大鼠髓核细胞退变模型的对比研究

目的比较H2O2和LPS干预两种髓核细胞退变诱导模型效果,及其对ECM代谢平衡的影响。方法提取SD大鼠第7-12尾椎椎间盘髓核细胞进行分离培养传代,取第三代髓核细胞,分别采用75μmol/L H_(2)O_(2)、10μmol/L LPS干预12 h后,Western blot检测二型胶原(collagenⅡ,Col-2)、Y染色体性别决定区-盒转录因子9(SRY-box transcription factor 9,SOX9)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases 9,MMP9)及13(matrix metalloproteinases 13,MMP13)表达,PCR检测Col-2、SOX9、MMP9及MMP13转录水平,通过免疫荧光染色观察Col-2、SOX9、MMP9及MMP13的分布及表达变化情况。结果H_(2)O_(2)和LPS干预12 h,均能成功建立髓核细胞体外退变模型。引起ECM合成代谢减少,分解代谢增加。结论LPS对ECM合成代谢相关基因表达的抑制作用更为显著,而H2O2更为明显地促进了ECM分解代谢相关基因的表达。

NAD的耗尽与补充对髓核细胞的退行性变的影响

目的明确调节细胞内NAD水平对体外髓核细胞退行性变指标的影响。方法分组利用FK866及NMN处理大鼠尾椎椎间盘髓核细胞。CCK-8法检测髓核细胞的增殖的影响。WST-8法检测NAD含量;RT-PCR测定退变相关指标的表达水平。结果FK866处理下的髓核细胞NAD含量减少,退行性变水平增加(P<0.05);NMN处理后的髓核细胞NAD含量增加,但退行性变水平改变差异无统计学意义(P>0.05);NMN干预FK866预处理的髓核细胞,NAD含量升高,较低浓度可恢复降低髓核细胞的退行性变水平(P<0.05),但高浓度处理可加重退行性变(P<0.05)。结论NAD的含量显著降低与髓核细胞的退行性变相关,但补充需要维持在合理剂量,NAD缺失的髓核细胞施用大量NMN可能加重退行性变;NAD池的稳态对于维持髓核细胞正常功能有重要意义。