自噬相关基因在小鼠月经样模型子宫内膜崩解过程中的动态表达

目的探究小鼠子宫内膜崩解过程中自噬相关基因表达的动态变化。方法建立小鼠月经样模型,孕酮撤退后0 h、8 h、16 h和24 h分别处死小鼠取其双侧子宫组织,通过苏木素伊红(HE)染色观察小鼠子宫组织的形态特征变化,采用蛋白质印迹(WB)检测小鼠子宫内膜崩解过程中LC3B和p62蛋白的表达动态变化,实时定量PCR(RT-qPCR)检测小鼠子宫内膜崩解过程中Lc3b、p62、Beclin1、Atg3、Atg5和Atg7的mRNA水平变化。结果孕酮撤退后0 h、8 h、16 h和24 h子宫大体颜色逐渐由浅粉色变为深红色,子宫内膜崩解坏死区域逐渐扩大,24 h时蜕膜化的子宫内膜完全崩解坏死。WB结果显示:孕酮撤退后16 h时,p62的蛋白表达水平较0 h和8 h时显著升高(P<0.05),24 h时p62的蛋白表达水平较其他时间点显著升高(P<0.01);LC3B-Ⅰ蛋白在孕酮撤退后0 h到8 h无显著变化(P>0.05),8 h到24 h其表达量显著降低(P<0.05);孕酮撤退后子宫内膜崩解过程中LC3B-Ⅱ的蛋白表达水平无显著变化(P>0.05)。RT-qPCR结果显示:p62 mRNA水平在孕酮撤退后0 h到16 h无显著变化(P>0.05),而24 h时p62 mRNA水平较8 h和16 h显著降低(P<0.05);Lc3b mRNA水平在孕酮撤退后16 h时较0 h和8 h显著上调(P<0.01),而24 h时Lc3b mRNA水平显著低于撤退后16 h(P<0.01);Beclin1 mRNA水平在孕酮撤退后8 h、16 h和24 h的表达较0 h均显著下降(P<0.05),且撤退24 h后Beclin1 mRNA水平相较8 h和16 h显著降低(P<0.01);Atg3、Atg5和Atg7的mRNA水平孕在酮撤退后0 h到16 h无显著变化(P>0.05),而24 h时的mRNA水平显著低于其他时间点(P<0.05)。结论孕酮撤退后,子宫内膜崩解过程中自噬水平下降,提示自噬参与负调控子宫内膜崩解过程。

利用米非司酮药物建立小鼠子宫内膜行经样模型的研究

目的利用米非司酮建立小鼠子宫内膜行经样模型。方法成年雌性去势NIH小鼠在花生油诱导蜕膜化后,给予米非司酮灌胃,每间隔8 h检测形态学和血清激素水平至给药后48 h,阴道细胞学检查监测出血状况。结果蜕膜化子宫内膜在给药后16 h崩解严重,24 h脱落,伴阴道出血;子宫内膜在24 h出现再生,至48 h基本恢复。此过程中血清孕酮水平保持不变,而雌激素水平升高。结论小鼠人工诱导蜕膜化后,利用米非司酮模拟孕酮的药理撤退,能够成功诱导发生行经样的改变。

金属基质蛋白酶在月经发生中的作用

子宫内膜在精确的雌激素和孕激素的作用下,经历了增殖,分化以及在分泌晚期孕酮撤退情况下的子宫内膜周期性的崩解、脱落以及其后的再生修复过程。子宫内膜的快速崩解脱落现象是月经发生的显著特征。孕酮撤退是引发月经发生的始动因子,金属基质蛋白酶则是最终作用因子。金属基质蛋白酶(MMP)为水解酶,其家族成员众多。将对金属基质蛋白酶结构种类、剪切与活化、调节以及其在月经发生中灵长类和小鼠月经样模型中子宫内膜中的定位、表达与酶活进行阐述。

白细胞在小鼠药理性孕酮撤退月经样改变模型中的作用

探讨小鼠药理性孕酮撤退月经样改变模型中白细胞的作用。方法雌性去势NIH小鼠在蜕膜化后给予米非司酮,间隔8 h检测白细胞的数量和定位以及基质金属蛋白酶(MMP)-9的定位。结果白细胞在双侧子宫角崩解前(给予米非司酮后16 h)和修复期(给予米非司酮后32 h)较多,其在月经中的作用可能依赖于蜕膜化状态。与生理性孕酮撤退月经模型存在差异,可能是由于内分泌环境造成的,源自嗜中性粒细胞的MMP-9定位存在区域性分布特征。结论在此模型中,白细胞对子宫内膜崩解和修复重建起作用。

