多模式镇痛的临床研究现状

多模式镇痛主要是采用不同作用机制的药物,如阿片类药、COX2抑制剂等,不同镇痛方法,如硬膜外阻滞及其他周围神经阻滞等,对产生术后疼痛机制的不同层面、不同靶位予以阻滞,以期实现平衡镇痛,减少神经、内分泌、免疫系统等不利影响,有助于内环境的稳定和术后患者的康复。多模式镇痛是目前控制急性术后疼痛选用的主要镇痛模式之一,广泛用于胸部、腹部、四肢手术,并取得了良好的效果。

核电厂安全壳结构的内压承载能力计算分析

安全壳结构的承载能力计算分析需要考虑钢绞线和混凝土的力学特性。采用正交异性膜单元模拟正交方向的预应力钢束,并分析预应力损失随时间的变化,对服役的安全壳进行有限元分析,提出安全壳结构的分析步骤。以某核电厂安全壳结构的分析与试验数据对比,证明了方法的可行性,并对安全壳进行了极限承载力分析。

ompL17基因酵母双杂交系统的构建及筛选鉴定

目的寻找钩体致病的信号传导通路,分析ompl17基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白。方法分别构建诱饵质粒载体和血管内皮细胞cDNA文库,通过顺序性转染转入酵母细胞中,然后进行初步的鉴定。结果PCR和酶切分析证实构建成功了诱饵质粒载体和血管内皮细胞cDNA文库。结论成功构建酵母双杂交系统为发现ompl17基因表达产物在体内相互作用的靶蛋白奠定了基础。

MMA对肺叶切除术后患者的镇痛效果观察

目的评价多模式镇痛(MMA)对肺叶切除术后患者的镇痛效果。方法 60例肺叶切除患者随机分为MMA组(M组)和对照组(C组),各30例。两组手术、麻醉方法等相同。M组术前采用0.375%左旋布比卡因5ml,阻滞切口部位肋间神经3条,同时静注帕瑞昔布40 mg,关胸前由手术医生在直视下用相同剂量、浓度的左旋布比卡因再次阻滞这3条神经;C组注射安慰剂(NS)。术后两组均启用自控镇痛泵(PCA),其药物组成及背景剂量、锁定时间等两组相同。记录术中BP、HR变化,术后采用VAS、Ramsay镇静评分评价镇痛、镇静效果,记录阿片类药物剂量、不良反应、生活质量。结果 M组术中BP、HR较C组明显减低、减慢,术后M组VAS、Ramsay镇静评分及芬太尼用量均较C组明显减少(P均<0.05)。两组不良反应的发生率近似(P>0.05)。结论肺叶切除术后患者MMA镇痛、镇静效果好、安全。

赖型钩体毒力相关基因OmpL17表达纯化及其产物的趋化作用

目的研究钩体017株外膜蛋白新基因ompl17与钩体肺大出血的相关性。方法提取钩端螺旋体017株基因组DNA,扩增出ompL17基因,与表达载体pGEX-4T-1重组,诱导表达OMPL17蛋白,然后纯化得到活性表达产物,并建血管基底膜,分析该产物的趋化活性。结果SDS-PAGE和Western-blot分析证实诱导表达并纯化得到OMPL17蛋白,趋化作用分析证明该基因表达产物具有趋化活性。结论成功表达纯化出ompL17基因的蛋白,观察到该基因表达产物具有趋化活性,为赖型钩体的分子机制的进一步阐明奠定了基础。

核电厂安全壳结构变位测量新技术研究——激光自动变位测量系统的研究

核电厂安全壳结构是核反应堆重要的外围防护结构,在压力作用下,对安全壳结构筒壁的位移的监测,通常采用壳内张线法和壳外铅垂线法。此次创新是以传统的铅垂线位移量传递法为基础,采用非接触式激光测微传感器,配以研制开发的采集控制软件,实现安全壳筒壁位移的连续实时监控。通过现场的实际验证,该采集系统达到了智能、高效、高精确度的目的。

