献血者使用HIV抗病毒治疗药物对血液安全的影响

目的分析深圳市无偿献血者中使用抗病毒治疗(ART)药物对血液安全的潜在风险。方法应用液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS/MS),检测定期献血者(阴性对照组n=86)、抗-HIV阳性检出者(实验组n=98,检出于2019—2023年约44万献血者)血浆中ART药物,探明阴性对照组ART药物血浆基线浓度,分析使用ART药物对血液安全的影响。结果86例阴性对照组血浆标本未检测到基线浓度的ART药物;98例实验组1∶2人份混合血浆标本中,经拆分确证检出4例ART药物标本,ART药物检出率为4.08%。其中,3例检出ART药物替诺福韦、拉米夫定、依非韦伦,1例检出拉米夫定、洛匹那韦、利托那韦、齐多夫定。结论深圳地区抗-HIV阳性检出者中存在使用ART药物情况,需要进一步探究此类人群献血动机,识别高危人群,保障血液安全。

抗-TP阳性献血者中抗病毒治疗药物使用情况分析

目的了解深圳市梅毒螺旋体(TP)抗体(抗-TP)阳性献血者中抗逆转录病毒治疗(ART)药物使用情况,评估人类免疫缺陷病毒(HIV)诊疗新趋势带来的血液安全风险。方法采用分层随机抽样方法选取2019年3月至2023年1月深圳地区血液筛查合格的重复献血者60例(阴性对照组),规律服用已知ART药物人群3例(阳性对照组),抗-TP阳性/抗-HIV阴性献血者353例(实验1组),抗-TP阳性/抗-HIV阳性献血者25例(实验2组),应用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)方法检测各组血浆样本中8种ART药物浓度,分析ART药物使用情况。结果阳性对照组血浆采用1∶6稀释混样后ART药物仍可检出,实验1组和实验2组1∶6人份混合血浆阳性样本经拆分确证,实验2组检出1例ART药物阳性样本,该样本抗-HIV、蛋白免疫印迹、HIV RNA阳性,抗TP阳性献血者ART药物检出率为0.26%,实验1组ART药物检出率为0.00%,实验2组ART药物检出率为4.00%。结论深圳地区抗-TP阳性献血者中发现使用ART药物情况,合并HIV感染及高危性行为人群更可能使用ART药物。

计划免疫后出生献血者乙肝无症状慢性感染血清学与分子生物学特征分析

目的了解深圳地区计划免疫后出生献血者乙肝病毒无症状慢性感染情况,分析其血清学和分子生物学特征。方法将1992年之后出生的无偿献血者的HBsAg ELISA阳性血液标本进行乙肝两对半检测和核酸大容量提取,对其BCP/PC区及S区进行巢式PCR扩增及qPCR定量检测,并对产物进行基因测序及序列分析。结果2020年12月—2022年1月共收集46632份计划免疫后出生无偿献血者标本,其中含男性31612份,女性15020份。通过常规筛查得到ELISA阳性标本99份,经化学发光、巢式PCR、实时荧光PCR等方法检测,61份确证HBsAg阳性,阳性率0.13%(61/46632)。其中男性49份,阳性率0.16%,女性12份,阳性率0.08%(P<0.05)。50/61份标本获得S序列,经系统进化树分析,其中B型46份[92%(46/50),男性38份,女性8份],C型4份[8%(4/50),男性3份,女性1份]。S区突变频率高的分别N40S(8/46,17.39%),G44E(7/46,15.22%),Q129H/R(6/46,13.04%),Y161F/S(7/46,15.22%),V179A(4/46,8.70%),S53L(2/4,50%),C69T(2/4,50%),I126S/T(2/4,50%)。其中免疫逃逸突变有Q129R和T/I126A/N/S/T。结论乙肝疫苗接种能大大降低献血者的乙肝表面抗原阳性率,提高输血安全性。高频率的免疫逃逸突变也成为血液安全潜在风险,需要进一步探讨研究。

