BMP-2基因转染对兔骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性和钙含量的影响

目的:观察骨形成蛋白2(BMP-2)基因转染对骨髓间充质干细胞(BMSCs)碱性磷酸酶(ALP)活性和钙含量的影响。方法:成年大耳白兔16只,经髂后上嵴抽取骨髓组织混合后培养、分离BMSCs。取第3代细胞,采用电转法转染pcDNA3.1-BMP-2质粒。在扩大培养的第7、14、21、28和35天时收集细胞,用相应试剂盒对细胞ALP活性和钙含量进行测定,在扩大培养的第21天采用RT-PCR检测细胞BMP-2 mRNA的表达水平。以未转染细胞作对照。结果:转染组细胞BMP-2 mRNA相对表达水平为(1.652±0.082),对照组为(0.473±0.021),转染组BMSCs中BMP-2 mRNA的表达明显提高(t=2.192,P=0.005)。转染组细胞内ALP活性和钙含量较对照明显提高(P<0.01)。结论:转染BMP-2基因的BMSCs表现出明显的成骨活性,可以应用为骨组织工程研究的种子细胞。

BMP-2转染BMSCs修复兔股骨头坏死模型的实验研究

目的探索骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)联合骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)基因转染在治疗兔早期激素性ANFH中的作用,以期为临床上ANFH的基因治疗的应用提供理论依据。方法把36只新西兰大白兔ANFH模型被随机分为3组,每组12只。A组为模型对照组,B组为模型对照组处理的基础上减压后植入空质粒BMSCs;C组为模型对照组处理的基础上减压后植入重组BMP-2真核表达载体转染的BMSCs。所有动物均将单侧股骨头制作ANFH模型,观察股骨头坏死(Avascular necrosis of the femoral head,ANFH)模型兔的一般情况,并分别于术后4、8周每组处死6只,收集到的模型股骨头标本分别做X线检查、HE染色。通过X线检查、组织学检查的方法检测ANFH修复重建的效果。结果 ANFH模型股骨头X线检查结果和股骨头组织切片观察,A、B、C三组的效果依次提高,C>B>A。结论 BMP-2与BMSCs在新骨生成过程中具有协同作用。

血管内皮生长因子复合骨形态发生蛋白-2转染骨髓间充质干细胞修复兔股骨头坏死模型

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）联合骨形态发生蛋白（BMP-2）基因转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）在治疗兔非创伤性股骨头缺血性坏死（ANFH）中的作用.方法：分离、培养兔BMSCs,采用电转法分别转染重组表达载体pcDNA3.1-BMP-2质粒和重组表达载体pcDNA3.1-VEGF质粒,分为4组,空白组、VEGF组、BMP-2组、混合培养组.免疫蛋白印迹检测各组BMSCs的BMP-2和VEGF蛋白的表达.检测各组碱性磷酸酶（ALP）活性和钙的含量.将64只新西兰大白兔制作ANFH模型,然后随机分为4组,分别转染上述4组质粒,减压后植入ANFH模型,收集股骨头标本分别做X线检查、股骨头组织H-E染色检查.结果：体外实验显示,ALP活性和钙含量,空白组＜VEGF转染组＜BMP-2转染组＜混合转染组.体内实验结果显示第4、8周X线和组织学观察,VEGF和BMP-2真核表达载体联合转染BMSCs组股骨头修复效果优于其他3组.结论：VEGF和BMP-2均能提高BMSCs体外培养中ALP的含量和促进体外培养时BMSCs向骨细胞转化.VEGF复合BMP-2转染BMSCs可增强骨坏死区骨修复和血运重建能力.

