携人IL-12基因腺病毒的构建及其对Hep3B细胞增殖及TGF-β表达的影响

目的:构建携带人IL-12的重组腺病毒,观察其对Hep3B增殖及TGF-β表达的影响。方法:PCR扩增IL-12基因,构建穿梭质粒pAdTrack-IL-12;穿梭质粒经Pme I线性化后转化AdEasier Cell,E.coli BJ5183内同源重组;PacⅠ酶切重组腺病毒质粒,转染AD293,包装病毒;病毒pAd-IL-12感染肝癌细胞Hep3B,以RT-PCR、Western blot检测白介素12的表达;MTT法检测肝癌细胞的增殖情况;RT-PCR检测转化生长因子-β(TGF-β)的表达。结果:成功构建携IL-12基因的重组质粒,并成功包装可高效感染Hep3B的腺病毒pAd-IL-12;RT-PCR以及Western blot结果表明,病毒pAd-IL-12感染Hep3B后可高表达白介素12,并且与对照组相比Hep3B增殖能力显著降低(P<0.05),TGF-β表达量也降低(P<0.05)。结论:可高表达IL-12的腺病毒包装成功,感染肝癌细胞Hep3B后抑制其增殖,同时也下调TGF-β的表达,为进一步研究IL-12的肿瘤治疗作用奠定了基础。

人YB-1蛋白的高效原核表达、纯化及其多抗的制备

目的构建YB-1原核表达系统,诱导表达后纯化YB-1融合蛋白并制备其多抗。方法采用RT-PCR扩增YB-1编码序列,将该序列克隆至载体pET-32a(+);转化BL21(DE3),确定最佳表达条件;采用亲和层析与超滤纯化目的蛋白,经Western blot鉴定后免疫家兔,制备其抗体。结果成功扩增YB-1编码序列并构建了其表达载体;SDS-PAGE结果显示,表达条件经优化后(28℃,5h,0.5mmol/LIPTG),YB-1融合蛋白在BL21中得到高效可溶性表达;Western blot结果证实,表达产物经纯化后获得了纯度较高的YB-1融合蛋白,将该蛋白免疫家兔后获得了效价与特异性较高的抗体。结论成功建立了YB-1蛋白的原核表达系统及蛋白纯化方法 ,并制备了其抗体。

建筑布局对高层住宅小区的流场影响分析

目的探讨研究建筑布局方式的不同对住宅小区室外风环境的影响,从而获得较舒适的住宅小区室外风环境.方法建立沈阳某高层住宅小区的数学模型,利用fluent软件对高层住宅小区冬、夏季的室外风环境进行模拟,对比分析建筑物布局方式改变的情况下,冬季与夏季住宅小区人行高度1.5 m处的风速分布.结果严寒地区的住宅小区,夏季南风时,建筑物之间的流动性较好,冬季北风时,建筑物间的风环境较差,通过降低小区出入口及主通道上建筑物的高度来调整建筑布局,与原布局小区的风环境相比,改变布局后的小区内人行高度1.5 m处的平均风速降低效果明显.结论调节迎风面建筑物的布局方式对小区室外风场的分布影响最显著,可以改善住宅小区室外的风环境,提高小区的舒适性.

深部开采矿井通风系统降温效果分析

目的模拟深部开采矿井井下高温环境,分析机械通风不同送风参数下的降温效果,确定出最佳送风参数,为深部开采矿井通风系统的设计提供理论依据.方法利用Fluent软件进行数值模拟,竖井壁面温度根据地温变化特点利用UDF编程确定,测定自然通风时矿井内的温度分布、风速大小,分析在深部开采矿井机械通风不同的送风速度、送风温度下,井下的降温效果,确定出最佳送风参数.结果当深采矿井送风风速为4 m/s,送风温度为15℃时水平巷道内的温度能够降到28℃,满足矿山安全规程规定.结论深采矿山开采深度为1 000 m,巷道长度为60 m时采用竖井机械通风能够实现井下高温环境的有效控制.对更为复杂的矿井,可以考虑采用细水雾和机械通风联合降温的方法,还可实现粉尘的综合防治.

