全蝎纯化液对静脉血栓形成大鼠纤溶和凝血系统的影响

目的通过观察全蝎纯化液对静脉血栓形成大鼠凝血和纤溶系统的影响,探讨全蝎抗静脉血栓形成的作用机制。方法 SD大鼠随机分为空白组、模型组和全蝎纯化液大、中、小剂量组,全蝎纯化液各剂量组由颈外静脉分别注入全蝎纯化液,空白组和模型组注入等体积的生理盐水。采用结扎大鼠腹腔主静脉造成静脉血栓模型,观察其对激活部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、组织型纤溶酶原激活物(tPA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)等凝血和纤溶指标的影响。结果全蝎纯化液大、中、小剂量能明显减轻血栓重量,与模型组相比,差异有统计学意义(均P<0.01),血栓形成的抑制率分别为75.23%、61.50%、51.05%;能明显延长APTT、PT、TT时间,与模型组相比,差异有统计学意义(均P<0.01);模型组tPA明显降低、PAI-1明显升高,而全蝎纯化液各剂量组能明显抑制PAI-1活性升高、增加tPA活性,与模型组相比,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论全蝎纯化液具有明显的抑制血栓形成的作用,其作用机制可能与其抗凝血及促纤溶作用有关。

僵蚕抗凝成分ACIBB对实验性静脉血栓形成的影响

目的:研究僵蚕抗凝成分(ACIBB)对大鼠实验性静脉血栓形成的影响。方法:采用结扎大鼠腹主静脉造成静脉血栓模型,观察ACIBB对纤溶、凝血系统的影响。结果:ACIBB可明显抑制大鼠实验性静脉血栓的形成,抑制纤维蛋白原含量(Fbg)、纤溶酶原含量(Plg),增强tPA与AT-Ⅲ的活性,抑制PAI活性,并明显延长激活部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)。结论:ACIBB通过降低内、外源凝血系统因子的活性,增加纤溶系统活性,进而防止血栓的形成。

僵蚕抗凝活性部位中化学成分的初步研究

目的探索僵蚕水煎液、醇沉液和凝胶色谱馏分各部位中的抗凝活性成分。方法用水煎煮、60%醇沉处理和凝胶色谱方法制备抗凝活性部位,用化学反应鉴别、氮测定法、电导、紫外吸收光谱和高效液相色谱方法检测各部位中的蛋白质或多肽和氨基酸类及草酸铵等成分。结果僵蚕的水煎煮提取、醇沉和凝胶色谱分离所得抗凝活性部位中,多肽、氨基酸类和草酸铵都是其中的主要成分,其含量在80%以上。醇沉处理使草酸铵含量下降约52%,而多肽、氨基酸类含量仅降低约8%。凝胶色谱净化后,多肽、氨基酸类含量与水煎部位比约提高28%,与醇沉处理部位比约提高39%,而草酸铵含量与醇沉液部位相当,但比水煎煮部位降低约1倍。各部位的固形物中,15种氨基酸含量在40%～50%,占定氮法测定的蛋白质含量的60%～76%;多肽类成分的分子量为1.0～4.4kDa。结论本研究为僵蚕抗凝活性成分的进一步分离纯化提供了实验基础。

全蝎提取液对大鼠下腔静脉血栓形成及凝血象的影响

采用大鼠下腔静脉血栓形成模型,观察了全蝎提取液对静脉血栓形成的影响。结果表明,全蝎提取液能明显减轻血栓重量,血栓形成抑制率为21.73％;同时激活部分凝血活酶时间(KPTT)和凝血酶原时间(PT)均明显延长,抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)活性和纤溶酶原含量明显降低。结果提示全蝎具有明显的抗静脉血栓作用,其机理与抗凝及促纤溶作用有关。

全蝎纯化液对凝血酶所致血液凝固的影响

目的探讨全蝎纯化液对凝血酶所致凝血／纤溶系统变化的影响。方法实验1：将18只SD大鼠随机分为对照组、凝血酶组和全蝎纯化液组，每组6只。凝血酶组颈外静脉注射凝血酶70U／kg，15min内注完；全蝎纯化液组于注射凝血酶前腹腔注射全蝎纯化液20mg／kg；对照组给予16ml／kg生理盐水。于注射凝血酶后10min取颈总动脉血，测定血浆活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）。实验2：将15只家兔随机分为对照组、凝血酶组和全蝎纯化液组，每组5只。实验方法同实验1，凝血酶剂量为50U／kg，药物均经耳缘静脉注射。于注射凝血酶后3h经颈总动脉取血，测定血浆血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α（6-keto—PGF1α）、组织型纤溶酶原激活物（tPA）及其抑制物（PAI）含量。结果全蝎纯化液可明显延长APTT[（43．6±1．3）s比（28．2±0．9）s]、PT[（13．1±0．7）s比（9．8±0．3）s]、TT[（19．9±1．1）s比（13．9±0．9）s]，明显降低血浆TXB2[（56．8±23．2）ng／L比（133．4±21．3）ng／L]、PAI含量[（4．9±0．5）kAU／L比（8．5±1．1）kAU／L]，增加血浆6-keto—PGF1α[（35．3±2．5）ng／L比（21．4±2．8）ng／L]、tPA含量[（4．6±0．9）kU／L比（2．3±0．5）kU／L]，与凝血酶组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论全蝎纯化液可降低内、外源性凝血系统因子的活性，增加纤溶系统活性，进而抑制凝血酶的作用。

