上海市2014—2019年麻疹疑似病例实验室监测结果及病原谱分析

本文旨在探究上海市麻疹疑似病例的病原谱构成。从2014—2019年的3325份麻疹/风疹阴性咽拭子标本中,挑选1197份标本,利用荧光定量PCR技术检测水痘带状疱疹病毒(VZV)、人细小病毒B19、人类疱疹病毒4型(Epstein Barr virus,EBV)、人单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、人疱疹病毒6型(HHV-6)、人疱疹病毒7型(HHV-7)、柯萨奇病毒A16(CA16)、柯萨奇病毒A6型(CA6)、柯萨奇病毒A10型(CA10)、肠道病毒71型(EV71)及其它通用肠道病毒(EV)。结果显示,共检测到9种病毒,总检出率为9.7%,未检出混合感染。EBV检出率最高,为1.8%,其次为人疱疹病毒6型(1.7%)、VZV及人细小病毒B19(各1.3%)。其他EV检出率为0.8%;检出CA6、CA10各7例(0.6%);检出HSV-1共6例(0.5%),CA16有4例(0.3%)。人细小病毒B19、VZV主要在未成年人中检出,EBV、HHV-6、CA16、CA6在成人和未成年人中占比相似。VZV、EBV及HHV-6主要在男性中检出,HSV-1主要在女性中检出。本研究提示,在上海市麻疹疑似病例中,除麻疹病毒、风疹病毒外,还存在EB病毒、HSV-1、细小病毒B19等9种病毒,它们均可能引起类似麻疹症状而被临床诊断为麻疹,临床医师诊断时须注意加以鉴别。

纳米孔测序技术在病毒性传染病检测及研究中的应用

快速、准确鉴定出病原体是临床感染性疾病诊断和传染病预防控制的基础。高通量测序基因检测技术突破了传统检测手段的时效性、灵敏度等的局限,为病原体检测和研究提供了便捷、高效的途径。本综述以高通量测序技术发展过程为基础,回顾纳米孔三代测序技术,及其在病毒性传染病检测鉴定及研究中的应用,并对该技术的应用前景及可能存在的问题进行阐述,期望它能在病毒性传染病的防控方面发挥更大的作用。

人星状病毒临床分离株感染CaCo-2细胞的转录组分析

人星状病毒（human astrovirus,HAstV）是引起婴幼儿病毒性腹泻的重要病原之一,但其致病机制及与宿主相互作用的数据非常有限。本研究旨在了解HAstV感染细胞后对宿主基因在转录水平上的影响。首先,利用临床分离HAstV毒株感染CaCo-2细胞,用实时定量反转录-聚合酶链反应（reverse transcriptasepolymerase chain reaction,RT-PCR）检测细胞培养上清液中的病毒总RNA,结果显示接种后9~24h病毒总RNA拷贝数明显增加。然后,利用转录组测序全面比较感染与未感染HAstV的CaCo-2细胞转录本,筛选两者间的差异表达基因;并应用KEGG信号通路富集性方法分析差异表达基因相关的信号通路。结果显示,差异基因富集在两条信号通路上（P〈0.05）,分别为轴突导向通路和Ras信号通路。本研究首次利用深度测序技术分析了HAstV感染对宿主基因在转录水平上的影响,为进一步研究HAstV致病机制等提供了方向。

碳青霉烯类抗生素与阿奇霉素联用对鲍曼不动杆菌生物被膜的效应研究

目的探讨碳青霉烯类药物单用或联合常用的抗被膜药物阿奇霉素对鲍曼不动杆菌生物被膜的作用。方法微量肉汤法检测亚胺培南、美罗培南对鲍曼不动杆菌浮游菌、被膜菌的敏感性,观察不同浓度的药物单药或联合阿奇霉素(AZI)时对鲍曼不动杆菌被膜的影响,用结晶紫实验观察被膜量的变化,用被膜下细菌计数的方法检测被膜细菌活力的改变。结果 4×MIC浓度的亚胺培南、美罗培南可以降低部分鲍曼不动杆菌的被膜量,剩余被膜量在17%~70%之间,被膜下细菌活力也有降低。与AZI联用时,鲍曼不动杆菌剩余被膜量较单用亚胺培南、美罗培南相比反而有所升高。结论碳青霉烯类药物可以有效降低细菌的被膜量及被膜下细菌,与阿奇霉素联用并不能增强其对被膜的活性。

利用36B4基因扩增效率评价PBMC基因组DNA的制备质量

目的建立一种评价PBMC基因组DNA制备质量的简便有效的方法。方法本研究采用实时定量PCR技术,对样本中的单拷贝基因36B4进行扩增,以考察扩增效率与样品质量之间的关系。结果经DNaseⅠ处理的基因组DNA中的36B4扩增效率显著低于未处理样品。采用该方法,对18份健康志愿者的血液标本基因组样品进行检测分析,结果显示,其可以有效地评估血液标本基因组制备质量。结论该方法可用于评价健康体检标本采集中的流程和操作对体检的影响,提高涉及基因组DNA检测体检项目的准确性。

