青春期大鼠实验性精索静脉曲张模型的建立及其对睾丸的影响

目的 研究青春期精索静脉曲张对睾丸的损害 ,探讨精索静脉曲张不育的机理。方法 通过部分结扎左肾静脉建立青春期大鼠实验性精索静脉曲张 (ELV)模型 ,分别于术后 4周和 8周研究双侧睾丸的组织学改变并进行统计学分析。结果 成功建立了ELV模型。该模型大鼠的睾丸病理损害以生精上皮退化 ,精子发生阻滞 ,生精细胞脱落 ,曲精小管萎缩 ,间质水肿最为多见。损害为双侧性 ,且有累进性特点。统计学分析显示 ,ELV大鼠左右侧睾丸平均重量和曲精小管直径均较对照组显著减小 ,睾丸间质面积较对照组显著扩大。结论 ELV大鼠双侧睾丸有严重的累进性病理改变 ,这可能是精索静脉曲张不育的主要原因之一。

性成熟期大鼠实验性精索静脉曲张对附睾显微和超微结构的影响

目的 探讨性成熟期大鼠实验性精索静脉曲张 (EVC)附睾显微和超微结构的改变及其在不育中的作用。 方法 部分结扎左肾静脉建立大鼠EVC模型 ,常规制作附睾各段光镜及电镜标本。 结果 EVC大鼠附睾各段均出现程度不同且有区段特异性的损害。光镜下主要表现有间质血管充血扩张 ,淋巴细胞浸润、积聚 ,间质内出现精子肉芽肿。附睾管萎缩 ,上皮细胞变性 ,甚至出现空泡化 ,上皮内晕、亮细胞数明显增多 ;管腔内出现大量未成熟生精细胞、畸形精子等。电镜下主要表现为主细胞内溶酶体增多、变大 ,残余小体增加 ,细胞器 (内质网、线粒体、高尔基复合体等 )受损 ,部分主细胞内出现大空泡。晕细胞、亮细胞内溶酶体也增大、增多 ,亮细胞常膨大 ,游离面突入管腔。上皮细胞游离面微绒毛稀少 ,可见局灶性断裂和破坏。上皮基膜增厚。 结论 性成熟期大鼠EVC可致附睾管上皮显微及超微结构明显改变 。

血管内皮生长因子蛋白在大鼠睾丸和附睾的表达和定位研究

为探讨血管内皮生长因子(VEGF)在雄性生殖系精子发生发育和成熟过程中的调控作用,应用免疫组化、Periodic acid-Schiff(PAS)染色及蛋白质免疫印迹技术,检测VEGF蛋白在成年大鼠睾丸和附睾的表达和定位情况。Western-blots显示,在大鼠睾丸和附睾内均有VEGF蛋白(约45kD)的表达;免疫组化显示,睾丸内VEGF见于圆形和长形精子细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞,免疫阳性产物位于细胞质内。精子细胞的VEGF表达伴随精子细胞顶体发育的全过程,精子残余体呈强阳性。附睾内VEGF表达于附睾管上皮,且有区域和细胞特异性。附睾起始段的所有上皮主细胞内都有VEGF阳性颗粒;头、体、尾各段的VEGF阳性细胞多数与含PAS阳性颗粒的细胞重合,证明为亮细胞;近端附睾的管腔内可见精子头部呈VEGF阳性染色。睾丸、附睾间质血管内皮为VEGF阴性。上述结果表明,VEGF蛋白可由生殖细胞和附睾管上皮细胞直接产生,它可能以自分泌和/或旁分泌的形式共同作用于睾丸和附睾的生殖细胞和血管内皮,直接或间接影响精子的发生、发育和成熟过程,特别是精子顶体的形成过程,并可能与精子在附睾内的成熟有关。

生殖细胞核因子（GCNF）在大鼠附睾中的表达和定位研究

目的：检测生殖细胞核因子(GCNF)在成年和青春期大鼠附睾中的表达和细胞定位情况，以探讨GCNF在附睾中可能参与的生理功能。方法：Western-blot，免疫组织化学和胶体金免疫电镜法。结果：Western-blot显示在成年和青春期大鼠附睾全蛋白抽提物中检测到GCNF编码的蛋白条带，

