超临界CO_2体系下固定化亚油酸异构酶的催化反应

SCCO2体系下,考察了压力,温度,作用时间,含水量,卸压时间对凝胶颗粒完整率和酶的稳定性影响。在不同条件下,影响因素作用的程度不同;快速卸压会引起CO2相变甚至颗粒破裂,卸压越快,海藻酸钙胶体的完整率越低;优化SCCO2体系下酶反应条件为:压力10MPa,温度40℃,相对含水量70%,底物LA与酶质量比为0.2(mg/g),反应时间为1.5h,卸压时间>2h;进3次循环反应,前2次重复使用具有较好的异构化酶活力。因此,在SCCO2体系下,初步实现了海藻酸钙包埋亚油酸异构酶催化底物LA的转化反应,并可重复使用。

“盖县李”果实成熟前后挥发性物质GC-MS分析

采用固相微萃取与气质联用技术,对"盖县李"果实成熟前后挥发性物质的变化进行了研究.通过质谱检测共鉴定出38种挥发性成分,以酯类、C6化合物、内酯类为主,(Z)-3-己烯醛、2-己烯醛、1-己烯醇、3-己烯醇乙酸酯是李果实挥发性成分中新鉴定出的物质.成熟前后3-己烯醇乙酸酯、γ-癸内酯、(Z)-3-己烯醛、乙酸丁酯、2-己烯醛含量变化较大.对"盖县李"果实香气贡献较大的物质有(Z)-3-己烯醛、己酸乙酯、γ-癸内酯、壬醛、乙酸己酯、辛醛、2-己烯醛、芳樟醇等.

李果实高质量RNA提取方法的比较和优化

李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28μg/g和80.75mg/g,因此常规方法不能有效提取其RNA以进行分子生物学研究。比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实RNA的效果,结果表明高氯酸盐法效果较好。根据李果实材料的特点,进一步优化了高氯酸盐法,包括用0.1mol/LTris-硼酸缓冲液(pH7.4)取代0.3mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.3);提取缓冲液中β-巯基乙醇的浓度由1%提高到2%,可溶性PVP的浓度由8.5%降低至1%;联合使用10%乙醇和醋酸钾以除去多糖;用12000×g离心替代使用填充有玻璃丝的Centriflo柱实现分离提取缓冲液中杂质的目的等。在230、260和280nm下测定所提取RNA的吸光值,并用提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段验证RNA的质量,结果表明:用优化了的高氯酸盐法提取李果实的RNA完整性好,杂质少,得率较高,适用于RT-PCR等后续实验,并且也适合提取其他富含酚类物质或多糖果实的RNA。

羧甲基壳聚糖亚铁配合物的表征及其对CO的吸附研究

利用羧甲基壳聚糖吸附亚铁离子得到亚铁配合物,红外光谱显示羧甲基壳聚糖与Fe2+发生了化学反应,同时利用扫描电镜和差热分析对配合物进行表征,发现反应前后两者的微观结构和热性质发生了显著变化。将亚铁配合物用于吸附CO,结果表明,在反应时间为6 h,温度为40℃左右,颗粒度为80目时吸附量最高,可达1.75 mg·g-1。对比发现,羧甲基壳聚糖亚铁配合物较羧甲基壳聚糖吸附CO效果提高4倍以上,且羧甲基壳聚糖亚铁配合物对CO的吸附量高于壳聚糖亚铁配合物。

巨大芽孢杆菌产亚硝酸还原酶活性测定条件优化

为探明巨大芽胞杆菌产亚硝酸还原酶(nitrite reductase,NiR)的催化特性,更好发挥其催化性能,该文从缓冲液种类、电子供体种类及浓度、NaCl浓度、加酶量以及反应温度和反应时间等几个方面研究了巨大芽胞杆菌产亚硝酸盐还原酶活性测定的适宜条件。研究结果表明,该菌产NiR酶活测定体系为:在250μL反应体系中加入Na2HPO(40.1mol/L)-柠檬酸(0.05mol/L)缓冲液(pH6.0)125μL;1mol/L NaCl 15μL;0.05mol/L甲基紫精(MV)7.5μL、0.05mol/L硫代硫酸钠20μL和0.15mol/L连二亚硫酸钠20μL作为电子供体,加酶量50μL;优化后的反应条件为反应温度35℃,反应时间1.5min。

