高校产学研协同创新生态系统评价体系的构建及实证研究

文章针对当前高校产学研协同创新生态系统研究的不足,借鉴模糊数学理论,结合高校产学研协同创新生态系统的特征,从创新主体、创新资源、创新生态环境3个维度着手,采用层次分析法为各指标赋值,通过调研问卷收集数据,采用多层次模糊综合评价,构建高校产学研协同创新生态系统模糊综合评价模型,将定量与定性结合起来对高校产学研协同创新生态系统进行评价。以浙江省高校为研究样本进行实证研究,结果表明该模型具有较好的适用性,可以为优化高校产学研协同创新生态系统结构提供指导与借鉴,促进高校产学研协同创新系统的稳定健康发展。

阴经透穴针刺疗法治疗缺血性脑卒中后下肢功能障碍的临床疗效

目的观察阴经透穴针刺疗法对缺血性脑卒中后下肢功能障碍的临床疗效。方法缺血性脑卒中后下肢功能障碍患者70例,随机分为观察组和对照组,每组35例(剔除脱落病例后,两组纳入统计各33例)。对照组采用常规针刺疗法,观察组采用阴经透穴针刺疗法。比较两组治疗前后下肢简化Fugl-Meyer运动功能量表(FMA)评分、Barthel指数评分、太冲穴表面温度及纤维蛋白原、血浆黏度水平。结果两组治疗后下肢简化FMA评分均较治疗前提高,且观察组高于对照组(P均<0.05)。两组治疗后Barthel指数评分均较治疗前提高(P均<0.01),两组治疗后Barthel指数评分差异无统计学意义(P=0.130)。治疗前两组患侧肢体太冲穴表面温度低于健侧(P均<0.01);治疗后两组健侧和患侧肢体太冲穴表面温度升高,且观察组高于对照组(P均<0.05);对照组治疗后患侧肢体太冲穴表面温度仍低于健侧(P<0.05),观察组治疗后患侧与健侧温度差异无统计学意义(P=0.682)。两组治疗后血浆黏度和纤维蛋白原水平均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P均<0.05)。结论阴经透穴针刺疗法能够促进脑卒中后下肢功能障碍患者下肢功能恢复,改善患肢局部组织代谢,促进血液循环,疗效优于常规针刺治疗。

理论力学课程思政示范课建设的思考

结合物理学专业建设特色和培养物理教学科研的高素质创新型人才的育人要求,以理论力学课程为例,重点对课程思政示范课建设进行思考与探索。该文从理论力学课程思政建设的方向与目标、内容供给、教学策略与评价以及典型案例展示四个方面进行阐述,期望能为物理学专业其他专业课程思政教育的实施提供一定的借鉴与参考。

基于科教融合的“气象学”课程教学改革探索

科教融合能够实现教学与科研的良性互动和共同发展,有效提高教学质量。“气象学”课程是高等林业类院校林学、生态学、水土保持、风景园林等专业的基础课,主要让学生系统掌握气象学基础理论知识、深入理解气象学与日常生活生产的紧密联系,培养具有创新精神和实践能力的高素质气象学人才。然而,由于“气象学”课程涉及大量专业名词,内容抽象且难以掌握,学生的学习积极性不强,导致教学效果不理想。为此,基于科教融合理念,以激发学生的学习兴趣、培养学生的创新精神和科研实践能力为目标,深入开展了“气象学”课程的教学改革实践:一是厘清主线、精选内容,确保课程内容既全面又突出重点;二是积极引入科研案例,采用多元化的教学方式,促进科研与教学深度融合;三是融入科技前沿知识,鼓励学生参与科研项目训练,培养学生的实践创新能力;四是构建全面、多元化的综合评价体系,全面提高学生的综合素质。课程教学改革取得了显著的成效,不仅增强了学生的专业兴趣和实践创新能力,还进一步提升了教学效果和课程满意度。

有机肥对恩施大马士革玫瑰园土壤的改良效果

为了研究恩施大马士革玫瑰园土壤有机肥增肥效果,对比研究施用有机肥(菌肥+秸秆+动物粪便+糖蜜)、农家肥(圈肥+草料)改良后和不施肥土壤的主要理化性质。结果表明,恩施大马士革玫瑰园土壤严重缺磷,中度缺钾、镁、锌,轻度缺铁。经有机肥改良土壤后,有效补充了土壤中的钾、铁,但土壤仍存在缺磷、镁、锌的问题。在恩施农禅谷生态农业发展有限公司有机肥配方基础上,可补充豆类、动物粪便,以期进一步改良土壤。

