西北地区羊种布鲁氏菌遗传相关性分析

目的调查西北地区羊源布鲁氏菌的种型、分布及遗传相关性,揭示西北地区羊种布鲁氏菌种群和流行特征。方法用常规鉴定和AMOS-PCR对西北4省区的13个地区分离的布鲁氏菌进行种型鉴定,采用MLST和MLVA-16分型方法对菌株进行基因特征分析。结果常规鉴定和AMOS-PCR检测显示,本研究共分离羊种布鲁氏菌59株,其中22株来自内蒙古,17株来自新疆,13株来自甘肃,另有7株来自青海。羊种3型布鲁氏菌58株,羊种1型布鲁氏菌1株。MLST分析表明90%(53/59)的羊种布鲁氏菌为ST8序列型,为该地区主导流行种群。MLVA-11调查显示59株羊种布鲁氏菌聚为6个MLVA-11基因型,87%的菌株为MLVA-11基因116型,提示西北地区的流行菌株属于东地中海谱系。MLVA-16将59株羊种布鲁氏菌分为40个基因型,其中8个为共享基因型且每个基因型由2~7株来自相同地区的菌株构成,表明各共享基因型的病例由来自相同传染源引起的暴发流行。所有的共享MLVA-16基因型均由来自相同省区的菌株组成,提示各省区菌株呈现明显的地域聚集性特征。基于人群和羊脾分离菌株遗传比较显示,不同宿主来源的菌株组成多个完全相同的MLVA-16基因型,提示由羊到人的传播途径。结论羊种3型布鲁氏菌是西北地区动物布病的主要病原菌,疫羊是该区域人群布病的主要传染源。ST8克隆群是该地区的主导流行种群,各地区菌株MLVA基因型呈明显的地域聚集性特征。

山羊地方性鼻内肿瘤病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

山羊地方性鼻内肿瘤(enzootic nasal tumor, ENT)是山羊的病毒性传染病,由山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats, ENTV-2)所引起,感染后可以导致山羊的鼻道筛骨上皮细胞发生不可逆的癌变,已在世界范围内广泛存在,对山羊养殖业造成严重的经济损失。为建立快速、准确且能定量分析ENTV-2的检测方法,本研究根据GenBank上发布的ENTV-2 env基因(MT254061.1)保守区域设计引物和TaqMan探针,建立ENTV-2 TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、重复性与临床检测效果进行验证。结果显示,重组质粒标准品模板浓度为6.30×10^(2)~6.30×10^(7) copies·μL^(-1)呈现良好的线性关系,相关系数R^(2)为0.996 5,扩增效率为110%,线性方程的斜率为-2.953,最低检测限度为6.30×10^(1) copies·μL^(-1);组内变异系数和组间变异系数均小于2%,重复性好;与口蹄疫病毒((foot-and-mouth disease virus, FMDV)、小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus)、羊内源性逆转录病毒(endogenous retroviruses)等均无交叉反应,表明该方法具有很好的特异性。利用本研究所建立的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法对29份临床样品进行检测,该方法较普通PCR方法的检出率更高。综上表明,本研究成功建立了ENTV-2 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法,为ENTV-2的快速诊断和流行病学调查提供技术手段。

测定痕量铊的泡沫塑料吸附分离-镉试剂2B分光光度法

研究了在 pH11.5～12.5的NH3 -NH4Cl介质和TritonX -100存在下 ,镉试剂2B与铊 (Ⅲ )的显色反应。铊 (Ⅲ )与镉试剂2B形成摩尔比为1∶4的红色配合物 ,在测定波长500nm处 ,表观摩尔吸光系数为9.3×104 L·mol-1·cm-1 。室温下显色反应瞬间完成 ,配合物至少稳定12h ,线性范围是0～800μg/L。建立了采用聚胺酯泡沫塑料吸附铊 (Ⅲ ) ,与其他干扰元素分离 ,在水相体系快速、准确测定地质样品中痕量铊的方法。该法回收率为97.0 %～106 % ,5次测定的相对标准偏差不大于4.1 % 。

一种基于碳酸锶纳米材料的催化发光乙醛气体传感器研究

研制了一种使用碳酸锶纳米材料作为敏感材料,用来检测空气中痕量乙醛气体的催化发光传感器。该传感器在342℃对乙醛有高灵敏度和选择性,在波长425nm处进行定量分析,催化发光强度与乙醛浓度的线性范围为6～6000mL/m3(r=0.9995,n=8);检出限为2mL/m3(信噪比=3)。外来物质如环己烷、四氯化碳、氨、苯、氯仿、甲苯、甲醇、乙醇及甲醛气体通过传感器时,除了乙醇和甲醛分别引起42.5%和12.5%的干扰外,其它气体不干扰测定。20000mL/m3的水蒸气不干扰200mL/m3乙醛气体的测定。连续100h通过乙醛气体测试了传感器的稳定性。对含有乙醛、甲醛和苯的人工合成样品进行了分析。

2-羟基-5-磺酸基苯基重氮氨基偶氮苯分光光度法测定痕量汞(Ⅱ)

