顺铂对人肺腺癌细胞SLC-89细胞周期、p21及c-myc表达的影响

目的 观察顺铂对SLC 89细胞增殖、细胞周期、p2 1及c myc蛋白表达的影响 ,以揭示顺铂抗癌的机理。方法 运用体外细胞培养技术 ,以不同浓度的顺铂作用于培养的SLC 89细胞 72h ,分别运用MTT法测定细胞增殖和流式细胞术观察细胞周期的变化及p2 1和c myc蛋白的表达。结果 顺铂能显著抑制SLC 89细胞生长 ,72h的顺铂IC50 为 18.4 7μg/ml。顺铂能以浓度依赖方式减少S期细胞而阻滞细胞于G0 /G1期 ,并诱导细胞p2 1及c myc蛋白的表达。 结论 顺铂能显著抑制SLC 89细胞生长增殖、改变细胞周期分布并诱导细胞 p2 1及c myc蛋白的表达 ,这可能是顺铂抗癌作用的重要机理之一。

三七总皂甙、大鼠高胆固醇血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :为观察tPNS对HCS刺激的VSMC增殖的影响。方法 :通过MTT法和电镜观察法 ,观察了tPNS对VSMC的保护作用。结果 :HCS可明显刺激VSMC增殖并导致其表型的改变 ,而tPNS可呈浓度依赖性抑制VSMC的增殖 (r=- 0 .972 ) ,与对照组相比具显著差异 ;tPNS还可明显抑制HCS对VSMC的刺激增殖作用 ,与HCS组相比具有显著差异。结论 :tPNS可抑制VSMC增殖而抗动脉粥样硬化 。

灯盏花素对兔血管平滑肌细胞增殖的影响

观察灯盏花素对兔血管平滑肌细胞生长增殖、细胞超微结构及其细胞周期和核因子κB活性的影响 ,以探讨其药理机制。胎牛血清刺激体外培养的兔血管平滑肌细胞使其快速增殖生长 ,加入不同浓度的灯盏花素作用一定时间后 ,通过MTT法测定灯盏花素对血管平滑肌细胞生长的抑制率 ,流式细胞技术测定细胞周期和核因子κB活性以及用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果发现 ,灯盏花素能明显抑制胎牛血清刺激的血管平滑肌细胞增殖 (IC5 0为 17.9mg L) ,并改变细胞的超微结构 ,包括使细胞电子密度增大 ,部分胞膜断裂 ,粗面内质网和高尔基体呈空泡状扩张 ,部分线粒体呈凝固性变化 ,嵴减少或消失 ,或呈凝固性坏死。灯盏花素还以浓度依赖方式减少S期细胞 ,阻滞细胞于G0 G1 期 ,并下调核因子κB活性。结果提示 ,灯盏花素能显著抑制血管平滑肌细胞的增殖生长 ,可能具有抗动脉粥样硬化的作用 ,其作用机理可能部分是通过调控血管平滑肌细胞核因子κB活性来实现的。

三七总皂甙对兔高胆固醇血清刺激的兔主动脉平滑肌细胞增殖及其释放一氧化氮的影响

目的 :为观察tPNS对HCS刺激的RASMC增殖及其释放NO的影响。方法 :运用兔HCS刺激体外培养的RASMC而形成的细胞异常增殖为模型 ,通过MTT法、电镜观察和Green法 ,观察了tPNS对RASMC的保护作用及其对NO释放的影响。结果 :HCS可明显抑制NO的释放、刺激RASMC增殖并导致其表型的改变 ,而tPNS可诱导NO的释放 ,明显抑制HCS对RASMC的刺激增殖作用 ,与HCS组相比具有显著差异 (P <0 .0 1)。结论 :tPNS抗动脉粥样硬化作用可能部分是通过调节NO的合成而抑制RASMC增殖来实现的。

