动态轴向压应变促进丝素蛋白支架内MC3T3-E1细胞成骨分化

目的观察动态轴向压应变对三维丝素蛋白支架内成骨细胞成骨相关基因表达的影响。方法应用动态力学加载仪对实验组小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1加载动态轴向压应变(5%应变幅度,1 Hz,30 min/d,共21 d),对照组细胞常规静置培养,不施加力学刺激。应用定量PCR检测细胞成骨基因碱性磷酸酶(ALP)、I型胶原(COLⅠ)、骨特异性转录因子(Runx2)、成骨相关转录因子(Osx)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达量。结果成骨细胞在周期性轴向压应力刺激下,Runx2、Osx及COLⅠ表达分别增加280%、68.9%和79.6%,ALP及OCN表达也分别增加10.7%和26.9%。实验组成骨相关基因mRNA表达与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成骨细胞复合丝素蛋白生物支架材料在周期性轴向压应力刺激下,成骨基因COLⅠ、Runx2、Osx及OCN表达明显上调,可能是生理状态下压应力刺激促进骨折愈合的重要机制之一。研究结果对于以力学信号为基础的细胞疗法修复骨缺损等疾病具有重要临床价值。

不同固定方法治疗老年股骨转子间骨折疗效比较

目的评价动力髋螺钉（DHS）、Gamma钉和防旋股骨近端髓内钉（PFNA）治疗老年不稳定股骨转子间骨折的临床疗效。方法对162例股骨转子间骨折患者分别采用DHS、Gamma钉及PFNA治疗。比较3种方式的手术时间、术中术后出血量、手术并发症及术后疗效。结果 162例均获随访,时间1~2年。手术时间及术中出血量3组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。术后3 d引流量：PFNA组与DHS组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。术后18个月内并发症总发生率比较DHS组最高（P〈0.05）;术后疗效比较3组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论与DHS、Gamma钉比较,PFNA手术时间短、出血量少、术后并发症发生率低,在治疗老年不稳定股骨转子间骨折应用中占有优势。

人转化生长因子β1基因重组腺病毒的构建与鉴定

背景:转化生长因子β1能促进多种细胞的生长增殖,是调控骨髓间充质干细胞向成骨方向定向分化的主要生长因子。目的:利用AdMax系统构建人转化生长因子β1(hTGF-β1)基因的重组腺病毒表达载体。方法:采用PCR方法克隆人转化生长因子β1基因cDNA后,插入线性化表达载体pAV-MCMV-EGFP-3FLAG中,转化E.coliDH5α感受态细胞,构建pAV-MCMV-hTGF-β1重组质粒。结果与结论:含目的基因的重组腺病毒质粒共转染293细胞进行病毒包装、扩增后,经PCR、WesternBlot检测得到转化生长因子β1重组腺病毒,其滴度约为1.25×1010pfu/mL。表明利用AdMax系统成功可构建人转化生长因子β1腺病毒载体,并可满足进一步的转化生长因子β1成骨作用的研究。

腰椎行椎间孔入路椎间融合术固定的有限元分析

目的 利用有限元方法分析经单侧椎间孔入路腰椎间融合术治疗腰椎退行性病变的临床可行性.方法 基于正常人L3～5节段的CT扫描数据,利用Mimics、Pro/E、ANSYS软件分别建立L3～5正常生理状态有限元模型、L4/5左单侧椎弓根螺钉内固定加椎间融合器模型（单侧TLIF）、L4/5双侧椎弓根螺钉内固定加椎间融合器模型（双侧TLIF）.在L3上表面施加500 N的人体重力和10N·m力矩,模拟人体直立、前屈、后伸、左侧弯和右旋5种生理活动,观察不同工况时椎体、椎间盘、螺钉及融合器上变形及应力分布情况,比较两种固定方法力学性能上的差异.结果 各种工况下单侧TLIF、双侧TLIF的L3～5节段变形量均较生理状态模型减少,单侧TLIF、双侧TLIF模型均在后伸运动时融合器的应力达到最大值,且单侧TLIF模型椎弓根螺钉上的应力峰值在各种工况中均明显高于双侧TLIF,后伸工况时应力峰值达到463.39 MPa.结论 单侧TLIF可作为腰椎退变性疾病的一种固定方法,但应力峰值均明显高于双侧TLIF模型,故系统稳定性差于双侧TLIF模型,提示患者在康复过程中应减少后伸运动,以免发生手术失效或螺钉断裂.

腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞

背景:骨髓间充质干细胞作为骨、软骨创伤缺损及退变修复的种子细胞越来越受到关注。目的:分析人骨形态发生蛋白2基因转染对白色封闭群大鼠(SD大鼠)骨髓间充质干细胞的影响。方法:分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞并体外扩增,通过腺病毒载体介导人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞,分别通过荧光显微镜观察荧光表达情况及蛋白质水平来测定转染后人骨形态发生蛋白2的表达,碱性磷酸酶定量测定鉴定成骨活性及MTT法评估人骨形态发生蛋白2转染对骨髓间充质干细胞的影响。结果与结论:从SD大鼠骨髓提取物中分离培养的细胞形态为梭形,呈铺路石状、漩涡状生长,经流式细胞仪检测及多项分化能力鉴定符合骨髓间充质干细胞的特征;经转染人骨形态发生蛋白2基因后,骨髓间充质干细胞表达人骨形态发生蛋白2、碱性磷酸酶;MTT法检测转染人骨形态发生蛋白2基因后,骨髓间充质干细胞增殖能力明显增强(P<0.05)。说明人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞后可以持续、高效表达人骨形态发生蛋白2和碱性磷酸酶,在体外明显促进骨髓间充质干细胞的增殖。

Ad-hBMP-2与Ad-hTGF-β1基因共转染骨髓间充质干细胞后的体外成骨诱导

背景:重组DNA技术的进展为骨组织工程研究的发展提供巨大动力,将其应用于组织工程骨构建可以显著提高骨修复的质量和效率。目的:拟将Ad-h BMP-2联合Ad-h TGF-β1转染骨髓间充质干细胞体外成骨诱导,观察二者在成骨过程中的相互关系。方法:以腺病毒Ad Max为基因转移载体,将携带转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2基因的高滴度腺病毒感染SD大鼠骨髓间充质干细胞,利用外源性基因编码的生长因子诱导其表达,通过RT-PCR、ELISA、MTT实验及碱性磷酸酶水平检测等方法鉴定。结果与结论:腺病毒感染骨髓间充质干细胞后RT-PCR可检测出外源基因的表达,MTT实验和碱性磷酸酶活性检测双基因共转染的骨髓间充质干细胞增殖能力最强,碱性磷酸酶活性最高。结果表明联合应用Ad-h TGF-β1和Ad-h BMP-2转染可明显促进骨髓间充质干细胞的成骨化,效果优于单用一种生长因子。

股骨粗隆间骨折动力髋螺钉和防旋股骨近端髓内钉临床疗效比较

目的评价治疗股骨粗隆间骨折两种手术方式的疗效。方法回顾性分析动力髋螺钉（DHS）及防旋股骨近端髓内钉（PFNA）对98例股骨粗隆间骨折患者的治疗。统计骨折的分型，手术时间，术中术后出血量、术中输血量，术后疗效及并发症。结果（1）手术时间、术中出血量，术后引流量及术中输血量，两组间比较P〈0．05。PFNA组平均用时最短，术中出血及术后引流量最少；（2）术后并发症：两组间并发症发生率（P〈0．05），并发症总发生率DHS组最高；（3）疗效比较：DHS组、PFNA组优良率分别为82．4％、90．2％，组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PFNA治疗股骨粗隆间骨折，以其术时短、损伤小、并发症发生率低及固定牢靠，在高龄不稳定粗隆间骨折应用中占有一定优势。

股骨干骨折术后膝关节僵硬的临床研究

目的分析股骨干骨折术后膝关节僵硬的处理方式及效果。方法 2005年1月至2010年1月我科共治疗26例股骨干骨折术后膝关节僵硬患者,其中男16例,女10例;年龄18-62岁,平均38.6岁。中段骨折10例,下段骨折16例,给予手法及切开松解。观察术后并发症和疗效。结果术后随访6-36个月,平均16个月,按膝关节外科临床评分系统[1]进行疗效评价,优14例,良9例,可2例,差1例,优良率88.5%。2次以上再手术发生率为11.5%。结论根据内固定及骨折愈合情况,选择合适的松解方法及术后功能康复,均可取得较满意的手术效果。