基于FMEA方法的我国高校创新创业教育生态系统风险预警模式研究

针对当前我国高校创新创业教育生态系统绩效评估存在的薄弱环节,通过引入失效模式与效应分析(FMEA)来评估我国高校创新创业教育生态系统绩效。以严重程度(S)、发生概率(O)、可检测度(D)作为评估指标,剖析了我国高校创新创业教育生态系统评估管理流程中的失效模式,最后利用模糊数学得出风险优先指数(RPN),提出针对我国高校创新创业教育生态系统的新风险评估方案。该方案显示,这种评估方法不仅能够系统识别潜在的风险点,还能够通过量化的指标(S、O、D)对这些风险进行优先级排序,进而采取针对性的管理措施。这对于推动我国高校创新创业教育的高质量发展具有重要意义,可为培养更多具备创新精神和创业能力的高素质人才提供一定的理论基础。

半胱氨酸、蛋氨酸对体外培养绒山羊次级毛囊生长及毛乳头细胞增殖的影响

旨在探讨半胱氨酸(Cys)、蛋氨酸(Met)对体外培养燕山绒山羊次级毛囊(SF)生长及毛乳头细胞(DPCs)增殖凋亡的影响。本研究选取1只1周岁左右健康雄性燕山绒山羊皮肤若干,完整分离的次级毛囊随机分成Cys试验组和Met试验组,每组各浓度3个重复,每个重复8根毛囊,Cys试验组添加浓度分别为0、40、80、120、160和200μg·mL^(-1);Met试验组添加浓度分别为0、10、15、20、25和30μg·mL^(-1)。毛囊培养7 d,每隔24 h观察毛囊生长形态并测量毛囊生长长度。从燕山绒山羊次级毛囊中提取、纯化DPCs,细胞计数并绘制DPCs生长曲线,将DPCs随机分为Cys试验组和Met试验组,每组各浓度6个重复,Cys试验组添加浓度分别为0、20、40、60、80、100μg·mL^(-1);Met试验组添加浓度分别为0、2、4、6、8、10μg·mL^(-1)。培养2 h后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定,确定燕山绒山羊DPCs中Cys和Met的最适培养浓度,利用qRT-PCR技术检测不同浓度Cys和Met的DPCs增殖相关基因(PCNA、CCND1、CDC42、CDK 4)、凋亡相关基因(P21、P53、Bax、Caspase-3、Bcl-2)、皮肤细胞分化相关基因(IVL)及角蛋白相关基因(K10、K 14)mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,添加80和120μg·mL^(-1) Cys与10、15、20和25μg·mL^(-1) Met均可显著影响次级毛囊生长速率和累计生长长度(P<0.01),且120μg·mL^(-1) Cys和20μg·mL^(-1) Met促生长效果最好;添加20、40和60μg·mL^(-1) Cys可以显著影响DPCs增殖(P<0.05),添加40μg·mL^(-1) Cys显著上调PCNA、CCND1、CDK4、Bcl-2、K10、K 14和IVL基因mRNA表达量(P<0.05);添加6μg·mL^(-1) Met可以显著影响DPCs增殖(P<0.05),并显著上调PCNA、CCND1、CDK4、P21、Bcl-2、K 10和K 14基因mRNA表达量(P<0.05)。综上,添加Cys和Met可以显著促进长绒期燕山绒山羊次级毛囊生长,最适添加量分别为120μg·mL^(-1)和20μg·mL^(-1);添加Cys和Met可通过上调细胞增殖、分化、角蛋白等基因mRNA、下调细胞凋亡基因mRNA表达,促进乳头细胞增殖、抑制细胞凋亡进而促进燕山绒山羊次级毛囊生长。