骨形态发生蛋白质-4转染骨髓间充质干细胞复合双层聚乳酸羟基乙酸共聚物支架修复兔膝关节软骨缺损

目的：探讨骨形态发生蛋白质-4（BMP-4）基因转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）复合聚乳酸羟基乙酸共聚物（PLGA）修复兔全层关节软骨缺损的效果。方法：取兔骨髓间充质干细胞，分离培养后，免疫组织化学鉴定BMSCs。采用电转法将pcDNA3-1-BMP-4质粒导入BMSCs。转染成功后培养备用。制备直径为4mm的双层PLGA支架。新西兰大白兔随机分成空白组、PLGA组、PLGA/BMSCs组、PLGA/BMP-4/BMSCs组4组，将双层PLGA支架置入兔双膝关节股骨内侧髁软骨缺损中。观察并记录术后动物膝关节活动情况。第8、16周时取膝关节置入组织行H-E染色，在扫描电镜下观察置入的PLGA新生组织。采用RT-PCR法定量检测4组修复软骨缺损处新生的软骨Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖基因的表达水平。结果：术后各组动物膝关节活动正常，未见炎症反应。第8、16周时PLGA/BMP4/BMSCs组兔膝关节损伤修复优于其他3组。H-E染色结果可见PLGA/BMP4/BMSCs组膝关节损伤修复效果优于其他3组。RT-PCR结果显示PLGA/BMP4/BMSCs组兔置入的PLGA新生的软骨中Ⅱ型胶原、SOX-9、蛋白聚糖基因的表达水平显著高于其他各组。结论：BMP-4转染BMSCs后能够促进骨髓间充质干细胞分化成软骨细胞，双层PLGA支架置入有利于兔膝关节软骨缺损区的修复。

闭合性脑损伤后NGF基因表达时间性变化的实验研究

目的:探讨大鼠闭合性脑损伤后 NGF基因表达的时间性变化。方法:采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)法 ,半定量分析闭合性脑损伤后 0、3、6、12 h和 1、3、5、7、9、11d脑组织中神经生长因子 (NGF ) m RNA表达的时间性变化。 结果:大鼠正常脑组织中存在 NGF m RNA,但表达量较低。当发生闭合性脑损伤后 ,其脑组织NGF基因的表达量明显增加 ,3d后达到高峰 ,7d后开始下降 ,11d后则降至一般水平。结论:闭合性脑损伤后脑组织中 NGF m RNA表达量显著升高 ,并呈现一定的规律性 ,这对于重构犯罪过程、探索脑损伤时间的推断方法具有重要的实验研究意义。

BMP-2转染BMSCs复合镁合金棒修复兔股骨头坏死的实验研究

目的探讨BMP-2转染BMSCs复合镁合金棒修复兔股骨头坏死的的效果。方法取一只兔分离、培养兔BMSCs,采用电转法将成功转染pc DNA3.1-BMP-2的质粒导入BMSCs。取40只兔子用液氮冷冻法制造股骨头坏死模型,然后随机分为4组,每组10只,分别为镁棒/BMSCs组,镁棒组,BMSCs组,空白组。镁棒组和镁棒/BMSCs组是指利用生物钻将生物镁合金棒置入坏死股骨头,同时镁棒/BMSCs组和BMSCs组导入转染pc DNA3.1-BMP-2质粒的BMSCs。术后6周和12周分别取股骨头标本观察修复效果。结果术后第1、2、4、8、12周分别检验各组兔血液、尿液中镁离子浓度。第6、12周X线、HE染色显示,镁棒/BMSCs组股骨头恢复最好,第12周镁合金棒基本完全吸收;镁棒组和BMSCs组股骨头坏死进展较慢,部分组股骨头坏死有好转;空白组股骨头坏死加重。结论植入镁合金棒联合BMP-2基因复合BMSCs有延缓和修复股骨头缺血性坏死的作用。