金属基质蛋白酶MMP3和MMP7在小鼠药理性孕酮撤退月经模型中的定位

目的本研究旨在研究金属基质蛋白酶(MMPs)在小鼠药理性孕酮撤退月经模型中的定位。方法卵巢切除的小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮处理,免疫组化检测金属基质蛋白酶MMP3和MMP7定位。结果 MMP3从米非司酮处理后0 h到24 h,存在于腔上皮下的局部基质、上皮、蜕膜化区域以及基底层和功能层的交界处;从32 h到48 h存在于腔上皮以及其下基质区域。MMP7从0 h到24 h存在于基底层,上皮和中间蜕膜化区域,从32 h到48 h与MMP3的定位相一致。结论 MMP3和MMP7蛋白质在此模型中定位呈区域性分布。

聚苯颗粒轻质混凝土砌块的物理力学性能研究

聚苯颗粒轻质混凝土砌块以聚苯乙烯颗粒为粗骨料,以水泥为主要胶凝材料,同时掺加工业废渣如粉煤灰、矿粉及减水剂、激发剂、改性剂等外加剂;为了提高聚苯颗粒与胶凝材料的界面结合力,对聚苯颗粒进行表面改性,并采用造壳方法形成聚苯颗粒复合母料。试验表明:聚苯颗粒轻质混凝土砌块具有较低的表观密度,其抗压强度也能满足国家标准自承重轻质混凝土砌块的要求。

子宫内膜损伤与宫腔粘连动物模型的研究进展

宫腔粘连的发病机理目前尚不明确,临床对其预防及治疗仍有待改善。动物模型是研究子宫内膜病理损伤和宫腔粘连机制的重要实验平台。本文针对目前的不同物种(包括大鼠、小鼠、新西兰兔和灵长类动物)的生理性和病理性子宫内膜损伤与宫腔粘连模型逐一进行阐述。

孕酮回植时间对小鼠月经样模型中子宫内膜基质细胞凋亡的影响

目的:探讨在小鼠月经样模型中孕酮回植对子宫内膜基质细胞凋亡的影响。方法:在月经模型小鼠月经发生关键时期的前后,即孕酮撤退后的12h和16h回植孕酮,24h收集小鼠子宫角,TUNEL法原位检测小鼠子宫内膜基质细胞的凋亡;Western Blotting法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。结果:孕酮撤退后12h回植孕酮,小鼠子宫内膜中发生凋亡的基质细胞数远低于16h回植组和对照组;而16h回植孕酮则子宫内膜基质细胞的凋亡仅仅稍低于对照组。凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,12h回植组明显高于16h回植组和对照组(P<0.01),而后两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。凋亡促进蛋白Bax和Caspase-3的表达,12h回植组均低于16h回植组和对照组(P均<0.01),而后两组之间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论:在月经发生关键时期之前,即孕酮撤退后12h回植孕酮可能通过上调Bcl-2/Bax比例而阻断Caspase-3的蛋白表达,从而有效抑制小鼠子宫内膜基质细胞的凋亡,阻断月经发生的进程,而16h回植则不能阻断小鼠月经的发生。

ROS对子宫内膜崩解的作用

为探讨ROS在小鼠月经样模型中的作用,将雌性C57小鼠去势,序惯性的给予雌二醇(E2)或孕酮(P4),模拟增殖期和分泌期,花生油注射至宫腔以人工诱导蜕膜化,将孕酮皮埋管移除以造成孕酮的撤退,建立小鼠月经样模型,并在孕酮撤退前1、3、7h给予抗氧化剂NAC消除ROS,利用大体变化、阴道细胞学涂片和组织形态学方法检测子宫的状态,并利用氮蓝四唑(NBT)染色的组织超氧阴离子色度法检测ROS的含量,以研究ROS在月经发生过程中对子宫内膜崩解的作用。阴道细胞学涂片显示,350 mg/kg和500mg/kg NAC能够抑制子宫内膜的出血,而200mg/kg NAC则不能,子宫大体和组织形态学结果显示,350mg/kg和500mg/kg NAC能够抑制子宫内膜的崩解,而200mg/kg NAC则不能,同时,350mg/kg和500mg/kg NAC能够显著抑制ROS的产生,而200mg/kg NAC则没有。说明350mg/kg是抑制子宫内膜崩解的合适剂量,且ROS对子宫内膜的崩解起至关重要的作用。