瘤胃源粪臭素降解菌的分离鉴定及其降解特性研究

【目的】旨在从绵羊瘤胃中分离粪臭素降解菌,并评估其粪臭素降解能力和生长性能,以期开发适用于反刍动物降臭的直接饲喂微生物。【方法】以绵羊瘤胃液为分离来源,使用含有粪臭素的MSM培养基进行富集和分离,通过细菌菌落形态观察进行初步分类;应用16S rRNA基因扩增、测序及系统发育分析进行物种鉴定;绘制菌株生长曲线,通过HPLC技术测定粪臭素降解曲线。【结果】从绵羊瘤胃液中分离出25株粪臭素降解菌,经菌落形态鉴定选出11株代表菌株进行后续研究。物种鉴定结果显示,MSML2和MSML6属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),MSML4、MSML5、MSML7和MSML10属于阿氏普里斯特氏菌(Priestia aryabhattai),MSML3和MSML11属于污染伯克霍尔德氏菌(Burkholderia contaminans),MSML1、MSML8和MSML9属于成都假单胞菌(Pseudomonas chengduensis)。其中,MSML5生长速度最快,在约12 h后进入稳定期,稳定期菌体浓度最高;MSML3和MSML8在前16 h生长缓慢,32 h后进入稳定期。在粪臭素降解方面,MSML2粪臭素降解效率最高,48 h内的降解率达到23.03%,其次是MSML7、MSML8和MSML10,降解率均超过20%。【结论】成功从绵羊瘤胃中分离获得25株粪臭素降解菌,涉及4个物种,首次报道了具备粪臭素降解能力的枯草芽孢杆菌、阿氏普里斯特氏菌和成都假单胞菌,为直接饲喂反刍动物的菌剂开发提供了宝贵的菌株资源。

城市轨道交通浮置板轨道纵向联板的动力效应分析

城市轨道交通浮置板轨道纵向联结处存在薄弱环节,轨道设计时对板与板纵向联结的动态效应考虑不足。通过引入等效密度及等效地基系数的方法对钢弹簧浮置板轨道系统板下基础进行合理的模型简化,建立了预制式和现浇式浮置板系统振动特性三维有限元分析模型,充分考虑了钢轨、剪力铰和板下基础对浮置板结构振动特性的影响,研究了浮置板轨道系统模态与谐响应特性,分析了浮置板纵向联结处的动力效应特性。结果表明:浮置板轨道在1~200 Hz低频段的模态振型变化主要表现为四种运动方式:刚体运动、弯曲、弯扭组合和扭转;对于预制板轨道系统,浮置板主导整个系统的振动特性表现的频段在系统模态分析和谐响应分析中表现出一致的规律;对于现浇板轨道系统,当频率为32.6~57.8 Hz时,浮置板对系统振动特性的主导作用弱化,表现为过渡频段;浮置板联板动力效应产生的低阶弯曲模态在预制板系统中表现为刚体运动模态;对于由Ns块板组成的浮置板系统,联板效应引起的单块板每阶弯曲模态频率附近的附加模态数为N_(s)/2-1。

不同挤压工况下圆柱形锂离子电池的压缩响应研究

为了满足动力锂离子电池在机械滥用下安全运行的要求,利用实验和有限元模拟相结合的方法对不同挤压工况下锂离子电池的压缩响应特性和失效机理进行了研究。通过自行搭建的三维数字图像相关法监测平台,对18650圆柱形锂离子电池进行了挤压实验,给出了不同挤压工况(平面压缩、局部压痕和三点弯曲)下电池的力-电-热响应行为。基于COMSOL多物理场仿真软件建立了挤压载荷下圆柱形锂离子电池的多物理场耦合模型,具体讨论了加载方式对锂离子电池压缩响应的影响,并与实验结果进行了对比分析,二者吻合较好。研究结果表明,平面压痕和局部压缩工况下锂离子电池表现出一致的响应特性,承载力达到峰值后迅速下降;平面压缩工况下电池的峰值力大于局部压痕工况,随着荷电状态(SOC)的提高,电池的承载能力增强。本工作可为锂离子电池多功能设计和安全评估提供参考。

虚拟仿真教学平台在放射治疗设备学教学中的应用

目的探讨将虚拟仿真教学平台应用于肿瘤和放射治疗方向的学生在放射治疗设备学见习课程中的教学效果,并与传统教学方法进行比较。方法选择四川大学医学影像技术专业放射治疗方向2015级—2018级本科生为研究对象,将2015—2016级作为对照组,2017—2018级作为试验组。对照组学生仅接受放射治疗设备学的理论与线下实践教学,而试验组学生在此基础上额外接受虚拟仿真教学平台的学习。通过比较2组学生在接受虚拟仿真教学平台学习前后的操作及理论考核成绩,评估虚拟仿真教学系统相较于传统教学模式在提升学生理论知识学习能力、线下实践操作水平以及学习兴趣方面的效果。结果试验组学生考核分数为(89.81±11.11)分,高于对照组的(85.50±2.67)分,差异有统计学意义(P<0.05)。超过50%的学生认为虚拟仿真教学系统在营造学习氛围与互动体验方面不具有优势,但在加强理论知识、提升实践能力、激发操作积极性方面则发挥了一定作用。结论在保留传统实践教学模式的同时,引入虚拟仿真教学模式能更有效地利用教学资源,拓展实践教学的范围,有助于学生将理论知识更有效地转化为临床实践能力。