人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植修复犬坐骨神经缺损

目的:探讨人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植技术的可行性。方法:12只犬分为脱细胞同种异体神经移植组和人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植(B)组,每组6只,均建立坐骨神经缺损动物模型。制备人胎盘羊膜和脱细胞同种异体神经。A和B组分别行同种异体神经移植术和人胎盘羊膜包裹的同种异体神经移植术。术后16周运用电生理学、髓鞘HE染色等观察2组犬移植段神经比目鱼肌诱发电位的波幅和时限、双侧坐骨神经传导速度的差异。结果:术后16周,A组犬足部及小腿红肿;B组犬神经功能恢复,小腿肌肉肌力恢复,犬右后肢能够站立。A和B组犬移植段神经连续性好,B组犬移植段神经周围炎症反应轻。B组与A组相比可见较多雪旺细胞增殖及大量再生的神经纤维。B组轴突密度和比目鱼肌诱发电位波幅、时限明显高于A组(t=10.195、4.825和6.323,P<0.001)。结论:人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植术可改善神经形态学变化,提高移植神经的修复质量。

大鼠闭合性脑损伤后脑组织星形胶质细胞结构及NO、内皮素水平的变化

目的探讨闭合性脑损伤后脑组织星形胶质细胞(Ast)形态学变化及一氧化氮(NO)、内皮素(ET)水平的变化。方法36只大鼠随机分为6组,每组6只。其中1组为对照组,免行打击,其他处理同其余5组。其余5组以Marmarou法造成闭合性脑损伤模型,分别于伤后0min、30min、60min、90min和120min再次麻醉后处死,迅速断头取脑,在脑干挫伤灶周围取部分脑组织,经HE染色、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色,观察分析脑损伤后Ast的细胞形态学变化,同时检测各组脑组织NO和ET含量。结果大鼠闭合性脑损伤早期(损伤后30min),Ast反应性肿胀最明显,随着时间的延长,Ast反应性肿胀程度和肿胀细胞数目逐渐减轻和减少。脑损伤早期(损伤后30min),脑组织NO水平迅速升高(P<0.01),以后逐渐降低,但仍高于对照组水平(P<0.01);损伤后30min脑组织ET水平迅速降低(P<0.01),而后逐渐增加,但仍低于对照组水平(P<0.01)。结论脑组织NO和ET水平的失衡可能是闭合性脑损伤后脑功能、代谢和结构改变的主要因素之一。

虚拟人体解剖学实验室教学系统

人体解剖学主要是从形态学角度研究正常人体形态结构及功能的科学,具有很强的直观性和实践性,尸体标本是学生学习解剖学的基础,要取得好的教学效果,就必须提供足够数量和品种齐全的尸体标本供学生观看和实践操作,这一过程是通过实验室教学来完成的,实验室教学在解剖学中占有重要的地位.

来华医学留学生解剖学教学方法的探索

随着国家国力的不断增强，与国外在教育事业方面交流的不断深入，积极拓展来华留学生规模，提高教育层次使留学生在学习现代科学技术的商时，接受年华彘族博大精深的思想文化内涵，对于提高我国软实力，进而实现中华民族伟大复兴具有战略意义。

来华医学留学生教育存在的问题与对策

随着我国国力的不断增强,我国与国外在教育事业方面的交流也在不断深入,积极拓展来华留学生的规模,提高教育层次,使留学生在学习现代科学技术的同时,接受中华民族博大精深的思想文化内涵,对于提高我国的软实力,进而实现中华民族伟大复兴具有战略意义.这也是当前我国教育走向世界,建设世界一流高水平大学的重要途径.

