下调PAK1对MPLW515L突变的MPN细胞分化、凋亡及6133/MPL移植小鼠存活的影响

目的:探讨下调p21蛋白激活激酶1(PAK1)对血小板生成素受体(MPL)密码子515突变(MPLW515L)的MPN细胞(6133/MPL)增殖、分化、凋亡及移植小鼠存活的影响。方法:使用慢病毒介导的shRNA转染技术干扰6133/MPL细胞中PAK1的蛋白表达水平;CCK-8法检测下调PAK1对6133/MPL细胞增殖能力的影响,细胞计数法检测其集落形成能力;流式细胞术检测敲低PAK1对6133/MPL细胞中多倍体DNA形成能力和细胞凋亡的影响;Western blot法检测细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和细胞凋亡相关蛋白Bax的表达;HE染色法观察移植小鼠脾脏和骨髓的肿瘤细胞浸润情况。结果:下调PAK1能显著抑制6133/MPL细胞的增殖并降低细胞集落形成能力;敲低PAK1后,6133/MPL细胞中多倍体DNA含量从31.8%增加到57.5%和48.0%,凋亡比例约增至10.8%;下调PAK1能够减少6133/MPL移植小鼠脾脏和骨髓肿瘤细胞的浸润,从而延长其生存期。结论:下调PAK1能显著抑制6133/MPL细胞生长促进多倍体DNA的形成,诱导6133/MPL细胞凋亡,延长6133/MPL移植小鼠的生存时间。

内皮激活和应激指数(EASIX)对外周T细胞淋巴瘤患者预后的影响

目的:探讨内皮激活和应激指数(EASIX)对血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)和外周T细胞淋巴瘤非特指型(PTCL-NOS)患者预后的影响,并比较低EASIX组和高EASIX组患者的临床特征。方法:回顾性分析2010年1月至2021年9月由徐州医科大学附属医院收治的59例初诊AITL和PTCL-NOS患者的临床资料通过受试者工作特征(ROC)曲线确定EASIX的最佳截断值,卡方检验分析EASIX与AITL和PTCL-NOS患者临床特征的相关性,Kaplan-Meier生存曲线分析患者的总生存期(OS)和无进展生存期(PFS),Cox比例风险模型进行单因素与多因素分析。结果:EASIX的最佳截断值为0.95以此为界将患者分为低EASIX(<0.95)组和高EASIX(≥0.95)组。与低EASIX组患者相比,高EASIX组PTCL患者具有Ann Arbor分期晚、IPI评分高中危以上、LDH升高、易发生低白蛋白血症与贫血、易合并B症状、结外累及和骨髓累及等临床特点。生存分析结果显示,59例PTCL患者中,高EASIX组患者的OS和PFS较低EASIX组患者均明显缩短(P<0.001)。多因素分析结果显示,EASIX是影响患者OS[HR=7.217(95%CI:1.959-26.587),(P=0.003)]和PFS[HR=2.718(95%CI:1.032-7.161),P=0.043]的独立危险因素。结论:初诊AITL和PTCL-NOS患者高EASIX提示患者预后不良,高EASIX是影响患者预后的危险因素。

24个月内疾病进展在套细胞淋巴瘤中的预后意义

目的:探讨24个月内疾病进展(POD24)对套细胞淋巴瘤(MCL)患者总生存的影响,比较POD24和非POD24患者的临床特征。方法:回顾性分析2010年1月至2020年8月徐州医科大学附属医院收治的有治疗指征且经过正规治疗的MCL患者50例,根据POD24发生情况进行分组,进行预后评估及临床特征比较。结果:单因素Cox回归分析结果显示,是否发生POD24、PLT、白蛋白、MIPI评分、ECOG PS评分、LDH均是影响初诊MCL患者OS的因素(P<0.05)。对单因素分析中有意义的指标进行多因素Cox回归分析,结果显示,发生POD24[HR=16.797(95%CI:3.671-76.861),P=0.001]、白蛋白<40 g/L[HR=3.238(95%CI:1.095-9.572),P=0.034]、ECOG PS≥2分[HR=4.005(95%CI:1.033-15.521),P=0.045]是影响MCL患者OS的独立危险因素。POD24患者较非POD24患者起病时PLT<100×10^(9)/L的发生率(33.3%vs 5.9%,P=0.033)及ECOG PS≥2分的发生率(45.5%vs 5.9%,P=0.040)明显增高。结论:POD24为影响MCL患者总生存的独立预后不良因素,起病时伴PLT<100×10^(9)/L、ECOG PS≥2分的患者发生POD24比例较高。