炭疽病来自病牛羊,牛羊肉还能吃吗

天气转凉,不少家庭开始购买牛羊肉。但今年8月,北京报告了1例外地来京就诊肺炭疽病例,随后,山西省又发生疑似皮肤炭疽疫情。提到炭疽不少人会想到肉制品,炭疽是什么?来自哪里?怎么预防?让疾控君带您了解。"生命力"顽强的致病细菌炭疽杆菌曾经是20世纪最可怕的生化武器之一。炭疽杆菌可以在自然界土壤中长期稳定存在,虽然细菌繁殖体的抵抗力与一般细菌无异,常规浓度的消毒剂也能迅速杀灭它,但一旦菌体接触空气,即可产生特殊成分——芽孢,它能在自然条件或在腌渍的肉中长期生存,在土壤中可存活数十年。

老年大鼠肝脏内质网GRP78水平揭示其在急性酒精性肝损伤中低应答

目的 对比观察老年大鼠和青年大鼠肝脏在急性酒精性肝损伤时的GRP78水平变化及其与细胞损伤的关系.方法 通过Real-time PCR技术动态对比测定给予酒精前和后3h、6h、24 h,老年大鼠和青年大鼠肝脏GRP78mRNA表达水平变化,并通过Western-blot法对其蛋白水平进行验证.通过动态测定天门冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransgerase,AST）水平,评估酒精对老年大鼠肝脏的损害作用.结果 相较于青年大鼠,老年大鼠发生急性酒精性肝损伤时AST水平更高[（569.5±76.6）U/L vs（218.6±20.5）U/L,P＜0.05],并且real-time PCR检测显示老年大鼠的GRP78上调表达时间更慢,幅度更低[（1.69±0.54） vs （295.34±45.72）,P＜0.01].Westernblot结果印证了老年大鼠的GRP78蛋白水平低于青年大鼠.结论 老年大鼠肝脏GRP78对急性酒精性肝损伤应答更低,细胞损伤更严重.

2021—2022年我国风疹流行病学及其病毒基因特征分析

目的了解2021—2022年间风疹流行病学及其病毒基因特征, 为我国风疹防控提供基础科学数据。方法自中国疾病预防控制信息系统中的传染病监测模块和监测报告管理模块获取2021—2022年间全国风疹发病数据;从全国麻疹/风疹实验室网络获得阳性风疹病毒(rubella virus, RuV)分离株, 通过逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)扩增并测定位于E1基因的两个核苷酸(nucleotide, nt)片段[F1-480(8 633~9 112 nt)和F2-633(8 945~9 577 nt)], 整理拼接后获得靶基因序列(E1-739), 将其与已报道的基因型/亚型参考株构建系统发育树以鉴定基因型别, 同时从GenBank数据库中下载我国2018—2020年间流行的RuV病毒株序列开展系统发育分析。结果 2021—2022年我国风疹发病率均为0.06/10万(2021年:840例;2022年:784例), 病例主要集中于西部和南部省份。病例年龄分布分析显示, 2021—2022年风疹发病主要以<5岁儿童为主(2021年:34.17%, 287/840;2022年:42.09%, 330/784), 其中以0~2岁患儿占比最高。进一步分析病例免疫史发现, 8~23月龄的病例中, 仅接种了1剂次含风疹成分的疫苗(rubella containing vaccine, RCV)幼儿的发病比例较高;2~14岁年龄组病例主要分布在接种了2剂次或以上RCV的儿童中;然而, >15岁病例主要集中在未接种RCV或免疫史不详的人群中。全国病毒学监测数据显示, 2021—2022年间从我国6个省市共获得22株RuV病毒分离株, 分属于1E-L2(11株)和2B-L2c(11株)基因亚型, 并与2018—2020年间流行的RuV病毒株具有很高的同源性。结论 2021—2022年间我国风疹发病维持在较低水平, 流行的RuV为1E-L2和2B-L2c基因亚型。

2013—2022年上海浦东新区麻疹和风疹疑似病例的检测结果分析

【目的】了解2013—2022年上海市浦东新区麻疹、风疹的流行特征,为适时调整消除麻疹、控制风疹的策略提供数据支持。【方法】采用酶联免疫吸附法检测疑似病例血清标本的麻疹和风疹IgM抗体,采用逆转录-聚合酶链反应法扩增麻疹病毒N基因C末端630个核苷酸序列并测序,构建亲缘关系树。【结果】1529例麻疹疑似病例中麻疹IgM抗体阳性率为33.55%(513/1529),3—5月份阳性率(20.73%)最高,集中在0~岁(63.16%,96/152)和20~岁(45.61%,161/353)人群。风疹IgM抗体阳性率为6.80%(104/1529),10~20岁(27.27%,18/66)人群居多。男性的麻疹和风疹IgM抗体阳性率高于女性(P<0.05),出疹4~28 d麻疹和风疹IgM检出率高于3 d内血清采集时间(P<0.05)。2020—2022年的麻疹和风疹IgM抗体阳性率明显低于2013—2019年。分离得到的麻疹毒株中2株为输入性D8基因型毒株,其余均为本土型H1a基因亚型。【结论】上海市浦东新区的麻疹和风疹IgM抗体阳性率明显降低,麻疹IgM抗体阳性率集中在0~岁和20~岁年龄段,风疹IgM抗体阳性率集中在10~岁年龄段。应继续加强适龄儿童接种相关疫苗,对暴露风险大的年龄段人群进行查漏补种和加强免疫,加强输入性麻疹病例的监测、内防外控,达到消除麻疹、控制风疹的目标。