猕猴肝纤维化模型建立与评价

目的:探讨灵长类动物肝纤维化模型制作方法,建立与人类肝纤维化更接近的动物肝纤维化模型.方法:猕猴10只,随机分为实验组和对照组,实验组每周皮下注射400mL/LCCl40.8mL/kg,连续10wk,同时辅以高脂饲料饲喂.注射CCl4后11wk,检测肝功相关的血清蛋白、血脂浓度及观察肝组织病理学变化.结果:实验组血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、球蛋白(GLO)、血清总胆固醇酯(TCH)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、血清胆红素(TBIL)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原含量与对照组相比均显著升高(2017.1±244.5nkat/Lvs550.1±72.8nkat/L,1978.6±237.0nkat/Lvs488.9±55.2nkat/L,47.7±5.4g/Lvs41.5±6.1g/L.4.2±0.5mmol/Lvs3.3±0.4mmol/L,1.1±0.2nmml/Lvs0.5±0.1mmol/L,1.9±0.3mmol/Lvs1.4±0.2mmol/L,9.5±1.2μmol/Lvs6.3±0.8μmol/L,419.3±42.1μg/Lvs68.4±8.2μg/L,274.6±32.2μg/Lvs39.4±4.5μg/L,269.7±18.2μg/Lvs103.7±12.3μg/L,P<0.01),而总蛋白(TP)和白蛋白含量降低与对照组相比显著降低(74.3±8.4g/Lvs84.3±7.7g/L,34±4.3g/Lvs41.7±4.8g/L,P<0.01).纤维化动物肝组织显示,肝小叶间纤维增生,部分纤维细胞向肝细胞间延伸.

顺铂对人肺腺癌细胞SLC-89作用的机理探讨

目的 观察顺铂对SLC 89细胞增殖生长、端粒酶活性、细胞周期、p5 3、bcl 2及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响 ,探讨顺铂抗癌作用的机理。方法 以不同浓度的顺铂作用于培养的SLC 89细胞 72h ,运用MTT法测定细胞增殖 ,端粒酶重复序列扩增—酶联免疫吸附法 (TRAP ELISA)检测细胞端粒酶活性以及流式细胞术观察细胞周期的变化和p5 3、bcl 2及PCNA的表达。结果 顺铂能显著抑制SLC 89细胞的生长 ,IC50 为 18.47mg/L。顺铂能以浓度依赖方式下调SLC 89细胞端粒酶活性 ,减少S期细胞而阻滞细胞于G0 /G1期 ,降低bcl 2和PCNA的表达 ,同时诱导 p5 3的表达。 结论 顺铂能显著抑制SLC 89细胞生长增殖、改变细胞周期分布、降低端粒酶活性及bcl 2与PCNA的表达 ,并诱导 p5 3的表达 ,这可能是顺铂抗癌作用的重要机理。

不同抗癌药物对乳癌MCF-7细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的 研究乳癌细胞MCF 7在不同抗癌药物存在的情况下端粒酶活性的变化规律。方法 运用细胞记数、台盼蓝染色和MTT法测定细胞增殖能力及其活性 ,同时用TRAP法测定细胞端粒酶活性。观察细胞在不同情况下端粒酶活性变化及其影响因素。结果 在无药物存在时 ,细胞增殖与端粒酶活性增加呈正相关 (r=0 .90 1)。阿霉素、紫杉醇和顺铂都能有效抑制细胞生长 ,以剂量依赖方式和时间依赖方式降低端粒酶活性 ,这种降低与活性细胞减少密切相关。结论 阿霉素、紫杉醇和顺铂抑制MCF 7细胞生长 ,其机制可能与降低端粒酶活性及细胞活性有关。

家兔随机扩增多态性DNA分析

从 2 5个随机引物中筛选出 5个具有较高多态性的引物 ,分别对 5个群体的 80只家兔基因组 DNA进行了 RAPD-PCR扩增。经统计分析得到了 5个家兔群体之间的远近不同的进化亲缘关系 。

