植物检疫专业农药学原理课程教学模式改革与实践

农药学原理是植物检疫专业的专业基础课。结合培养方案和课程特点,通过以学生为主导的多样化教学手段、及时更新农药学专业知识及研究进展、建立更科学的教学评价体系等措施,充分调动学生学习的积极主动性,同时引导学生查阅最新农药学领域的文献,课堂进行拓展讲授,并让学生分组讨论,培养学生逻辑思维和归纳总结的能力。通过对本门课程的教学内容、教学模式及考核方式等方面的改革及实践,与往年传统教学模式对比分析,取得了较好的教学效果。

梨树内生细菌LP-5的鉴定及其促生作用研究

从梨树木质部分离到1株具有强烈抑菌活性的内生细菌LP-5,通过形态观察、生理生化测定、16SrDNA序列分析及特异基因片段扩增,将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。盆栽试验结果表明,该菌株可明显促进黄瓜幼苗的生长,其20倍稀释发酵液处理黄瓜种子,可使其胚根长度增长36.32%。用同稀释倍数的发酵液处理黄瓜幼苗,可使幼苗株高、茎粗、干重分别提高9.06%、14.67%和24.14%。高效液相色谱分析表明:该菌株具有促生作用可能是因为产生植物激素IAA。

枯萎病菌的PCR-RFLP分子检测和早期诊断

采用自行设计的、能对镰刀菌18srDNA进行特异性扩增的1对引物,利用PCR-RFLP对尖孢镰刀菌以不同方式侵染的植株进行跟踪检测。结果表明,应用PCR-RFLP检测程序可检测出处于侵染初期和潜育期的枯萎病菌,说明PCR-RFLP能够快速、灵敏、准确地对枯萎病进行早期诊断。

4种镰刀菌基因组DNA提取方法的比较研究

[目的]寻找一种简便、高效的基因组DNA提取方法,为进一步开展镰刀菌等丝状真菌的分子生物学研究提供科学基础。[方法]采用改良的CTABS、DS、高盐沉淀和SDS-CTAB 4种方法提取8个镰刀菌菌株的基因组DNA,并对其进行质量测定及PCR分析,比较不同提取方法的效果。[结果]4种提取方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为SDS、SDS-CTAB法、高盐沉淀法和CTAB法。其中采用SDS法可成功提取到所有供试菌株基因组DNA,而且DNA浓度和纯度均较高,RNA及其他杂质污染少。而高盐沉淀法和CTAB法提取到的基因组DNA不够完整或浓度较低。[结论]SDS法更适合于镰刀菌等丝状真菌基因组DNA的提取。

镰刀菌rDNA ITS序列的克隆及序列分析

【研究目的】为了利用rDNA ITS区的遗传变异的特点,为镰刀菌种内及种间的分类鉴定提供一定的分子技术辅助手段,【方法】试验以PMD18-T为载体,对10个不同镰刀菌菌株的rDNA的ITS区及28S部分片段进行了克隆、测序,用DNAMAN4.0软件进行序列分析,分析了菌株间的同源性及遗传距离,并建立了分子系统进化树。【结果】试验结果表明:所测各菌种间的亲缘关系在92.2%-99.9%之间,反映了种间较大的遗传差异,这与形态学上把它们鉴定为不同的种相吻合,而从不同地区、不同寄主上分离的同一菌种的不同专化型,其同源性高达96.6%-100%,说明同一菌种的不同专化型,在rDNA基因序列上碱基差异甚微,同源性很高。【结论】利用ITS对镰刀菌进行种间的分类鉴定是稳定可行的,但对于种内及专化型的鉴定存在困难。

镰刀菌基因组DNA的抽提及特异片段的扩增分析

实验运用改良的SDS碱裂解法对30株镰刀菌基因组DNA进行了抽提，并对rDNA ITS区域进行了特异性扩增。结果表明：被测菌株DNA片段大于20 kb．其OD260，／OD280大都在1．6～2．0之间，可见用改进的方法抽提的基因组DNA比较完整，纯度较高。实验采用对镰刀菌属有特异性的寡聚核苷酸为引物，对镰刀菌基因组rDNA基因进行扩增，该引物可以扩增出18S、28S部分片段及ITS区域，电泳检测其片段大小在1 041～1 135 bp之间，且特异性良好，为进一步进行RFLP及核苷酸序列分析奠定了基础。