孕期营养补充剂抗疲劳、耐寒、耐热动物实验观察

目的:通过抗疲劳、耐寒、耐热实验分析孕期营养补充剂对小鼠机体生命活力的影响。方法:SPF级昆明小鼠随机分为高、中、低剂量和对照共4组,灌胃给药21d后,进行动物实验。结果:负重游泳时间在雌性小鼠的3个剂量组均明显增加(P均<0.05),在雄性小鼠的中、高剂量组明显增加(P<0.05);耐寒时间在雌性小鼠的中、高剂量组明显增加(P<0.01),在雄性小鼠的3个剂量组均明显增加(P<均0.05);耐热时间在雌性和雄性小鼠的中、高剂量组均明显增加(P<0.05)。结论:服用多种维生素、多种矿物质的营养补充剂的小鼠机体活力明显增加,抗疲劳、抗寒和抗热的能力显著提高。

小鼠药理性月经模型中孕酮撤退激活NF-κB状态研究

目的:研究在小鼠药理性月经样模型中,阻断孕酮作用后子宫内膜组织崩解过程中核转录因子NF-κB激活状态。方法:切除卵巢后小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮处理模拟月经样出血,取部分子宫组织采用免疫组织化学、蛋白质印迹方法检测米非司酮处理(即孕酮撤退)后不同时期NF-κB激活及NF-κB上游信号分子的表达。结果:免疫组化结果显示,阻断孕酮作用后NF-κBp65显著入核,p50入核不明显。蛋白印迹实验显示,p50和p65蛋白发生了核浆转移,在孕酮撤退12h后核蛋白中表达量最高。NF-κB诱导性激酶、磷酸化IKK-β、磷酸化IκB-α在阻断孕酮作用后的各个时期都有表达,且各时相表达均有差异。结论:孕酮撤退可能通过NF-κB诱导性激酶、磷酸化IKK-β,继而磷酸化IκB-α通路激活NF-κB。

孕酮维持下的小鼠子宫蜕膜化内膜的变化

目的在小鼠子宫诱导蜕膜化发生行经样变化模型中,血管反应是这一变化的重要表现之一。通过对蜕膜组织中血管结构的研究,期望对于血管结构在该模型的作用有进一步的认识。方法制备小鼠诱导蜕膜化模型并维持孕酮水平,诱导后96 h处死并取子宫。对组织材料进行全程从系膜对侧向系膜侧连续系列石蜡切片并进行HE染色。对该系列染色切片等距取102张进行显微照相,所得图像结果进行计算机三维重组。通过CD31免疫组化判断空腔结构组成。结果子宫中的空腔结构由CD31阳性细胞组成。三维重组后获得了三种不同的空间结构及其相互之间空间关系。结论小鼠子宫内膜中空腔结构由内皮细胞构成,为扩张的静脉。通过三维重组清晰地定位了该结构在蜕膜整体组织的位置及其与其他成分的关系,为血管结构在月经出血和妊娠中的作用提供了有价值的信息。

肿瘤坏死因子在小鼠药理性孕酮撤退月经样模型中的定位和表达

目的在药理性撤退小鼠月经样模型中,观察孕酮撤退后,肿瘤坏死因子(TNF-α)的定位和表达情况。方法卵巢切除的小鼠在诱导蜕膜化之后给予米非司酮即通过拮抗孕酮受体的方法(药理性撤退),导致孕酮撤退,并用免疫组化的方法观察米非司酮处理的不同时相,TNF-α在小鼠子宫内膜的定位;用实时PCR的方法观察TNF-α表达情况。结果免疫组化结果显示米非司酮处理后0～8 h,TNF-α主要存在于腔周围的血管内皮细胞;12～16 h,主要存在于内流的白细胞;24～48 h,主要存在于崩解组织边缘的间质细胞区域和修复好腺上皮细胞周围的间质细胞。实时PCR结果显示TNF-αmRNA在孕酮撤退后24 h内都有表达,并且TNF-α表达量逐渐增高,在12 h、16 h达到峰值。结论在此小鼠月经样模型中,米非司酮处理即孕酮撤退后TNF-α在此模型子宫中定位呈区域性分布,并诱导TNF-α表达升高,可能参与了子宫内膜的崩解。

