大豆黄酮影响青春期小鼠乳腺发育的潜在机制

[目的]以大豆黄酮(DZ)作用于青春期雌性小鼠,探讨其通过上调雌二醇(E2)水平和雌激素受体β(ERβ)受体表达影响青春期小鼠乳腺发育的机制,为DZ及其他植物雌激素类在畜牧生产和临床应用提供依据。[方法]选取48只2周龄C57BL/6雌性小鼠,随机均分为3组:对照组,腹腔注射无菌的PBS;DZ处理组,腹腔注射DZ(100 mg·kg^(-1));阳性对照组,腹腔注射E2(0.2 mg·kg^(-1)),每组16只。分别在饲养至21和28 d,每组随机选取8只,采集血液,测定血液中E2含量,处死后摘取乳腺,测定乳腺指数并检测乳腺组织中E2含量。取同侧部位乳腺制作组织学切片,免疫组化检测核增殖抗原蛋白(PCNA)的表达,Western blot法分析乳腺组织内细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和D3(cyclin D3)、ERβ蛋白表达水平。[结果]与对照组相比,DZ处理显著增加饲养21~28 d小鼠体重及采食量;增加21 d小鼠血液和乳腺组织中E2含量,但未达到显著水平(P>0.05);显著增加28 d小鼠血液和乳腺组织中E2含量(P<0.05);E2处理血液中E2含量均极显著增加。DZ处理对饲养21 d小鼠乳腺指数影响较小,显著增加饲养28 d小鼠乳腺指数(P<0.05);E2处理具有相同趋势(P<0.05)。HE染色结果显示,DZ和E2处理均极显著增加饲养21和28 d小鼠乳腺组织小叶内的导管数(P<0.01)和乳腺组织PCNA阳性细胞数(P<0.01)。Western blot结果显示,DZ及E2处理均可上调小鼠乳腺组织cyclinD1、cyclinB1、ERβ蛋白的表达,显著上调饲养28 d小鼠cyclinD1、cyclinB1、ERβ蛋白的表达(P<0.05)。[结论]DZ处理可促进青春期小鼠乳腺发育,促进乳腺细胞增殖和分裂,这种作用可能与内源性E2水平升高及ERβ受体有关。

肾素血管紧张素系统在溃疡性结肠炎小鼠肠-血屏障损伤中的调控作用

本研究旨在探讨肾素血管紧张素系统(renin-angiotensin system, RAS)在溃疡性结肠炎小鼠肠-血屏障损伤中发挥的作用。选取16只ICR小鼠,随机分为正常对照组(Control组)和葡聚糖硫酸钠盐处理组(DSS组),等体积灌胃生理盐水。试验至第4天,DSS组小鼠在饮用水中添加DSS(终浓度为4%)制造小鼠溃疡性结肠炎模型。期间每天记录小鼠体重、粪便性状和粪便隐血情况,并计算疾病活跃指数(disease activity index, DAI)。DSS饮用至第8天,所有小鼠采血后剖检,量取结肠长度,取结肠组织等样品。进行如下试验:1)HE染色观察结肠组织病理变化;2)ELISA法检测血液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGFA)及结肠组织中Ang1-7和AngⅡ的含量;3)Western blot检测结肠组织中血管紧张素转化酶2(angiotensin-coverting enzyme 2, ACE2)、血管紧张素转化酶(ACE)和质膜膜泡关联蛋白(plasmalemma vesicle associated protein, PLVAP)的表达;4)斯皮尔曼相关性分析ACE2、ACE与PLVAP表达变化的相关性以及Ang1-7、AngⅡ和VEGFA含量变化的相关性。结果显示:1)成功建立了DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎模型,小鼠表现为体重下降、DAI极显著升高(P<0.01)、结肠极显著缩短(P<0.01)和结肠组织出现明显的病理变化;2)与对照组相比,DSS组小鼠表现肛门明显出血,结肠组织中PLVAP和VEGFA蛋白表达均极显著升高(P<0.01);3)与对照组相比,DSS组小鼠结肠组织中ACE2和ACE表达均极显著上调(P<0.01),Ang1-7和AngⅡ含量分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)升高;4)相关性分析显示,ACE2、ACE的表达变化和PLVAP表达变化呈正相关,Ang1-7、AngⅡ含量变化与VEGFA含量变化也呈正相关。以上结果表明,DSS致小鼠结肠炎症过程中小鼠结肠血管屏障受损,结肠局部RAS均处于激活状态,ACE/AngⅡ通路的激活占优势,提示:AngⅡ参与了结肠炎小鼠肠-血屏障的损伤过程。通过激活ACE2或过表达ACE2,增强其对AngⅡ的降解作用以缓解肠-血屏障的损伤,可能是治疗或缓解溃疡性结肠炎的一个新的思路或途径。

