来源于线虫Caenorhabditis briggssae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因的合成及其功能分析

ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFAs)是一类被广泛研究和关注的脂肪酸,对人类及其他哺乳动物的正常发育和保持良好的健康状况极其重要,并且对于人类的多种疾病的预防和治疗亦有着明显的作用。在人和哺乳动物体内,ω-3PUFAs的含量与ω-6PUFAs(其代谢方式和功能与前者不同,通常其作用也相反)相比很低。而对于人体,无论ω-3PUFAs的过低还是ω-6PUFAs的过高都会带来极为不利的影响。所以人们一直在努力寻求提高人体中ω-3PUFAs含量的途径或者大量生产ω-3PUFAs的方法。本研究经过密码子优化后,用化学合成的方法获得了C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1-sFat1-EGFP,通过脂质体转染了CHO细胞系并对其进行抗性筛选获得稳定转染细胞株。对稳定转染sFat-1细胞株的RT-PCR分析及脂肪酸组成的GC-MS分析表明,sFat1基因完全能够在CHO细胞中表达和发挥其ω-3去饱和酶的作用,即促使ω-6系列不饱和脂肪酸转变为相应的ω-3系列不饱和脂肪酸(从十八碳到二十二碳)。ω-6不饱和脂肪酸总量从48.97%下降到35.29%,而ω-3不饱和脂肪酸总量则相应地从7.86%上升到24.02%。ω-6多不饱和脂肪酸和ω-3多不饱和脂肪酸的比值从正常细胞中的6.23下降到转染细胞中的1.47。这说明C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1的合成是成功的,试验所获得的结果为今后的进一步的研究或应用其大量生产ω-3PUFAs奠定了基础。

黄芪多糖对衰老HDF细胞染色体末端限制性片段长度的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)改善衰老人胚肺二倍体成纤维细胞(HDF细胞)衰老表型的机制。方法 HDF细胞连续传代培养,形成衰老细胞模型;采用MTT法检测细胞活力;免疫组化法检测β-半乳糖苷酶活性;DNA杂交法检测染色体末端限制性片段(TRF)长度。结果 APS提高衰老HDF细胞活力(P<0.05),降低了SA-β-gal表达(P<0.05);衰老HDF细胞TRF长度明显缩短(P<0.05),而APS可使TRF缩短速度降低(P<0.05)。结论 APS可以通过减慢TRF缩短速度,提高衰老HDF细胞活力,发挥抗衰老作用。

应用PCR-酶切连接法合成全长sFat1基因

人工合成基因在生命科学研究中有着重要的意义,因此基因合成是一项常用技术。长片段基因的合成比较困难,常常因为合成中碱基序列的错配、突变等原因而导致失败。研究者们所熟知的几种现行的方法仍然难以解决该问题。本研究在作者自身的工作经验中建立了一种新的基因合成方法,即PCR-酶切连接法。应用该方法成功地将化学合成的27个寡聚核苷酸片段(每个片段长60～68bp)拼接组装起来,获得了完整的总长为1226bp的基因sFat-1。整个过程仅采用3轮PCR(共7个反应)、2轮的酶切连接(3个反应),而且未曾出现任何偏离预期基因序列的差错。该方法步骤较少,技术简单,出错极少,是合成长基因序列很好的选择。

实施细节护理对提高急诊内科患者护理满意度的探讨

目的探讨实施细节护理对于提升急诊内科患者的护理满意度的效果。方法：选取自2013年2月份-2014年11月份在我院急诊内科收治的患者58例实施细节护理的资料进行回顾性分析。结果：细节护理可显著提高住院患者的治疗护理依从率，直接降低并发症、护理投诉及护理不良事件发生的风险。结论：在急诊内科实施细节护理干预能够有效的提升患者对于护理服务的满意度，因此非常值得临床推广使用。

急性上消化道出血患者的急救护理分析

目的探讨急性上消化道出血的护理措施体会。方法通过回顾性分析2012年1月-201 4年11月我科收治的35例上消化道出血患者,对其采取急救治疗,病情监测,心理护理,一般护理及健康指导。结果经过积极救治与护理45例患者均好转出院。结论积极有效的救治护理是抢救患者生命的关键措施之一,亦是提高患者生活质量的有效途径。

肉牛产业化需解决的几个关键问题

针对我国肉牛产业化水平低、经济效益差的现状 ,提出应着力解决以下几个关键性的问题 :在全国范围内执行全国统一的肉牛胴体分级 (评定 )标准 ,以生产符合国际牛肉贸易要求的高档优质牛肉 ,获取高额利润 ,并迅速促进国内牛肉市场的发展 ;通过冷配杂交改良及胚胎移植等技术继续大力实施肉牛改良计划 ,大幅度地提高屠宰牛的胴体重 ;深入开展与肉牛有关的经济性状进行分子遗传机理的研究以及营养和牛肉品质等方面的研究。

