环氧化酶-2与p53在食管上皮癌变及鳞癌细胞中的表达

目的 探讨环氧化酶 (Cyclooxygenase,COX) 2基因表达在食管上皮癌变中的作用 ,为食管癌早期诊断及非类固醇类抗炎药 (Nonsteroidalanti inflammatorydrugs ,NSAIDs)在食管癌高发区进行化学预防提供理论依据。 方法 从食管癌高发区人群中采集食管上皮细胞标本 ;并收集该省食管癌高发区食管鳞癌及癌前病变新鲜标本 76例。采用间接免疫荧光标记技术 ,应用流式细胞仪对COX 2及 p5 3的表达进行定量检测。 结果 COX 2在食管脱落上皮细胞中的表达随异型性的增高而逐渐增加 ,在癌细胞组达最高 (FI=1.6 2± 0 .2 3) ;COX 2在高分化鳞癌组表达最高 (FI=2 .37± 0 .71) ,并随癌细胞分化程度的降低而显著减少。p5 3的表达在脱落上皮细胞中随细胞异型性的增高逐渐增多 ,在癌细胞组表达含量最高 (FI =2 .2 8± 0 .2 0 ) ;而在癌组织中的表达 ,则随分化程度的降低继续升高。对COX 2与p5 3表达的相关分析发现 ,从正常上皮至高分化鳞癌两者表达呈显著正相关 (r=0 .42 4,P =0 .0 0 2 ) ;而在不同分化程度癌中的表达 ,两者呈显著负相关 (r =- 0 .345 ,P =0 .0 31)。结论 COX 2及 p5 3表达在食管上皮早期癌变进程中异常增高 ,并有明显的协同作用。COX 2单独或与p5 3联合检测可以作为食管上皮早期癌变的分子标志。

COX-2抑制剂(阿司匹林)体外抑制人食管癌细胞的生长及诱导凋亡

目的:探讨COX-2抑制剂阿司匹林对食管癌细胞作用的生物学效应及可能的作用机制。方法:采用MTT法检测阿司匹林对Eca-109和TE-13细胞生长的抑制作用;FCM法检测细胞凋亡及COX-2、bcl-2,Bax基因蛋白的表达;用RIA法检测培养上清中PGE_2的含量。结果:阿司匹林可抑制2种细胞的生长,并随药物浓度升高及作用时间延长抑制率逐渐增高,而使这2株细胞产生的PGE_2量明显降低。阿司匹林还能使2株细胞的G_0/G_1期细胞显著增多,S期细胞显著减少(P＜0．01),并引起了明显的细胞凋亡。2株细胞随阿司匹林作用时间的增加,COX-2和bcl-2表达显著减少,而Bax表达显著增高,COX-2、bcl-2和Bax的表达呈显著相关性(P＜0．01)。结论:阿司匹林能抑制食管癌细胞的增殖并可诱导其凋亡,对食管癌进行化学预防或辅助治疗具有可能性。

新生血管、淋巴管在结直肠癌进展中的作用

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)、CD105、D2-40在结直肠癌中的表达及三者与结直肠癌患者临床病理因素之间的相关性。方法收集结直肠癌标本99例及30例癌旁正常组织,应用免疫组织化学检测VEGF、CD105、D2-40在以上标本中的表达,分析VEGF、CD105、D2-40的表达与结直肠癌患者临床病理因素的相关性,以及三者协同表达情况。结果 VEGF、CD105标记的微血管密度(MVD)值、D2-40标记的微淋巴管密度(LVD)值在癌组织中的表达均显著高于癌旁正常组织(P<0.05);其表达与是否有淋巴结转移均显著相关(P<0.05);结直肠癌中VEGF与CD105、CD105与D2-40的表达均呈显著正相关(P<0.05)。结论 VEGF、CD105、D2-40可能在结直肠癌的发生进展过程中发挥重要作用;其高表达对结直肠癌的恶性程度及预后评估有一定的应用价值。

凋亡相关基因bcl-2与bax在人食管鳞癌中的表达

目的:探讨bcl-2及bax基因在我国食管鳞癌中的表达特点,研究其在食管癌变中的可能作用. 方法:应用原位杂交技术、流式细胞术及免疫组化方法对81例食管鳞癌中bcl-2及bax基因的表达进行检测,并应用图像分析技术对原位杂交及免疫组化结果进行定量分析. 结果:bcl-2 mRNA在正常食管上皮无表达,在癌旁上皮主要是上皮近基底部细胞中呈阳性表达.食管鳞癌细胞胞质可见明显的bcl-2 mKNA表达.图像定量分析显示bcl-2 mRNA表达与分化程度有显著相关性(灰度值37.88±11.40 vs 23.03±8.71,19.90±4.33,6.60±3.36,P<0.05; 44.89±15.26 vs 23.03±8.71,19.90±4.33,6.60±3.36, P<0.05).Bcl-2蛋白在食管鳞癌中表达随癌组织的分化程度降低其表达显著增高并且在不同分化组间差异显著(F=8.738, P<0.01).Bax蛋白在食管鳞癌细胞中都有表达,但各组间均无显著性差异. 结论:在食管鳞癌中凋亡相关基因bcl-2,bax表达异常增高,尤其是抗凋亡基因bcl-2可能在食管鳞癌癌变及浸润过程中起着重要作用.