异基因造血干细胞移植后中枢神经系统并发症的临床特征分析

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后发生中枢神经系统(CNS)并发症的危险因素及对患者生存的影响。方法 回顾性分析2018年4月-2021年12月在徐州医科大学附属医院行allo-HSCT的171例患者的临床资料,对发生CNS并发症患者的临床资料进行统计学描述,分析发生CNS并发症的危险因素,并进行生存分析。结果 171例allo-HSCT患者中19例发生CNS并发症,中位发生时间为118(3~826)d,其中9例为脑血管并发症(脑出血5例,脑梗死4例),中枢复发2例,中枢感染2例,移植相关血栓性微血管病1例,代谢性脑病1例,慢性中枢神经系统移植物抗宿主病1例,病因不明确3例。临床表现为头痛、癫痫发作及意识障碍等。单因素分析结果显示巨核系及粒系重建情况为allo-HSCT后发生CNS并发症的影响因素(P<0.05);多因素分析结果显示巨核系未重建为allo-HSCT后发生CNS并发症的危险因素(P<0.05);生存分析结果显示发生CNS并发症的患者1年和2年总生存率均低于未发生CNS并发症的患者(P<0.001),1年和2年无病生存率均低于未发生CNS并发症的患者(P<0.001),1年和2年非复发死亡率均明显高于未发生CNS并发症的患者(P<0.001)。结论 巨核系未重建是allo-HSCT后发生CNS并发症的独立危险因素,发生CNS并发症的患者总生存率及无病生存率显著低于未发生CNS并发症的患者,发生CNS并发症的患者往往预后不良。

Ⅱ类抗原反式激活因子与HLA-DR抗原的关系及其意义(英文)

本研究探讨Ⅱ类抗原反式激活因子(CIITA)和人类白细胞抗原(HLA-DR)表达时相的关系和差异,及STAT1-α反义寡核苷酸(STAT1-αAS)对CIITA和HLA-DR的抑制作用。分离健康志愿者外周血T淋巴细胞,给予不同剂量干扰素-γ(IFN-γ)后,用RT-PCR法检测CIITAmRNA,Westernblot分析HLA-DR抗原表达,然后给予不同浓度STAT1-αAS和STAT1-α寡核苷酸有义链(STAT1-αS),再次检测CIITAmRNA和HLA-DR的表达。结果表明:CIITAmRNA在IFN-γ作用后5小时开始表达,14小时达峰值;HLA-DR在28小时后可被检测出,52小时达高峰。5、10和20μmol/LSTAT1-αAS作用于细胞后,CIITAmRNA的表达显著低于对照组(P<0.01),而在S组明显高于AS处理组(P<0.01),S组与对照组间无显著差异;HLA-DR的表达可被STAT1-αAS抑制,AS组仅为对照组的64.3%(P<0.01),S组与对照组间仍无差异;STAT1-αAS作用后,HLA-DR变化同CIITA。结论:CIITAmRNA表达与HLA-DR表达呈正相关且早于后者;STAT1-αAS可特异性抑制CIITA和HLA-DR的表达,并能预防T淋巴细胞激活,CIITA在移植免疫病因中起重要作用。

区域医疗中心建设的探索

我院作为江苏省卫生事业发展“十二五”规划确定的苏北地区医疗技术指导和服务中心、苏北和淮海经济区最具综合实力的省属三级甲等综合医院，近年来，凭借学科、人才、技术、品牌优势和全新的管理理念．在本区域内形成了以我院为龙头的管理精、质量高、服务优的区域医疗中心体系。

公立医院运行机制改革的实践与探索

当前，公立医院在运行机制上，一方面内部管理机制存在缺陷，科学管理体系不完善，管理干部的管理职业化、专业化程度偏低，在管理方式上经验管理、粗放管理的现象仍然存在。另一方面管理目标不够清晰明确，利润最大化与社会公益性的矛盾依然比较突出．

