两株马立克病毒的分离鉴定及其主要致病基因分析

为了解国内鸡群马立克病毒(MDV)流行毒株的分子特征,采用细胞培养法对马立克病疑似病鸡抗凝血进行MDV分离,间接荧光法鉴定MDV血清型,PCR扩增分离病毒的meq和pp38两个主要致病基因,所得序列与MDV参考毒株的序列进行比对分析。结果显示,共分离鉴定出2株MDV I型毒株,分别命名为JS0316和JS0424。meq基因编码的氨基酸序列结果显示,2个MDV分离株缺乏弱毒疫苗株的特征(A71S、P194-),具有MDV强毒分离株的分子特征(D80Y、V115A、T139A、P176R和P217A)。同时,JS0316 Meq蛋白出现Q93R和V123A突变,pp38蛋白出现L98I和F240S突变,而JS0424 Meq蛋白出现P217T突变,pp38蛋白出现W67G和V210A突变。因此,2株MDV均具有国内流行强毒株的分子特征,同时存在新的基因突变。

16株新型H3N3亚型禽流感病毒的遗传变异分析

为了解新出现的H3N3亚型禽流感病毒(AIV)的遗传变异特征,对2022—2023年分离鉴定的H3亚型AIV进行了全基因组测序分析,并对代表株进行了抗原差异分析。结果共分离鉴定出15株家禽源和1株野鸟源H3N3亚型AIV。全基因遗传演化分析结果显示,16株分离株均属于欧亚分支,其HA基因均源自H3N8亚型AIV,与人源H3N8亚型AIV的核苷酸相似性为97.3%~99.2%;NA基因均源自H10N3亚型AIV,与人源H10N3亚型毒株的核苷酸相似性为98.1%~98.4%;内部基因片段均来自H9N2亚型AIV。分离株HA基因裂解位点均符合低致病性AIV的分子特征。分离毒株存在多个能增强病毒对哺乳动物适应性及致病性的突变位点,如PB2蛋白的A588V和E627V突变、PB1蛋白的I368V和S375N突变等。抗原差异性分析结果表明,分离株与华东地区早期流行株的HI抗体滴度相差1 log2~3 log2。因此,本研究分离的16株H3N3亚型AIV均为三源重组病毒,由H9N2亚型AIV提供全部内部基因,毒株存在多个哺乳动物适应性及致病性增强的突变,并已传播给野禽。本研究揭示了新型H3N3亚型AIV的遗传特征、变异和多宿主分布情况,为禽流感的防控提供理论支持。

表达MDVgB和/或鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒免疫效力试验

将表达鸡 干扰素基因、表达MDVgB基因、共表达MDVgB和鸡 干扰素基因的重组鸡痘病毒进行组合免疫 ,观察在SPF鸡、狼山鸡中的免疫保护作用。在狼山鸡中随rFPV gB剂量的减少 ,保护效力逐渐下降 ,而在SPF鸡中 10 4 与 10 6PFU的rFPV gB提供相同的保护效力 ,但存在减缓增重的副反应 ;在所有的疫苗组合中 ,由10 6PFU的rFPV gB、10 5PFU的rFPV IFN Ⅱ和 40 0 0PFUHVT组成三价疫苗的保护效力最高且不影响增重 ,表明鸡 干扰素既可降低重组鸡痘病毒的减缓增重的副反应 ,又具有免疫佐剂作用 ,与重组鸡痘病毒及HVT配合成疫苗是预防MD有效的冻干制剂。

PCR扩增TK基因检测鸡传染性喉气管炎病毒的研究

根据已发表序列设计一对包含鸡传染性喉气管炎病毒 ( ILTV) TK基因全长核苷酸的 1 2 5 9bp引物 ,对 2株 IL TV强毒和1株 ILTV疫苗毒进行 PCR扩增 ,均能扩增出预期大小的目的片段 ,酶切分析证实了目的片段的特异性 ,而其它禽病原体的扩增均为阴性。 PCR检测 IL TV DNA的最小检测量为 75 pg。此方法检测人工接种鸡的气管棉拭样品 ,均能检测到 IL TV。