杀菌剂对盾壳霉和核盘菌的毒力及选择性研究

为了选择可与盾壳霉相结合共同防治菌核病的有效化学药剂，采用菌落直径法比较了9种常用杀菌剂对盾壳霉和核盘菌的毒力差异。结果表明，盾壳霉对多菌灵、菌核净、腐霉利和百菌清高度敏感，平均EC50为0．11～3．04mg·kg^-1；时异菌脲、乙烯菌核利和乙霉威中度敏感，平均EC50为11．83～14．17mg·kg^-1；对代森锰锌和福美双敏感性最低，平均EC50为49．88～53．39mg·kg^-1。核盘菌对多菌灵、菌核净、乙烯菌核利、福美双和腐霉利高度敏感，平均EC50为0．08～2．07mg·kg^-1；对乙霉威、异菌脲和百菌清中度敏感，平均EC50为6．66～15．33mg·kg^-1；而对代森锰锌最不敏感，平均EC10为33．57mg·kg^-1。福美双和乙烯菌核利对盾壳霉和核盘菌的选择性指数较大。分别为32．28和12．71，比较适合与盾壳霉搭配共同控制菌核病。

梨树内生拮抗细菌的筛选及发酵条件的研究

以梨黑斑病菌(Alternaria alternata)为指示菌,从梨树木质部分离的8株内生芽孢杆菌中筛选出一株抑菌效果最佳的拮抗菌株LP5。为明确该菌株在发酵生产中的最佳营养组分及发酵条件,运用单因素试验和正交试验方法测定了不同因素下LP5菌株发酵液的OD600值及其抑菌作用。研究结果表明:最有利于菌体生长及抗菌物质积累的营养条件是以含蔗糖1.5%,蛋白胨1.0%,酵母粉0.5%,NaCl 0.5%的液体培养液,最适发酵条件为30℃,pH 7.0,发酵培养48 h^72 h。

甲基营养型芽胞杆菌G-1抗菌肽的分离及抑菌作用研究

为探索甲基营养型芽胞杆菌Bacillus methylotrophicus G-1抑制番茄灰霉病菌的作用机制,采用HPLC、LC-MS等对其分泌的抗菌肽进行分离鉴定,通过扫描电镜观测抗菌肽对番茄灰霉病菌菌丝形态影响,借助RNA-seq研究抗菌肽处理番茄灰霉病菌3、5 d后的差异表达基因。研究结果表明:甲基营养型芽胞杆菌G-1产生的抗菌肽主要为伊枯草菌素A。经菌株G-1抗菌肽处理后,番茄灰霉病菌菌丝生长异常,菌体畸形肿胀,内溶物外渗。基因差异表达分析表明,有40个基因在2个时期均差异表达。GO、KEGG富集分析发现,与萜烯合酶、氨基酸跨膜转运相关的15个基因在各时期均上调表达,与细胞表面受体信号通路、氧化还原酶、果胶裂解酶、单加氧酶等有关的25个基因在各时期均下调表达,其中编码琥珀脱氢酶(SDH)的Bcin02g06840基因及编码3-羟基-3-甲基戊二酸辅酶A还原酶(HMGR)的Bcin04g04450基因表达量显著下调。经q RT-PCR验证,8个差异表达基因的表达模式变化与转录组测序分析结果一致。研究表明菌株G-1抗菌肽可能通过抑制番茄灰霉病菌细胞膜组分中SDH、HMGR的合成抑制菌丝及孢子的生长。