阵发性睡眠性血红蛋白尿症血清α_2-巨球蛋白测定的临床意义

测定了26例阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者和63例正常人血清α_2-巨球蛋白(α_2M)含量。结果显示,轻度溶血的PNH患者血清α_2M与正常对照比较差异无显著性;中度溶血者血清α_2M低于正常对照,P<0.05;重度溶血者α_2M显著低于正常对照,P<0.01。患者血清α_2M水平与血浆游离血红蛋白浓度及网织红细胞％呈负相关,P<0.05及0.01;与血红蛋白浓度呈正相关,P<0.05;与试管法凝血时间亦呈正相关,P<0.05。α_2M在2例合并血栓形成的PNH患者降低尤为显著。结果提示,测定血清α_2M可作为估计PNH患者红细胞破坏程度的一项指标;α_2M测定还有助于评价PNH时的高凝状态,当其显著降低时,要警惕血栓形成的可能。

微量元素铜锌与血液病

铜、锌是人体的必需微量元素,对机体的代谢有重要的生理作用和临床意义.许多血液系统疾病时血清及血细胞内铜、锌含量明显异常;铜、锌缺乏对血细胞及免疫机能有重要影响;铜、锌制剂用于部分血液病的治疗已取得初步疗效.本文主要就上述几方面作一概述.

优化内部资源配置路径的探索与实践

徐州医学院附属医院针对大型公立医院内部资源配置存在的问题,结合自身特点,进行横向整合关联学科、纵向发展亚专科和新兴专科、深度抓临床路径标准化诊疗、发展高新技术、支持科研工作等方面对优化内部资源配置的相关路径探索和实践。经过几年的努力,医院学科建设、高新技术的应用、标准化治疗、科研工作都有重大的突破,资源利用率明显提高,使医院形成了强有力的核心的竞争力。

自身免疫溶血性贫血T淋巴细胞亚群的研究

用单克隆抗体测定了16例自身免疫溶血性贫血(AIHA)患者及32例正常人外周血T淋巴细胞亚群。同时检测了E玫瑰花结形成率(ERFR)及植物血凝素(PHA)诱导的淋巴细胞转化率(LTR)。与正常对照比较,AIHA患者T_3、T_8平均百分率及绝对计数明显降低;T_4百分率及绝对计数无显著性差异;T_4/T_8比值明显增高,其中6例患者T_4/T_8比值高于正常范围(1.30～1.92,(?)±1.96SD)上限,占37.5％;LTR及ERFR亦有所减低。文中对T淋巴细胞亚群分布异常在AIHA发病机制中的意义进行了讨论。

再生障碍性贫血患者血浆纤维结合蛋白的变化及其意义

用火箭电泳法测定了４３例再生障碍性贫血（再障）患者血浆纤维结合蛋白（ＦＮ）水平，发现严重出血的患者血浆ＦＮ明显低于正常对照（Ｐ＜０．００１）；合并感染者血浆ＦＮ亦较正常对照为低（Ｐ＜０．０５）；病程长短、有无输血、是否服康力龙地测定血浆ＦＮ水平没有影响。结果提示：再障患者有出血倾向和感染时测定血浆ＦＮ水平有助于对病情的观察，严重出血和感染时常有血浆ＦＮ水平下降。

慢性淋巴细胞白血病治疗进展

本文综述慢性淋巴细胞白血病(CLL)治疗指征和药物选择方面的研究进展,归纳了目前较为一致的意见;介绍了新药嘌呤类似物在CLL的应用和难治性CLL的治疗方法。

论如何培养医患感情

医院是救死扶伤的高尚场所,也是大众心理矛盾、社会矛盾等极易爆发的场所。而医患关系的好坏将直接影响和谐医院的建设。增进医患沟通与交流,培养好医患感情,促进医院发展,一直是广大卫生管理人员和医院管理者关注和探讨的问题。