实验性猕猴1型糖尿病模型的建立及评价

7～10岁健康猕猴15只,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,每组5只,分别按照100、125、150mg/kg的剂量一次性静脉注射链脲菌素,连续观察血糖、血浆C肽和胰岛素浓度的动态变化,观察期15周.结果:与注射链脲菌素前比较,注射后1周,Ⅰ组猕猴血糖浓度明显升高,血浆C肽和胰岛素浓度显著下降(P＜0.01),随后趋于正常水平,而Ⅱ、Ⅲ组猕猴血糖浓度明显升高并在随后的时间内持续维持在高水平,血浆C肽和胰岛素浓度持续维持在低水平(P＜0.001),Ⅲ组动物至15周全部死亡.结论:按照125mg/kg的剂量一次性给猕猴静脉注射链脲菌素,可成功复制1型糖尿病动物模型,其维持高血糖和低胰岛素及C肽浓度至少15周.

成人骨髓间充质干细胞体外培养方法的建立及生长特性分析

目的建立成人骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MMSCs)体外分离培养和扩增方法,观察MMSCs在体外培养的生物学特性,为MMSCs的临床应用奠定技术基础。方法采集成人骨髓,密度梯度法分离单个核细胞,利用DMEM/F12培养基添加自体血清进行黏附培养和扩增MMSCs,光镜观察MMSCs生长和形态变化,计数和MTT法观察原代和传代培养的增殖及生长特征,免疫组化法分析MMSCs纯度。结果MMSCs贴壁生长,呈典型MMSCs形态和生长特征,原代及传代5代内的MMSCs均有活跃的增殖能力,其中CD105阳性细胞>98%。结论密度梯度离心结合贴壁培养法可获得高纯度和高增殖活性的MMSCs,成人MMSCs至少在传代培养5代内生长旺盛并维持其生物特性,可满足临床治疗和人体生物组织研究要求。

人骨髓胚胎样干细胞向多核肌纤维诱导分化的研究

目的:比较骨髓来源的胚胎样干细胞(ELSCs)与间充质干细胞(MSCs)的体外成肌分化能力。方法:采用胚胎干细胞扩增用的无血清Knockout-DMEM培养基在明胶包被过的培养瓶中培养人骨髓单个核细胞以分离ELSCs,传统方法从相同骨髓中分离MSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态特征,采用免疫荧光染色鉴定多潜能抗原标志的表达。成肌分化液分别培养ELSCs和MSCs,采用免疫染色法检测肌纤维特异性抗原标志肌球蛋白重链(MHC)、成肌素(myogenin)和MyoD蛋白的表达,RT-PCR检测MHC、myogenin和MyoD mRNA的表达,计算MHC阳性肌纤维的比例以比较ELSCs与MSCs的体外成肌分化能力。结果:无血清培养基可从骨髓中分离到弱表达多潜能抗原标志Oct-4、Nanog-3和Sox-2的ELSCs,体积较小,形态纤细均一,在形态方面不同于相同骨髓来源的MSCs,后者不表达多潜能抗原标志。在成肌分化液中培养,ELSCs和MSCs均可被诱导为在蛋白和mRNA水平表达MHC和myogenin的多核肌纤维,但诱导培养10 d时,ELSCs的MHC蛋白阳性肌纤维的比例为(25.7±4.1)%,MSCs为(15.8±7.6)%,ELSCs的成肌分化能力明显高于MSCs(P<0.05)。结论:骨髓ELSCs能被诱导为多核肌纤维,并具有比来自相同骨髓的MSCs更强的成肌分化能力,ELSCs是肌病治疗更理想的种子细胞。