LP3,LP5杆菌的防病作用及其对梨幼苗的促生效应

测定了内生芽孢杆菌LP3,LP5菌株对梨采收后果黑斑病的预防和治疗效果,并通过盆栽试验分析了这2个菌株对梨幼苗的促生效应。结果表明,LP3,LP5对9种病原菌的抑制率分别在42.3%～87.3%和45.6%～92.6%之间;其对梨黑斑病兼具预防和治疗作用,经LP3,LP5发酵液处理的梨果接病菌5 d后,防效分别为81.53%,88.92%;LP3,LP5处理病果3 d后,病斑扩展抑制率分别达65.64%和72.48%;LP3,LP5能促进梨树幼苗的生长,经这2个菌株处理的梨树幼苗初生枝长度分别比对照提高了50.48%和21.83%,鲜质量分别比对照增加35.67%,31.16%,干质量分别比对照增加29.24%,20.75%。

芽孢杆菌LP-3抗菌物质的初分离及抑菌活性测定

内生芽孢杆菌LP-3对多种植物真菌具有抑制作用,为分析其分泌的抗菌物质的抑菌活性,分别采用5种有机溶剂对抑菌物质进行萃取,比较了抗菌粗提物与两种杀菌剂对梨黑斑病菌的抑菌效果,测定了粗提物对9种植物病原菌的毒力,结果表明,甲醇萃取物对梨黑斑病菌的抑制效果最佳,抑菌率可达68.4%,对病菌菌丝及孢子的EC50分别为1.18mg.L-1和3.61mg.L-1,介于腐霉利和异菌脲之间,显示出良好的抑菌活性,而且该物质抗菌谱广,对9种植物病原菌的EC50在1.18mg.L-1～67.93mg.L-1之间。

一种新型核辐射防护材料的设计与应用研究

根据物质与放射性射线相互作用的原理,在大量理论计算的基础上,设计了几种核辐射防护材料的配方,并分别选择几种不同的工艺,加工了一系列样品。在对样品进行辐射防护性能和各种机械性能试验、检测和分析的基础上,研制出了一种采用辐射交联加工,防护性能和机械性能均较好的新型核辐射防护材料,并对其应用范围进行了探讨。

山西省灰霉菌对啶酰菌胺的敏感性测定

啶酰菌胺是一种较新的用于防治灰霉菌的杀菌剂,国内鲜有灰霉菌对该杀菌剂的抗性报道。为了明确山西省灰霉菌对啶酰菌胺敏感性情况,通过菌落直径法测定了山西省8个地区139株灰霉菌对该杀菌剂的敏感性。结果表明,所采菌株中137株为相对敏感菌株,2株表现为低抗,敏感菌株占98%以上,说明山西省灰霉菌对啶酰菌胺具有较高的敏感性,但啶酰菌胺具有中度抗性风险,且灰霉菌极易产生抗药性,故有必要做好抗性预防工作。

生防菌成团泛菌XM2抗菌蛋白抗真菌特性研究

以成团泛菌XM2为研究对象,采用硫酸铵分级沉淀和生长速率法对其次级代谢产物中抗菌蛋白的最佳硫酸铵沉淀质量浓度和抗真菌特性进行了研究。结果表明,该抗菌蛋白最佳硫酸铵沉淀质量浓度为209.4 g·L-1;具有较好的抑菌广谱性,对梨黑斑病菌、辣椒疫病菌、西瓜枯萎病病菌以及辣椒枯萎病菌具有90%以上的抑菌活性;在温度低于80℃、pH值为4~9.5、紫外照射24 h以及蛋白酶K和胰蛋白酶处理后均可保持85%以上的抑菌活性。

BHT对6种植物病原真菌抑制作用的研究

为测定2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）的抑菌活性,采用生长速率法、悬滴法分别测定了该物质对6种植物病原真菌菌丝生长及孢子萌发的抑制作用。结果表明：该物质对所测6种病原真菌均具有一定的抑制作用,抑制菌丝生长的EC50在129.18-1113.85 mg·L^-1之间,其中对小麦赤霉病菌的抑制作用最强,EC50为129.18 mg·L^-1;抑制孢子萌发的EC50在160.51-356.03 mg·L^-1之间,其中对小麦叶枯的抑制率最高,EC50为160.51 mg·L^-1。与4种常用药剂对小麦赤霉及番茄早疫病菌菌丝的抑制作用比较,BHT的抑制中浓度相对较大。