白细胞滤器中的NK及T细胞回收数量及其相关因素研究

目的为了探索白细胞滤器中NK及T细胞回收数量及其相关因素,本项目将分析来源于白细胞滤器及全血的NK细胞及T细胞的数量,并进一步分析白细胞滤器来源的与全血来源的细胞数量是否与年龄、性别等因素相关。方法2023年7月—2024年6月于深圳市血液中心共收集51名重复献血者的全血样本及白细胞滤器(400 mL)。通过PBS缓冲液冲洗白细胞滤器得到白细胞,通过血细胞分析仪分别对来源全血及白细胞滤器来源的细胞进行计数,密度梯度离心法分离得到单个核细胞,流式细胞术分别检测两组来源的CD3-CD56+NK、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T细胞的比例,GraphPad Prism 9.0软件进行统计分析。结果细胞计数结果显示,在一定量的冲洗液范围内,白细胞滤器来源的总淋巴细胞数量随着冲洗液体积的增多而增多,但细胞密度随着冲洗液的增多而降低。且白细胞滤器中的总淋巴细胞数量在不同年龄和不同性别的献血者中并未体现出明显的统计学差异(P>0.05)。细胞数量与细胞比例的结果通过计算可知,来源于白细胞滤器的CD3-CD56+NK细胞数量在不同年龄组间存在差异(P<0.05),而在性别分组中未见明显差异(P>0.05)。而来源全血的男性CD3-CD56+NK细胞数量要明显高于女性(P>0.05)。无论是来源白细胞滤器还是全血的CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞数量在不同年龄组和性别组中都未见明显统计学差异(P>0.05)。结论在一定量的冲洗液范围内,来源白细胞滤器的总淋巴细胞数量与冲洗液的体积相关,CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞的数量与献血者年龄、性别无明显相关,而CD3-CD56+NK细胞数量与献血者年龄相关。

采供血机构关键仪器设备采购论证评价模型:基于模糊评价法

目的建立采供血机构关键仪器设备采购论证的指标及模糊评价模型,为采供血机构的设备采购论证提供科学可靠的方法。方法通过文献回顾法和德尔菲专家咨询法,建立采供血机构关键仪器设备的采购论证评价指标。通过向专家发送指标调查问卷,使用层次分析法计算各个指标的权重。根据设立的指标结合模糊综合评价方法,构建关键仪器设备的采购论证打分模型。应用建立的论证模型,对血液筛查流水线系统进行分析验证。结果共建立4项一级评定指标,16项二级评定指标。紧迫性、社会效益、经济效益和技术条件4个一级指标的权重分别为0.496,0.300,0.051和0.153。拟采购的血液筛查流水线系统进行采购前论证,评价值为0.629,通过采购论证。结论通过构建采供血机构关键仪器设备论证指标和模糊综合评价方法,可对采购论证进行可量化的科学评价。

核酸筛查后HBsAg-/NAT+/HBV DNA-献血者标本的确认试验

目的对核酸筛查后HBsAg-/NAT＋/HBV DNA-献血者标本做确认试验及调查HBsAg-/HBV DNA＋标本检出率。方法采用核酸检测方法（NAT）筛查本中心2011年11月-2012年7月的52 672（人）份无偿献血者标本,对其中HBsAg阴性NAT初筛阳性、HBV DNA鉴别试验阴性的81（人）份标本,使用巢式PCR（NestedPCR）和实时荧光定量检测方法（QPCR）确认其HBV DNA是否存在。结果从52 672份NAT无偿献血者标本中,筛得HBsAg-/NAT＋/HBV DNA-81份、HBsAg-/NAT＋/HBV DNA＋15份;经Nested-PCR和QPCR方法扩增,81份HBsAg-/NAT＋/HBV DNA-标本共检出10份HBV DNA＋,HBsAg-/HBV DNA＋检出率为0.05%[（10＋15/52 672）;25例HBsAg-/HBV DNA＋标本病毒载量介于不可检出到至108.9 IU/mL,抗-HBc＋/HBsAg-/HBV DNA＋标本病毒载量（不可检出到至108.9 IU/mL）明显高于与抗-HBc-/HBsAg-/HBV DNA＋标本（不可检出到至54.0 IU/mL）（P〈0.05）。结论目前采用的核酸检测存在假阳性或假阴性情况,应提高核酸检测试剂灵敏度与特异性,确保检测HBsAg-/HBV DNA＋准确性。

HBsAg、抗-HCV反应性无偿献血者归队检测模式探讨

目的：探讨深圳地区无偿献血人群因血液筛查检测 HBsAg 或抗-HCV 呈阳性反应，在规定的条件下允许其再次招回重新检测，以确定是否恢复其献血资格并重新归队献血的检测模式。方法对深圳市2007年10月至2013年12月期间无偿献血人群捐血后 HBsAg、抗-HCV 初筛反应性人员，且符合我中心制定的再次招回重新检测的献血人群进行分析研究，对无偿献血者归队模式的可行性进行探讨。结果2007～2013年期间共计415759人次，HBsAg 检测阳性2506例，抗-HCV 检测阳性1357例，阳性率分别为0.60％和0.33％。笔者对符合召回条件的59例 HBsAg 和16例抗-HCV 阳性反应的多次献血者启动了归队检测的召回流程，HBsAg、抗-HCV 项目分别有31例和9例成功完成检测流程检测项。其中29例曾经 HBsAg 呈阳性反应的献血者重新恢复献血资格，2例因后续检测不合格被屏蔽献血资格，而9例曾经抗-HCV 阳性反应而召回献血者全部恢复其献血资格。结论在现有检测模式下，血液筛查的检测技术手段很难避免因试剂、设备、人员操作等原因造成假阳性反应的发生。为了保护无偿献血人群的献血资格，必须建立一套科学、合理并具有实际操作性的献血者归队检测模式，以保护有限的无偿献血资源。

