斑点免疫金渗滤法检测边虫病的研究

应用自行制备的直径２５ｎｍ～３０ｎｍ的胶体金标记ＳＰＡ，建立了检测抗边虫抗体的斑点免疫金渗滤试验（ＤＩＧＦＡ），同时作与补体结合试验（ＣＦＴ）、团集凝集试验（ＣＡＴ）比较试验，结果表明ＤＩＧＦＡ是一种检测边虫病抗体的敏感性高、特异性强、重复性好的快速、简便易行方法。

用阴离子交换层析纯化牛皮蝇素A蛋白的研究

建立了用阴离子交换层析AKTAFPLC纯化果蝇S2细胞分泌的重组牛皮蝇素A(HypodermotinA,HA)的方法。将诱导培养3天的S2细胞上清液浓缩后,经25mMpH8.5Tris-HCl缓冲液透析,在MonoQ柱上以Tris-HCl+NaCl为流动相进行分离。在检测波长280nm处获得蛋白峰。经SDS-PAGE分析,第一峰的分子量与原重组蛋白HA分子量相符,并对明胶大分子具有酶活性;用斑点免疫金渗滤法检测证实对牛皮蝇抗体具有免疫原性。用阴离子交换层析纯化HA的方法具有获得的蛋白质纯度高、操作简便、生产效率高等特点。

用斑点免疫金渗滤法检测上海地区奶牛肝片吸虫病的感染

为了了解上海地区奶牛肝片吸虫病的感染情况，用斑点免疫金渗滤法检测了上海地区奶牛血清５７８份，结果阳性４５份，阳性率７．８％，与粪便检查结果相近。该方法操作简便，反应速度快，可作为检查和监测奶牛场奶牛肝片吸虫病的一种有效和实用的方法。

隐孢子虫病两种诊断方法的应用比较

目的对目前常用的两种检测隐孢子虫感染方法进行估价。方法取上海某牧场随机采集的20头奶牛粪便用改良抗酸染色法和巢式PCR(Nested PCR)法检测。结果两种方法均能检测出粪便中的隐孢子虫卵囊,改良抗酸染色法阳性检测率55%,Nested PCR法阳性检测率70%。结论:两种方法均能从感染隐孢子虫的奶牛粪便中捡出隐孢子虫卵囊,可根据需要选择。

应用斑点免疫金渗滤法检测羊东毕吸虫病的研究

:应用自行研制的胶体金探针标记SPA ,建立了诊断羊东毕吸虫病的新方法———斑点免疫金渗滤法 (DIGFA) ,该法与ELISA法具有良好的相符性 ,将抗原、待检血清滴加于膜上进行反应 。

刚地弓形虫18S rDNA基因的克隆与序列分析

采用PCR方法从弓形虫RH株和CN株总DNA中分别扩增到18S rDNA基因,与pGEM-T easy vector连接,并进行DNA测序分析。结果表明,2个虫株均扩增出1 745 bp的片段,用DNAMAN软件对其与GenBank上2个虫株相应序列进行同源性比较,4个虫株的同源性为99.34%。刚地弓形虫虫株在不同宿主和不同区域上存在着一定的差异。

斑点免疫金渗滤试验检测绵羊脑多头蚴病的研究

为了寻找一种快速、简便诊断绵羊脑多头蚴病的新方法 ,应用自行配制的胶体金探针标记 SPA,建立了斑点免疫金渗滤试验 (DIGFA)。该法同 EL ISA具有良好的相符性。将抗原、待检血清滴加于膜上进行反应 ,数分钟内即可用肉眼进行结果判定。本法具有操作简单、反应快速、敏感性强、重复性好、不需要贵重仪器等优点 ,适合于基层推广应用。

毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白

建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A（Hypodermotin A，HA）的技术，并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上，构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后，用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选。重组酵母细胞在含0．5％甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白，培养3d后收取上清，用阴离子交换层析柱分离纯化。经SDS—PAGE检测，所表达的蛋白相对分子质量约为30000。Western—blotting表明，该蛋白能与兔抗HA血清特异性结合。明胶电泳检测显示，该蛋白具有酶活性。单因素改变表达条件的结果表明，甲醇浓度在0．5％～1％、溶氧量在70％以上、诱导2～3d的情况下表达产量最高，达1500mg／L左右。该研究结果对防治牛皮蝇蛆痛疫苗的深入研究及毕赤酵母在寄生虫领域的应用有一定价值。

羊寄生虫病的防制技术

发展养羊业是农村经济发展和农民致富奔小康的重要举措.近几年来,随着农村改革开放的深入,各地农村纷纷引进了一些羊的新品种,如小尾寒羊、波尔山羊、杜伯肉羊等,使我国的养羊业上了一个新的台阶.……

上海地区爬行类及两栖类动物隐孢子虫感染调查

目的了解上海地区的蛇,蜥蜴,蟾蜍,龟等部分爬行类动物及两栖类动物感染隐孢子虫情况。方法饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊。结果改良抗酸染色法检测31条野生蛇,隐孢子虫感染率为45.2%(14/31);改良抗酸染色法检测44份粪样总感染率为13.6%(6/44),蜥蜴感染率为30%(3/9),乌龟感染率为100%(1/1),巨龟感染率为100%(1/1),蟒蛇感染率为25%(1/4);而饱和蔗糖溶液漂浮法检测,仅发现2份蜥蜴样品感染,感染率为22.2%(2/9)。结论本调查表明,来自野外蛇的隐孢子虫感染率要显著高于动物园驯养的爬行动物,对喜食野生蛇类的陋习提出了严重的警示。