抗原冲击致敏的树突状细胞介导的特异性体外抗慢性粒细胞白血病细胞作用

为研究慢性粒细胞白血病 (CML)细胞冻融抗原 (CLA)致敏的树突状细胞 (DC)对特异性抗白血病的作用 ,将CML患者外周血单个核细胞来源的DC在体外用CLA致敏 ,再与CML患者的经细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养。应用乳酸脱氢酶释放法观察其对自身CML细胞 ,K5 6 2细胞和Raji细胞的杀伤活性 (CIK +CLA DC组 ) ,与未致敏的DC +CIK(CIK +DC组 ) ,CIK组及CIK +CLA组进行比较。结果表明 ,效靶比为 2 5∶1时细胞杀伤活性最强 ,在该效靶比下 ,4组细胞对自身CML细胞的杀伤活性分别为 (6 8 8± 14 2 ) % ,(5 2 5± 9 4 ) % ,(2 0 7± 7 5 ) %和 (2 4 2± 8 7) %。CIK +CLA DC组杀伤活性最强 ,与其余 3组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;CIK +DC组比CIK组杀伤活性强 (P <0 0 1) ;CIK组与CIK +CLA组比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。CIK +CLA DC组在效靶比为 2 5∶1时对自身CML细胞 ,K5 6 2细胞和Raji细胞的杀伤活性分别为 (6 8 8± 14 2 ) % ,(14 6± 6 2 ) %和 (12 7± 10 2 ) % ,与K5 6 2细胞和Raji细胞比较 ,具有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :CIK对CML患者自身细胞具有一定的杀伤活性 ;CIK与CML DC共培养组对自身CML细胞杀伤活性比CIK组强 ;CIK与CLA抗原致敏CML DC共培养组具有最强的杀伤活性。

免疫性血小板减少症患者外周血Th17/Treg细胞比率失衡的研究

本研究检测免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞和调节性T细胞(Treg)的表达并初步阐明Th17/Treg细胞比率失衡在ITP中的作用及意义。ITP患者根据血小板计数及治疗效果分为治疗前组(活动组38例)、治疗后组(缓解组24例、部分缓解组10例、未缓解组4例),30例健康体检者设为对照组。用流式细胞术检测ITP患者、健康者外周血Th17细胞及Treg细胞分别占CD4+T细胞的百分率。结果表明,活动组、未缓解组Th17细胞的百分率均高于对照组(p<0.05);缓解组、部分缓解组亦高于对照组,但均无统计学意义(p>0.05);缓解组低于活动组,但无统计学意义(p>0.05)。活动组、部分缓解组、未缓解组Treg细胞百分率均明显低于对照组(p<0.01);缓解组亦低于对照组,但无统计学意义(p>0.05);缓解组高于活动组(p<0.05)。活动组、部分缓解组、未缓解组Th17/Treg细胞比率均高于对照组(p<0.05);缓解组亦高于对照组,但无统计学意义(p>0.05);缓解组低于活动组(p<0.05)。结论 :ITP患者活动组Th17细胞百分率、Th17/Treg细胞比率升高。ITP患者活动组、部分缓解组、未缓解组Treg细胞百分率降低,缓解组Treg细胞百分率较活动组升高。Th17/Treg细胞比率失衡在ITP的发病机制中可能有重要作用。

免疫性血小板减少症患者白介素-22及相关CD4＋T细胞亚群的表达

本研究通过检测初治的成人免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中白介素-22(IL-22)及相关CD4+T细胞亚群的表达,探讨其在ITP发病机制中的作用。以我院住院治疗的40例新诊断的急性ITP患者及40例健康对照者为研究对象,应用ELISA法检测外周血血浆中IL-22的含量,采用流式细胞术检测Th1、Th17、Th22细胞亚群的比例,并分析其相关性。结果表明,新诊断的ITP患者血浆中IL-22的含量为(364.12±94.22)pg/ml,显著高于健康对照者(P<0.001);ITP患者外周血Th1细胞比例为(18.92±6.03)%,Th22细胞比例为(2.28±0.51)%,显著高于健康对照者(P<0.05);且ITP患者血浆IL-22水平与Th1和Th22细胞比例之间存在正相关(Th1:r=0.42,P=0.022;Th22:r=0.40,P=0.030);而ITP患者Th17细胞比例与健康对照者比较无明显差异,且与IL-22水平无相关性。结论:成人ITP患者外周血中IL-22水平明显升高,且与Th1、Th22细胞比例之间密切相关,提示IL-22与Th1和Th22细胞在ITP的发病中可能起着协同作用,而Th17细胞可能与ITP的发病无关。

携带绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体的构建及其介导的T细胞基因转移研究

为了构建含绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)基因的逆转录病毒载体和研究逆转录病毒对T细胞的感染能力,利用亚克隆技术将磷酸甘油酸激酶启动子(phosphoglyceratekinasepromoter,PGK)基因和GFP全长cDNA插入逆转录病毒载体pLXSN,采用磷酸钙沉淀法将重组载体转染PA317包装细胞,G418筛选出抗性克隆,收集滴度最高的病毒上清感染NIH3T3和T细胞,在倒置荧光显微镜下观察GFP表达情况。结果表明;重组逆转录病毒载体转染PA317包装细胞后,可在荧光显微镜下观察到GFP的表达。G418筛选后,含GFP的逆转录病毒可感染原代培养的T细胞。结论:逆转录病毒载体能够快速、稳定地将外源基因转移至T细胞,可作为介导T细胞基因转移的重要工具。