赖型钩体毒力相关基因ompL17的重组表达以及体外不同温度下的表达研究

目的:观察ompL17基因表达产物的免疫原性以及该表达蛋白在动物模型中的分布情况。方法:提取钩端螺旋体017株基因组DNA,扩增出ompL17基因,与表达载体pGEX-4T-1重组,诱导表达OMPL17蛋白,分析该基因在017株中体外不同温度的表达情况。结果:PCR和酶切分析证实构建成功了表达载体,SDS-PAGE分析证实诱导表达出OmpL17蛋白;体外不同温度下发现该基因不表达蛋白。结论:成功表达出ompL17基因的蛋白,体外不同温度未发现该蛋白的表达,为赖型钩体的分子机制的阐明奠定了基础。

结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的高效表达及免疫原性研究

目的高效表达结核分枝杆菌6kDa早期分泌性抗原靶(6kDaearlysecretoryantigenictarget,ESAT6)和培养滤液蛋白10(culturefiltrateprotein10,CFP10)的融合蛋白,通过免疫动物,获得CFP10-ESAT6融合蛋白的多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板,扩增cfp10-esat6融合基因,将其与表达质粒pET32a(+)构建成重组质粒pET-cfp10-esat6。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达带组氨酸标签的融合蛋白,经亲和层析得到纯化CFP10-ESAT6蛋白。用该蛋白免疫成年家兔,获得的抗CFP10-ESAT6融合蛋白的多克隆抗体,作Western-blot和ELISA分析。结果重组质粒pET-cfp10-esat6构建成功,融合蛋白CFP10-ESAT6大量表达,多克隆抗体制备成功(1∶106)。结论成功构建并表达了CFP10-ESAT6融合蛋白,制备了大量的CFP10-ESAT6融合蛋白的多克隆抗体,为发展新型结核病疫苗和临床血清学检测奠定了实验基础。

赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22基因的克隆分析及蛋白表达

目的分析赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22的结构特征,并对其进行克隆表达。方法分别以问号状赖型钩体017株、56601株及双曲状钩体PatocI株基因组为模板PCR扩增目的基因。构建Loa22基因与质粒pGEX-4T-1的重组原核表达质粒,克隆筛选并测序。利用Bioedit、Dnaman、PSIPRED、NCBI及SignaIP等对其结构进行分析。最后在大肠杆菌JM109中诱导表达目的蛋白。结果不同毒力赖型钩体均能扩增出约600bp的片段,而PatocI株则未能扩增出目的片段;PCR、双酶切及测序证实pGEX-Loa22构建成功:分析显示不同赖型钩体的Loa22的同源性很高,C末端都具有同OmpA一致的保守序列及肽聚糖相关基序,都有信号肽序列;表达产物经SDS-PAGE检测证明是目的蛋白。结论赖型钩体具有编码OmpA膜蛋白的Loa22基因,可能与赖型钩体毒力和免疫原性存在某种相关性。

四川地区结核分枝杆菌喹诺酮耐药基因突变研究

目的 研究结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物的分子机制 ,探索四川地区耐喹诺酮结核分枝杆菌临床分离株的耐药基因突变特征。方法 采用绝对浓度法检测结核分枝杆菌临床分离株的最小抑菌浓度 (MIC) ,再通过聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR- SSCP)和直接测序检测结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物临床分离株 gyr A耐药决定区 (QRDR)突变 ,并和标准株 H 37Rv比较。结果 6 8株临床分离株中 ,14株喹诺酮药物敏感株和 8株低耐药株未发现 gyr A耐药决定区基因突变 ,2 5株高耐药株、11株低耐药株和 10株药物敏感株检测到 gyr A基因突变 ,高耐药株突变率为 10 0 % ,低耐药株突变率为 5 8% ,敏感株突变率为 4 2 % ,总的突变率为 6 8%。根据 SSCP条带 ,gyr A突变可分成 4种类型 ,测序发现分别为 Ser95 Thr、Asp94 Gly、Ala90 Val、Ala83Val突变。结论 结核分枝杆菌耐喹诺酮与 gyr A基因突变密切相关 ,gyr A基因突变是耐喹诺酮结核分枝杆菌耐药性的主要分子机制。