藏羚羊中华皮蝇蛆的分子生物学鉴定

利用分子生物学技术对藏羚羊感染的中华皮蝇的线粒体COI基因种属特异性序列进行了研究。利用PCR方法扩增出长度为688 bp的序列,经TA克隆后测序,测序结果表明与中华皮蝇、牛皮蝇和纹皮蝇的相似性分别为99.1%、91.4%、93.6%,确定为中华皮蝇,证实藏羚羊中存在中华皮蝇的侵染,从而扩大了中华皮蝇的宿主范围。

片形吸虫分泌排泄抗原和虫体抗原的分析

用牛源肝片吸虫 (南京 )、牛源大片吸虫 (广西 )和羊源肝片吸虫 (实验感染 )制备可溶性虫体抗原 (BA)和分泌排泄抗原 (ES) ,以 SDS- PAGE电泳分析比较 ,结果显示 ,3株虫体可溶性虫体抗原至少有 2 0条以上的主要蛋白条带 ,分子量集中于 10～ 90 KD之间 ,它们之间无显著差异。而 3株分泌排泄抗原蛋白成分较简单 ,明显可分的条带不超过 5条 ,分子量集中于 10～ 30 KD之间 ,且均拥有 2 6～ 2 8KD的蛋白成分 ,提示该蛋白应为片形吸虫 ES抗原的主要免疫成分。

卡片PCR法检测果汁饮料中卡耶他环孢子虫技术的建立

为建立一种快速检测果汁饮料中卡耶他环孢子虫的方法，采用FTA卡片法提取果汁饮料中的卡耶他环孢子虫DNA，利用特异性引物组F1E／R2B、CC719／CRP999进行巢式PCR。以柔嫩艾美耳球虫、贝氏隐孢子虫等作为对照，结果显示，除卡耶他环孢子虫外，均无特异性条带。用卡耶他环孢子虫卵囊进行巢式PCR敏感性试验，结果显示敏感度最高达1．0×10^0个／mL。可见，FTA．PCR方特异、敏感，能用于新鲜食品中卡耶他环孢子虫的检测。

抗大片吸虫ES抗原单克隆抗体的制备及特异性鉴定

用大片吸虫分泌排泄 (ES)抗原免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,经筛选和 3次克隆化培养后获得 2株分泌抗大片吸虫ES抗原单抗的杂交瘤细胞 (F5,F9)。经传代、冻存、复苏培养检测和染色体检查 ,证实其分泌单抗的性质稳定。通过间接ELISA试验证明 ,F5和F9单抗能与大片吸虫、肝片吸虫的ES抗原发生特异性反应 ,而不与它们的虫体抗原反应。SDS PAGE电泳和Western blot显示 ,F5McAb能与ES抗原的相对分子质量为 2 6 0 0 0～ 2 80 0 0的蛋白条带反应 ,而不与其可溶性虫体抗原反应。表明F5McAb有ES抗原特异性 ,是一株具有潜在诊断价值的McAb。

动物牛皮蝇蛆病诊断方法的进展(综述)

综述了牛皮蝇蛆病临床诊断的方法以及一些免疫学诊断方法：免疫电泳、双向免疫扩散试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验。并重点介绍了国内外在酶联免疫吸附试验的进展,介绍了采样的方法、对血清和牛奶的检测以及检测循环抗原HC的夹心ELISA,并对该病未来诊断方法的发展做了展望。

亚洲象肝片吸虫病的免疫诊断和治疗

在国内首次用斑点免疫金渗滤法 (Dot- im munogold filtration assay,DIGFA)对亚洲象的肝片吸虫病进行了免疫诊断 ,并采用 10 %肝蛭净进行治疗 ,获得成功。试验结果表明 ,斑点免疫金渗滤法诊断大象肝片吸虫病是一种敏感、快速。

用虫卵孵化试验检查羊捻转血矛线虫的抗药性

用虫卵孵化试验对上海某羊场的羊捻转血矛线虫的抗药性进行了检查。结果表明该羊场有抗丙硫苯咪唑捻转血矛线虫存在，其５０％抑制虫卵有效孵化率（ＥＤ５０）为０．０８７，０．０１μｇ／ｍＬ噻苯咪唑或０．０４８，０．０２μｇ／ｍＬ丙硫苯咪唑；而敏感株ＥＤ５０为０．００４５，０．００８５μｇ／ｍＬ噻苯咪唑或０．００６４，０．００２３μｇ／ｍＬ丙硫苯咪唑，抗药株ＥＤ５０值明显高于敏感株。改用羊佳１号进行治疗，取得了满意的效果。

黑龙江大山种羊场羊线虫抗药性的检测──粪便虫卵减少试验检查线虫抗药株

为了查明羊线虫对某种药物的抗药性，本试验用粪便虫卵减少试验（ＦＥＣＴＲＴ）对黑龙江大山种羊场羊线虫的抗药性进行了检测。结果表明该羊场的羊线虫对丙硫苯咪唑产生了抗药性；改用佳灵三特、羊佳２号进行治疗，获得较为满意的结果。粪卵减少试验是检测线虫抗药性的一种简单实用的方法。