土木香内酯对RPMI-8226细胞的增殖抑制作用及其相关机制研究

目的:探讨土木香内酯(alantolactone)对多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:使用浓度为1、2.5、5、7.5及10μmol/L的土木香内酯处理RPMI-8226细胞48 h,应用CCK-8检测细胞活力,并计算其半数抑制浓度(IC50)值;使用浓度为2.5,5及7.5μmol/L的土木香内酯处理RPMI-8226细胞48 h后,应用AnnexinV/PI双标记法分析细胞凋亡;Western blot方法检测呈切割的caspase-3及ERK信号通路的变化;裸鼠荷瘤并给予土木香内酯以进一步验证其对多发性骨髓瘤细胞的促凋亡作用。结果:土木香内酯可抑制RPMI-8226细胞活力,并呈现剂量依赖效应(r=-0.9784,P=0.0007);RPMI-8226细胞48 h的IC50为4.32±0.15μmol/L;流式细胞术分析凋亡结果显示,随着土木香内酯浓度的增高,细胞早期凋亡率显著增加(r=0.9601,P<0.05);Western blot结果显示,土木香内酯处理RPMI-8226细胞后,活化了caspase-3,降低ERK磷酸化水平;体内结果显示,给药组小鼠瘤体积明显小于对照组(P<0.05);免疫组织化学检测结果显示,与对照组相比,实验组瘤内细胞核增殖相关抗原Ki67及p-ERK的水平降低。结论:土木香内酯可有效地抑制多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能是通过抑制ERK信号通路的活性,抑制裸鼠皮下多发性骨髓瘤的生长。

慢病毒介导可溶性肿瘤坏死因子受体1在小鼠骨髓未成熟树突状细胞中的表达(英文)

背景:肿瘤坏死因子α是介导树突状细胞成熟的重要细胞因子之一,可溶性肿瘤坏死因子受体1与其结合可阻断肿瘤坏死因子α的作用,维持树突状细胞于不成熟状态,诱导免疫耐受。目的:构建含有人sTNFR1的慢病毒表达载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法:以人外周血单个核细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增出sTNFR1基因片段,亚克隆至慢病毒转移质粒pXZ208,通过IRES连接eGFP报告基因,建立双顺反子慢病毒转移质粒,命名为pXZ9-sTNFR1,DNA测序鉴定。采用脂质体转染293FT细胞,根据报告基因eGFP测定病毒滴度。采用小剂量粒-巨噬细胞集落刺激因子+白细胞介素4体外培养扩增C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞。培养第5天,以pXZ9-sTNFR1重组慢病毒上清感染未成熟树突状细胞,RT-PCR检测感染后sTNFR1转录,Western blot法检测sTNFR1蛋白表达,观察sTNFR1基因修饰及脂多糖刺激后树突状细胞的表型特征。结果与结论:成功构建重组质粒pXZ9-sTNFR1,转染293FT细胞24h后观察到eGFP表达,病毒滴度在106U/L以上。RT-PCR显示pXZ9-sTNFR1感染的未成熟树突状细胞sTNFR1呈阳性表达,Western blot检测到sTNFR1蛋白存在于感染后未成熟树突状细胞和培养上清中。培养第5天的树突状细胞低表达CD40、CD86、CD80和MHCⅡ类分子,脂多糖刺激后,高表达MHCⅡ类分子和CD40、CD80、CD86分子,显示出成熟型树突状细胞表型特征,sTNFR修饰的树突状细胞MHCⅡ类分子和CD40、CD80、CD86分子表达水平无变化。提示:①成功构建了负载sTNFR1基因片段及含eGFP报告基因的慢病毒载体,获得了高滴度的重组慢病毒颗粒。②经慢病毒高效转导的未成熟树突状细胞sTNFR1 mRNA及蛋白稳定地表达,可以保护未成熟树突状细胞不被外源性脂多糖刺激活化,维持树突状细胞于非成熟状态。