血管内皮生长因子和其受体Flt-1在青春期大鼠睾丸、附睾及附睾内精子上的表达研究

目的:通过对血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1在大鼠睾丸、附睾及附睾内精子上表达的研究,探讨其在雄性生殖系统中的作用。方法:免疫组化SP法和免疫荧光法检测20只青春期SD大鼠睾丸、附睾及精子上VEGF和Flt-1蛋白的表达情况。结果:VEGF和Flt-1在大鼠睾丸和附睾组织及精子上均有特征性表达。睾丸内VEGF蛋白表达于生精细胞、精子细胞发育中的顶体、Sertoli和Leydig细胞胞质内;Flt-1只见于精子细胞发育中的顶体及Leydig细胞胞质中。附睾中VEGF表达于各段上皮主细胞胞质内,而Flt-1表达于头、尾段上皮主细胞胞质内,体部免疫染色阴性;两者在附睾上皮亮细胞、晕细胞和基细胞中均为阴性表达。免疫荧光染色显示,VEGF和Flt-1共同定位于附睾内精子头部的顶体,尾部的颈、中和主段。结论:VEGF和Flt-1蛋白在大鼠睾丸、附睾及精子中的特异性表达提示,他们可由不同生精上皮细胞、间质细胞和附睾主细胞产生,可能以自分泌或旁分泌的形式单独或共同作用于睾丸和附睾的生殖细胞或Leydig细胞,直接或间接地影响精子的发生、发育和成熟过程,并与精子的活动和受精能力有关。

实验性精索静脉曲张对大鼠睾丸和附睾中血管内皮生长因子及其受体1表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸、附睾中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体fms样酪氨酸激酶(Flt-1)蛋白表达的影响。方法:建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化SP法检测VEGF和Flt-1在ELV组及假手术对照组睾丸、附睾组织中的表达变化。结果:VEGF和Flt-1蛋白在ELV组和对照组大鼠睾丸、附睾中均有表达,其定位和表达量具有细胞特异性和区域特异性。经图像分析和统计检测显示,ELV2周和4周组双侧睾丸和附睾中VEGF蛋白的表达与相应对照组比较均显著增加(P<0.01和P<0.05);ELV2周组双侧睾丸和附睾中Flt-1蛋白的表达与相应对照组比较也显著增加(P<0.01和P<0.01),但4周时在双侧睾丸和左侧附睾中Flt-1蛋白的表达显著下降(P<0.01和P<0.05),而右侧附睾未见明显差异(P>0.05)。结论:实验性精索静脉曲张可造成青春期大鼠睾丸、附睾中VEGF和Flt-1的表达量变化,该变化可能会影响精子的发生和成熟,因而可能是VC引起男性生育力下降甚至不育的原因之一。

VEGF、VEGFR2在青春期大鼠睾丸、附睾及附睾精子上的表达

目的通过对血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR2在青春期大鼠睾丸及附睾表达的研究,探讨其在雄性生殖器官中的作用。方法采用免疫组化法检测VEGF、VEGFR2在SD大鼠睾丸和附睾的表达定位,用免疫荧光法检测它们在大鼠附睾精子上的表达定位。结果VEGF及VEGFR2在青春期大鼠睾丸和附睾组织中均有表达。在睾丸中,VEGF主要表达于精原细胞胞质、精子细胞发育中的顶体、Sertoli细胞胞质及精子残余体内,Leydig细胞胞质也有阳性表达;VEGFR2主要表达于精子细胞发育中的顶体和间质细胞胞质。在附睾中,VEGF表达于附睾管上皮所有主细胞胞质内;而VEGFR2表达于附睾管头段和尾段上皮主细胞胞质内,体段免疫染色阴性。免疫荧光显示,VEGF与VEGFR2都与精子头部顶体、尾部颈段、中段和主段相结合,末段未见阳性荧光。结论VEGF及VEGFR2在大鼠的睾丸和附睾中均有表达,其表达定位具有细胞特异性和区域特异性,提示其可能在大鼠睾丸精子发生和附睾精子成熟中发挥重要作用。

附睾分泌蛋白2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:探讨附睾分泌蛋白2(HE2/EP2)的一种异构体———HE2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达及其意义。方法:应用免疫组化SP法检测15只青春期SD大鼠睾丸和附睾组织中HE2β1的定位及其表达情况。结果:HE2β1在青春期大鼠睾丸和附睾组织中均有表达。在附睾中,HE2β1主要表达于附睾管上皮主细胞胞质内,而在亮细胞、晕细胞及基细胞内未见阳性表达;其表达水平在附睾头部远段较弱,在体部近、中段及尾部较强,而在附睾始段未见阳性表达。在睾丸生精小管中,部分精原细胞核及支持细胞核均可见明显的棕褐色的阳性颗粒,其他生精细胞以及间质细胞均为阴性。结论:HE2β1在青春期雄性大鼠的睾丸和附睾上皮中均有表达,其定位及表达水平具有区域特异性和细胞特异性,提示其在大鼠精子发生、成熟及附睾上皮天然抗感染机制中发挥重要的作用。