重组腺病毒Ad5F35-IL-12感染不同单核-巨噬细胞的研究

目的确定人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12在不同人单核-巨噬细胞中的表达。方法将人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12分别感染人外周血单个核细胞、胸水巨噬细胞,以及THP-1和U937单核细胞株及其经佛波酯(PMA)诱导后生成的巨噬细胞;感染48 h后荧光显微镜观察对相应细胞的感染效率,RT-PCR检测IL-12双亚基p35和p40的mRNA表达情况,ELISA检测细胞培养上清中IL-12p70的分泌水平。结果人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12可成功感染人外周血单个核细胞、胸水巨噬细胞以及THP-1和U937单核细胞株及其PMA诱导后生成的巨噬细胞,并分泌IL-12 p70蛋白,蛋白表达量从高至低依次是胸水巨噬细胞、PMA诱导后U937细胞、PMA诱导后THP-1细胞、U937细胞、外周血单个核细胞、THP-1细胞。结论人IL-12基因重组腺病毒Ad5F35-IL-12可以感染不同的单核-巨噬细胞,并成功表达分泌IL-12 p70蛋白。

重组腺病毒Ad-IL-12感染淋巴细胞对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响

目的探讨重组腺病毒Ad-IL-12感染人外周血淋巴细胞后对人卵巢癌细胞SKOV3周期、增殖和凋亡的影响。方法采用重组人IL-12腺病毒(Ad-IL-12)感染人外周血淋巴细胞,感染48 h后与人卵巢癌细胞SKOV3共培养(SKOV3/Ad-IL-12),同时设未感染组(SKOV3)和Ad-GFP空载感染组(SKOV3/Ad-GFP)作为对照。RT-PCR检测IL-12双亚基P35和P40的mRNA表达,ELISA检测细胞培养上清中IL-12 P70蛋白的分泌,CCK8法检测卵巢癌细胞增殖,流式细胞术分析卵巢癌细胞周期和凋亡,RT-PCR和Western blot检测抗凋亡蛋白BCL-2、survivin的表达。结果重组腺病毒Ad-IL-12可成功感染人外周血淋巴细胞,分泌较高水平的IL-12 P70蛋白;淋巴细胞过表达IL-12可抑制SKOV3细胞的增殖;与未感染组和空载组相比,SKOV3/Ad-IL-12组G1期细胞显著增加,凋亡率显著升高(P<0.05),SKOV3细胞中抗凋亡蛋白BCL-2和survivin显著下调(P<0.05)。结论人IL-12基因重组腺病毒可以成功感染人外周血淋巴细胞,分泌IL-12 P70蛋白,并可以通过阻滞细胞周期进程和促进细胞凋亡抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖。

shRNA靶向干扰COX-2促进人肝癌裸鼠皮下移植瘤肿瘤细胞凋亡

目的:探讨重组干扰质粒pshRNA-COX-2对人肝癌细胞Hep3B裸鼠皮下移植瘤肿瘤细胞凋亡的促进作用。方法:重组干扰质粒pshRNA-COX-2转染Hep3B细胞并筛选后,将被成功转染的Hep3B细胞种植于裸鼠皮下,测量肿瘤大小,成瘤4周后处死裸鼠,绘制肿瘤生长曲线,RT-PCR和Western blot检测肿瘤组织中COX-2 mRNA和蛋白表达,电镜观察和TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果:与空白组相比,干扰组肿瘤组织中COX-2 mRNA和蛋白表达抑制率分别为48.5%和61.4%。干扰组最终瘤体大小明显小于阴性组和空白组<P<0.01)。电镜观察显示干扰组凋亡细胞增多,TUNEL法显示干扰组肿瘤细胞凋亡指数明显高于阴性组和空白组(P<0.01)。结论:pshRNA-COX-2通过靶向抑制COX-2基因表达,可明显抑制人肝癌细胞Hep3B裸鼠皮下移植瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡。

