰箱或液氮保存,定期检测标本的CFU-GM,LTC-IC,CD34+,TBR,计回收率。结果:冰箱降温并保存,5%DMSO-6%HES为保护剂的CFU-GM、LTC-IC、CD34+、TBR回收率分别为:82.2%±14.7%、83.0%±12.2%、94.2%±4.3%、97.7%±3.9%,比10%DMSO者具体回收率明显高(P<0.05);同一种保护剂下:冰箱降温并保存与程序降温冰箱保存比,差异不显著(P>0.05),冰箱降温并保存、冰箱降温液氮保存及程控降温液氮保存,在一年内,各种回收率差异不显著(P>0.05),二年时,只有冰箱降温并保存者其各种回收率指标明显下降(P<0.05);细胞复温后,标本不稀释也不洗涤,室温下放置,细胞活力的各指标均下降(P<0.05),以含10%DMSO为保护剂者影响最大。结论:造血干细胞优选保存方法是:保护剂用5%DMSO-6%HES,保存时间不超过一年时,用冰箱降温并保存,长期保存时,冰箱降温则需液氮保存,细胞复温后,标本内保护剂应立即稀释(临床应用)或去除。

预激态补骨脂素抑制K562细胞增殖的实验研究

本研究的目的是观察预激态补骨脂素对K5 6 2细胞增殖的影响 ,为补骨脂素的临床应用提供实验依据。取预激态补骨脂素和晚激态补骨脂素处理的细胞 ,在培养后检测台盼蓝拒染细胞数和白血病细胞集落 ,并对它们在台盼蓝拒染细胞抑制率 (TBIR)、细胞增殖抑制率 (CPIR)和集落形成抑制率 (CFIR)方面的差异进行比较。结果表明 :预激态补骨脂素对K5 6 2细胞增殖有抑制作用 ;随着预激态补骨脂素浓度的增加 ,其抑制作用也随之增强 ;预激态补骨脂素与晚激态补骨脂素的TBIR、CPIR、CFIR各值比的差异不显著 ;为使预激态补骨脂素要充分发挥对K5 6 2细胞的抑制作用 ,补骨脂素的紫外线照射时间应在 10分钟以上 ;与K5 6 2细胞作用时间也应大于 12小时 ;抑制作用会因预激态补骨脂素预激后搁置时间的延长而下降 ,在 6小时内作用最强。结论 :预激态补骨脂素和晚激态补骨脂素对K5 6 2细胞的增殖均表现出抑制作用 ,有望作为临床的抗肿瘤用药。

DC-CIK免疫治疗对急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子的影响

目的探讨树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK细胞)治疗对急性白血病患者免疫功能的影响。方法选择15例化疗后完全缓解急性白血病患者,采用静注DC-CIK治疗37次,分别于DC-CIK治疗前和治疗后21天检测患者外周血T淋巴细胞亚群以及IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-6、IL-4、IL-2细胞因子水平。结果淋巴细胞亚群中CD+3、CD+3CD+8、CD-3CD+56、CD+3CD+56、CD+3HLA-DR+细胞均有明显升高(P均<0.05),而CD-3CD+19、CD+3CD+4CD+25明显减少(P均<0.05)。急性白血病患者DC-CIK治疗结束后21天与治疗前相比外周血IFN-γ、IL-2升高(P均<0.05),IL-10、TNF-α、IL-6、IL-4则无明显变化(P均>0.05)。结论 DC-CIK细胞免疫治疗能提高急性白血病患者的抗肿瘤免疫反应。