溶氧对巨大芽孢杆菌发酵亚硝酸还原酶的影响

通过振荡间歇静置培养,研究不同静置时间对巨大芽孢杆菌发酵生产亚硝酸还原酶(nitrite reductase,NiR)的影响,并在适宜间歇静置条件下,分析细胞生长、基质消耗与NiR酶量的关系。结果表明,在发酵前12h每2h振荡培养间歇60min静置培养的条件下,20h发酵时所得亚硝酸盐还原酶的酶活最高;在每2h振荡培养间歇60min静置培养的条件下,周期为20h的该菌的发酵特性研究表明,菌体的细胞生长量及发酵液中的亚硝酸盐消耗量和葡萄糖消耗量均同步低于一直振荡培养的对照组,但发酵20h后所得亚硝酸还原酶的酶活为98.7U/mL,比一直振荡培养的对照组的酶活高出103.4%。

植物乳杆菌LB-B1产细菌素发酵条件的优化

为提高分离自新疆传统发酵乳制品酸马奶中植物乳杆菌LB—B1产细菌素的能力，对其产细菌素的发酵条件进行了优化，分别研究了培养条件（时问、温度、培养基初始pH值）和培养基成分对细菌素产量的影响。通过单因素试验和正交试验，确定产植物乳杆菌LB-B1的最佳培养条件为37℃静置培养20h，培养基初始pH值为6～7；最佳培养基成分组合为葡萄糖30g／L、胰蛋白胨10g／L、牛肉膏10g／L、酵母粉5g／L、无水乙酸钠5g／L、柠檬酸铵2g／L、磷酸氢二钾2g／L、硫酸镁0．28g／L、硫酸锰0．25g／L、吐温－804mL／L。在优化发酵条件下，植物乳杆菌LB－B1产细菌素高达10240AU／mL，提高了3倍。

元宝草悬浮细胞培养及其生长特性研究

研究了元宝草悬浮细胞生长及其金丝桃素类物质（金丝桃素和假金丝桃素）的代谢规律。悬浮培养细胞的生长周期为18d，其中4～10d是对数期。金丝桃素类物质在10d达到46．06μg／g（DW），其含量增加与细胞鲜质量增长相偶联。可溶性糖的消耗与细胞的生长以及金丝桃素类物质的代谢有着密切的关系，是影响细胞鲜质量和金丝桃素类物质增长的重要因素。

桦褐孔菌中多糖类和三萜类物质共提取研究

从水提取和有机溶剂提取2个方面,通过单因素试验,研究了提取温度、提取时间、料液比以及2种提取法提取顺序对桦褐孔菌中多糖类和三萜类共提取率的影响.结果表明,用水提再用异丙醇提得到的2种物质提取率较高.其中在初次水提料液比1∶40,温度80℃,时间2 h,多糖提取率为8.84%,三萜类提取率为1.71%.

茉莉酸甲酯(MeJA)对贯叶连翘悬浮细胞生长和贯叶金丝桃素产量的影响

培养基中添加100μmol·L-1MeJA后,贯叶连翘悬浮细胞生物量增加量和贯叶金丝桃素(HF)的产量分别是未经MeJA处理的1.3倍和1.73倍;培养3d时,培养基中添加100μmol·L-1MeJA能提高HF产量,是未经MeJA处理的2.4倍。