白介素-1和肿瘤坏死因子-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的关系

为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取H.pylori阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、TNF-A-857位点多态性和IL-1受体拮抗剂基因多态性。结果显示在慢性胃炎组中TNF-A-308各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=22.614,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-857各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=9.444,P=0.009)。再经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生慢性胃炎的危险性为OR=22.70(95%CI:2.51-205.40);与携带TNF-A-857C/C者相比较,携带TNF-A-857T/T者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=6.73(95%CI:1.71-26.53)。这些结果表明TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的发生相关。为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取H.pylori阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、TNF-A-857位点多态性和IL-1受体拮抗剂基因多态性。结果显示在慢性胃炎组中TNF-A-308各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=22.614,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-857各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=9.444,P=0.009)。再经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生慢性胃炎的危险性为OR=22.70(95%CI:2.51-205.40);与携带TNF-A-857C/C者相比较,携带TNF-A-857T/T者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=6.73(95%CI:1.71-26.53)。这些结果表明TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的发生相关。

电力系统中CAN总线通讯的应用

在目前的变电站自动化系统中,为了获得实时通讯,广泛采用了CAN总线通讯。本文在基于嵌入式硬件平台的设计基础上,给出了CAN总线通信的软、硬件设计。分析了通信方式以及精度问题,并对CAN总线在变电站自动化中的应用加以介绍。

FDI对江苏省经济增长效应分析

从FDI如何影响GDP出发,运用时间序列模型进行回归分析,然后分析引进FDI与江苏GDP增加的因果关系,从而完成对FDI对江苏省经济增长的效应分析,对模型合理性进行解释,并提出相关建议。

超高分子质量聚乙烯纤维纺丝工艺的研究进展

结合国内外生产研究现状,对超高分子质量聚乙烯(UHMWPE)纤维的发展历程、工艺路线、纺丝原理及其应用进行了梳理,从分子链聚集态结构变化的角度对冻胶纤维的超倍热拉伸和热定形进行解读,通过热致相分离的原理对冻胶丝成形进行阐述。并针对国内外现有研究工艺中的不足,对提高UHMWPE纤维力学性能、抗蠕变性等方面提出工艺改进方案,以期为UHMWPE纤维在不同领域中的应用和发展提供有益参考。

自贸区视角下江苏中小外贸企业跨境电商转型升级阻力及策略研究

自贸区作为深化改革开放新高地,为江苏中小外贸企业跨境电商转型升级注入强大动力,但企业在此过程中也遇到了来自各方面的阻力。本研究旨在通过对这些阻力进行探究,提出相关策略建议,希望对江苏中小外贸企业跨境电商稳步发展有所借鉴。

对火电行业征收碳税的利润最大化模型

煤炭是中国最重要的能源,而电煤是我国煤炭消耗中的主要组成部分,排放大量的温室气体;在低碳经济模式下,征收碳税将成为实现低碳的一种重要手段.本文通过构建火电行业的利润最大化模型,采用比较静态分析方法分析了碳税对我国火电行业产业的影响.结果表明:1)碳税税率A的增加,火电行业的生产成本(碳税)将增大,为了获得最大化利益,火电企业将采取措施降低碳排放量,减少支出;2)降低碳排放系数α,增加发电机组、人力、物流运输等投入,更新机组,采用低碳能源发电,减少碳税成本.