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾中CRES蛋白表达的影响

目的：研究青春期大鼠实验性左侧精索静脉曲张（ELV）对睾丸和附睾中胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生（CRES）蛋白表达的影响，探索精索静脉曲张导致不育的机制。方法：建立青春期雄性SD大鼠ELV模型，采用免疫组化及蛋白印迹方法检测CRES蛋白在ELV2周组（n=8）、4周组（n=8）及其相应的对照组（n均=5）大鼠睾丸和附睾头、体、尾中的表达变化。结果：免疫组化显示，CRES蛋白在ELV实验组和对照组大鼠睾丸和附睾中均有表达。在睾丸中，CRES蛋白主要定位于圆形和长形精子细胞的胞质、精子的顶体以及残余体中，其表达与生精周期密切相关，I～Ⅲ和Ⅸ～XⅣ期表达最强，Ⅶ～Ⅷ期表达次之，Ⅳ～Ⅵ期表达减弱。在附睾中，CRES蛋白主要表达于从附睾起始段到尾部的上皮主细胞的胞质中，且以体、尾部表达最强，头部次之，管腔分泌物也呈阳性表达。实验组比对照组CRES蛋白表达增强。Western印迹显示：实验组和对照组大鼠睾丸和附睾在相对分子质量（Mr）为19000和14000处均可见CRES蛋白条带，其中以M．19000处表达更为明显。实验组CRES蛋白的表达比对照组明显增强。对免疫组化和Western印迹结果进行灰度值和积分吸光度值（IA）测定，并经统计学分析显示：ELV2周组和4周组比其相对应的对照组表达增强且差异有显著性（P〈0．05或P〈0．01），而ELV各组问未见CRES蛋白表达有明显差异（P〉0．05）。结论：CRES蛋白在大鼠睾丸和附睾中均有表达，睾丸中表达呈现生精周期特异性和细胞特异性，附睾中表达呈现附睾上皮区段和细胞特异性；CRES蛋白在青春期ELV大鼠睾丸和附睾中的表达比对照组明显增强。这些结果提示CRES蛋白在精子发生和精子成熟过程中可能起着重要的作用，并且可能与ELV引起的不育或生育力低下有关。

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾精子结合抗原11mRNA及其蛋白异构体表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸和附睾中精子结合抗原11(SPAG11)mRNA及其蛋白异构体SPAG11E表达的影响,并探讨其与精索静脉曲张导致男性不育的关系。方法:40只SD大鼠随机分为ELV2周组、4周组,假手术对照2周组、4周组,每组10只。ELV组行部分结扎左肾静脉建立青春期SD大鼠ELV模型,假手术对照组仅显露左肾静脉过程,但不结扎。应用RT-PCR和免疫组化法(n=5)检测SPAG11 mR-NA及SPAG11E蛋白在ELV2周组和ELV4周组及各自对照组大鼠双侧睾丸、附睾中的表达变化。结果:RT-PCR结果显示,SPAG11基因376bp的特异扩增产物仅见于大鼠附睾组织中。免疫组化结果显示,SPAG11E蛋白主要与睾丸生精上皮的圆形和长形精子细胞的顶体泡和顶体、睾丸间质细胞的胞质相结合;在附睾管上皮主细胞胞质和顶部静纤毛中表达。对RT-PCR的相对吸光度值和免疫组化的灰度值进行统计学分析显示:①左侧附睾ELV2周和4周组SPAG11 mRNA和SPAG11E蛋白的表达与各自右侧组及各自对照组比较均有显著减弱(P<0.05或P<0.01);左侧附睾ELV4周组SPAG11mRNA与SPAG11E的表达较ELV2周组显著减少(P<0.05或P<0.01);右侧附睾ELV4周组SPAG11E的表达也较ELV2周组显著减少(P<0.01);②两实验组双侧睾丸SPAG11E蛋白的表达与相应对照组比较均未见明显差异(P>0.05),且在ELV2周组和ELV4周组之间该蛋白的表达也无显著性差异(P>0.05)。结论:SPAG11是特异表达于附睾的基因,在大鼠睾丸和附睾中均可见其蛋白异构体SPAG11E免疫阳性反应,其定位及表达水平具有细胞特异性和区域特异性,而且SPAG11 mRNA及SPAG11E蛋白在ELV模型鼠附睾中的表达发生了明显变化,这提示SPAG11不仅可能在大鼠精子发生、成熟过程中发挥重要作用,还可能与精索静脉曲张所致的男性不育相关。