食管鳞癌及癌前病变中环氧化酶-2及p53表达上调

目的:探讨环氧化酶(Cyclooxygenase,COX)-2及p53在中国人食管上皮癌变中表达特点及其作用,为食管癌早期诊断及非类固醇类抗炎药(Nonsteroidalanti-inflammatorydrugs,NSAIDs)在食管癌高发区进行化学预防提供理论依据。方法:收集我省食管癌高发区食管癌及癌前病变新鲜标本76例,应用流式细胞术对COX-2及p53的表达进行定量检测。结果:COX-2及p53的表达在食管上皮细胞从正常到单纯增生以至高分化鳞癌演进过程中不断增高,COX-2在高分化鳞癌中表达量达最高(FI=2.37±0.71),而后随癌的分化程度降低而明显减少。但p53表达持续增高,在低分化癌中达最高(FI=2.70±0.82)。二者表达在从正常至高分化鳞癌中呈显著正相关(r=0.424,P=0.002),而在不同分化癌中表达,二者呈显著负相关(r=-0.345,P=0.031)。结论:COX-2及p53在食管上皮早期癌变进程中表达异常增高,并有明显的协同作用,对二者的早期定量检测有可能作为早期癌变的较好标志物。并有可能应用COX-2抑制剂对食管癌高发区进行化学预防。

乳腺癌组织中芳香化酶的表达

目的：探讨芳香化酶在乳腺癌中的表达特点及其与临床病理参数的关系。方法：采用免疫组织化学sP法，检测62例乳腺癌组织中芳香化酶的表达情况。结果：乳腺癌组织中芳香化酶阳性表达率为58．06％。芳香化酶在导管内癌局部浸润组的阳性率（80％）明显高于浸润性导管癌组（53．85％）；临床Ⅰ～Ⅱ期阳性率68．09％，Ⅲ～Ⅳ期阳性率26．67％，差异具有显著性（P〈0．05）。芳香化酶的表达与患者年龄、癌的左右乳分布及淋巴结转移没有显著性联系（P〉0．05）。结论：芳香化酶在乳腺癌中有过表达，可能参与或促进乳腺癌的形成。检测乳腺癌组织中芳香化酶的表达对乳腺癌的内分泌治疗有重要意义。

诱导型一氧化氮合酶在人食管鳞癌中的表达

目的:研究iNOS基因在我国食管鳞癌中的表达特点及iNOS基因表达与PCNA表达的关系,探讨iNOS基因在食管癌变中的可能作用.方法:应用原位杂交、流式细胞术对81例食管鳞癌中iNOS及PCNA基因的表达进行检测,并应用图像分析技术对原位杂交结果进行定量分析.结果:iNOSmRNA在正常食管鳞状上皮几乎无表达,在异型增生上皮近基底细胞有少量表达,而在鳞癌细胞中有明显阳性表达,癌细胞胞质呈棕黄色颗粒状.原位杂交定量分析及流式细胞术结果都显示:iNOS在正常食管上皮表达微量,在异型增生上皮明显增高,而在不同分化鳞癌中表达都较高,在低分化鳞癌中表达最高,组间差异非常显著(F=14.001,P<0.01).PCNA表达也是随分化程度的降低而明显增高,组间差异显著(F=20.393,P<0.01).且iNOS与PCNA表达呈显著正相关(r=0.292,P=0.009).结论:在食管鳞癌中iNOS基因表达显著增高,iNOS基因表达异常与食管上皮癌变密切相关.