植物雌激素大豆黄酮对断奶期小鼠乳腺退化的减缓作用研究

旨在研究植物雌激素大豆黄酮(DZ)对断奶期小鼠乳腺退化的影响。选取48只孕鼠,随机分为对照组(CON组),腹腔注射无菌PBS;大豆黄酮组(DZ组),每天每kg体重腹腔注射DZ 100 mg,连续处理1周。孕鼠正常分娩后,在哺乳期第10天强制断奶。各组分别在断奶第1、3、7天选取8只小鼠取血后处死,取所有乳腺组织,称重计算乳腺指数;ELISA法测定血液中雌二醇(E2)、催乳素(PRL)、胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)的浓度;常规法制作乳腺组织切片,进行HE染色;Western blot及荧光定量PCR(RT-qPCR)分析乳腺组织内促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2的蛋白与基因表达水平。结果:与CON组相比,DZ组增加了断奶1 d母鼠的乳腺指数,但降低断奶3 d、7 d的乳腺指数;与CON组相比,断奶1 d时,DZ组极显著提高母鼠血清中PRL和IGF-Ⅰ浓度(P<0.01),断奶3 d时DZ组极显著提高了PRL和E2浓度(P<0.01),显著提高断奶7 d母鼠血清中E2浓度(P<0.05);HE染色结果显示,与CON组相比,DZ组显著降低断奶母鼠乳腺组织中脂肪细胞面积比(P<0.05),提高腺泡的面积比(P>0.05);与CON组相比,DZ组极显著上调断奶期乳腺组织Bcl-2蛋白的表达水平(P<0.01),极显著下调断奶1 d Bax基因的表达水平(P<0.01),断奶3 d时极显著下调Bax蛋白与基因的表达水平(P<0.01),断奶7 d时极显著上调乳腺中Bax和Bcl-2蛋白的表达水平(P<0.01),在断奶1 d和3 d,Bcl-2/Bax比值均极显著升高(P<0.01)。本研究表明,DZ处理可升高断奶母鼠血清中IGF-Ⅰ、PRL及E2浓度,上调乳腺中Bcl-2/Bax比值,抑制细胞凋亡,降低脂肪细胞所占面积比,提示DZ可能通过抑制母鼠乳腺细胞凋亡,延缓乳腺早期退化。

临床腹泻猪空肠组织中肾素-血管紧张素系统(RAS)的表达变化及与肠道炎症的关系

在现代生猪规模化养殖过程中,无论是断奶、换舍和换料等因素引起的应激反应还是细菌、病毒感染都极易影响消化道健康引起以腹泻为主要症状的肠道炎症。本文通过研究临床腹泻猪空肠组织中肾素-血管紧张素系统(renin-angiobensin system,RAS)的表达变化,探讨其与肠道炎症的关系。以临床上出现腹泻症状的保育猪为研究对象,截取其空肠组织,采用组织病理学、Western blot和RT-qPCR等方法,观察其空肠组织病理变化,明确RAS组分特别是血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)的表达变化,探究其对猪肠道炎症损伤的影响。结果表明,临床腹泻保育猪的空肠组织中促炎性因子TNF-α、IL-1β显著升高,抗炎性因子IL-10无明显变化;组织病理学显示,空肠上皮绒毛脱落,腺体增生,存在大量出血点;ACE2、MasR mRNA和蛋白水平及Ang(1-7)含量均降低,ACE和AT1R蛋白水平及Ang II含量均升高。结果提示,临床腹泻保育猪空肠组织局部RAS被激活,ACE-Ang II-AT1R轴的活性远高于ACE2-Ang(1-7)-MasR轴,ACE2抗炎性损伤作用处于劣势。