僵蚕抗实验性静脉血栓及作用机理的研究

目的:为研究僵蚕抗实验性血栓的作用。方法:用Beyers制作静脉血栓动物模型进行观察。结果:表明静脉注射僵蚕液后,模型动物的血栓重量明显减轻(P<0.01),纤溶酶原含量、纤维蛋白原含量、优球蛋白溶解时间明确减少(P<0.05),同时激活部分凝血活酶时间(KPTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)均有明显延长(P<0.01)。结论:说明僵蚕具有促纤溶活性,对凝血酶一纤维蛋白原反应的直接抑制作用为防止血栓形成的主要因素。

僵蚕抗凝成分对血小板聚集的抑制效应

目的观察僵蚕抗凝物质(ACIBB)对血小板聚集的影响。方法在体外与体内观察ADP与凝血酶的诱导血小板的反应。结果与其相比无论ADP或凝血酶作为诱导剂,阿司匹林(ASA)与ACIBB明显降低血小板最大凝聚率,而且这一抑制作用呈剂量依赖关系。但ASA与ACIBB之间的抗血小板作用之差异无统计学意义。结论ACIBB对血小板的凝聚抑制作用,可能是僵蚕抗血栓的机理之一。

全蝎纯化液对实验性动脉血栓形成血栓素B_2和6酮-前列腺素F_(1α)的影响

目的观察全蝎纯化液对新西兰白兔颈总动脉血栓形成血栓素B_2(TXB_2)、6酮-前列腺素F1_α(6-Keto-PGF_(1α))的作用。方法采用随机数字表法将50只健康新西兰白兔分成5组:空白组、模型组、全蝎纯化液大剂量组(20 mg/kg)、全蝎纯化液中剂量组(10 mg/kg)和全蝎纯化液小剂量组(5 mg/kg)。耳缘静脉注射全蝎纯化液(空白、模型组注射同等体积的生理盐水)后,采用H_2O_2损伤新西兰白兔颈总动脉制备血栓模型,造模2 h后,采血,称血栓质量、ELISA法检测血浆TXB_2和6-Keto-PGF_(1α)的含量。结果 (1)全蝎纯化液大、中、小剂量组血栓质量比均明显低于模型组[(0.39±0.17)mg/mg、(0.52±0.21)mg/mg、(0.71±0.18)mg/mg比(1.68±0.15)mg/mg,均P<0.01]。(2)与模型组比较,全蝎纯化液大、中、小剂量组均能拮抗TXB_2含量升高[(98.7±23.5)ng/L、(127.6±24.6)n/L、(139.2±31.5)ng/L比(213.5±48.3)ng/L],能抑制6-Keto-PGF_(1α)含量降低[(65.4±21.3)ng/L、(49.8±11.5)ng/L、(41.2±9.6)ng/L比(26.3±6.1)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.01)。结论全蝎纯化液能明显降低血浆TXB_2含量、增加血浆6-Keto-PG_(1α)含量,提示全蝎纯化液作用机制可能与维持血浆TXB_2和6-Keto-PGF_(1α)平衡,从而抑制动脉内膜受损后血栓形成有关。

僵蚕抗凝成分对内毒素休克伴弥散性血管内凝血大鼠的保护作用研究

目的:探讨僵蚕抗凝成分(ACBB)对大鼠内毒素休克伴弥散性血管内凝血(DIC)的保护作用。方法:60只雄性SD大鼠被随机分为空白对照组、模型组及ACBB高、中、低剂量组,每组12只。采用静脉注射脂多糖(LPS)的方法复制大鼠内毒素休克伴DIC模型。ACBB高、中、低剂量组于注射LPS即刻分别由静脉注射ACBB 36、18和9 mg/kg;空白对照组给予等量生理盐水。注射LPS前及LPS后1、3和6 h记录大鼠平均动脉压(MAP);并于LPS后6 h经颈总动脉取血,测定血浆副凝实验(3P实验)阳性率、D-二聚体含量、血小板计数(PLT)、纤维蛋白原(Fbg)含量及抗凝血酶(AT-)活性。结果:与空白对照组比较,随时间延长,模型组MAP显著下降,6 h PLT、Fbg、AT-均显著降低,D-二聚体、3P实验阳性率均明显升高,各指标比较差异均有显著性(P均<0.01)。与模型组比较,ACBB各剂量组可明显抑制LPS引起的MAP降低,抑制3P实验阳性率,增加D-二聚体含量,防止休克后PLT、Fbg、AT-活性降低,两组比较差异均有显著性(P均<0.01),且ACBB高剂量组各指标几乎接近于空白对照组。结论:ACBB对内毒素休克伴DIC大鼠具有保护作用。