新型稀土镁合金螺钉体内促骨修复及体外生物相容性研究

为测试新型稀土镁合金的生物相容性及降解产物致敏性;评价新型稀土镁合金螺钉对骨伤模型的治疗效果,基于NZ30K镁合金添加Mn元素制成新型稀土镁合金,并通过后期加工制成不同规格的螺钉.将稀土镁合金螺钉浸入磷酸盐缓冲液中制作浸提液,于大鼠后肢背部皮下注射,观察浸提液皮下致敏性.将螺钉打磨制成圆片植入到大鼠皮下,观察皮下降解产气情况,以可吸收骨蜡作为对照同位置皮下植入.建立兔骨损伤模型,将稀土镁合金植入,定期拍摄X光检查螺钉降解情况,按照时间顺序分别于8周、12周、16周处死实验兔制作肝肾切片、骨切片,评价肝肾毒性及体内降解情况;同期以ZA75镁合金为基础添加0.3%Mn元素制成新镁合金,作为对照组对比稀土镁合金对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化效果.将浸提液过滤稀释后添加至细胞培养板中,加入成骨诱导液培养, Westernblot蛋白电泳实验测定骨保护蛋白(OPG)表达情况.新型稀土镁合金浸提液未表现出致敏性,皮下降解结果显示植入初中期有气腔产生,中后期气腔消失,镁合金完全降解;组织切片显示,兔股骨螺钉植入在前中期有一定肝肾毒性,植入中期促骨生长效果相较于前期更为明显,植入后期未见明显肝肾毒性,螺钉降解完全,植入部位骨质增强;兔股骨植入降解结果显示植入前期未观察到明显的促进骨生长效果,螺钉与骨质嵌合紧密,植入中期促骨生长修复效果呈现,局部骨组织出现膨隆包裹住螺钉降解产物,植入后期螺钉完全降解,植入位置有一小孔未闭合,股骨近端明显膨隆;蛋白电泳实验显示,新型稀土镁合金浸提液可增加OPG表达,具有良好的生物相容性.基于NZ30K开发的新型稀土镁合金在动物实验及细胞实验阶段表现出良好的生物相容性,可为临床应用提供一定参考.

生物可降解镁合金骨科植入材料的临床应用及其有限元分析

在骨-器械界面建立和维持成熟骨是骨科植入材料长期成功的关键.镁合金由于其生物可降解性、天然骨组织的力学相似性以及成骨潜力,并且在体内不抑制间充质干细胞(hBMSCs)的成骨特性,成为有前途的承重骨科植入物的候选材料.但其高降解率和植入物相关感染的风险以及不佳的力学性能,对其临床应用提出了巨大的挑战.有限元分析方法能对复杂结构、形态、载荷和材料力学性能进行应力分析,可有效地帮助临床医生了解镁合金植入器械的应力及生物力学性能.

实验性大鼠脑损伤后脑组织中肿瘤坏死因子α基因表达的变化

目的:观察闭合性脑损伤后脑组织肿瘤坏死因子αmRNA表达变化,探讨对脑组织的影响。方法:实验于2004-09/2005-03在郑州大学基础医学院人体解剖学教研室神经分子生物学实验室进行,选择SD大鼠72只,随机分为实验组66只和对照组6只,实验组采用Marmarou法制备闭合性颅脑损伤模型,对照组不做任何处理。实验组又分为脑损伤后30min,1,3,9,12和1,2,3,4,5,6d11个时间点,每个时间点6只。应用反转录多聚酶链反应检测脑损伤后不同时间点脑组织中肿瘤坏死因子αmRNA表达。结果:72只大鼠全部进入结果分析。对照组未见肿瘤坏死因子α表达实验组损伤后30min及1h组与对照组无明显差别,9h～5d明显增加,12h～3d达到高峰,6d后开始下降。结论:大鼠闭合性脑损伤后脑组织肿瘤坏死因子αmRNA表达水平增加,是加重继发性脑损伤的重要因素。

大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化

目的：探讨大鼠坐骨神经损伤后GAP-43基因表达的变化。方法：采用RT-PCR法，半定量分析坐骨神经横断后1d、2d、4d、1W、2W、4W远侧端组织中GAP-43m．RNA含量的变化。结果：大鼠正常坐骨神经中存在NGF mRNA，但表达量较低。坐骨神经横断后，其远侧端组织中GAP-43 mRNA表达量显著升高，1周达到高峰，两周开始下降，4周则降至一般水平。结论：坐骨神经损伤后,GAP-43基础的表达呈现出增高现象，提示OAP-43 mRNA的表达和蛋白质合成与神经损伤再生密切相关。

闭和性脑损伤后NGF基因表达时间性变化的应用研究

目的：探讨大鼠闭和性脑损伤后NGF基因表达时间性变化。方法：采用RT-PCR法，半定量分析闭和性脑损伤后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、9d、11d脑组织中NGF mRNA含量的变化：结果：大鼠正常脑组织中存在NGF mRNA，但表达量较低。闭和性脑损伤后脑组织中NGF mRNA表达量显著升高并呈现一定的规律性。