研究了 2 羟基 5 磺酸基苯基重氮氨基偶氮苯 (HSDAA)与汞 (Ⅱ )的显色反应。在TritonX 10 0存在下 ,于pH 10 30的硼砂 氢氧化钠缓冲溶液中 ,汞 (Ⅱ )与试剂形成 1∶2的稳定橙红色配合物 ,其最大吸收波长位于 5 19nm处 ,表观摩尔吸光系数为 1 6 7× 10 5L·mol- 1 ·cm- 1 。汞 (Ⅱ )在 0～ 6 0 0 μg·L- 1 之间符合朗伯 比尔定律。该法直接应用于水样中痕量汞的测定。

邻羟基苯基重氮氨基偶氮苯分光光度法测定痕量汞(Ⅱ)

研究了邻羟基苯基重氮氨基偶氮苯 ( O- HDAA)与汞 ( )的显色反应。在 Triton X- 1 0 0存在下 ,于 p H 1 0 .0的硼砂 -氢氧化钠缓冲溶液中 ,汞 ( )与试剂形成 1∶ 2的稳定橙红色配合物 ,其最大吸收波长位于 52 0 nm处 ,表观摩尔吸光系数为 1 .74× 1 0 5L· mol- 1· cm- 1,汞 ( )在 0～ 60 0μg/L之间符合朗伯-比耳定律。此法直接应用于水样中痕量汞的测定。

一种高选择性的检测丙酮蒸气催化发光传感器

设计了一种基于纳米材料SrCO3中掺杂Dy2O3的催化发光(CTL)丙酮蒸气传感器。通过掺杂Dy2O3使体系选择性显著提高。当Dy2O3的掺杂量为33%时,催化发光强度是不掺杂的3倍。当各测试气体浓度均为2000mL/m3时,三氯甲烷、二氯乙烷、甲醛和苯气体不干扰丙酮的测定。乙醇和正丁烷只引起15%和2.1%的干扰。在温度383℃、波长425nm、空气流速为360mL/min的最佳条件下,催化发光强度与丙酮蒸气浓度在1.0～5000mL/m3内呈良好的线性关系,检出限为0.30mL/m3。本传感器响应和恢复时间快速。

邻羟基苯基重氮氨基偶氮苯与铊(Ⅲ)的显色反应及其应用

本文研究了邻羟基苯基重氮氨基偶氮苯 (O HDAA)与Tl(Ⅲ )的显色反应。在TritonX 10 0和十二烷基苯磺酸钠 (SDBS)存在下 ,于 0 5 4～ 1 1mol·L-1氨水介质中 ,试剂与Tl(Ⅲ )形成 1∶5的稳定红色配合物 ,其最大吸收波长位于 5 2 0nm处 ,表观摩尔吸光系数为 1 4× 10 5L·mol-1·cm-1。Tl(Ⅲ )量在 0～ 6 0 0 μg·L-1之间符合朗伯 比耳定律。已用于直接测定水样及经泡沫塑料吸附分离后测定地质样品中的痕量铊 。

2-羟基-5-磺酸基苯基重氮氨基偶氮苯与铊(Ⅲ)显色反应的分光光度法研究

研究了 2 羟基 5 磺酸基苯基重氮氨基偶氮苯 (HSDAA)与铊 (Ⅲ )的显色反应 ,在TritonX 10 0存在下和 0 72～ 0 99mol·L-1 氨水介质中 ,铊 (Ⅲ )与HSDAA有高灵敏的显色反应 ,生成 1∶2红色配合物 ,最大吸收波长在 516nm处 ,铊量在 0～ 0 8mg·L-1 范围内符合比尔定律 ,表观摩尔吸光系数为 1 0 4× 10 5L·mol-1 ·cm-1 。在体系中加入酒石酸钠和氰化钠 ,可大大提高试剂的选择性 ,已用于合成水样中痕量铊的直接测定 。

nested-PCR试剂盒检测牛精液中的布鲁氏菌DNA

目的布鲁氏菌是兼性细胞内寄生菌,能够在吞噬细胞内长期存活并繁殖,引起家畜流产和人的波浪热。根据病原性和感染宿主的不同将布鲁氏菌分为六个种,能否快速、有效地从各种病料中检出布鲁氏菌,对及时控制布鲁氏菌在家畜中的传播和预防对人的感染十分重要。方法2006年6月,宁夏某公司奶牛场工作人员送检3份奶牛冻干精液,用巢式PCR检测出其中的2份为布鲁氏菌感染阳性,这年8月,重复取这2头种公牛的冻精、鲜精复查。结果用本方法检测全部为布鲁氏菌感染阳性。结论这是国内首次用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)试剂盒从送检的牛精液中检出了布鲁氏菌DNA片段。

差示脉冲阳极溶出伏安法测定痕量铊的研究

在 0 .0 5 0mol·L-1NaAc、0 .0 2 5mol·L-1HAc缓冲溶液 (pH =4.5± 0 .2 )和 0 .2 0mol·L-1EDTA、0 .0 1%聚乙二醇 2 0 0 0 0 (PEG2 0 0 0 0 )、0 .0 2mol·L-1抗坏血液溶液中 ,用悬汞电极 (HMDE)进行差示脉冲阳极溶出伏安法测定Tl(I) .该体系能消除相当于铊 1万倍的Pb(II)、Cd(II)、Cu(II)、Fe(III)、Zn(II)、As(III)、In(III)、Ni(II) ,1千倍的Co(II)的干扰 .应用该法测定了硫酸厂废渣中各化学提取液中的铊 .