骨髓细胞液氮保存21-25年后的细胞活力体外研究

为探讨适合临床应用的骨髓细胞保存方法,揭示细胞长期低温保存效果,将20人份骨髓加入DMSO-AuP(10%二甲亚砜、10%自体血浆)或DMSO-HES-HuA(5%DMSO、6%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白)保护剂,分装2毫升/管,600-800管/人份,自控程序降温仪或-80℃低温冰箱预冻降温、液氮中保存21-25年。取冷冻骨髓细胞于38℃复温,检测细胞相关指标。结果表明:加保护剂的细胞标本在-80℃低温冰箱中为低速降温,-30℃前,与自控程序降温仪设定1℃/min的低降温速率接近。DMSO-HES-HuA与DMSO-AuP比较,红细胞形态畸形率分别为(3.5±1.5)%和(12.6±4.8)%;溶血率分别为(3.3±1.6)%和(23.1±5.1)%(p<0.05);前者渗透性脆性不变,后者减低;红细胞、血小板、粒单系造血祖细胞、长期培养起始细胞回收率,前后者对比分别为(96.1±1.8)%、(70.0±9.5)%、(49.2±10.9)%、(54.2±13.8)%vs(76.3±5.6)%、(52.7±8.1)%、(43.5±12.3)%、(47.2±13.6)%。用上述保护剂配合上述降温法保存后,细胞在间充质干细胞培养上,生长特性良好。同一保护剂用上述两种降温法保存后,细胞各种回收效果差异不显著(p>0.05)。结论:细胞在液氮中保存21-25年,其细胞形态和回收活力(率)良好;保存如骨髓这种细胞成分并非单一的标本时,用5%DMSO-6%HES-4%HuA为保护剂的-80℃冰箱预冻降温后液氮保存,方法简便、经济、易操作,适合临床应用。

21例继发于血液系统疾病的弥漫性肺泡出血分析

目的总结血液系统疾病患者弥漫性肺泡出血的诊断及治疗经验。方法分析2004年10月-2014年10月本院血液科21例继发于血液系统疾病的弥漫性肺泡出血患者的临床资料。结果 21例中急性非淋巴细胞白血病14例,急性淋巴细胞白血病5例,重型再生障碍型贫血2例。15例发生于白血病化疗中或化疗后,3例发生于异基因造血干细胞移植预处理期或移植后,4例发生于保守治疗期。临床表现:呼吸困难100%(21/21),低氧血症100%(21/21),发热90.5%(19/21),痰中带血71.4%(15/21),咯血19.1%(4/21)。胸部影像学:15例呈双肺实质弥漫性渗出,6例呈双肺磨玻璃样间质改变,7例合并双侧少量胸腔积液。死亡率76.2%(16/21)。结论继发于血液系统疾病的弥漫性肺泡出血致死率高,呼吸困难、发热、痰中带血、咯血及肺部弥漫性浸润影为诊断提供线索,及早识别及治疗方能改善预后。

Zo-1与id4基因异常甲基化在多发性骨髓瘤中的临床意义

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,常规化疗不能治愈,为探讨zo-1、id4基因异常甲基化在MM诊断、预后、微小残留病检测及治疗中基因标志作用的临床意义,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MS-PCR)方法检测MM细胞系U266、H929及IM9(B淋巴母细胞,MM患者骨髓来源)中zo-1、id4基因的甲基化状况;应用MS-PCR方法分析20例MM患者及6例健康供者骨髓标本zo-1、id4基因启动子区甲基化状况。结果显示:zo-1、id4基因在MM细胞系中均为甲基化阳性(完全甲基化或部分甲基化);zo-1、id4基因在5例健康人标本中均呈完全非甲基化状态;MM患者骨髓中zo-1、id4基因甲基化阳性率分别是50%和85%,二者阳性覆盖率高达95%,二者均阳性的标本阳性率为40%,明显高于健康人(0%),差异均有统计学意义(p<0.05);MM患者不同重链及不同轻链间甲基化阳性率没有统计学差异;MM患者是否具有B组症状并不影响患者的甲基化阳性率,这可能与标本数量有关。结论:MM患者中zo-1、id4基因甲基化状态发生改变并具有特异性,可能是MM新的基因标记。

低温冻存对脐血树突状细胞生物特性的影响

目的 :观察低温冻存对脐血来源的树突状细胞 (DCs)培养生物特性的影响 ,为DCs的应用提供冻存方法。方法 :设未冻存脐血细胞 (UFCB)经增殖培养后产生的DCs(UFDCs)为对照组 ,来源于经低温冻存的脐血 (CPCB)的DCs和经低温冻存的DCs(CPDCs)为实验组 ,比较实验组与对照组DCs生物特性 ,包括细胞增殖量 ,不染色和染色的细胞形态 ,台盼蓝拒染回收率 (TBR) ;细胞表面抗原 ;混合淋巴细胞培养剌激指数 (SI)、抗毒 杀灭效应处理率(ER)。结果 :CPCB与UFCB比 ,形成DCs的时间迟 ,细胞增殖量、树突状细胞量、CD1a、CD83、HLA DR表达、SI、ER均低。CPDCs与UFDCs比 ,形成贴壁树突状细胞迟 ,细胞增殖量、树突状细胞量、CD1a、CD83、HLA DR表达、SI、ER均低。CPCB的TBR为 95.8% ,CPDCs的TBR为 88.7%。结论 :脐血细胞和经增殖培养的脐血DCs ,经低温冻存后复温培养 ,DCs的生物特性有一定的损伤 ,但基本功能仍比较完整 ,回收率均 >85%。