青春期大鼠实验性精索静脉曲张对附睾雄激素受体的影响

目的 研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对附睾雄激素受体的影响。方法 建立青春期大鼠 ELV模型,通过免疫组化及蛋白印迹方法,研究ELV 4周组、8周组与正常对照组附睾雄激素受体表达之间的差异。结果 雄激素受体分布于附睾管各段上皮的细胞核内,ELV 4 周组附睾内雄激素受体的表达比 4 周正常对照组明显增强(P<0.01),而ELV 8周组附睾内雄激素受体表达比ELV 4周组及8周正常对照组均减弱(P<0.01),同组左右侧附睾间未见雄激素受体表达有明显差异(P>0.05)。结论 青春期大鼠ELV可导致雄激素受体表达异常,这可能是造成不育或生育力低下的原因之一。

实验性左侧精索静脉曲张对青春期大鼠附睾中VEGF、VEGFR2蛋白表达的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(VEGFR2)在实验性左侧精索静脉曲张(ELV)大鼠附睾中的表达和定位,探讨VEGF、VEGFR2在精索静脉曲张(VC)致男性不育中的作用。方法通过部分结扎左肾静脉建立大鼠ELV模型,于术后2周和4周取材,采用免疫组化法检测VEGF、VEGFR2在附睾中的表达变化。结果ELV大鼠两侧附睾中VEGF蛋白表达均上调,但ELV4周组表达明显少于2周组;ELV2周组大鼠附睾中VEGFR2蛋白的表达比对照组有所增加,而ELV4周组相比对照组和ELV2周组均显著下降。结论ELV对VEGF、VEGFR2蛋白的表达有影响,说明VC所致男性不育可能与VEGF及VEGFR2的表达变化有关。

浅谈医学生立体思维能力的培养

医学生潜能开发和素质提高是我们医学院校教师的职责。潜能开发是指学生创造能力的培养，它来源于创造性的思维运动。创造性思维是突破传统的思维习惯和逻辑规则，以新颖的思路来阐明问题和解决问题的思维过程和方法。

A STUDY ON EXPRESSION OF ARmRNA IN HUMEN BPH TISSUE WITH IN SITU RT-PCR

Objecive To check and compare the expression levels of human androgen receptor (AR) mRNA in both normal adult prostate (NAP) and benign prostate hyperplasia (BPH) tissues, and to try to find if BPH results from the abnormal transcription of ARmRNA in prostate. Methods Expression of the human ARmRNA in 14 paraffin-embedded prostate tissues (4 cases of NAP and 10 cases of BPH) was studied with the direct in situ reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Quantitative analysis of the ARmRNA products was performed using the image analysis system. Results ①Specific ARmRNA was detected in both NAP and BPH specimens and in both epithelia and interstitial cells. The positive products were relatively densely localized in the cytoplasm of perinuclear zone. ② The intensity of ARmRNA signals in epithelial cells was significantly stronger than that in interstitial cells (P<0.001). However, there was no statistically significant difference in ARmRNA level between NAP and BPH; ③ The heterogeneity of ARmRNA signal and the androgen-independent cells were observed in prostatic epithelia. Stronger positive signals of ARmRNA were shown in a few basal-cell layer (BCL) cells of BPH tissue, but were not found in that of NAP tissue. Conclusion Results of this study show that there is no significant difference in the ARmRNA expression between NAP and BPH groups in both epithelium and interstitial cells. It may indicate that BPH does not result from the ARmRNA transcription in the prostate.

生殖细胞核因子在不同成长期大鼠附睾中的表达

目的 探讨生殖细胞核因子 (GCNF)在大鼠附睾中的时空表达与分布。方法 应用免疫组化和蛋白质免疫印迹技术 ,检测GCNF蛋白在出生后 7、14、2 8、4 5、6 0、90天龄和 18月龄大鼠附睾内的表达、定位和发育变化 ,并通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行统计学分析。结果 GCNF表达于出生后 14天龄至 18月龄大鼠附睾上皮的细胞核内 ,其表达呈明为的年龄相关性和附睾区段以及细胞特异性。 14天龄附睾上皮内出现散在阳性细胞核 ,2 8天龄时阳性细胞数和阳性强度明显增强 ,4 5天龄时达到高峰。成年后阳性细胞数维持不变而阳性染色强度开始逐渐减弱 ,18月龄时减弱非常明显。附睾管上皮内的各种细胞如主细胞、基细胞、顶细胞、狭窄细胞和亮细胞等均呈GCNF阳性染色 ,从附睾起始段到尾段到尾段均有阳性染色 ,其中以近端头部最强 ;远端尾部主细胞核阳性减弱非常明显甚至呈阴性 ,而亮细胞核则阳性较强。 14d后各年龄组附睾抽提物中均可见 5 50 0 0处有GCNF特异性条带 ,其年龄变化与免疫组化结果一致。结论 GCNF在大鼠附睾上皮内的表达与附睾上皮分化和发育过程明显相关 ,且其分布表现出明显的附睾区段和细胞特异性。