生物质降解菌系中GH11家族耐热木聚糖酶基因的克隆与鉴定

以玉米芯粉为基质富集培养牛粪中生物质降解菌系,提取该降解菌系的宏基因组DNA,并以其为模板,通过简并引物PCR扩增出200bp左右的木聚糖酶基因片段,选择与耐热木聚糖酶相似性最高且丰度最高的基因序列,应用mTAIL-PCR扩增得到1 059bp的基因全长序列(xynHAD4),编码352个氨基酸,经序列比对分析,该木聚糖酶(XynHAD4)属于典型的GH11家族木聚糖酶,与来源于Dictyoglomus thermophilum的xylanase229B相似度为93%。将xynHAD4连接于表达载体pET22b(+),在E.coli BL21中成功得到表达,表达产物经纯化后,测定其分子质量约为36kDa,最适作用温度和pH分别为80℃和6.0,该酶在90℃保温1h,残余酶活为72%,pH作用范围较广,在pH4.0保存1h,残余酶活为82%,可见,XynHAD4属于耐热木聚糖酶,并且在酸性条件下可保持较高稳定性,在食品、饲料等领域具有潜在的应用价值。

γ-氨基丁酸分批发酵动力学的研究

对短乳杆菌产γ-氨基丁酸(GABA)的分批发酵动力学进行了研究。基于Logistic方程和Luedeking-Piret方程分别建立了菌体生长、产物合成及底物(葡萄糖、L-谷氨酸钠)消耗的动力学模型,并利用1stopt软件对模型参数进行非线性曲线拟合。对实验值与模型值进行了验证比较,结果该组模型能较好的拟合发酵过程。进一步用该模型对发酵过程进行分析。

酸性电解水批式处理对玉米秸秆半纤维素降解的影响

考察了以酸性电解水为反应介质,不同预处理条件下玉米秸秆半纤维素的降解情况。结果发现酸性电解水高温(160℃~200℃)处理条件下,半纤维素的降解效果明显,酸性电解水的pH值越低,半纤维素的去除率越高;优化处理条件后,确定最佳处理条件为:预处理温度180℃、时间10min、液固比为30∶1、酸性电解水pH值为2.0,在此条件下半纤维素的去除率为92.4%,此时木糖和低聚木糖的总得率为86.7%。

四种蛋白酶酶解对桦褐孔菌多糖的α-葡萄糖苷酶抑制活性影响

为了探究桦褐孔菌高温水提粗多糖(High temperature water-extracted polysaccharides,HIOP)中结合蛋白质组成键型与其α-葡萄糖苷酶抑制活性的关系,用4种不同的蛋白酶对HIOP进行酶解,测定蛋白酶水解后对其分子量组成及α-葡萄糖苷酶抑制活性的影响。结果显示,与原HIOP在10μg/m L时的α-葡萄糖苷酶抑制率83.72%相比,经中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解处理后的HIOP,α-葡萄糖苷酶抑制率最低分别为53%、65%、6.5%和7.1%,其中胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解处理显著降低了HIOP的α-葡萄糖苷酶抑制活性,表明HIOP中结合蛋白在HIOP的α-葡萄糖苷酶抑制活性中有一定作用。结合四种蛋白酶的作用效果与作用键型推测,HIOP中结合蛋白的活性中心可能含有芳香族氨基酸、酸性氨基酸、赖氨酸或精氨酸,破坏此类肽键,α-葡萄糖苷酶抑制活性明显降低,而四种蛋白酶酶解均未使HIOP分子量发生较大改变,说明四种蛋白酶酶解仅影响了HIOP与α-葡萄糖苷酶活性中心结合的部位。

黑曲霉S-05产柚苷酶的纯化与分离

从黑曲霉S-05发酵液中提纯了柚苷酶并分离为α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶。经过(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-25脱盐、Cellulose DE-52、Sephadex G-100四步,得到电泳纯的α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶,SDS-PAGE电泳测得α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶分子量分别为66 ku、102 ku。纯化后的α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶酶比活分别为859.21U/mg和947.37U/mg,酶活回收率分别为43.77%和33.33%。