四种抑癌基因在大肠癌中表达的研究概况

随着肿瘤分子生物学的研究进展,人们对肿瘤发生发展的过程有了更深入的了解。业已证明,正常细胞的生长受着原癌基因和抑癌基因的双重调节,两者之间存在着平衡关系。若这种平衡关系被破坏,便可导致肿瘤的发生。目前、国外对P53、APC、MCC和DCC基因及它们与大肠癌的关系已有不少研究,多数人认为这些抗癌基因的失活比原癌基因的激活更为重要。本文对这四种抑癌基因在大肠癌中的改变及意义做一简要复习。

环氧化酶-2在食管上皮癌变过程中的表达状况

目的 :探讨环氧化酶 (Cyclooxygenase ,COX) - 2基因在食管上皮癌变中的作用 ,为食管癌早期诊断及非类固醇抗炎药 (Nonsteroidalanti-inflammatorydrugs,NSAIDs)在食管癌高发区进行化学预防提供理论依据。方法 :自食管癌高发区人群采集食管上皮细胞标本 ;并收集本省食管癌高发区食管癌新鲜手术切除标本 5 1例。分别采用COX - 2mRNA原位杂交技术、免疫荧光标记技术及流式细胞仪 ,对COX - 2在食管上皮癌变过程中及不同分化的鳞癌组织中的表达进行检测。结果 :COX - 2在食管脱落上皮细胞中的表达随异型性的增高而逐渐增加 ,在可疑癌及癌细胞中达最高 (FI=1 .5 4± 0 .2 7) ;COX - 2在癌组织中的表达以高分化鳞癌中最高 (FI =2 .6 4± 0 .6 4) ,原位杂交显示其阳性率为 1 0 0 %。而在癌组织中的表达含量随分化程度的降低明显减少 ,在低分化鳞癌中FI=1 .5 1± 0 .2 7。原位杂交结果也是随分化程度的降低其阳性率显著减小 ,在低分化鳞癌为 38.5 %。研究还发现 ,在癌旁上皮中COX - 2含量及阳性率也较高 (FI =1 .73± 0 .35 ,阳性率 1 0 0 %) ,而切端上皮无COX - 2表达。组织免疫荧光检测其阳性率比原位杂交结果稍低。结论 :COX - 2表达在食管上皮早期癌变进程中异常增高 ,COX - 2检测可以作为食管上皮早期癌变?

苦参碱对MCF-7细胞Fas、VEGF及端粒酶活性的影响

目的研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞Fas、VEGF及端粒酶活性的影响。方法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,随机分组,实验组细胞加入苦参碱溶液,对照组或阴性对照组细胞加入等量培养液,阳性对照组细胞加入端粒酶抑制剂莪术油。采用倒置显微镜下观察细胞形态学变化;TRAP-ELISA法检测端粒酶活性;免疫细胞化学法检测MCF-7细胞中Fas、VEGF蛋白表达情况。结果苦参碱对乳腺癌细胞有明显的生长抑制作用和促凋亡作用;不同浓度苦参碱处理MCF-7细胞24、48、72h后,端粒酶活性随苦参碱浓度增加和作用时间延长而逐渐下降,呈剂量—效应正相关和时间—效应正相关;苦参碱能够上调MCF-7细胞Fas蛋白表达和下调MCF-7细胞VEGF蛋白表达。结论苦参碱对MCF-7细胞具有明显的生长抑制作用和促凋亡作用,可能是通过上调Fas蛋白表达、抑制端粒酶活性诱导乳腺癌细胞凋亡及通过下调VEGF蛋白表达,抑制肿瘤血管形成等实现的。

食管癌前细胞DNA、端粒酶含量及多基因表达产物的定量检测

为探讨食管癌高发区人群食管上皮癌变过程中的早期分子改变及早期癌变机理 .应用流式细胞术和免疫荧光技术及碘化丙啶DNA荧光染色方法 ,对食管上皮癌前细胞的DNA含量、端粒酶含量和多个基因p5 3、p16、cyclinD1蛋白质表达进行了定量检测 .检测结果发现 ,DNA含量在癌变形成时明显增加 ,异倍体率为 87 9% ;p5 3蛋白积聚发生在癌变早期 ,在癌细胞组的阳性率为 10 0 % (5 5 ) ;抑癌基因 p16在癌变早期有明显缺失 ;癌基因cyclinD1及端粒酶阳性率在癌细胞组都为 10 0 % (分别为 6 6 ,7 7) .研究结果表明 :在癌变早期 ,DNA含量及异倍体率增加 ,癌基因cyclinD1表达增高 ,抑癌基因 p16缺失及 p5 3蛋白积聚 ,端粒酶含量也明显增高 。

弓形虫对4种肿瘤细胞增殖及凋亡的影响

用1×104个/ml^32×104个/ml 6个不同浓度刚地弓形虫RH株速殖子体外分别作用于对数生长期的乳腺癌MCF-7、前列腺癌DU-145、食管癌EC-109和肺癌A549细胞(5×104/ml)24 h,运用CCK-8法测定弓形虫对上述肿瘤细胞的抑制作用,计算细胞抑制率。用1×104、2×104和4×104个/ml弓形虫速殖子体外作用于A549细胞24 h后,流式细胞仪检测肿瘤抑制基因P53和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)基因所编码蛋白质的表达情况。结果显示,随着弓形虫速殖子浓度升高,各肿瘤细胞增殖抑制率增高,其效果与剂量呈正相关。1×104个/ml弓形虫速殖子即对MCF-7、DU-145、EC-109和A549细胞增殖有抑制作用,其抑制率分别为19.7%、4.5%、28.0%和20.8%。各实验组肿瘤细胞增殖情况与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测A549细胞凋亡,凋亡率上升,且p53蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调。