黑胡椒精油抑菌活性研究

为测定黑胡椒精油的抑菌活性,采用生长速率法测定了4种溶剂提取出的黑胡椒精油对5种植物病原真菌菌丝生长的抑制作用。结果表明:提取物抑制菌丝生长的EC50在0.0128g·L-1～0.4090g·L-1之间;氯仿提取出的精油抑菌效果最好,抑制菌丝的EC50在0.0128g·L-1～0.1431g·L-1之间,其中对小麦赤霉病菌的抑制作用最强,抑制菌丝的EC50为0.0128g·L-1。综合表明黑胡椒精油具有较好的抑菌活性。

山西省忻州地区土壤镰刀菌(Fusarium)种类鉴定

在分析国内外镰刀菌属(FusariumLink)种类鉴定现状的基础上,将采自山西省忻州地区的164个土壤样品进行土壤分离培养及单孢分离纯化,得到16个有大孢子的镰刀菌菌株。运用培养性状和形态特征综合分析的方法对这16个菌株进行分类鉴定,鉴定结果为:16个菌株分别属于尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、茄病镰刀菌(F.solani)、雪腐镰刀菌(F.nivale)、蕉斑镰刀菌(F.stoveri)、胶孢镰刀菌(F.subglutinans)、弯角镰刀菌(F.camptoceras)、砖红镰刀菌(F.lateritium)。由于土壤是镰刀菌的大本营,因此分析土壤中镰刀菌的类型对镰刀菌病害的防治具有重要意义。

酸枣内生真菌的分离及抑菌活性测定

为明确酸枣内生真菌的多样性和抑菌活性特征,采用组织分离法对酸枣植物内生真菌进行了分离,并采用平板对峙法对从酸枣植株不同部位分离的内生真菌进行筛选,用生长速率法测定了内生真菌发酵液的抑菌活性.研究结果表明：从酸枣体内分离的40株内生真菌中,25株具有一定的抑菌活性,占分离总数的62.5％.其中,SZJ-2、SZJ-5和SZJ-8菌株对梨黑斑病菌等具有较强的抑制活性,抑菌率在30.6％～70.7％之间,表明所分离的3株内生真菌抑菌活性较好,且能产生多类抗菌物质,具有进一步开发应用的价值.

苹果树内生细菌G23的鉴定及其抑菌活性的研究

从苹果树木质部中分离到1株内生拮抗细菌G23,为明确其分类地位及抑菌活性,采用形态学、生理生化测定及16Sr DNA序列分析对其分类地位进行鉴定,并对其发酵液进行过滤及高温处理,分析其抗菌物质类型。研究结果表明:该菌株为1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该菌株发酵滤液对所测8种病原真菌的抑制率在63.4%～87.5%之间,发酵液经高温处理后活性降低,对8种病原菌的抑制率在57.4%～79.6%,因此推测该菌株可能分泌多种拮抗物质,包括对热不敏感的抗生素类,也包括对高温敏感的肽类及蛋白酶类。

金属材料点蚀缺陷的无损检测方法综述

点蚀缺陷会直接影响金属材料的使用性能与服役寿命,对其进行有效的无损检测与评估为预测疲劳寿命提供数据支撑具有重要意义。通过阐述点蚀缺陷的特点,指出了点蚀缺陷参数与疲劳性能之间的对应关系。通过介绍以漏磁、脉冲涡流和超声导波为主的点蚀缺陷无损检测基本原理,总结了这些方法用于点蚀缺陷无损检测的现状,对比分析了多种无损检测方法从理论模型、信号分析到工业应用的关键环节。通过分析点蚀缺陷检测时不同无损检测方法在信号处理方面的特殊性,指出了点蚀缺陷的可视化成像结合图像处理与信号分析是准确提取点蚀缺陷信息和定量化分析的关键基础问题,积极开展非接触式点蚀无损检测方法研究对提升检测精度与工业应用推广具有重要意义。