献血者采血前ALT初筛检测可行性探讨

目的 探讨干化学仪用于无偿献血者采血前ALT检测的实用性。方法 用Reflotron快速全自动生化分析仪、ALT干化学试剂条检测 5 91份全血标本 ,同时采用微量速率法、BACKMAN自动生化分析仪作平行血清实验。结果 3种检测方法所得结果符合率达 95 .9%。结论 Reflotron快速全自动生化分析仪是目前较为先进的干化学测定仪 ,用于无偿献血采血前的ALT及临床门诊或急诊病人生化指标的检测 ,快速 。

核酸检测阳性标本与酶联免疫吸附试验分析研究

目的为了提高临床输血的安全性,拟比较血液筛查核酸检测(NAT)阳性标本结果与酶联免疫吸附试验(ELISA)数据分析,旨在研究探讨如何提高ELSIA检测技术在血液筛查中的灵敏度。方法对55 499例常规ELISA检测非反应性的无偿献血者血样标本,其各项指标均正常的标本,用NAT检测技术8例混合检测,从中比较NAT检测阳性与酶联免疫吸附试验结果。结果血清学检测非反应性标本中11例HBV DNA阳性标本,1例HCV RNA阳性标本,HIV RNA未检出。结论 NAT与ELISA的血液筛查检测互补作用主要体现在3个方面:1)窗口期漏检是目前ELISA漏检的最大因素。2)免疫静默感染、病毒变异、病毒亚型对以抗原-抗体免疫反应技术基础的ELISA方法会降低ELISA检测性能。3)ELISA检测"灰区"的设置在理论上可以减少因试剂检测灵敏度而造成的漏检现象,但仍无法解决因病毒变异、病毒亚型和因"窗口期"而造成的漏检现象。

ELISA检测与NAT在血液筛查应用中的互补性研究

目的对酶联免疫吸附实验(ELISA)与核酸检测(NAT)技术在血液筛查应用中的互补探讨。方法对2011年1月～2012年1月深圳市血液中心采集的70 584人份无偿献血者标本用ELISA检测方法对血液传染性指标HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒螺旋体、ALT进行检测,另外采用NAT检测技术对上述献血人群的HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA进行单人份平行核酸检测。从中比较2种检测方法的检测灵敏度,并对2种检测方法的检出率进行比较。结果 70 584例标本中血清学检测及ALT不合格人数共计1 309例,不合格率为1.71%。检出ELISA阴性,HBV-DNA呈阳性41例,检出率为5.9/万。HIV-RNA检出1例。结论 NAT与ELISA的血液筛查检测互补作用主要体现在1)病理生理过程互补:检测窗口期的长短主要由检测对象的生理属性来决定,而非检测方法缺陷。2)检测方法学互补,由于检测方法学的不同使得NAT检测技术的检测灵敏度明显高于ELISA血清学检测方法。3)ELISA对变异及亚型的检出概率与NAT对突变及基因型在检测概率相互补充。

深圳献血者中HCV感染自然清除与病毒血症特征分析

目的测定我国深圳地区献血者中的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染者自然清除和病毒血症,即自然康复与慢性感染者比率及其人群特征,为丙型肝炎防治研究提供数据。方法对深圳献血者中抗-HCV初筛阳性的血清标本采用2种EIA方法进行抗体再测定,以定量PCR方法测定病毒载量,并采用巢式PCR对核酸进行确认,进而将标本分为3种HCV感染状态,即病毒自然清除(RNA-/Ab+)、病毒血症(RNA+/Ab+)和假阳性(RNA-/Ab-),通过统计学方法分析3种感染状态献血者在临床信息(性别、年龄)、ALT、抗-HCV的差异。HCV RNA阳性标本通过分析5'-NCR序列进行基因分型。结果 152份初筛抗-HCV阳性的标本中,病毒自然清除标本45份、病毒血症51份、假阳性56份。50份HCV定量PCR阳性标本病毒载量范围从[(12.6～2.43)×106]IU/ml(中位值2.54×104IU/ml)。36份进行基因分型的标本包括47.2%基因1型、5.6%基因2型、19.4%基因3型和27.8%基因6型。慢性感染组标本的年龄及抗-HCV水平(S/CO值)显著高于病毒自然清除和假阳性组(χ2=7.812,P<0.05;χ2=90.865,P<0.01)。结论深圳地区献血者HCV感染病毒自然清除率约为46.9%。HCV基因型中1型为主要,6型也占有较高比例。年龄小、女性献血者更易于自然清除病毒。病毒血症即慢性感染者HCV抗体水平显著升高,其在HCV自然康复过程中的作用还有待进一步研究。