共表达MDV糖蛋白B和鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建

Recombinant fowlpox viruses(rFPVs)coexpressing MDV gB and chicken type Ⅱ interferon (IFN-Ⅱ) gene were constructed by using different promoters of Ps and PE/L.rFPVs were selected and purified by blue plaque expressing β-galactosidase.The expression of MDV gB gene was confirmed by indirect immunofluorescence assay.The levels of MDV gB expressed in rFPV-gB-IFN under the control of the synthetic promoter Ps was same as that in rFPV-gB.The expression of IFN-Ⅱ was examined in chicken embryo fibroblast(CEF) by protection against vesicular stomatitis virus-induced cytopathic effect.The levels of IFN expressed in CEF was 640～1280 units/mL.When rFPVs were propagated in CEF,the plaque sizes of rFPV-gB were larger than those of rFPV-gB-IFN,the plaque formation units of rFPV-gB were also more than those of rFPV-gB-IFN.

鸡痘病毒基因组DNA复制非必需片段的鉴定

将中国鸡痘病毒鹌鹑化弱毒株（２８２Ｅ４）蚀斑纯化，在ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞上增殖后，经超声波裂解，蔗糖梯度离心得到纯化病毒，以蛋白酶Ｋ消化，酚：氯仿、氯仿和水饱和乙醚抽捉，乙醇沉淀，得到ＦＰＶ基因组ＤＮＡ，后用ＥｃｏＲｌ消化，随机克隆到ｐＵＣ１８质粒中。限制性内切酶片段电泳分析结果表明，克隆到１０个不同大小的片段，根据酶切图谱分析，选取克隆或亚克隆后的单一酶切位点，插入标记基因（Ｐ１１一ＩａｃＤ筛选出３个复制非必需片段。为进一步构建表达外源片段重组质粒载体创造了良好的条件。

表达马立克氏病病毒CVI988/Rispens株糖蛋白B基因的重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护研究

用鸡痘病毒载体表达马立克氏病病毒 (MDV)糖蛋白B(gB)基因构建成重组鸡痘病毒 (rF PV)。以MDVGA或Md5和RBIB混合攻毒 ,在不同品种的鸡中评价rFPV -gB/R单价苗和与火鸡疱疹病毒 (HVT)组成的二价苗的免疫保护效力。试验结果表明 ,MDV疫苗和FPV母源抗体阴性的SPF鸡和母源抗体阳性的商品鸡中 ,rFDV - gB/R均能提供免疫保护作用 ,且其中一种商品蛋鸡中rFPV - gB/R与HVT液氮苗或HVT冻干苗结合使用 ,均有显著的免疫协同保护作用。免疫学研究指出 ,rFPV -gB/R与常规疫苗一样 ,可显著地降低疫苗免疫攻毒鸡的病毒血症和羽囊排毒。

磷酸钙介导马立克氏病病毒DNA转染鸡胚成纤维细胞

提取马立克氏病病毒（ＭＤＶ）Ｒｉｓｐｅｎｓｅ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）总ＤＮＡ，运用磷酸钙－ＤＮＡ沉淀转染ＣＥＦ，可以成功地得到ＭＤＶ的病变空斑。用每份沉淀含２０μｇ的ＭＤＶ和细胞总ＤＮＡ转染次代ＣＥＦ，其转染形成空斑的数量为４～２２１个，转染频率约为１０－６～１０－５；将磷酸钙－ＤＮＡ沉淀加入到ＣＥＦ中，于３７℃５％ＣＯ２培养箱中培养４ｈ后，室温下用１５％甘油休克２ｍｉｎ，由此可以提高转染频率约２０倍；转染后形成的ＭＤＶ空斑与原始感染病毒的空斑形态、生长速度一致。ＭＤＶＤＮＡ通过磷酸钙沉淀法以较高的频率转染ＣＥＦ，为研究ＭＤＶ基因组的调控。

表达马立克氏病病毒CVI988/Rispens糖蛋白B重组鸡痘病毒的免疫性及安全性

用表达马立克氏病病毒(MDV)Ⅰ型疫苗株CVI988/Rispens 糖蛋白B(gB)基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB/R)和鸡痘病毒(FPV)疫苗株282E4 免疫1 日龄不同品种的鸡,来评价2 种病毒株的安全性及免疫性。试验结果表明,rFPV gB/R和FPV 282E4 免疫鸡后对FPV 强毒攻击均可提供100% 的保护,对有FPV母源抗体的商品蛋鸡安全无毒性,而对无母源抗体的SPF鸡的毒性则不同。斑点杂交和Southern 杂交证实,rFPV-gB/R 中无氨苄青霉素的抗性基因。