超临界CO_2体系下酵母转化茄尼醇生成辅酶Q_(10)的营养条件

研究了在超临界CO2流体条件下不同营养物质的添加对粟酒裂殖酵母转化茄尼醇生产辅酶Q10的影响。通过改变超临界CO2流体中添加的营养物质种类以及添加量等条件,确定对酵母细胞生存影响较小并显著促进辅酶Q10合成的超临界CO2体系营养条件为:培养基的添加可显著提高辅酶Q10的生成量,其中K+浓度为0.02mol/mL,Mg2+浓度为0.004mol/mL,添加底物茄尼醇浓度为22.5mg/mL时,辅酶Q10产量最高,使得超临界CO2流体中辅酶Q10的产量提高174%。研究结果表明,通过优化培养基组成,可显著提高酵母细胞生成辅酶Q10的能力。

酵母转化茄尼醇生成辅酶Q_(10)的超临界CO_2体系条件

超临界CO2作为非水相介质对酵母转化茄尼醇生成辅酶Q10的底物和产物具有良好的溶解作用,但对微生物的存在会产生一定影响,选择合适的超临界CO2体系条件有利于辅酶Q10产量的提高。通过研究超临界CO2流体的压强、酵母细胞在超临界CO2流体中的反应时间、添加介质种类以及添加量等条件对粟酒裂殖酵母细胞活性和辅酶Q10产量的影响,确定对酵母细胞生存影响较小并显著促进辅酶Q10生产的超临界CO2体系条件为:超临界CO2压强为10.5 MPa,反应时间为16 h,向菌体中添加菌体湿重3倍的培养基,超临界CO2流体中辅酶Q10的产量达到55.71μg/mL。比液体深层发酵培养辅酶Q10产量提高97.5%。研究结果表明,通过优化酵母转化茄尼醇生成辅酶Q10的超临界CO2体系条件,可以显著提高酵母细胞生成辅酶Q10的能力。

用于文库筛选的植物瞬时表达载体的构建

利用绿色荧光蛋白基因可以指示目的基因表达,因此本实验构建了含有稀有酶切位点的植物瞬时表达载体,并且目的基因和绿色荧光蛋白基因有各自独立的表达框架。目前在大果型的离体番茄果实上尚未有进行EGFP的瞬时表达研究,本实验利用农杆菌介导的瞬时表达技术在烟草叶片和大果型离体番茄果实上瞬时表达了绿色荧光蛋白,验证了载体进行瞬时表达的可行性。

高产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及鉴定

利用MRS选择性培养基,从酸菜、泡菜等中分离出6株产γ-氨基丁酸的乳酸菌,经过复筛得到γ-氨基丁酸高产菌株F13、F14和F15。这3株菌在含有10g/L谷氨酸钠的发酵培养基中33℃培养60h,发酵液中γ-氨基丁酸含量分别达到5.72g/L、5.01g/L和4.98g/L。根据乳酸菌的形态特征和生理生化特征,初步鉴定这3株菌分别为短乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌。

DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌多糖的工艺优化

为了能高效快速的分离纯化桦褐孔菌子实体多糖,使用DEAE-52纤维素静态法,分别研究了静态吸附过程中多糖的样品浓度、吸附时间、吸附温度和吸附振荡转速等因素对多糖吸附量的影响及解吸过程中洗脱时间和洗脱液量对多糖解吸量的影响,确定了多糖分离纯化优化工艺条件。结果表明:多糖浓度为40 mg/m L时,在30℃,120 r/min转速下吸附处理90 min,此时DEAE-52纤维素对多糖吸附效果最好。而分别以12倍体积的去离子水洗脱90 min后,采用11倍体积的0.2 mol/L Na Cl溶液洗脱60 min时,能达到最好的解吸效果,其中去离子水洗脱多糖浓度为0.56 mg/m L,0.2 mol/L Na Cl洗脱多糖浓度为0.38 mg/m L。静态洗脱出的两种多糖组分均为分子量均一分布的多糖组分,与DEAE-52纤维素柱层析分离效果一致。因此采用DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌子实体多糖是可行的。