全自动样本处理仪在血型检测中的应用

目的建立血型正定型试验的快速自动血样分配方法,用于血站系统大批量ABO血型正定型、RhD定型试验。方法采用全自动酶联加样系统,完善仪器加样程序的编辑,使其自动完成对待检样本的稀释、血样分配及加入试剂的全过程。结果共检测48300份样本,纠正ABO初筛错误13例,查出A亚型2例,检出RhD阴性146例。用原倍试剂,试管法复检,符合率100%,其中弱D阳性样本5例。结论全自动样本处理仪操作简单、快捷,可减少工作强度,提高工作质量,仪器自动取血样条码能有效防止因工作量大而造成的错报、漏报结果。

血筛用酶联免疫吸附试验与核酸检测互补性探讨和研究

目的为了提高临床输血的安全性,探讨核酸检测(NAT)与酶联免疫吸附试验(ELISA)技术在血液筛查工作中的互补特性。方法对2007年6月至2008年3月采集的无偿献血者标本共计45 022例用ELISA血清学检测方法对血液传染性指标HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒螺旋体、丙氨酸氨基转移酶(ALT)进行检测,各项指标均正常的标本用NAT技术检测,以研究2种检测方法的互补性。结果45 022例标本中血清学检测及ALT不合格人数共计803例,不合格率为1.98%。对各项检测指标合格的36 806例标本进行核酸检测,结果HBV-DNA呈阳性3例。HBV-RNA、HIV-RNA均未检出。结论NAT与ELISA的血液筛查检测互补作用主要体现在3个方面:1)病理生理过程互补,检测窗口期的长短主要由检测对象的生理属性来决定,而非检测方法缺陷。2)检测方法学互补,由于检测方法学的不同使得NAT技术的检测灵敏度明显高于ELISA血清学检测方法。3)影响各自实验的错误发生各不相同。

深圳地区献血人群弓形虫感染的血清学调查研究

目的了解深圳地区献血人群中弓形虫感染和分布情况。为医疗安全用血提供科学依据。方法采用酶联法(ELISA)检测标本血清中弓形虫的IgG、IgM,初筛检测阳性,复查仍为阳性,判断为阳性。结果对随机抽取的680例无偿献血者进行检测,检出IgG阳性为49例,IgG阳性率为7.21%;IgM阳性2例,IgM阳性率为0.29%。其中18～30岁、31～40岁、41～55岁IgG阳性率分别为5.91%、7.04%和9.26%;在校大学生、外来打工人员、家庭妇女、公务员及企业职员阳性率分别为6.57%、6.98%、11.2%和6.12%;男性、女性IgG阳性率分别为7.6%、6.62%。结论献血者人群中弓形虫感染率随着年龄的增长有增高的趋势;家庭妇女组的阳性率高于其他3组人群;男女人群的阳性率差异无显著性。对于感染弓形虫的献血者存在潜在的输血传播该病的可能性应起重视。

核酸血筛在献血者常规筛查中的应用研究

目的评估核酸检测在大规模临床用血输血传染性指标筛查中的必要性和实用性。方法 ELISA法检测献血者HBsAg,抗-HBV和抗-HCV,以及抗-TP,非反应性标本再用国产HBV/HCV/H IV核酸检测试剂进行检测,从中筛查出ELISA检测非反应性,核酸检测阳性的标本。进一步对NAT阳性标本跟踪采样检测以确认血清学转化,或用进口核酸试剂复核检测确认核酸阳性。结果使用8份混样、阳性标本汇集池一次拆分的自动化检测模式,55 499人份ELISA检测合格的血标本中共检出11份HBV核酸阳性标本,1份HCV核酸阳性标本。其中3份经跟踪采样检测确认为HBV感染窗口期标本,1份由罗氏试剂复核检测确认为HCV感染窗口期标本。其余8份HBV核酸阳性样本经"两对半"检测确认为现行ELISA血筛漏检的HBV隐匿性感染或其它感染类型标本。结论核酸血液筛查可大大提高血液安全性,特别是提高对我国较为复杂的HBV低滴度感染标本的检出能力。