超高分子质量聚乙烯溶胀工艺的研究进展

主要针对超高分子质量聚乙烯(UHMWPE)树脂与溶剂混合液的溶胀性能进行阐述,包括溶胀工艺的必要性和重要意义、溶胀机制以及影响溶胀效果的因素。结合我国科研人员针对UHMWPE树脂溶胀方面的论述进行了归纳总结,得出影响UHMWPE混合液溶胀性能的是溶胀液浓度、溶剂种类、溶胀温度及作用时间等因素,从而为其他科研工作者或相关企业人员提供参考思路。

影响UHMWPE原料溶胀性能因素的初步探讨

通过单因素条件对超高分子质量聚乙烯树脂与白油混合液溶胀行为进行了研究,探讨了不同溶胀时间、溶胀温度、质量分数,以及超声波处理时间等对其溶胀性能的影响。并通过其混合液黏度、溶胀度的测试,得出国内外四种不同供应厂家、分子质量在400万左右的超高分子质量聚乙烯原料在不同溶胀工艺条件下的影响结果,为车间溶胀工艺提供一定的理论参考。

合作研发模式对科技型企业创新质量的影响——以苏州市为例

研发能力属于企业创新能力的核心组成部分,不断优化企业合作研发模式,有利于企业创新工作全面性以及深度的提升。本文以苏州市科技型企业作为研究对象,构建合作模式研发指标,就4种类型合作研发模式对科技型企业创新能力的影响效果以及机制进行探讨,发现相比于企业独立研发,企业合作研发与科技型企业创新质量之间呈显著正相关关系,与其他类型合作模式相比,产学研合作研发对于企业创新质量的影响更为积极,提出从加大产学研合作研发力度、畅通企业合作研发信息共享等方面入手,进一步优化企业创新工作。

乡村振兴背景下数字电商助力苏州城乡融合发展路径研究

乡村振兴背景下,数字电商作为推动城乡融合的新引擎,已成为推动城乡经济协调发展、促进乡村振兴的重要途径。苏州市作为长三角地区经济实力较强的城市之一,数字电商产业发展水平较高,但仍存在一些不足。在乡村振兴背景下,苏州市应立足区域资源禀赋、发展现状和市场需求,发挥数字电商优势,以试点市作为契机,在建设完善的标志性农村电子商务公共服务体系、农村农业农副产品电子商务基础设施、构建高水平人才队伍体系、打造农产品品牌等方面发力,促进城乡融合发展。

阅读需求导向下的中小学图书馆阅读指导课创新实践研究—北京市中小学图书馆课题研究成果之十二

学校图书馆开设阅读指导课,从学生阅读需求出发,激发学生阅读热情,培养学生阅读习惯,从杂志阅览到图书阅读,从推荐书目到学生个性化学期阅读任务单,从朗读文章片段到由问题引发思考、书写理解、交流感受,力求培养学生的阅读力、思维力和表达力。

中国煤炭安全后续研究——延伸煤炭产业链,实现产业循环发展

煤炭在我国经济发展发挥着重要的作用,但煤炭开采中造成环境的极大破坏,比如地表裂缝、岩溶塌陷、地下水资源破坏等等。给予SCP模型的基本思想对中国煤炭产业组织进行研究,并依据当前形势和存在问题提出相关建议。

基于薄膜栽培的聚乙烯醇-茶多酚复合水凝胶膜的制备

采用刮涂法制备能够应用于薄膜栽培技术中的聚乙烯醇(PVA)-茶多酚(TP)复合水凝胶膜,考察复合水凝胶膜中茶多酚的加入量对膜性能的影响。通过傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)、X线衍射仪(XRD)、耐水压测试及电子万能拉伸试验等手段对水凝胶膜的结构、平衡溶胀度、耐水压力、抗菌性和力学性能等进行表征。结果表明:加入TP对PVA-TP复合水凝胶膜分子间的相互作用有影响,膜内部出现氢键的断裂以及新的氢键的形成;添加适量的TP能够优化复合水凝胶膜的力学性能、耐水性和抗菌性;当复合水凝胶膜中TP质量分数为0.6%时,复合水凝胶膜综合性能最好;相比于纯PVA膜,复合水凝胶膜的拉伸强度、断裂伸长率和耐水压力分别提高了73.5%、71.1%和14.3%,平衡溶胀度降低了12.5%,且有效提高了PVA膜对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的抑菌率。