僵蚕抗凝活性成分的研究

介绍用NaOH水解 ,再经乙醇分级分离的方法 ,从僵蚕提取液中获得抗凝血酶活性物质 (成分 )。该活性不被AT Ⅲ抗体中和 ,表明其具有不依赖AT Ⅲ的作用。活性物均在 2 18nm左右有强吸收峰。其活性成分不属糖、蛋白质和生物碱类 ,而可能与水蛭一样系一种肽类或其它含氨基化合物。

桑叶提取液对凝血机制的影响

目的观察桑叶提取物对凝血机制的影响。方法小鼠腹腔注射桑叶提取物后测定全血凝固时间 ;在兔血浆中加入桑叶提取物后 ,测定激活的部分凝血酶时间 (APTT)、凝血酶原时间 (PT)和凝血酶时间(TT) ,在去抗凝血酶Ⅲ (AT Ⅲ )和去纤溶酶原兔血浆中加入桑叶提取物后测定TT。结果桑叶提取物能明显延长小鼠全血凝固时间和显著延长兔血浆的APTT、PT和TT ,显有明显的剂量 效应依赖关系 (P <0 .0 1 ) ,对去AT Ⅲ和去纤溶酶原血浆同样有显著的延长TT的作用 (P <0 .0 1 )。结论桑叶提取物具有明显的抗凝作用 。

全蝎抗凝活性成分的定性分析

目的鉴定与探讨全蝎抗凝活性成分。方法用不同的展开剂,采用薄层色谱法和纸层析法对全蝎抗凝活性成分进行鉴定和分析。结果全蝎抗凝活性成分中不含生物碱、糖类、甾体和萜类,含蛋白质和多肽,但在氨基酸的定性检测中,分离得到6个成分的斑点,与14种氨基酸对照品在相同位置上有相同颜色的斑点。结论全蝎抗凝活性成分中含有多种氨基酸、蛋白质和多肽。

全蝎抗凝活性成分的研究

目的研究全蝎提取液抗凝活性成分。方法以紫外分光光度法测其抗凝蛋白含量,以凝血酶时间(TT)为指标,以提取次数、提取工艺、加热时间、反复冻融及酸碱度考察全蝎提取液抗凝活性成分的稳定性。结果其凝血酶时间与蛋白质含量呈正比关系(γ=0.9988),全蝎以提取2次为宜,对热的稳定性较差,与冻融的次数无关(P>0.05),易受pH的影响,经酸碱处理后的TT有所降低P(<0.05),在3种提取工艺中,冷浸液的活性最强(P<0.01)。结论全蝎提取液的抗凝活性成分易受提取次数、提取工艺、受热时间及pH的影响。

僵蚕抗内毒素所致红细胞膜损伤作用的研究

目的观察僵蚕对内毒素所致红细胞膜损伤的抑制作用。方法以内毒素 (ET)损伤红细胞膜 ,观察不同浓度的僵蚕液对血浆游离血红蛋白 (PHb)含量的影响。结果 3个不同浓度的僵蚕液对内毒素所致全血溶血具有明显的对抗作用 ,PHb含量明显低于内毒素组 (P <0 .0 1 )。

僵蚕提取液中蛋白质和草酸铵等成分的定量分析

目的对僵蚕提取液中三种形态的含氮物质、草酸盐、总离子浓度和还原性物质进行含量测定。方法采用离子交换和经典化学分析方法。结果僵蚕提取液中固形物含量为38.52%,RSD=0.92%(n=3);总氮、铵态氮和酰胺态氮含量分别为5.798%、0.868%、0.196%,蛋白质含量为29.74%,占总固形物的77.2%;草酸铵含量为3.85%(不包括0.96%的草酸根对应的其他盐),占总固形物的9.98%;总离子浓度按一价离子计为1.099mol/L;能被高锰酸钾在酸性条件下氧化的还原性物质含量相当于1.015mol/L的草酸盐浓度,其中阳离子型、阴离子型和非离子型还原物质浓度占总还原物质的摩尔百分率分别为7.84%、64.16%和不低于28.0%。结论本研究为进一步研究僵蚕提取液的抗凝作用和药理作用机理奠定了一定的物质基础。