慢病毒载体感染人子宫内膜组织块的研究

目的 在优化人子宫内膜组织块体外培养条件基础上,建立慢病毒载体感染人子宫内膜组织块的方法.方法 将人子宫内膜标本剪成1 mm×1 mm×2 mm大小,移入含激素（雌二醇和醋酸甲羟孕酮）或不含激素的培养液中培养7 d,每天取3块组织块,进行大体和HE染色形态学观察.在优化的组织块体外培养条件下,组织培养液分别加入不同病毒量的慢病毒和具有促进病毒感染的感染增强液ENi.S和Polybrene,在荧光显微镜下观察荧光表达情况,比较阳性细胞率.结果 人子宫内膜组织块在含激素的培养液中培养5 d后,色泽鲜红,结构完整,培养效果明显优于不含激素的培养液.3.5×107TU/ml病毒数量及在培养基中加入细胞增强液时,慢病毒感染阳性细胞数明显增加,阳性率达50%.结论 慢病毒载体在体外可成功转染人子宫内膜组织块.

利用假孕小鼠建立小鼠行经模型的研究

目的利用假孕小鼠建立小鼠行经模型,并与以往的小鼠行经模型做对比。方法NIH雌鼠与输精管结扎的NIH雄鼠晚间合笼交配,翌日晨见阴栓为假孕第0天。第3.5天于左侧子宫角注射25μl花生油诱导蜕膜化,右侧子宫角为对照;第5.5天切除双侧卵巢(作为0 h),分别在0、8、12、16、24、32和48 h各时点行颈椎脱臼处死小鼠,收集子宫,观察组织形态学,阴道细胞学涂片观察出血情况。结果子宫在0 h可见广泛蜕膜化;8 h上皮有部分脱落,部分蜕膜化细胞出现核固缩;12 h子宫腔上皮基本脱落,核固缩凋亡坏死的区域继续扩大;1 6 h可见蜕膜化组织崩解;24 h崩解组织剥离;32 h组织开始修复;48 h组织修复完好。血清孕酮(P)浓度在切除卵巢后8 h开始快速下降,48 h降至0 h浓度的1/7。结论利用假孕小鼠人工诱导蜕膜化后,切除双侧卵巢可以模拟子宫内膜崩解脱落和再生。

雌激素对小鼠子宫内膜崩解后修复的影响

目的探讨假孕小鼠月经模型中,雌激素水平对子宫内膜崩解后修复再生进程的影响。方法对假孕小鼠一侧子宫人工诱导内膜间质细胞发生蜕膜化,并通过双侧卵巢切除的方式实现孕酮撤退,建立小鼠月经模型;将实验动物随机分为雌激素组以及溶剂组,在孕酮撤退后分别给以17β-雌二醇油溶液和溶剂;在孕酮撤退后24 h及48 h检测各组子宫重量改变、并进行形态学观察和评级。结果比较孕酮撤退48 h两组形态学评级,雌激素组子宫内膜修复率显著高于溶剂组(P<0.01)。结论在假孕小鼠月经模型中,溶剂组小鼠较雌激素组小鼠出现明显的修复延迟,说明雌激素水平对于子宫内膜崩解后修复进程有一定影响。