仿玛瑙红稀土陶瓷颜料

本试验研制了稀土仿玛瑙红陶瓷颜料。它具价廉、颜色较深而艳丽、耐高温的优点。对颜料进行了物相鉴定及元系分析。结果表明,颜料析出的结晶物与ZnAl_2O_4具相同晶格构造类型,化学式可表示为Zn(Al_1.5Cr_0.1)O_4。元素分析表明少量秘和稀土元素进入晶格。对发色机理进行了探讨。

乳牛布鲁氏菌病PCR诊断试剂盒的实验室评估

对前期研制的布鲁氏菌omp25基因-PCR试剂盒的保存期、特异性和可重复性进行了测定,并应用该试剂盒对采自宁夏、甘肃、内蒙古、山西、黑龙江、新疆省(区)的98头血清凝集试验(SAT)阳性乳牛的6批98份乳样和350头SAT阴性乳牛的2批350份乳样进行了检测。检测结果显示,PCR试剂盒与SAT的阳性符合率为100%(98/98),阴性符合率为97.71%(342/350);从SAT阴性乳牛的乳样中,用PCR试剂盒检出8份阳性,表明其敏感性高于SAT;对2株田间野毒Br-gs和Br-nmg株进行了克隆与测序,二者与标准菌株序列的同源性分别为99.8%和100%。试验结果证实,本试剂盒的可重复性良好,特异性较高,-20℃下的有效保存期为5个月。

稀土桃红色陶瓷颜料的研制及组成测定

本试验研制了稀土桃红色陶瓷颜料。它具价廉、颜色纯正艳丽、耐高温的优点。对颜料绘制了吸收光谱、反射光谱,进行了物相鉴定及元素分析。结果表明:颜料析出的结晶物与ZnAl_2O_4具相同晶格构造类型。化学式可表示为Zn(Al_(1.6)Cr_(0.4))O_4元素分析表明少量稀土元素已进入晶格。对发色机理进行了探讨。

基于ZnO纳米棒的催化发光法检测空气中的乙醚

研究了空气中的乙醚蒸气在纳米材料表面的催化化学发光现象,发现ZnO纳米棒对乙醚的检测具有较高的灵敏度和选择性,据此设计了检测乙醚蒸气的传感器.该传感器在波长460 nm,温度264℃和载气流速280 mL.min-1的最佳条件下,化学发光强度与乙醚蒸气浓度在10～2 000 mL.m-3内呈良好的线性关系(R=0.999 6),检出限为4.8 mL.m-3,响应时间为2 s.在可能共存的10种干扰物中,只有乙醛、乙酸和丙酮分别引起1.38%、1.06%和1.31%的干扰,苯、甲醛、氨水、甲醇、七氟醚、乙醇和三氯甲烷等7种蒸气则没有引起干扰.应用该传感器可方便、快速地测定空气中的低浓度乙醚蒸气.

4,5-二溴苯基荧光酮和十二烷基硫酸钠吸光光度法测定锗

用取代苯基荧光酮作为显色列的胶束增敏吸光光度法测定锗已有不少报道.形成的多元体系中,各种类型表面活性剂都有应用,但以阳离于表面活性剂为主,而阴离子及两性表面活性剂则极少报道.笔者通过试验发现,使用阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)参与锗与4,5-二溴苯基荧光酮(DBPF)的显色反应.不仅具有较高灵敏度,而且具有很好选择性.低价金属离子及非金属离子均不干扰锗的测定.易产生干扰的高价金属离子的允许存在量均达数百微克以上,优于已有的光度法测定锗的所有体系.直接测定了煤样中微量锗,方法简便快速,获满意结果.

流产布鲁氏菌BCSP31基因在大肠杆菌中的可溶性高效表达

设计1对引物,突变除去布鲁氏菌BCSP31(细胞表面蛋白31)基因的N端信号肽氨基酸序列,经NotⅠ和EcoRⅠ酶切后与相同处理的表达载体pGEX-4T-1连接,转化BL21(DE3)感受态细胞。酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性克隆,测序证明其阅读框完全正确。用IPTG诱导表达构建成功的阳性克隆,对产物进行SDS-PAGE和Western-blotting检测,发现表达产物出现预期分子量57 kD的融合蛋白,该蛋白能与牛流产布鲁氏菌阳性血清发生反应,进一步证明目的蛋白主要以可溶性形式存在,表达量约占总蛋白的40%,应用GST琼脂糖凝胶FF纯化可得到纯度较高的表达产物。