动物食欲的产生及调节机制

对经济动物来说,对饲料的摄食选择及摄食量直接影响到动物的品质及经济价值。随着集约化养殖和精饲料的广泛使用,饮食失衡导致的肥胖及营养代谢病已成为养殖业不容小觑的问题,而食欲是决定摄食选择及摄食量的关键,食欲的调控又涉及神经调节、体液调节及机体的能量与营养平衡。从最初胃肠道激素、食欲相关神经元的发现,再到小分子代谢物、能量激素、胃肠道微生物以及炎症相关因子的探索,食欲调控研究领域正在不断地更新与细化,肥胖与抑郁等问题研究专家也将目光投向食欲研究,论文系统地讨论了食欲的产生机制及机体神经、体液信号及其他因素如何相互协调促进食欲的调节,综述了近几十年来新的研究进展及目前已发现并研究的影响食欲调控的关键因素,为进一步探究低成本、结构均衡、能满足动物需求的饲料,以及提高饲料利用效率和动物品质提供理论参考。

酪啡肽及其酪蛋白水解肽对早期断奶仔猪分泌型免疫球蛋白A和细胞因子水平的影响

本文旨在研究酪啡肽及其酪蛋白水解肽对早期断奶仔猪分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和细胞因子水平的影响。24头仔公猪随机分为对照组(正常哺乳28d断奶)、试验Ⅰ组(添加β-酪啡肽-7)和试验Ⅱ组(添加酪蛋白酶解物)。试验组于21d断奶,再连续添加酪蛋白胃蛋白酶解液或β-酪啡肽-710d,每天2次(共20mL),至32d,3组动物各随机取6头同时剖杀,取血、胃食糜和空肠食糜。观察其血清IL-2、TNF-α和胃肠内容物中SIgA的含量变化。结果表明:添加酪蛋白水解液组仔猪血清中IL-2的水平比对照组高75.9%,差异极显著(P<0.01);试验Ⅰ组血清中IL-2水平比对照组高35.7%,差异显著(P<0.05)。血清中TNF-α水平试验组略低于对照组。在对照组、试验Ⅰ和Ⅱ组仔猪的空肠食糜中均检测到SIgA,平均含量分别为(6.48±0.85)ng/g、(6.30±0.85)ng/g和(8.71±0.54)ng/g。与对照组相比,试验Ⅱ组差异极显著(P<0.05);胃食糜中未检测到SIgA。提示乳源活性肽对早期断奶仔猪细胞免疫和黏膜免疫活性具有一定的促进作用。

动物生物化学教学改革的探讨

以本科生必修课“动物生物化学”的教改为背景,从课程体系、课程内容、教学方法等方面进行了探讨,提出了“动物生物化学”教改的几项措施,并在教学中进行了尝试,收到了理想的效果。

酪蛋白源阿片物质的分离、纯化及活性鉴定

酪蛋白的胃蛋白酶水解物通过RP-HPLC进行分离,并用NG108-15 细胞对其进行阿片样活性鉴定。实验结果表明:酪蛋白经胃蛋白酶处理2 h 后, 其酶解产物中有阿片样活性物质产生, 而酪蛋白本身无阿片活性。

酪蛋白酶解产生β-Casomorphin-7样物质的ELISA检测

用酶联免疫吸附分析法(ELISA) 对酪蛋白经胃蛋白酶作用 30,60,90,120和 150 min的酶解消化液中β-Casomorphin－7样物质的含量进行了测定。结果分别为29．5±4．08,47．6±4．17,75．4±4．57,118±7．12和(99．2±5．69)ug/L;平均回收率为97．9%。ELISA方法检测结果表明,酪蛋白2h酶解消化液中β－Casomorphin－7样物质含量最高。

酪蛋白酶解产物阿片样活性的细胞生物学鉴定

以富含δ 阿片受体的NG1 0 8-1 5杂交瘤细胞株 ,在有和无阿片特异性拮抗剂纳洛酮存在的情况下 ,与酪蛋白及其胃蛋白酶酶解消化液共同孵育。其细胞抽提液用 1 2 5I标记cAMP试剂盒进行放免测定 ,观察对细胞腺苷酸环化酶活性的影响。结果证明 ,酪蛋白经胃蛋白酶处理后有阿片样活性物质释放。