局部解剖学虚拟实验室的设计与应用

近年来随着招生规模的扩大，加之各医学院校相继开设局部解剖学实验课．尸源紧张，激发了我们利用校园网创办局部解剖学虚拟实验室，作为局部解剖实验教学的重要补充，使学生无论是存校还是在假期期间，

大鼠闭合性脑损伤后星形胶质细胞的形态及GAP-43、ET-1 mRNA表达的变化

目的：探讨闭合性脑损伤后脑组织星形胶质细胞（Ast）形态学变化和生长相关蛋白（GAP-43）、内皮素-1（ET-1）mRNA表达的变化。方法：78只大鼠随机分为12个损伤组和1个假损伤对照组，每组6只。损伤组制备Marmarou脑损伤模型。各组分别于伤后0h、0．5h、1h、1．5h、2h、6h、12h、36h、48h、60h、66h、72h断头取脑，在脑干损伤灶周围取部分脑组织，常规固定切片HE染色，胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色结合计算机彩色图像分析技术观察分析Ast形态，RT-PCR法检测GAP-43及ET-1 mRNA。结果：闭合性脑损伤后0．5hAst反应性肿胀最明显，以后随着时间的延长Ast反应性肿胀程度降低、肿胀Ast的数目减少。伤后6—72h脑组织GAP-43mRNA及ET-1mRNA均较假损伤对照组增高（P〈0．01）。结论：GAP-43及ET-1在脑损伤后血脑屏障损害的病理生理过程中起重要作用。

不同粘接剂修复Ⅴ类洞的边缘微渗漏情况比较

目的:比较不同粘接剂在Ⅴ类洞修复中的边缘微渗漏情况。方法:30颗新鲜离体前磨牙随机分为3组,每组10颗。在颊、舌侧颈缘上1 mm处制备标准的Ⅴ类洞(3 mm×2 mm×2 mm)。分别选用全酸蚀粘结剂Prime&Bond NT、自酸蚀粘结剂Clearfil SE Bond或Clearfil S3 BOND和可乐丽前后牙通用光固化复合树脂A2进行修复。立体显微镜下观察修复体边缘微渗漏的情况。结果:3种粘结剂均存在微渗漏现象。3组牙合壁微渗漏情况差异无统计学意义(χ2=1.530,P=0.465),龈壁微渗漏情况相比差异有统计学意义(χ2=8.924,P=0.012),且两个自酸蚀粘接剂组的龈壁微渗漏情况均较全酸蚀组轻(P<0.05)。结论:自酸蚀粘接剂在龈壁部位封闭效果较好,适用于Ⅴ类洞的修复。

正常膝关节和人工膝关节髌股关节高屈曲运动特性及其比较分析

目的分析人体正常膝关节和人工膝关节高屈曲活动下髌股关节的运动,为膝关节髌股关节运动特性研究提供参考。方法建立包括膝关节骨组织和主要软组织在内的正常膝关节以及人工膝关节的动态有限元模型,采用三束股四头肌肌力非同步变力加载的方式,对膝关节下蹲运动中髌股关节的运动特性进行研究,并与相关研究结果进行对比分析。结果通过有限元分析,获得高屈曲膝关节三维运动的相对运动参数。髌股关节在位移和旋转均呈现出相同的运动趋势,同时,存在局部的差异,在低屈曲时,人工髌股关节表现出先外倾后内倾的运动趋势,而正常髌股关节表现出持续内倾的运动特性。结论通过仿真和对比分析,人体髌股关节的运动数据总体趋势近似,同时存在差异。对于正常膝关节,差异的原因主要在于髌骨运动各个方向上和不同屈曲度时的约束程度的改变;对于人工膝关节,差异主要来源于膝关节型面和结构的改变,以及坐标系定义、在体和离体差异、负荷加载差异。