国产HCV RNA分型试剂盒检测结果分析

目的分析丙型肝炎病毒(HCV)RNA分型试剂盒检测深圳市抗-HCV阳性献血者结果。方法收集2014-2015年158份深圳市抗-HCV阳性献血者血液样本,应用聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法进行HCV RNA定量检测,病毒载量>1.0×103 IU/mL的样本经HCV RNA分型试剂盒检测HCV基因型,分析不同基因型所占比例,病毒基因型与载量之间的相关性。结果 158份抗-HCV阳性献血者PCR-荧光探针法检出HCV RNA阳性样本54例,病毒载量>1.0×103 IU/mL的45例,全部得到分型结果,HCV 1b型、2型、3型、6型分别占57.78%(26/45)、6.67%(3/45)、8.89%(4/45)、26.67%(12/45)。单因素方差分析结果显示,1b型与2型病毒载量差异有统计学意义(F=2.861,P<0.05);不同性别间HCV RNA定量检测结果及抗-HCV S/CO值结果差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄段各基因型分布比例经Fisher精确检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HCV 1b型、6型仍为深圳市无偿献血人群感染HCV的主要基因型,而HCV 2型和3型比例有所减少。

不同方法检测深圳献血人群梅毒感染结果分析

目的 探讨TRUST、ELISA和TPPA法检测梅毒抗体的效果,评价深圳献血人群的梅毒感染情况。为临床安全用血提供依据。 方法 12 600例无偿献血者标本皆采用TRUST和ELISA两种方法平行进行梅毒检测。对其中任何一种方法检测阳性者,用TPPA方法进行确认(1:80以上者为阳性)。 结果 TRUST方法检测梅毒,阳性例数有62例,阳性检出率为0 .49%;ELISA法为118例,阳性检出率为0 .94%。后经TPPA确认,结果为116例阳性,确认阳性率为0. 92%。TRUST检出率明显低于ELISA法和TPPA法。 结论 单纯采用TRUST检测筛查献血人群梅毒抗体检出率低,不适用于健康人群梅毒抗体的筛查。

核酸血液筛查试剂内标质控效果研究

目的竞争性内标对核酸检测灵敏度的影响程度及方式,探寻采用适度的内标质控浓度,用于有效控制核酸检测过程。方法使用竞争性混合内标试剂对不同浓度的HBV、HCV、HIV阳性标本检测,HBV内标浓度<103IU/ml,HCVt HIV内标浓度为(200—300)IU/ml。结果HBV内标浓度<5IU/ml检出率<95%,浓度>10IU/ml后检出率≥95%,HCV、HIV内标浓度<100IU/ml检出率<95%,≥100IU/ml检出率≥95%。结论内标(内参照)把质量控制从每批阳性质控提高到每管阳性质控的水平,能有效减少假阴性检测结果,竞争性内标结构和待检物几乎完全相同,更能真实反应情况。

献血人群Rh(CE)表型筛查策略决策树的建立和分析

目的分析不同Rh(CE)表型在献血人群中的分布,比较献血者Rh表型筛查策略,为临床精准输血建设提供支撑。方法通过微柱凝胶方法进行Rh E、e、C、c抗原检测,统计Rh(CE)表型在深圳市初次、重复献血者、不同ABO血型献血者中的占比。基于筛查数据建立决策树模型,通过成本-效果分析比较选择适宜的筛查策略。结果深圳地区无偿献血者中Rh(CE)8种表型占比从大到小依次为CCee(49.56%)、CcEe(30.93%)、Ccee(9.04%)、ccEE(5.74%)、ccEe(2.96%)、CCEe(0.90%)、ccee(0.63%)和CcEE(0.25%)。通过决策树建立和成本-效果分析发现,基于该中心初次献血者占比接近50%的现状,对初次献血者进行Rh(CE)筛查为最劣方法,其效果提升的花费高于对重复献血者进行Rh(CE)表型筛查的策略,综合考虑下对重复献血者进行Rh(CE)表型筛查较适宜。但当初次献血者占全部献血者比例>0.7时,筛查初次献血者的效果开始优于重复献血者筛查;当初次献血者比例<0.486时,初次献血者的筛查费用开始低于重复献血者筛查,需进行综合分析选择适合的策略。结论有必要对献血者开展Rh C和E表型的筛查工作,对于筛查策略的选择可在该模型的基础上,依据各地区的检测成本和献血者组成选择最优的方案。