人骨形态发生蛋白2基因重组腺病毒的构建与鉴定

背景:骨形态发生蛋白2是诱导成骨关键物质,参与调节从细胞增殖、决定种系分化方向到细胞死亡等一系列的生物过程。目的:利用AdMax系统构建人骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒载体并鉴定。方法:以人cDNA为模板PCR扩增人骨形态发生蛋白2基因,转化E.coli感受态细胞,经菌落PCR鉴定阳性转化子、阳性克隆测序无误后,扩增、抽提。将带有目的基因的腺病毒表达载体和携带有腺病毒大部分基因的辅助包装质粒共转染293细胞进行病毒包装扩增,PCR检测目的基因、Western Blot检测目的蛋白及终点稀释法检测病毒滴度。结果与结论:PCR获得长度为1223bp的人骨形态发生蛋白2目的基因片段,同源重组表达载体经阳性克隆PCR及测序鉴定,结果正确。293细胞内包装、扩增,经Westernblot及PCR鉴定无误后,获得病毒滴度为5×1013pfu/L的重组腺病毒。实验成功构建携带有人骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒载体。

山梨醇增加糖尿病患者腰椎管狭窄症炎性反应因子的表达

目的探讨糖尿病腰椎管狭窄患者黄韧带增生肥厚的发生机制。方法 24例糖尿病和20例非糖尿病的腰椎管狭窄患者列为研究对象,观测黄韧带标本结构,D-Sorbitol/Xylitol试剂盒检测山梨醇水平。体外实验中使用小鼠成纤维细胞(NIH3T3)细胞系,用Western blot及q PCR分别检测高糖培养条件及醛糖还原酶抑制剂(ARI):依帕司他(EP)作用对细胞炎性反应因子及TGF-β表达水平的影响。结果糖尿病组较非糖尿病组的山梨醇水平更高、黄韧带平均厚度更大、标本弹力纤维降解、胶原纤维增生更为显著、免疫组化CD68阳性染色率更高(P<0.01);体外实验中,NIH3T3细胞系在高糖培养与正常糖浓度培养相比山梨醇、促炎性细胞因子和TGF-β表达水平更高,而山梨醇、促炎性细胞因子和TGF-β增高的表达水平可被醛糖还原酶抑制剂所抑制并且呈剂量依赖(P<0.05)。结论糖尿病腰椎管狭窄患者黄韧带中山梨醇水平显著增高,进而促进炎性反应因子及纤维化相关因子TGF-β表达增加,使得黄韧带炎性增生。

TiRobot机器人辅助治疗骶髂关节骨折脱位

[目的]介绍TiRobot机器人辅助经皮空心螺钉内固定治疗骨盆骨折骶髂关节骨折脱位的手术技术与初步临床结果。[方法]2019年1月~2020年1月,采用TiRobot机器人辅助经皮空心螺钉内固定治疗的骨盆骨折骶髂关节骨折脱位13例。术前影像明确骨折类型,进行手术设计。将机器人机械臂移动并固定至手术床旁。将示踪器固定于健侧髂前上棘骨质中,透视获取机器人定位标记点,在主控系统规划软件上进行手术螺钉路径规划。于入钉点行2 cm小切口,将机械臂所持套筒尖端抵至入钉点骨皮质,在主控工作站确认入钉点和虚拟探针方向是否符合规划,并进行微调,确认路径精准后,内钻入导针,沿导针拧入空心螺钉。[结果]手术共置入20枚螺钉,未出现医源性血管、神经及脏器损伤。置入的螺钉位置优良率100%。[结论]TiRobot机器人适用于辅助骨盆骨折骶髋关节骨折脱位,具有精确性高、安全性好的优点。

新鲜齿状突骨折的前路及后路手术治疗选择

目的探讨新鲜齿状突骨折手术前、后路治疗的方法和临床效果。方法对46例新鲜齿状突骨折行手术治疗。前路齿状突空心螺钉固定35例（前路组），后路C1、2椎弓根钉固定11例（后路组）。结果术后随访25～50个月。前路组出现1例切口脂肪液化、1例骨折延迟愈合及1例声音嘶哑，其余均达骨性愈合。结论前路空心螺钉固定术可以作为治疗新鲜Ⅱ、Ⅲ型浅表型齿状突骨折的首选方法；寰枢椎椎弓根钉以其牢靠内固定适用于治疗上颈椎不稳症。