仔猪胃肠道食糜和血液中酪啡肽的检测及阿片样活性分析

将24头仔公猪分为对照组(正常哺乳28 d断奶)、试验I组(添喂β-酪啡肽-7)和试验Ⅱ组(添喂酪蛋白酶解物)。试验组于21 d断奶,再连续添喂酪蛋白胃蛋白酶解液或β-酪啡肽-7 10 d,每天2次(共20mL),至32 d,3组动物各随机取6头同时剖杀,取血、胃食糜和空肠食糜。通过所建立的RP-HPLC方法,在胃食糜和空肠食糜中检测到β-酪啡肽-5、β-酪啡肽-7样物质。对照组、酪啡肽-7组和酪蛋白水解液组,β-酪啡肽-7的平均含量分别为21.12±2.38,23.58±7.49、21.81±9.93μg/g胃食糜和16.99±3.48、19.08±2.85、21.36±4.85μg/g肠食糜;胃食糜中-βCM-7的含量高于空肠食糜,试验组均高于对照组。在各组仔猪的血液中未检测到酪啡肽样物质。肠食糜的细胞生物学试验结果表明:与喂仔猪料的对照组比较,试验I组和试验Ⅱ组对细胞腺苷酸环化酶的活性均具有不同程度的抑制作用,抑制率分别为27.9%和89.0%,抑制作用均能被纳洛酮反转,逆转率分别是43.2%和89.07%。提示在21日龄断奶仔猪饲料中添加酪啡肽或酪蛋白酶解物,其肠道中有酪啡肽释放,阿片总活性升高。

β-Casomorphin-7的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立

β-酪啡肽-7(β-Casomorphin-7)是一个有代表性的乳源外啡肽,有调节动物消化道运动和采食、内分泌、免疫等多种生物学功能。本研究以β-Casomorphin-7与人血清白蛋白(HSA)经戊二醛交联的复合物作为包被抗原;一抗为鸡抗β-Casomorphin-7与牛血清白蛋白(BSA)交联复合物的抗血清;酶标二抗为兔抗鸡IgG经戊二醛与辣根过氧化物酶(HRP)交联的复合物。包被抗原和一抗的稀释度经方阵稀释实验确定。本实验所建立的竞争ELISA方法的孔间差异为3.3%,板间差异为8.6%,检测灵敏度20ng/ml,检测范围20～320ng/ml,在实验浓度范围内。β-Casomor-phin-7的抗血清与β-内啡肽、脑啡肽、强啡肽、精氨酸降压素和神经降压素等活性肽未显示免疫交叉反应。表明所建立的方法有较高的特异性,可用于酪啡肽的体内功能研究。

用HPLC测定酪蛋白酶解产物中的β-Casomorphin-7

自８０年代初期发现动物和植物性饲料蛋白经酶处理可以产生各种生物活性肽以来，国外对其进行了大量研究。结果表明，一些具有独特生理和药理作用的肽段均以无活性的形式存在于蛋白质的多肽链中，可是在体内某些消化酶的作用下才会释放出来，表现出多种生物活性。最初分离...

酪啡肽对21日龄断奶仔猪胃酸分泌的影响

采用放射免疫、RT-PCR等方法,研究了酪啡肽对21日龄断奶仔猪消化道酸度、血清中胃泌素水平和胃肠道胃泌素mRNA表达的影响。将24头仔公猪分对照组(正常哺乳28 d断奶)、试验I组(β-酪啡肽-7组) 和试验Ⅱ组(早期断奶组)。试验组于21 d断奶后,再连续添喂β-酪啡肽-7或生理盐水,每天2次(共20 mL)。10 d后,3组动物各随机取6头同时宰杀,共测定了18头仔猪胃、空肠和回肠食糜pH值及血清中胃泌素的含量,并对胃幽门和十二指肠胃泌素mRNA的表达进行了分析。结果发现日粮中添加β-酪啡肽-7的仔猪胃内平均pH为2.76±0.51,低于对照组(5.08±0.43)和早期断奶组(4.26±0.62);空肠和回肠食糜中pH值各组无明显差异。血清中胃泌素含量β-酪啡肽-7组最高,为100.03±18.72 pg/mL,与对照组相比差异极显著。RT- PCR检测分析表明:β-酪啡肽-7组仔猪胃窦胃泌素mRNA表达量高于对照组(P<0.01)和早期断奶组。十二指肠中胃泌素mRNA表达的变化情况与胃窦相似。认为酪啡肽类可以促进断奶仔猪的胃酸分泌,其机制可能是通过上调胃泌素mRNA的基因表达,使胃泌素分泌增加所至。