脐带间充质干细胞对体外外周血单核细胞的影响

目的观察脐带间充质干细胞(UC-MSC)对体外外周血单核细胞的影响。方法分离人UC-MSC和外周血单核细胞,流式分析技术鉴定单核细胞CD45和CD3的表达率;UC-MSC和单核细胞按不同比例共培养72 h,采用免疫荧光染色和ELISA方法检测γ干扰素(IFN-γ)在细胞内和培养上清的表达。结果采用含10%血清的DMEM/F12可以从新鲜脐带分离到UC-MSC,密度梯度离心法可以从外周血中分离到单核细胞,CD45阳性率为89.4%,CD3阳性率为80.7%。可在CD3/CD28刺激培养的单核细胞检测到IFN-γ的表达,1∶10和1∶20共培养上清IFN-γ的含量显著低于仅有单核细胞的对照组(P<0.01)。结论UC-MSC的存在可以影响IFN-γ在单核细胞的表达,这种影响与两种细胞的比例有关。

食蟹猴脐带间充质干细胞的分离与鉴定

目的建立食蟹猴脐带间充质干细胞的分离培养方法。方法新鲜食蟹猴脐带剪碎为糊状,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养,观察细胞形态特征,流式细胞技术分析细胞抗原标志的表达,并检测其体外多向分化潜能。结果运用组织贴块法可以从新鲜脐带中分离到贴壁生长、阳性表达CD29、CD44、CD90的成纤维细胞样细胞。这些细胞在体外诱导培养后可分别检测到脂滴、骨和软骨细胞。结论运用组织贴块培养法可用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液从食蟹猴脐带中分离到间充质干细胞。

灯盏花素对动脉粥样硬化兔内皮素、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛分泌水平的影响

目的观察灯盏花素对动脉粥样硬化兔内皮素、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛分泌水平的影响。方法日本大耳白兔50只,随机分为健康组、对照组、实验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组。健康组饲喂正常的基础饲料,对照组饲喂高胆固醇饲料(由79.5%基础饲料,15%蛋黄粉,0.5%胆固醇,5%猪油混合加工而成。),实验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组给予高胆固醇饲料的同时,每日分别肌肉注射1.53、.0和4.5 mg/kg体重的灯盏花素。3个月后分别采血测定内皮素、一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛的含量。结果灯盏花素能以浓度依赖关系显著增加NO含量和SOD的活性、抑制MDA和ET的产生。结论灯盏花素具有抗动脉粥样硬化的作用,其部分机制可能与其抗氧化,诱导NO合成和提高SOD活性有关。

Duchenne型肌营养不良小鼠模型鉴定及干细胞移植后dystrophin的变化

目的建立Duchenne型肌营养不良(DMD)模型dko小鼠的鉴定方法,评估干细胞移植后dystrophin的再生水平。方法采用SSP-PCR方法鉴定杂合子鼠交配产生的子代鼠的基因型。生化分析仪测定dko小鼠血浆肌酸激酶含量,HE染色观察肌肉组织学变化。扩增人脐带间充质干细胞并注射到dko小鼠后肢肌肉,2个月后免疫荧光染色法检测dystrophin的表达。结果杂合子鼠交配可以产生三个基因型的子代鼠,21.2%的子代鼠可以鉴定为dko小鼠的基因型(285 bp)。dko小鼠显示了肌营养不良的症状,血浆肌酸激酶含量高达(16,988.52±617.48)IU/L,典型的病理变化包括肌纤维大小不一,多见核中移细胞,结缔组织增生或炎性细胞浸润。将人脐带间充质干细胞注射到dko小鼠后肢肌肉,2个月后可检测到人dystrophin的表达。结论采用SSP-PCR可用于鉴定dko小鼠基因型,dko小鼠是研究干细胞治疗DMD的理想动物模型。