脐带血清对造血细胞的增殖刺激作用

目的 :探讨脐带血清 (CBS)对骨髓造血细胞的效应。方法 :采用骨髓粒单系祖细胞、混合祖细胞、鹅卵石造血区、长期培养起始细胞培养法 ,在培养体系中加入CBS或 和细胞因子 (CK) ,根据培养集落的形成量 ,推算CBS中CK的含量。结果 :CBS中含有能直接刺激骨髓造血细胞形成的CK ,其中约含GM CSF 6 5 6 μg L ,IL 32 9μg L ,有较高的SCF、IL 6等活性。结论 :CBS内含有的造血刺激活性 ,可支持造血细胞体外生长、扩增 ,与CK比 ,有一定可比性及协同作用 ,具有一定应用前景。

慢性髓系白血病患者各期id4基因甲基化状态研究

本研究探讨id4基因在慢性髓系白血病(CML)不同时期甲基化状态及其与疾病进展的关系。采用甲基化特异的PCR(MS-PCR)方法对48例CML患者和10例正常人的骨髓标本进行id4基因启动子区甲基化状态检测。结果表明:id4基因在正常人及CML慢性期患者骨髓中呈现完全非甲基化状态,而在CML急变期(包括加速期)骨髓中id4甲基化率为66%,较正常人和CML慢性期明显增加,二者差异具有统计学意义(p<0.05)。系列研究结果也显示,同一CML患者的id4基因甲基化状态在慢性期时是非甲基化的,而在加速期或急变期却为甲基化状态。结论:id4基因在CML慢性期呈非甲基化,在加速期或急变期则呈甲基化状态,因而检测id4基因甲基化程度有助于监测CML患者的病情演变,可作为CML疾病进展的标志。

来源于骨髓和脐带血的基质细胞基本特性的比较

目的 比较骨髓与脐带血细胞体外培养基质细胞的基本特性 ,为基质细胞的选择应用提供依据。方法 用Dexter长期培养体系培养骨髓和脐带血基质细胞 ,以细胞增殖、细胞形态、细胞化学染色、细胞表面及基质细胞支持另一骨髓细胞形成的鹅卵石造血区 (CAFC) ,长期培养起始细胞 (LTC IC)为指标 ,比较两者的生长特性、成分及功能。结果 ①细胞生长特性 :出现贴壁细胞时间 ,骨髓细胞为培养 3d ,脐带血细胞为培养 5～ 6d ;细胞融合成片时间 ,骨髓细胞为培养 10～ 14d ,脐带血细胞为培养 12～ 18d ;第 2 1天细胞增殖数 ,骨髓比脐带血细胞增殖少 ;②细胞成分 :2 1d培养后细胞成分 ,骨髓来源者以成纤维细胞为主 ,其次是巨噬细胞与内皮细胞 ,脂肪细胞最少 ;脐带血细胞来源者 ,以巨噬细胞为主 ,其次是内皮细胞、成纤维细胞 ,偶见脂肪细胞 ;细胞化学与上述结果基本一致 ;细胞表面抗原检测 ,CD14、CD4 5的表达骨髓细胞明显低于脐带血细胞 ;③细胞功能 :骨髓来源的基质细胞较脐带血细胞的基质细胞支持另一骨髓细胞形成的CAFC和LTC IC明显多。结论 ①生长特征 :形成贴壁细胞时间骨髓较脐带血短 ,骨髓细胞比脐带血细胞有核细胞数增殖快、持续时间相对短 ;②细胞成分特性 :骨髓来源形成的基质细胞以成纤维细胞为主 。