反相高效液相色谱法分析结构相似酪啡肽

β-酪啡肽(β-Casomorphinβ-CM)是β-酪蛋白经过酶解所释放的一类小肽,具有类似阿片肽的功能。本研究参考相关肽检测方法,以乙腈:水(3:1)为流动相,内含0.1%三氟乙酸为流动相酸性调节剂,梯度洗脱,反相C8柱分离,215nm紫外检测。结果显示,酪啡肽-7在21.45min出峰,在0.125～1.0mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9989),β-酪啡肽-7和β-酪啡肽-5纯度和迁移时间的RSD分别为7.29%和5.19%。应用本方法可快速准确分离分析酪啡肽,尤其是结构相似的小分子肽。

β-酪啡肽-7的多克隆抗体的制备

β-酪啡肽-7 经戊二醛与牛血清白蛋白(BSA)交联后的复合物免疫伊莎蛋鸡5只。6个月后，对鸡血清、所产蛋的卵黄和卵黄氯仿抽提上清液进行琼扩效价分析。结果表明，血清抗体的最高效价达到1∶8，后两者的效价为1∶4。

酪蛋白酶解产物β-酪啡肽-7的HPLC分析和阿片活性鉴定

利用建立的高效液相色谱(HPLC)定量分析法,在酪蛋白2 h酶解液中检测到134.27μg.mL-1的β-酪啡肽-7(β-CM-7);其酶解消化液经葡聚糖凝胶柱层析收集物3、4组中也检测到β-CM-7,含量分别为44.79和18.90μg.mL-1;而1和2组中未检测到。细胞生物学鉴定结果表明:酪蛋白酶解液、柱层析收集的3、4组均能抑制富含δ-阿片受体的神经杂交瘤细胞腺苷酸环化酶活性,降低细胞内cAM P水平,纳洛酮可逆转这种抑制作用,证明有阿片活性。1、2组和酪蛋白本身无阿片作用。HPLC测定结果与细胞生物学鉴定结果相符,证明所建立的HPLC方法可用于酪啡肽的定量分析。

高氟黄牛血清钙磷和碱性磷酸酶活性及硒铜镁防治效果的研究

为了探讨地氟病黄牛血清钙磷和碱性磷酸酶（ＡＬＰ） 活性及硒铜镁田间防治效果。３２ 头自然生长的高氟黄牛，随机分为４ 组，每组８ 头，其中１ 组为高氟对照组；２ 组为高氟黄牛每日添加０２５ ｍｇ／ｋｇ 硒（ 亚硒酸钠） ；３ 组为高氟黄牛每日添加１５ ｍｇ／ｋｇ 铜（ 硫酸铜） ；（４） 组为高氟黄牛每日添加０２５ ｍｇ／ｋｇ 硒＋ １５ ｍｇ／ｋｇ 铜＋ １ ｍｇ／ｋｇ 镁（ 硫酸镁） 。另设正常对照奶黄牛各８ 头，连续饲喂８３ｄ ，分别于试验的０ｄ 、３０ｄ 、８３ｄ 采样，检测血清钙、磷和ＡＬＰ。结果表明，高氟黄牛血清ＡＬＰ活性高于正常对照奶黄牛，血清钙磷变化不大。添加硒铜镁于不同时间，使高氟黄牛ＡＬＰ活性下降，血钙也随之降低，血磷维持正常水平，说明高氟黄牛补充硒铜镁能防治地氟病，但但不能完全阻止骨质疏松，故应同时补钙。

猪生殖-呼吸道综合征

本文根据近几年国外有关猪生殖－呼吸道综合征的研究报导，较系统地讨论了该病的病因，流行病学，发病机理、病理变化，临床症状以及诊断和防制措施。同时，对有待于深入研究的问题作了阐述。