葛根素(普乐林)对SHRsp脑卒中预防和治疗作用的研究

目的：研究普乐林注射液对卒中型自发性高血压大鼠（ＳＨＲｓｐ）脑卒中的预防和治疗作用。材料和方法：将８０只８周龄（雌雄各半）ＳＨＲｓｐ随机分为普乐林 ２００ ｍｇ／ｋｇ，１００ｍｇ／ｋｇ及对照组，饮 １． ０％～１． ５％ ＮａＣｌ盐水。实验一：在高盐负荷开始即灌胃治疗，８周后断头处死，取颈动脉及脑组织做电镜检查。取脑组织光镜下检查脑卒中发生率。实验二：脑卒中发生后开始灌胃治疗，连续１０天。记录大鼠脑卒中临床表现分数及存活天数。结果：实验一：治疗后普乐林 ２００ ｍｇ／ｋｇ， １００ ｍｇ／ｋｇ组颈动脉电镜扫描和脑组织电镜透射观察组织病理结果均好于对照组；光镜下脑卒中检出率（４１．７％，５０．０％）也低于对照组（７６．９％）。实验二：治疗前脑卒中临床表现分数三组间相似，治疗后普乐林 ２００ ｍｇ／ｋｇ， １００ ｍｇ／ｋｇ组分数（０． ９５±１． ３９，２．４１±１．６５）均明显低于对照组（３．７７±０．２７）（Ｐ＜０．０１～０． ００１）。治疗期存活天数普乐林 ２００ ｍｓ／ｋｇ组（９． ７３±１．０３）及１００ ｍｇ／ｋｇ组（７．９３±２．６４）均长于对照组（５．３６±４．４５）（Ｐ＜０． ０５， Ｐ＞０． ０５）。脑与心脏重量?

赖型钩端螺旋体外膜蛋白基因结构比较性研究

用 PCR方法扩增不同毒力赖型钩体 Omp L1基因片段 ,进行序列测定 ,用相关软件比较分析核苷酸序列、蛋白质二级结构以及限制性内切酶谱 .不同毒力赖型钩体均能扩增出960 bp的片段 ,非致病 Patoc株未能扩出相应片段 ,中国赖型参考株 Omp L1序列 ( Gene BankNo.AF2 50 31 8)与流感伤寒型相应序列比较有 98个核苷酸差异 ,同源性为 89.8% ,二级结构预测和氨基酸疏水图显示变异主要发生在跨膜蛋白的膜外区 ,其膜上成分并未明显变化 ;赖型强弱毒力株之间 Omp L1序列仅 8个核苷酸差异 ,6个氨基酸变异 ,且集中在 C末端 2 92 -30 5位氨基酸之间 ;限制性内切酶谱分析显示赖型 Omp L1基因位点发生特异变化 .结果提示 ,外膜蛋白 Omp L1基因是钩体保守性较强的致病标记 ;赖型钩体减毒致弱可能与 Omp

中国强毒力赖型钩端螺旋体外膜蛋白基因的克隆表达及对大肠杆菌活力的影响

目的 :构建表达致病性赖型 0 17株钩端螺旋体OmpL1外膜蛋白的真核 -原核穿梭表达载体 ,并在原核细胞中表达出目的蛋白。方法 :用PCR方法从 0 17株钩体基因组中钓出OmpL1蛋白基因 ,酶切纯化后与质粒pBK -CMV连接 ,通过电泳、限制性内切酶分析及PCR鉴定筛选出正确重组质粒。重组质粒在大肠杆菌中诱导表达后提取总蛋白以SDS -PAGE检测表达情况 ,同时监测目的蛋白表达前后各时段宿主菌OD6 0 0值的变化。结果 :筛选出 5株带重组质粒菌 ,其中有 4株能在大肠杆菌中表达 37kD的特异蛋白 ,而且随着该外源蛋白的表达 ,宿主菌生长各时段的OD6 0 0值下降。结论 :成功地构建了钩体OmpL1蛋白的穿梭表达质粒 ,并在大肠杆菌中表达出OmpL1融合蛋白 ,该异源蛋白的表达导致宿主菌的活力降低。本工作为OmpL1蛋白用于钩体病诊断。