补阳还五汤抗脑缺血再灌注损伤作用机理的研究

目的从氧自由基体系、ＴＸＡ２／ＰＧＩ２平衡、环核苷酸及钙等方面研究补阳还五汤抗脑缺血再灌注损伤的作用机理。方法采用沙鼠两颈总动脉结扎法脑缺血４５分钟再灌注４５分钟模型，于再灌注前腹注补阳还五汤（１４ｇ生药／ｋｇ）。家兔采用四血管夹闭法缺血３０分钟再灌注４５分钟模型，于缺血前静注该方（３．９ｇ生药／Ｋｇ）。结果①补阳还五汤可抑制沙鼠脑缺血再灌注后脑含水量的升高（Ｐ＜０．０１），降低脑组织Ｎａ含量（Ｐ＜０．０５）和ＭＤＡ含量（Ｐ＜０．０１），提高ＧＳＨ－ＰＸ活性（Ｐ＜０．０１。）②家兔实验表明，该方可降低脑组织ＴＸＢ２含量（Ｐ＜０．０５）和Ｃａ含量（Ｐ＜０．０５），提高６—Ｋｅｔｏ—ＰＧＦ１α含量（Ｐ＜０．０５）。结论该方可对抗脑缺血再灌注损伤，其作用机理可能与防止脑内水钠潴留，对抗自由基的毒害作用。

补阳还五汤对血液凝固影响的实验研究

动物实验发现补阳还五汤在体内与体外均有明显抗凝作用,除抑制凝血酶活性外,对内在凝血途径凝血酶原酶生成以前的过程也有抑制效应。该方抗凝作用具有显著的量效关系。单味分别实验表明其抗凝作用主要来自地龙。该方LD_(50)为149.0g生药/kg体重(小鼠),安全度大。

补阳还五汤对兔脑缺血再灌注损伤TXA2／PGI2、环核苷酸及钙的影响

用四血管夹闭模型法建立家兔脑缺血再灌注损伤模型，在缺血前静脉注射补阳还五汤（３．９ｇ／ｋｇ）可抑制脑缺血再灌注损伤后脑组织血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）的升高、脑组织６－酮－ＰＧＦ１α的降低，降低再灌注后脑组织的钙含量，但对脑组织ｃＡＭＰ含量的增加无明显影响，提示补阳还五汤抗脑缺血再灌注损伤的作用机理与调节脑内ＴＸＡ２／ＰＧＩ２平衡。

全蝎纯化液对大鼠静脉血栓形成TXB_2、6-keto-PGF_(1α)的影响

目的观察全蝎纯化液对大鼠静脉血栓形成血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的影响,阐述全蝎纯化液抗静脉血栓形成的作用机制。方法 SD大鼠随机分为空白对照组、模型组与全蝎纯化液大、中、小剂量组,采用结扎大鼠腹腔主静脉造成静脉血栓模型,观察其对血栓重量及TXB2、6-keto-PGF1α等凝血指标的影响。结果全蝎纯化液大、中、小剂量组TXB2水平显著降低,6-keto-PGF1α水平明显上调,与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),而与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。全蝎纯化液各剂量组能明显降低大鼠静脉血栓的重量,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论全蝎纯化液具有明显的抑制血栓形成的作用,提示其作用机制可能与血管内皮损坏及TXB2、6-keto-PGF1α含量有关。

全蝎纯化液对实验性动脉血栓形成t-PA、PAI-1的影响

目的观察全蝎纯化液对新西兰白兔颈总动脉血栓形成组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原活化物抑制剂(PAI-1)、血小板计数(Pt)的变化。方法将50只健康新西兰白兔随机分成5组:空白组、模型组、全蝎纯化液大剂量组(20mg/kg)、全蝎纯化液中剂量组(10mg/kg)和全蝎纯化液小剂量组(5mg/kg)。耳缘静脉注射药物(空白组、模型组注射同等体积的生理盐水)后,采用H2O2损伤新西兰白兔颈总动脉制备血栓模型,造模2h后,采血并取血栓,酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血浆t-PA、PAI-1的含量。结果与空白组比较,模型组t-PA明显降低,PAI-1明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,全蝎纯化液各剂量组能明显抑制PAI-1活性,增加t-PA活性,差异均有统计学意义(P<0.01),而各组的血小板计数差异无统计学意义(P>0.05)。结论全蝎纯化液各剂量组可明显促进血浆t-PA的分泌,抑制血浆PAI-1活性,提示全蝎纯化液抗血栓作用机制可能与其促纤溶作用有关。