上海市2018年D8基因型麻疹病毒病例流行病学与病原学特征

目的了解2018年D8基因型麻疹病毒(Measles virus,MV)病例的流行病学和病原学特征。方法通过中国麻疹监测信息报告管理系统收集上海市2018年麻疹病例;对病原学标本进行MV核酸检测、病毒分离和基因测序定型;对数据进行描述性分析。结果2018年上海市鉴定发现7例D8基因型MV病例,其中3月发病2例、10-12月5例;6月龄1例、25-31岁6例;无含麻疹成分疫苗(MCV)免疫史2例、免疫史不详5例。7例病例属于3起聚集性疫情:在出疹前7-21d有泰国旅行史2例;有日本旅行史2例及其密切接触感染1例;无外出旅行史1例及其密切接触感染1例。该7株D8基因型MV与本市2016年输入性D8基因型MV的核苷酸、氨基酸序列同源性分别为99.1%-99.3%、98.0%-98.6%;与2015-2018年其他国家D8基因型MV的同源性为99.34%-100%。结论2018年上海市发现的D8基因型MV病例为输入病例或输入相关病例。建议继续做好MCV接种工作,并开展高质量的流行病学和病原学监测。

2018年上海市一起D8基因型麻疹病毒引起的输入性麻疹暴发报告

目的追踪2018年上海市一起输入性麻疹暴发的来源,并分析其病毒分子流行病学特征。方法直接从临床咽拭子标本中提取病毒核酸,采用一步法反转录–聚合酶链式反应,扩增麻疹病毒核蛋白基因COOH末端676个核苷酸,然后对扩增产物进行核苷酸序列测定,并分析其同源性,以确定病毒基因型及其可能的来源。结果本次暴发病例来自于同一家庭,且2例成年人病例在发病前21 d内有共同的出境旅游史;导致此次暴发的麻疹病毒为D8基因型。结论结合流行病学调查和实验室检测结果,推断此次疫情为一起D8基因型麻疹病毒引起的输入性麻疹暴发。

新型冠状病毒温度稳定性研究

【目的】观察不同温度保存条件下细胞培养物中新型冠状病毒(简称“新冠病毒”)存活情况,判断温度对病毒稳定性的影响,为新冠病毒肺炎疫情趋势研判及防控提供基础数据。【方法】将病毒接种于Vero E6细胞适应培养后,收获病毒液,根据所测得病毒半数组织培养感染剂量(TCID50)将不同稀释度(10^(-1)、10^(-3)、10^(-5)、10^(-6))的病毒在不同温度下(4℃、22.5℃、37℃)保存1~7 d,并分别感染细胞,通过观察细胞病变效应(CPE)、实时荧光定量检测病毒核酸确定病毒感染性,以评价病毒在不同温度条件下的稳定性。【结果】不同浓度的新冠病毒在4℃条件下保存较为稳定,均具有感染性;22.5℃条件下,高浓度(10-1稀释度)病毒放置7 d感染性逐渐下降,其他较低浓度病毒放置1 d则完全失去感染性;37℃保存超过1 d病毒即失去感染性。【结论】在细胞培养环境中,新冠病毒在4℃条件下高度稳定,对热敏感,且与病毒浓度相关,高浓度病毒室温22.5℃条件下仍可存活7 d,37℃条件下放置1 d病毒完全失活。

新型冠状病毒肺炎患者粪便中新型冠状病毒的分离鉴定

【目的】分离鉴定新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者粪便标本中的新型冠状病毒(SARS-CoV-2),并进行生物学特性分析。【方法】利用Vero E6细胞对收集到的SARS-CoV-2核酸阳性粪便标本开展病毒分离,对产生细胞病变的培养物进行病毒核酸检测、免疫荧光抗原检测、病毒含量测定及全基因组测序分型。收集每代细胞培养物后进行半数组织培养感染剂量(TCID50)实验。【结果】8份粪便标本经处理后分别接种Vero E6细胞,培养48 h,1份标本在Vero E6细胞上发现明显细胞病变。8例COVID-19患者粪便病毒核酸阳性标本中分离到1株SARS-CoV-2,阳性分离率为12.5%。病毒能稳定传至第3代,P1代病毒TCID50为104.0/0.2 mL,P2代病毒TCID50为104.5/0.2 mL,P3代病毒TCID50为104.75/0.2 mL。8份粪便样本中仅1份有SARS-CoV-2活毒的复制扩增,传代培养的核酸检测Ct值约为10。该分离株的序列与Wuhan-Hu-1株序列(Gen Bank MN908947)的同源性>99.99%。【结论】从COVID-19患者粪便中分离到SARS-CoV-2活毒株,COVID-19患者中不仅存在粪便排毒的现象,且有活病毒存在。