以健侧小腿血管为受区血管的股前外侧皮瓣游离移植修复小腿软组织损伤

目的探讨以健侧小腿血管为受区血管的股前外侧皮瓣游离移植修复小腿严重软组织损伤的临床效果.方法 2012年1月至2018年1月,南昌大学第一附属医院骨科收治10例小腿严重软组织损伤的患者,男7例,女3例,年龄17~56岁,平均35岁.所有病例患肢创面周围均无可供吻合的主干血管.创面大小为20 cm×13 cm^29 cm×15 cm;缺损位置:小腿前侧5例、内侧3例、后内侧2例.采用与健侧胫前或胫后血管桥接吻合的健侧股前外侧皮瓣修复患侧小腿软组织缺损,根据缺损大小及是否需要填塞死腔,切取肌皮瓣、筋膜皮瓣或穿支皮瓣,双下肢置于平行位并用外支架固定,术后1周开始断蒂训练,21~32 d断蒂,并拆除外支架,断蒂时如条件允许,将健肢血管断端与远端重新吻合,以恢复血管的连续性.结果本组10例皮瓣全部成活.股前外侧皮瓣面积为23 cm×14 cm^32 cm×16 cm,供区血管包括胫后动、静脉5例,应用健侧小腿局部皮瓣卷成管状覆盖;胫前动、静脉5例,应用中厚皮片游离移植覆盖血管束,均采用端端吻合的方式吻合供受区血管.大腿供区应用局部皮瓣修复2例、皮肤牵张器修复1例、植皮修复7例.1例发生患肢受区创面的轻度感染,经换药后控制,1例发生健侧大腿供区小面积植皮皮片坏死,其余8例供、受区创面一期愈合.随访6~18个月,平均12个月,患侧肢体功能基本恢复,健侧无明显功能丧失,创面完全修复,外形满意.结论以健侧小腿血管作为受区血管,应用股前外侧皮瓣游离移植修复小腿大面积皮肤缺损,虽然存在长期下肢制动、分期手术等缺点,但当患侧下肢缺乏合适的受区血管时,不失为一种可以考虑的治疗方法.

生物衍生松质骨支架材料的Micro-CT量化分析

目的:在骨组织工程中,如何制备出理想的支架材料一直是研究重点;目前主要的有天然生物支架材料、人工合成有机材料和无机材料等;生物衍生骨即天然生物支架材料的一种,由于其与天然骨在形态结构上较为相似,是近年来研究较多的支架材料之一;既往形态学研究局限于在二维层面,对于其三维结构参数分析较少。故本实验主要运用Micro-CT对生物衍生松质骨的三维结构参数进行分析,量化评价其作为骨组织工程支架材料的结构参数。方法:截取新鲜猪松质骨,经脱脂脱蛋白部分脱钙及去抗原处理后,制作成生物衍生骨支架;应用Micro-CT扫描,重建三维图并量化分析其结构参数,统计软件SPSS分析各参数间的相关性。结果:经Micro-CT扫描,得到二维CT图和三维重建图。各三维结构参数的值分别为:BV/TV(20.48±5.14)%;BS/BV(41.66±5.39)1/mm;Porosity(79.52±5.14)%;Tb.Th(0.10±0.01)mm;Tb.N(1.99±0.47)1/mm;Tb.Sp(0.32±0.05)mm;Tb.Pf(2.03±4.70)1/mm;SMI(1.28±0.35);DA(1.60±0.23);Conn.Dn(158.53±106.09)1/mm3。各参数间相关系数具有统计学意义的为:(1)Porosity与BS/BV、Tb.Th;(2)BV/TV与BS/BV、Tb.Th;(3)BS/BV与Conn.Dn、Porosity、BV/TV;(4)Tb.Th与Porosity、BV/TV、Conn.Dn;(5)DA与Conn.Dn;(6)Conn.Dn与BS/BV、Tb.Th、DA。结论:Micro-CT扫描、量化分析是评价支架材料结构参数的理想方法;也证明生物衍生骨支架符合骨组织工程对支架材料的三维结构要求,尤其在孔径大小、孔隙率、表面积体积比等三维结构参数,此外,也可为其他支架材料的制备在三维结构上的要求提供参考依据。