环磷酰胺对喉癌Hep-2细胞端粒酶活性及p16表达的影响

目的 观察环磷酰胺对人喉鳞状细胞癌Hep 2细胞端粒酶活性及其p16表达的影响 ,以揭示环磷酰胺的抗癌机制。方法 运用体外细胞培养、端粒酶重复序列扩增 酶联免疫吸附法 (TRAP ELISA)及流式细胞技术观察、分析不同浓度的环磷酰胺作用 72h的Hep 2细胞。 结果 环磷酰胺能以浓度依赖方式下调端粒酶活性并诱导细胞 p16基因的表达增强。端粒酶活性下调与p16基因表达紧密相关。 结论 环磷酰胺能下调端粒酶活性、诱导细胞增强p16的表达 。

三七总皂甙对兔血管平滑肌细胞核因子κappaB和细胞周期的影响

目的观察三七总皂甙对兔VSMC生长增殖、细胞周期和NF-κB活性的影响 ,以探讨其药理机理。方法胎牛血清刺激体外培养的兔VSMC使其快速增殖生长 ,加入不同浓度的三七总皂甙作用一定时间后 ,通过MTT法测定三七总皂甙对VSMC生长的抑制率、流式细胞技术测定细胞周期和NF -κB活性的影响。结果三七总皂甙能明显抑制胎牛血清刺激的VSMC的增殖 (IC50 为14.8μg/ml)。三七总皂甙还以浓度依赖方式减少S期细胞 ,阻滞细胞于G0/G1 期 ,并下调NF-κB活性 ,与对照组相比具有显著差异 (P<0.01)。结论三七总皂甙能显著抑制VSMC的增殖生长 。

骨髓胚胎样干细胞的形态结构特征观察

目的观察胚胎样干细胞(ELSCs)的形态结构特征。方法分别采用无血清培养基在明胶包被过的培养瓶和传统方法在未包被的培养瓶中分离骨髓胚胎样干细胞和间充质干细胞(MSCs),以MSCs为对照,在光学显微镜下观察ELSCs的细胞形态,在透射电镜下观察ELSCs的超微结构,并采用染色体技术分析传代细胞的核型。结果与MSCs相比,ELSCs体积更小、形态纤细均一,传代后细胞贴壁快,在细胞培养瓶中均匀分布生长,不易老化。第四代ELSCs的绝大多数细胞膜显示显著的花多样伪足,细胞浆中有丰富的粗面内质网。而部分MSCs的细胞膜光滑,部分MSCs膜表面有微绒毛,多数细胞胞浆内有空泡和丰富的粗面内质网而且明显扩张形成内质网池,内含中等电子密度的分泌物。第十代ELSCs和MSCs都有正常的核型。结论 ELSCs具有比MSCs更不成熟的细胞形态结构特征,传代10代后细胞仍然是安全的。

原发性肺动脉高血压治疗的研究进展

原发性肺动脉高血压(primary pulmonary hypertension,PPH)是常发生于30岁～40岁之间的女性,且对这些患者而言是发病率及死亡率均很高的一种进行性加重疾病.

顺铂对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性和凋亡及p53和bcl-2表达的影响

目的 :观察顺铂对HeLa细胞端粒酶活性、凋亡及其p5 3、bcl 2表达的影响 ,以揭示顺铂抗宫颈癌的机理。方法 :运用体外细胞培养技术 ,以不同浓度的顺铂作用于培养的HeLa细胞 72h ,通过端粒酶重复序列扩增 -酶联免疫吸附法 (TRAP ELISA)检测细胞端粒酶活性 ,以及流式细胞术观察细胞凋亡及p5 3、bcl 2的表达。结果 :顺铂能以浓度依赖方式下调端粒酶活性并诱导细胞凋亡 ,使其bcl 2基因的表达显著降低 ,而p5 3基因的表达则增强。端粒酶活性下调与细胞凋亡及其p5 3、bcl 2基因表达紧密相关 ,P <0 0 1。结论 :顺铂能下调端粒酶活性 ,诱导细胞凋亡 ,使bcl 2表达降低和p5 3表达增强 ,这可能是顺铂抗癌作用的重要机制之一。