建立大鼠代谢综合征模型及其胎盘和成年个体中糖脂代谢性别差异研究

目的构建代谢综合征实验动物模型并探究糖脂代谢异常在胎盘和成年个体的雌雄差异。方法采用高热量饮食+5%果糖饮水诱导大鼠妊娠期代谢综合征(GMS)模型。雌性大鼠GMS模型及妊娠:16只雌性Wistar大鼠随机分为对照组(正常饮食饮水+妊娠;NC组,n=8)和GMS模型组(高热量饮食+5%果糖饮水+妊娠;HDF5组,n=8)。雄性及雌性大鼠代谢综合征(MS)模型:雌、雄性大鼠各14只分别随机分为2组,即雌性大鼠MS组(F-HDF5组,n=7)、雄性大鼠MS组(M-HDF5组,n=7),雌、雄性大鼠对照组(F-NC组,n=7;M-NC组,n=7)。分别在适应1周后的基线时(W0)到饮食/饮水干预第5周(W5)内每周监测记录各组大鼠的体重、收缩压(SBP)和舒张压(DBP),于W0和W5检测其空腹血糖(FBG)值并进行口服葡萄糖糖耐量试验(OGTT),并采集空腹血清检测甘油三酯(TGs)和总胆固醇(T-CHO)浓度。在W5时收集各组大鼠的空腹血清和肝脏组织,于妊娠第20.5天(GD20.5)收集胎鼠及胎盘组织,检测胎盘组织TGs和T-CHO浓度、脂蛋白脂肪酶(LPL)活性和游离脂肪酸(FFA)含量以及胎盘组织HE和油红O染色。结果(1)在经饮食/饮水干预5周后,相较于NC组,HDF5组的体重(P<0.001)和BMI(P<0.05)、FBG(P<0.001)和OGTT血糖变化曲线下面积(AUC)(P<0.05)、TGs和T-CHO(P<0.001)、SBP(P<0.001)和DBP(P<0.05)的指标均显著升高,提示成功构建雌性大鼠GMS模型,且妊娠期血压升高(P<0.05);与NC组比较,GD20.5时HDF5组FBG、TGs和T-CHO均显著增加(P<0.001),雄性胎盘重量显著增加(P<0.01),雌雄性胎盘LPL活性均显著降低(P<0.01),TGs、T-CHO、FFA含量显著增加(P<0.05)且雄性胎盘中的含量及脂滴显著高于雌性胎盘(P<0.05)。(2)在成年的雌雄大鼠MS模型中,经5周干预后,相较于M-NC组,M-HDF5的BMI无显著增加(P>0.05),而其余各项与MS相关的指标在F-HDF5组和M-HDF5组均显著升高(P<0.05),F-HDF5组以血糖升高更为显著(P<0.05),而M-HDF5组以血脂升高更为显著(P<0.001);两组大鼠肝脏重量和FFA含量升高均以雄性表现更为显著(P<0.05),LPL的酶活性在F-HDF5组肝脏中显著降低(P<0.05)而在M-HDF5组中显著升高(P<0.05)。结论高热量饮食和5%果糖饮水可以在5周内诱导雌雄大鼠出现MS表型,糖脂代谢紊乱表现在胎盘和成年个体均具有与性别相关联的差异,也存在器官特异性。

超级电容器碳电极材料的制作工艺研究

运用物理化学联合活化法,在不同活化时间对碳材料进行处理制备活性炭,优化了超级电容器碳电极材料的制作工艺。分析比较了所制电极材料的表面形态,并测定了比表面积、孔容和孔径等活性炭的结构参数。结果表明:活化时间为1.5h可以制得满足要求的活性炭材料。

兔妊娠早中期滋养层细胞侵润的观察研究

目的观察兔妊娠早、中期滋养层细胞的形成、侵润及蜕膜区变化。方法 HE染色、碱性磷酸酶染色和过碘酸雪夫染色观察血管周变化,以细胞角蛋白7(CK7)抗体免疫组化标记滋养层细胞,观察滋养层细胞的行为。结果妊娠第7.5天出现着床点,第9天管周细胞发生蜕膜化,滋养层细胞开始向子宫间质侵润,第10.5天,管周蜕膜化细胞发生水肿,出现胎盘小叶,合胞体滋养层细胞增多,第12天,迷路下的子宫间质中滋养层细胞剧增,迷路下出现动脉血窦,蜕膜化细胞高度空泡化,第13天和14天动脉窦管腔扩大,第15天胎盘形成,胎盘下(连接区)全部被滋养层细胞侵润,第19天,滋养层细胞侵袭至子宫肌层和肌层动脉管壁。结论兔妊娠过程中,滋养层细胞以间质渗入、蜕膜细胞渗入、血管内逆行向上等多种方式并行向蜕膜区肌层血管进行侵润。

宫颈癌相关microRNAs表达调控机制的研究进展

宫颈癌是世界范围内三大妇科肿瘤之一,其高致死率严重威胁着女性的健康。microRNAs（miRNAs）是一类内源性非编码蛋白的、长度约为18~25个核苷酸的小RNA,在转录后水平调控靶基因的表达。现已证实miRNAs的异常表达与宫颈癌的发生发展密切相关。宫颈癌中调控miRNAs异常表达的研究报道相对较少,调控机制也不十分明确。有研究表明,表观遗传修饰、人乳头瘤病毒（HPV）、miRNAs海绵及miRNAs的多态性均可以对宫颈癌中miRNAs的表达及其功能产生影响。本文拟从这四个方面对miRNAs的表达调节以及所引起的宫颈癌发生发展的角度展开综述。