电针结合经颅交流电刺激对脑缺血大鼠神经炎症和凋亡相关基因表达的影响

目的:观察电针(electroacupuncture,EA)结合经颅交流电刺激(transcranial alternating current stimulation,tACS)对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠神经功能、脑血流、炎症-细胞凋亡基因表达的影响,探讨脑缺血再灌注后脑功能康复的神经调控机制。方法:将40只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、电针组(EA组)、经颅交流电刺激组(T组)及电针结合经颅交流电组(EA+T组),每组8只。缺血再灌注后2h,EA组选取双侧曲池、足三里进行电针干预;T组选取右侧M1区(motor cortex M1,运动皮质M1区)进行tACS干预;EA+T组选取电针结合tACS干预;S组与M组均进行气麻30min/次,连续7天。记录大鼠造模前(B)—造模后7天(D7)的神经缺损评分;B—D7右侧大脑中动脉供血区的血流值,记录血流量;D7时取脑RT-PCR方法检测缺血侧的炎症-细胞凋亡基因的表达。结果:神经缺损评分(neurological deficit scores,NDS):2h、D1时,M组、EA组、T组、EA+T组与S组相比显著增加(P<0.05);D3、D5、D7时,S组与其他各组相比显著降低、M组与其他各组相比显著增加(P<0.05)。EA组、T组、EA+T组各时间均有显著性差异(P<0.05);M组2h、D1、D3、D5、D7与B相比显著上升;D1、D3、D5、D7与2h相比显著下降(P<0.05)。血流量:EA+T组与S组均在2h时下降、D1时上升、D3时下降;EA组则从D3时上升;而M组在D1、D3、D5时与其他各相比均显著下降(P<0.05)。RT-PCR:运动皮质ΔCt法分析(参照基因):EA+T组的天冬氨酸蛋白水解酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase12,Caspase 12)表达显著低于T组(P<0.05);EA组、EA+T组的细胞因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体1(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor pyrin domain containing 1,NLRP1a)均显著低于S组(P<0.05)。缺血区2-ΔΔCt分析:M组的内质网应激相关蛋白激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达显著高于其他各组(P<0.05);M组的B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma,l-2)显著高于S组、EA组、EA+T组(P<0.01);M组的Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X potein,Bax)、Caspase 12、细胞癌基因fos(cellular oncogene fos,fos)均显著高于S组(P<0.05)。结论:电针结合tACS对缺血性脑卒中的干预可能通过调控ATF4、Bcl-2、Bax、Caspase 12、C-fos的表达发挥调节作用,联合应用在减轻炎症反应、抑制细胞凋亡方面,可能优于单独电针或tACS干预,可为缺血性脑卒中的治疗提供新的策略。

某院碳青霉烯类抗菌药物的合理用药分析

目的:分析医院碳青霉烯类抗菌药物的合理用药情况,为促进临床碳青霉烯类药物的合理使用提供参考。方法:选取2022年7月—12月郑州市第二人民医院住院患者的碳青霉烯类药物医嘱作为研究资料,采集患者的临床诊断、检查结果,以及所用碳青霉烯类药物的品种、用法用量、疗程、联用药物等信息,依据《碳青霉烯类抗菌药物临床应用评价细则》对碳青霉烯类药物医嘱进行合理用药评价并进行分析。结果:2022年7月—12月医院共有84例次患者使用了碳青霉烯类药物,其涉及的临床科室主要有重症医学科(33例次,占39.29%)、呼吸与危重症医学科(12例次,占14.29%)和消化内科二(10例次,占11.90%);合理用药点评结果显示,84例次患者中共发现41条不合理用药情况,其中主要为适应证不适宜(16条,占39.02%)和用药前未进行病原学送检(14条,占34.15%)。结论:当前医院住院患者碳青霉烯类抗菌药物的使用仍存在较多的不合理现象,管理部门应当加强对临床的培训和管理,以提高其合理用药水平,最终保障患者用药的安全和有效。

融合工业信息的《宠物食品加工工艺与设备》课程教学改革探索

《宠物食品加工工艺与设备》是本科院校动物科学专业融合工业信息的一门专业课程。改革开放以来,我国发展迅速,工业化程度不断提高。教育教学与工业信息结合,改革教育教学形式与内容是必然趋势。该文结合当前《宠物食品加工工艺与设备》课程的教学内容和教学方式、教学方法等多方面存在的问题提出改革建议,为培养适合时代潮流的动物科学专业宠物方向的创新型、复合型人才奠定基础。