山羊绿脓杆菌感染的诊断

山羊绿脓杆菌感染的诊断彭大新张如宽（扬州大学农学院动物医学系２２５００９）徐圻刘立玉钱志勤（响水县畜牧兽医站）１９９６年７月，江苏省某羊场饲养的７３只山羊发生以咳嗽和拉稀为主要病症的传染病，发病率８０％以上，死亡率２３％，经系统诊断确诊为绿脓杆菌感染...

马立克氏病基因工程疫苗研究现状及发展趋势

本文对MD基因工程疫苗中的重组亚单位疫苗、基因缺失苗、基因疫苗和重组活病毒载体疫苗的研究现状作一综述,并重点介绍了重组活病毒载体疫苗。结合其他疫苗的研究方法,可从鸡痘病毒载体插入部位的选择、增加外源基因的表达产量、使用多个抗原表位构建多价重组基因工程疫苗、使用两种病毒载体构建的重组病毒二次免疫、共表达细胞因子或细胞表面受体、表达微基因等方面来增强重组鸡痘病毒活病毒载体疫苗的免疫效力。

传染性法氏囊病病毒分子结构与功能研究进展

本文对传染性法氏囊病病毒的分子结构与功能的关系及致病的分子基础作了综述。 IBDV的主要保护性抗原及抗原表位的变异位于结构蛋白 VP2上。病毒多肽成熟需经二次切割 ,NCR可影响病毒的转录和 /或翻译 ,VP1 - VP3复合体的形成是 IBDV装配的重要环节。不同毒力型的 IBDV的出现除与基因突变、重组、重排有关 ,还可能与 VP5有关 ,也证实了 NCR与血清型的致病性无关。

MDV Rispens 株B抗原基因的酶切及序列分析

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ｉ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株接种原代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），待出现８０％以上细胞病变后收获，提取细胞和病毒的总ＤＮＡ．以此为模板，根据Ｂ抗原基因核苷酸序列设计一对引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出一条约２．８５ｋｂ的特异性条带，双酶消化后克隆至质粒ｐＵＣ１９，酶切分析表明该病毒的Ｂ抗原基因上ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲⅤ、ＢａｍＨⅠ、ＥｃｏＲⅠ的酶切位点分布与ＲＢ１Ｂ株、ＧＡ株的完全相同，进一步序列分析表明。

鸡传染性支气管炎

鸡传染性支气管炎＠彭大新￥扬州大学农学院畜禽传染病实验室鸡传染性支气管炎■彭大新（扬州大学农学院畜禽传染病实验室２２５００９）传染性支气管炎（ＩＢ）是鸡的一种急性、高度接触传染的病毒性呼吸道疾病，以气管罗音、咳嗽和打喷嚏为其特征。在产蛋鸡群则通常发生产蛋率...

禽流感病毒的流行现状与防控技术

最近报道的病例2014年5月南充市l例重症肺炎病例咽拭子标本，经中国疾病预防控制中心检测确定为H5N6禽流感病毒。2014年8月28日，黑龙江省哈尔滨市双城区的鹅出现疑似禽流感症状，发病20550只，死亡17790只。经国家禽流感参考实验室确诊为H5N6亚型高致病性禽流感。

二甲基亚砜对马立克氏病Ⅱ型无毒株Z_4的影响

本试验测定了细胞结合毒—马立克氏病Ⅱ型无毒株 Z_4在冻存前或复苏后条件下,与10%二甲基亚砜(DMSO)作用不同时间对病毒粒子的活力影响,结果发现,加入DMSO 后,Z_4形成的蚀斑数只为未加 DMSO的56.2—71.1%。DMSO 与病毒分别作用5、10、15,20、25和30分钟,对病毒蚀斑形成的影响无显著差异;不同来源的10%DMSO与 Z_4作用后,对 Z_4的活力影响亦无显著差异。