碱性成纤维细胞生长因子和硫糖铝联合局部应用对扩张皮肤组织结构的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和硫糖铝对扩张皮肤组织结构的影响。方法 白色小猪 9只 ,自身对照。在猪两侧侧胸埋置皮肤扩张器。持续恒压扩张同时实验 组注入 b FGF和硫糖铝 ,实验 组注入b FGF和生理盐水 ,实验 组注入硫糖铝 ,对照组注入生理盐水共 7天。各组完成扩张后第 3天及取出扩张器后 6周取材行组织学检查。结果 实验 组皮肤表皮层增厚更明显 ,颗粒和棘细胞层次更多 ,基底细胞数目增多 ,细胞核肥大 ,染色质变浓 ,排列密集 ,表皮钉突增多 ,呈粗长发育成巨大钉突 ;真皮层厚度变化较轻 ,胶原纤维束粗而密 ,平行于皮面排列 ,弹力纤维明显增加 ;成纤维细胞和毛细血管密度更高 (P<0 .0 5 )。对照组表皮层和真皮层有相应的变化均弱于实验 组 ,术后 3天、6周胶原纤维可见断裂。实验 、 组表皮层和真皮层组织改变与对照组差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。各组纤维包膜厚度近似。结论 在持续恒压扩张同时扩张囊周围注入外源性 b FGF和硫糖铝 ,能更有效地刺激皮肤生物性生长 ,促进扩张速率 。

食管鳞状上皮细胞癌中Keap1、Nrf2和HO-1的表达及临床病理意义

目的检测食管鳞状上皮细胞癌中Keap1、Nrf2和HO-1的表达,并探讨氧化应激通路与食管鳞状上皮细胞癌相关临床病理因素间的关系。方法采用免疫组化SP法检测89例结直肠腺癌及21例癌旁正常食管黏膜组织中Keap1、Nrf2和HO-1的表达。结果 Keap1、Nrf2和HO-1在食管鳞状上皮细胞癌中阳性率均明显高于正常食管黏膜组织,差异有显著性(P<0.05);三者表达与食管鳞状上皮细胞癌淋巴结转移明显相关(P<0.05);Nrf2和HO-1的表达与食管鳞状上皮细胞癌浸润深度有关(P<0.05);Keap1和Nrf2表达呈负相关,Nrf2和HO-1表达呈正相关(P<0.05)。结论氧化应激Keap1-Nrf2信号传导通路参与食管鳞状上皮细胞癌的发生、发展过程,对指导食管鳞状上皮细胞癌的临床治疗和判断预后有重要指导意义。

透明质酸对人骨关节炎软骨细胞保护机制的探讨

目的:探讨透明质酸对人骨关节炎软骨细胞的作用机制。方法:应用细胞培养、四唑盐比色实验检测细胞线粒体活性,流式细胞术检测线粒体膜电位、细胞凋亡百分率和细胞内游离钙离子浓度。结果:透明质酸能明显提高人骨关节炎软骨细胞线粒体活性,抬高线粒体膜电位,降低细胞凋亡率和胞内游离钙浓度。结论:透明质酸可抑制人骨关节炎软骨细胞线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,这种作用可能与其能抑制软骨细胞内钙超载有关。

姜黄素对人食管癌耐药细胞Eca-109/VCR生长和凋亡的影响

目的研究姜黄素(Cur)对人食管癌耐药细胞Eca-109/VCR的体内外生长和凋亡的影响。方法 CCK-8法测定Cur对Eca-109/VCR细胞的抑制作用。FCM检测Eca-109/VCR细胞凋亡率。建立Eca-109/VCR裸鼠皮下移植瘤模型,观察Cur对移植瘤的抑制作用。比较各组瘤组织病理形态学改变、细胞凋亡及血清中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白的表达。结果 Cur呈浓度、时间依赖性抑制Eca-109/VCR细胞增殖。Cur可诱导Eca-109/VCR细胞凋亡。Cur显著抑制移植瘤的生长,Cur组内可见大量坏死灶。Cur诱导移植瘤细胞凋亡和升高Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的表达,随着Cur浓度的增高而增加。结论Cur能显著抑制食管癌耐药细胞的体内外生长,其作用可能与上调Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表达,诱导耐药癌细胞凋亡有关。