废旧锂离子电池正极材料回收研究进展

随着锂离子电池(lithium-ion batteries,LIBs)在电动汽车、3C电子产品和储能领域的大规模应用和产销量的日益剧增,其退役后带来的金属浪费和环境污染问题也日益突出。有必要大力开发绿色环保、高效低成本的废旧锂离子电池正极材料回收工艺,实现金属资源的周期性利用。回顾了废旧锂离子电池正极材料回收工艺的最新进展。概述了现有的回收工艺,详细介绍了预处理、火法冶金、湿法冶金、生物浸出和直接回收等回收工艺的研究现状。并通过对比分析现有技术存在的问题,综合讨论了各工艺的回收效率、安全性和经济价值。最后,展望了废旧锂离子电池正极材料回收再利用的前景和发展趋势,旨在为直接化、高值化、规模化的废旧锂电池回收再利用研究提供借鉴与参考。

道路运输对羔羊体重、血液生化及临床指标的影响

试验旨在研究道路运输对羔羊体重、血液生化指标和临床指标的影响,为生产中有效缓解羔羊运输应激提供理论依据。选取平均体重(21.52±1.22)kg健康4月龄羔羊10只进行8 h的长途运输,分别在运输前后进行称重、静脉采血,并测定体温、呼吸频率、脉搏等临床指标。结果表明:①道路运输使羔羊体温、呼吸和脉搏频率极显著升高(P<0.01),体重降低了15.31%(P<0.05)。②道路运输极显著升高了羔羊血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)和乳酸脱氢酶(LDH)水平(P<0.01),显著升高了皮质醇(COR)和肌酸激酶(CK)水平(P<0.05),血清中谷丙转氨酶(ALT)水平无显著变化(P>0.05)。③道路运输显著降低了羔羊血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)水平(P<0.05),显著升高了白介素-6(IL-6)水平(P<0.05),血清中免疫球蛋白M(IgM)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平与运输前差异不显著(P>0.05)。④道路运输显著降低了羔羊血清中葡萄糖(GLU)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)水平(P<0.05)。⑤道路运输显著降低了羔羊血清中红细胞总数(RBC)、红细胞压积(HCT)、血红蛋白含量(MCH)(P<0.05),红细胞平均体积(MCV)极显著降低(P<0.01),白细胞总数(WBC)显著升高(P<0.05)。综上所述,羔羊经过8 h道路运输后发生了明显的应激反应,导致羔羊体重下降,机体代谢增强,炎症反应增强,免疫系统受到了一定程度损伤。

包被γ-氨基丁酸对断奶应激期内羔羊生长性能及相关血液生化指标的影响

试验旨在研究日粮中添加不同水平包被γ-氨基丁酸(GABA)对断奶应激期内羔羊生长性能、抗氧化以及神经肽类指标的影响。选择45日龄健康状况良好、体重为(26.14±1.40)kg的湖羊羔羊48只,随机等分为4组,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在基础日粮中添加100、140、180 mg/d包被GABA,羔羊48日龄断奶(记为第1天),分别记录羔羊采食量及体重,在第-3、1、3、7天采集血液测定相关指标。结果表明:①添加包被GABA显著影响羔羊平均日增重(ADG)(P<0.05),时间显著影响羔羊体重(BW)、ADG和ADFI(P<0.05),添加包被GABA×时间对羔羊生长性能无影响(P>0.05)。②添加包被GABA和时间显著影响羔羊血清抗氧化指标中丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性(P<0.05),添加包被GABA降低了MDA含量、升高了GSH-Px水平;随着时间延长,MDA含量、GSH-Px活性呈先增加后降低趋势。③添加包被GABA显著降低了胆囊收缩素(CCK)和神经肽Y(NPY)含量(P<0.05),时间显著影响血清中CCK、NPY水平(P<0.05),随着时间延长CCK水平整体呈增加趋势。④添加包被GABA显著影响血清去甲肾上腺素、五羟色胺、多巴胺含量(P<0.05),添加包被GABA降低了去甲肾上腺素、多巴胺水平,升高了五羟色胺含量;随着时间延长,去甲肾上腺素含量总体呈升高趋势。综上,在日粮中添加包被GABA可通过提高抗氧化能力、降低大脑兴奋性缓解断奶应激,改善生长性能,本试验条件下包被GABA的最佳添加量为140 mg/d。