结核分枝杆菌cfp10-esat6融合基因重组穿梭质粒的构建及其在BCG中的融合与分泌表达研究

通过SOE法(重叠延伸,Genesplicingbyoverlapextension),扩增cfp10-esat6融合基因,与穿梭整合质粒pMV361构建成重组质粒。另将BCGα抗原(α-Ag)信号肽序列与上述重组质粒构建成另一重组质粒。将两种重组质粒分别导入BCG菌构建融合型重组卡介苗和分泌型重组卡介苗,热诱导后分析其表达产物。本研究成功构建并表达了CFP10-ESAT6融合及分泌表达的重组BCG,为发展新型结核病疫苗打下了一定的基础。

表达结核杆菌ESAT-6基因重组耻垢分枝杆菌的构建及其功能研究

目的构建表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌并对其免疫功能进行研究。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌ESAT-6基因,构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV-ESAT6,经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后,用电穿孔法将重组质粒转染到耻垢分枝杆菌mc2155中。以SDS-PAGE检测ESAT-6蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达。以重组耻垢分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞ANA-1,半定量RT-PCR检测ANA-1细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平,裂解巨噬细胞,计数胞内存活细菌数。结果重组耻垢分枝杆菌构建成功,经热诱导后可以表达相对分子质量约为6000的蛋白,与预期值一致。重组耻垢分枝杆菌能够诱导ANA-1细胞活化表达iNOS,并增强巨噬细胞的杀伤活性,重组耻垢分枝杆菌在胞内存活数低于对照组(P<0.05)。结论表达结核分枝杆菌ESAT-6基因的重组耻垢分枝杆菌具有免疫原性,为构建新型结核疫苗提供了实验基础。

结核分枝杆菌免疫优势抗原ESAT-6真核表达载体的构建及蛋白表达的鉴定

目的 克隆并表达结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT 6的编码基因 ,为研究其免疫功能奠定基础。方法 以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板 ,用PCR对ESAT 6基因进行扩增 ,扩增产物克隆到真核表达载体pcDNA3 1/Zeo( +)中。对重组表达载体pcDNA ESAT 6进行酶切、PCR及测序鉴定。经鉴定无误的重组质粒用DEAE 葡聚糖法转染COS 7细胞 4 8h后 ,用Trizol法提取转染细胞总RNA进行RT PCR鉴定。结果 重组质粒pcDNA ESAT 6构建成功 ,并能在COS 7细胞中有效表达。结论 结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT 6真核重组表达质粒pcDNA ESAT 6构建成功 ,为进一步研究ESAT 6和CFP 10的免疫原性。

结核分枝杆菌抗原蛋白ESAT-6基因重组穿梭质粒的构建与鉴定

目的 构建分泌性表达结核分枝杆菌抗原蛋白 ESAT- 6的重组卡介苗。方法 分别以卡介苗(BCG)和结核分枝杆菌 H37Rv株基因组 DNA为模板 ,通过 PCR扩增得到约 117bp的 BCGα抗原 (α- Ag)信号肽序列和 2 85 bp的结核杆菌 esat- 6基因序列。将 esat- 6基因与大肠杆菌 -卡介苗穿梭质粒载体 p MV2 6 1重组 ,得到重组质粒 p ME。再将 BCGα- Ag信号肽序列克隆至 p ME中 ,得到重组质粒 p SME。结果 质粒 p SME用双酶切和 PCR扩增鉴定证实 ,克隆基因 α- Ag信号肽序列和 esat- 6正确插入载体 p MV2 6 1。结论 重组质粒 p SME可望在 BCG中分泌性表达结核分枝杆菌的免疫保护性抗原蛋白 ESAT- 6 ,该质粒的构建成功为改造卡介苗。