我国在世界禽病领域的影响仍有待于进一步提高

在第十八届世界禽病大会上，与会的中国代表积极地参与了大会的全过程，展示了中国禽病研究的水平，了解了世界各国禽病的研究现状和成果，收获颇丰。下面简单谈一下参会体会。

新的犬ANP32A的克隆及其在流感病毒跨物种感染中的作用

物种特异的酸性核磷蛋白32A(acidic nuclear phosphoprotein 32A,ANP32A)调节不同宿主A型流感病毒RNA聚合酶活性。为分析犬ANP32A(canine ANP32A,caANP32A)的物种特异性及其在流感病毒跨物种感染中的作用,利用RT-PCR方法从MDCK细胞以及犬肺、脾、肠不同组织中扩增和克隆caANP32A;激光共聚焦试验分析caANP32A与A型流感病毒RNA聚合酶的相互作用;双荧光素酶报告基因试验检测过表达caANP32A对A型流感病毒RNA聚合酶活性的影响。结果显示,从MDCK细胞中扩增到新的caANP32A,比已报道的caANP32A多出4个氨基酸插入,从犬肺、脾和肠组织中均扩增到该新的caANP32A;对caANP32A的基因进行测序分析,发现该新的caANP32A不是由mRNA选择性剪接形成的;激光共聚焦试验发现,新caANP32A与H3N2 CIV的RNA聚合酶在细胞核中共定位;聚合酶活性试验显示,在哺乳动物细胞过表达新caANP32A不能促进H9N2禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和H3N2犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)的RNA聚合酶活性,而鸡ANP32A(chANP32A)能够促进。本研究克隆的新caANP32A较以往报道,在176至179位存在四个氨基酸LSLV的插入,但新caANP32A对AIV的RNA聚合酶活性仍然有物种限制性且该新的caANP32A也未增强CIV的RNA聚合酶活性。本研究为进一步解析犬在流感病毒跨物种感染中的作用提供依据。

肉用种鸡大肠杆菌性眼炎的诊治报告

肉用种鸡大肠杆菌性眼炎的诊治报告彭大新，张如宽，甘军纪，彭长坤，王祥根，张芸（江苏农学院畜禽传染病实验室杨州市２２５０００）（湾山鸡场）１９９２年１０月至１１月，镇江市某鸡场饲养１万只彼得逊肉用种鸡发病，经诊断，确诊为大肠杆菌性眼炎，现将诊治结果报告...

我国部分地区H9亚型禽流感病毒血凝素基因序列比较与遗传发生关系分析

为从分子水平掌握我国H9亚型AIV的遗传变异情况和流行规律 ,本研究汇集近年来从我国 1 2个省、市、自治区的发病鸡群中分离到的 2 3株H9亚型禽流感病毒 ,通过RT -PCR方法和核苷酸序列测定获得了 2 3个毒株的HA基因cDNA核苷酸序列。核苷酸和推导的氨基酸序列同源性比较结果表明 ,这些毒株HA基因的核苷酸序列同源性为 94.1 %～1 0 0 % ,氨基酸序列同源性为 95 .4%～ 1 0 0 % ;将这 2 3个毒株和来自亚洲及世界其它地区的另外 3 1株的HA基因cDNA序列同源性进行比较发现 ,分离自香港的HK1 70 4 99株与日本的 2个毒株关系较近 ;氨基酸序列分析发现 ,CKGS1 99、CKTJ1 96、CKTJ2 96、CKSH3 0 0和CKBJ1 97五个毒株各发生了一个潜在的糖基化位点的丢失。 5 4株H9亚型AIVHA基因 5 5bp～ 1 1 5 2bp的氨基酸序列分析发现 ,裂解位点尽管有 1 0种基序 ,但本研究中的 2 3株和近年来从我国大陆和香港地区的分离的毒株则均为RSSR↓GLF ;构成受体结合位点的 1 91位氨基酸有一个规律 ,即所有中国大陆毒株与部分香港毒株都为N ,其它毒株均为H ,1 41aa～ 1 43aa处的糖基化位点有与 1 91aa类似的规律 ,即 :凡是 1 91aa为N的毒株 ,该处均为NVS(CKBJ1 94除外 ) ,凡是1 91aa为H的毒株 ,则该处均为NVT ;遗传发生关系分析 ,中国大陆?