急性白血病形态学诊断及其发病特点——233例患者的10年回顾性分析

本研究探讨急性白血病(AL)形态学诊断价值及AL发病特点。收集2001-2011年间本院初诊AL 233例患者骨髓和外周血细胞,进行形态学(M)、免疫学(I)、遗传学(C)和分子生物学(M)检查,比较形态学结论与MICM结论之间的关系,分析10年中AL的发病特点。结果显示:①形态学结论与MICM结论的符合率为84.3%,符合率依次是AUL与AML-M0<M1<HAL<M4<M2<M3<M5<ALL<M6、M7与AP;②形态学混淆,一类是AUL、M0、M1、ALL和HAL之间混淆,另一类是M2a、M3v、M4和M5之间混淆,形态学混淆者形态自身特点与MICM结论特点无规律可寻,准确诊断需依据MICM结论;③233例AL中,白血病细胞比例以M1最高而M2最低,前者中位值为92.5%,后者中位值则为49.5%;④男性患者多于女性患者,AML患者>ALL>HAL>AUL;在AML中,M2>M5>M4>M3>M1>M0>M6>M7>AP患者;⑤最小年龄1岁,最大88岁,中位发病年龄(岁):AUL为41.5,M0为40.8,M1为43.4,M2为46.3,M3为33.8,M4为42.6,M5为48.8,M6为77.3,M7为2.5,AP为65.0,ALL为29.1,HAL为40.3;⑥近5年患者数(139例)明显多于前5年(94例)患者数,特别是M1、M2、M3、M4和M5。结论:在AL的MICM诊断中,形态学诊断具有重要的临床价值,重视易混淆的白血病细胞形态及发病特点可提高诊断的准确性。

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞免疫治疗对肾癌和非小细胞肺癌患者免疫功能的影响

目的探讨自体树突状细胞（DCs）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）过继免疫治疗对肾癌和非小细胞肺癌患者免疫功能的影响。方法选取Ⅲ～Ⅳ期肾癌患者28例和Ⅲ-Ⅳ期非小细胞肺癌患者15例，分别于DCs—CIK细胞免疫治疗前和治疗后第30天监测患者免疫功能指标，包括外周血T淋巴细胞亚群以及干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、IL-6、IL-4、IL-2等细胞因子水平。结果肾癌患者经DCs—CIK治疗后30d与治疗前比较，外周血IFN-γ、IL-2升高（P〈0．05），IL-10降低（P〈0．05），TNF—α、IL-6、IL-4则无明显变化（P〉0．05）。T淋巴细胞亚群中CD3＋T细胞、CD3＋CD8＋T细胞、NKT细胞比例较治疗前有所提高（P〈0．05），而CD3＋CD4＋T细胞、NK细胞、调节性T细胞（Tregs）则无明显变化（P〉0．05）。非小细胞肺癌患者DCs—CIK治疗后30d与治疗前比较，外周血IFN-γ、IL-2升高（P〈0．05），TNF-α、IL-10、IL-6、IL4则无明显变化（P〉0．05）。T淋巴细胞亚群中CD3＋T细胞、CD3＋CD8＋T细胞、NKT细胞比例较治疗前有所提高，CD3＋CD4＋T细胞、NK细胞、Treg细胞则无明显变化。结论DCs—CIK细胞免疫治疗能改善晚期肾癌和非小细胞肺癌患者的免疫功能。

人脐血树突状细胞体外诱导抗白血病细胞毒效应

为了体外观察树突状细胞 (DC)诱导的抗白血病细胞毒效应 ,采用细胞因子组合体外扩增培养脐血单个核细胞 (CBMNC) ,对产生的DC进行形态学观察、免疫表型检测和功能鉴定 ;用DC制备细胞毒T淋巴细胞 (CTL)和51Cr释放法测定CTL的溶靶细胞毒性。结果表明 :CBMNC中T细胞亚群与成人外周血相似 ;CD1a阳性细胞含量极少 ,仅为 (0 .4 1± 0 .0 9) % ;在DC扩增培养过程中 ,DC形态发生明显变化 ,胞体变大 ,形态不规则 ,有的细胞出现毛刺状突起 ,有的细胞出现粗大树根状突起 ;在培养 15天时 ,细胞群中CD1a阳性细胞达 (2 8.4± 3.5 5 ) % ,有 (6 3.6 7± 2 3.33) %的细胞表达CD86 ,(8.7± 1.4 9) %的细胞表达CD83,(32 .5± 1.5 3) %的细胞表达HLA DR ;产生的DC对异基因淋巴细胞具有明显的增殖刺激作用 ;经冻融的HL 6 0全细胞抗原脉冲的DC致敏自体T淋巴细胞产生的CTL对HL 6 0细胞具有特异性细胞毒效应。结论 :本研究中的脐血DC培养体系能产生较高含量的DC ,脐血DC在体外能诱导产生抗白血病细胞毒效应。