γ-氨基丁酸对绵羊卵巢颗粒细胞凋亡及类固醇激素分泌的影响

【目的】该文章旨在探究γ-氨基丁酸(GABA)对绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)凋亡及类固醇激素分泌的影响。【方法】卵巢GCs培养液中分别添加0、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)和10^(-5)mol/L的GABA处理24 h后,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测GCs增殖及凋亡情况,筛选出GABA适宜培养浓度用于后续试验,采用ELISA检测GABA对GCs雌激素(E_(2))及孕酮(P_(4))分泌的影响,RT-q PCR及Western blot技术检测促GCs增殖(PCNA、CCNB1、CCND1)、促凋亡(Caspase-3、Bax)、抗凋亡(Bcl-2)和类固醇激素合成相关基因(CYP11A1、St AR、3β-HSD、CYP19A1)m RNA及蛋白的表达。【结果】添加GABA处理绵羊卵巢GCs 24 h,各组均可显著促进GCs增殖(P<0.05),抑制其凋亡(P<0.05)。GABA可显著上调PCNA、CCNB1、CCND1、Bcl-2 m RNA及蛋白表达量(P<0.05),显著下调Bax、Caspase-3 m RNA及蛋白表达量(P<0.05)和Bax/Bcl-2比值(P<0.05)。GABA可显著促进P_(4)的分泌(P<0.05),显著抑制E_(2)的分泌(P<0.05)。显著上调St AR、3β-HSD、CYP11A1的m RNA及蛋白表达水平(P<0.05),显著下调CYP19A1的m RNA及蛋白水平(P<0.05)。【结论】GABA通过调节CCNB1、CCND1、PCNA、Caspase-3、Bcl-2、Bax基因表达促进GCs的增殖,抑制其凋亡;通过调节St AR、3β-HSD、CYP11A1、CYP19A1基因表达促进GCs的P_(4)分泌,抑制E_(2)生成。

L-半胱氨酸对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡和类固醇激素分泌的影响

旨在探讨L-半胱氨酸(L-Cys)对体外培养绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)增殖、凋亡和类固醇分泌的影响。本研究采集1~1.5岁龄体重相近饲养条件相同的30只健康性成熟小尾寒羊母羊新鲜卵巢,从优势卵泡(2~8 mm)中收集GCs,随机分为5组,每组6个重复,各组添加L-Cys浓度分别为0、100、300、500和700μmol·L^(-1),培养48 h后用CCK-8试剂盒进行细胞增殖活力测定,Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测GCs的凋亡情况,采用ELISA检测GCs培养液上清中孕酮和雌二醇的分泌水平并采用实时荧光定量PCR和Western blot分析L-Cys对绵羊颗粒细胞增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB 1)、凋亡相关基因(BAX、Caspase-3、Bcl-2)和类固醇分泌相关基因的(STAR、3β-HSD、CYP 11A1、CYP 19A1)mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,100、300和500μmol·L^(-1)组的L-Cys均可显著促进绵羊GCs的增殖活力(P<0.05),并显著抑制其凋亡率(P<0.05)。添加300μmol·L^(-1)的L-Cys显著抑制了孕酮(P 4,P<0.05)的分泌。进一步研究发现,300μmol·L^(-1)和500μmol·L^(-1)组的L-Cys可以上调增殖相关基因(PCNA、CCND2、CCNB 1)mRNA表达水平,其中300μmol·L^(-1)组的增殖蛋白(PCNA、CCND2、CCNB1)表达量显著上升(P<0.05);100μmol·L^(-1)和300μmol·L^(-1)组显著下调凋亡相关基因(BAX、Caspase-3)mRNA(P<0.05)及其蛋白表达水平(P<0.05)。添加300μmol·L^(-1)L-Cys显著降低了类固醇相关基因(STAR、3β-HSD)mRNA及蛋白表达水平(P<0.05),添加100μmol·L^(-1)和300μmol·L^(-1)L-Cys显著升高了类固醇相关基因(CYP 11A1、CYP 19A1)mRNA(P<0.05)及其蛋白表达水平(P<0.05)。综上,L-Cys通过上调基因PCNA、CCNB1、CCND2、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达、下调基因BAX、Caspase-3 mRNA及其蛋白表达,促进绵羊GCs增殖,抑制其凋亡;L-Cys通过下调基因STAR、3β-HSD mRNA及其蛋白表达以及上调基因CYP 11A1 mRNA及其蛋白表达抑制P 4的分泌。