表达sFat-1基因慢病毒载体的构建及病毒生产

为了建立有效地用于转基因动物生产的慢病毒表达系统,以线虫C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)为目的基因构建了慢病毒表达载体,通过与慢病毒包装载体PLP1、PLP2和PLP/VSVG一起共转染293FT细胞系生产了慢病毒颗粒,并对其感染哺乳动物细胞NIH3T3细胞系的能力进行了检测。结果表明,该系统所生产的病毒滴度约为5.0×106TU/mL,这种病毒能够感染哺乳动物细胞,说明构建的慢病毒表达系统是有效的,应用其可以生产感染力良好的慢病毒颗粒,并高效地进行sFat-1基因转移。

不同日龄阉割对河田鸡胸肌氨基酸含量的影响

为了研究不同日龄阉割对河田鸡胸肌氨基酸含量的影响,试验选取40日龄河田鸡公鸡400羽,随机分为4组,每组4个重复,每个重复25羽,对照组公鸡不阉割,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组公鸡分别于40,60,80日龄实施手术阉割。对照组、试验组公鸡全程饲喂相同日粮,饲养至170日龄。分别于140,170日龄从每个重复随机取3羽测定胸肌蛋白质和氨基酸含量。结果表明:试验Ⅰ~Ⅲ组140,170日龄胸肌蛋白质、鲜味氨基酸含量与对照组差异不显著(P>0.05)。140日龄时,试验Ⅰ~Ⅲ组胸肌谷氨酸和组氨酸含量显著高于对照组(P<0.05),蛋氨酸、酪氨酸及脯氨酸含量显著低于对照组(P<0.05);试验Ⅲ组胸肌异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、精氨酸、总氨基酸、必需氨基酸含量均显著低于对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组(P<0.05)。170日龄时,试验Ⅰ~Ⅲ组胸肌胱氨酸含量显著高于对照组(P<0.05),丝氨酸、苯丙氨酸含量显著低于对照组(P<0.05);试验Ⅱ组胸肌天冬氨酸和缬氨酸含量显著高于对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅲ组(P<0.05)。说明阉割对河田鸡胸肌蛋白质、鲜味氨基酸含量无显著影响,对不同日龄河田鸡胸肌氨基酸含量的影响存在差异。

车前子多糖对衰老模型大鼠脑氧化-非酶糖基化影响的实验研究

目的探讨车前子多糖对D-半乳糖致衰大鼠氧化-非酶糖基化作用的影响,明确车前子抗衰老作用及机制。方法选用D-半乳糖衰老模型Wistar大鼠作研究对象,观察不同剂量车前子多糖对衰老模型大鼠总抗氧化能力(T-AOC)、抑制羟自由基能力(AHR)、脑单胺氧化酶B活性(MAO-B)、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSH)比值、羰基化蛋白、醛糖还原酶(AR)和晚期糖基化终末产物特异性受体(RAGE)mRNA表达水平的影响,并与衰老模型组和车前子水煎剂组进行比较。T-AOC、AHR、MAO-B活性、GSH/GSSH、羰基化蛋白含量采用分光光度法,ARmRNA和RAGE mRNA检测采用RT-PCR法。结果衰老模型组羰基化蛋白含量、MAO-B活性较青年组明显增加(P<0.01),而T-AOC、GSH/GSSG比值降低(P<0.01),ARmRNA表达明显低于青年组(P<0.01),而RAGEmRNA表达明显高于青年组(P<0.01)。车前子多糖和车前子水煎剂组各组T-AOC、GSH/GSSG、AHR,ARmRNA表达明显高于衰老模型组(P<0.05,P<0.01),而羰基化蛋白含量、MAO-B和RAGEmRNA表达显著低于衰老模型组(P<0.05,P<0.01)。以车前子多糖大剂量组效果最明显。结论车前子及其多糖可通过提高机体抗氧化能力和清除羰基能力而发挥抗脑老化作用,车前子多糖是其作用的重要成分。

Caspase-3参与白花败酱草皂苷诱导Hela细胞凋亡

目的研究白花败酱草总皂苷对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用及其机制。方法采用MTT法观察白花败酱草水提液和总皂苷对Hela细胞生长增殖的抑制作用;光镜和透射电镜观察总皂苷和水提物诱导Hela细胞发生凋亡的情况;观察总皂苷和水提物对Hela细胞半胱天冬酶(Caspase-3)活性的影响。结果白花败酱草总皂苷在体外剂量依赖性地抑制Hela细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,并通过对凋亡关键酶Caspase-3的激活,实现其促进Hela细胞凋亡的作用,达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。结论 Caspase-3参与白花败酱草皂苷诱导Hela细胞凋亡的作用。

山茱萸纳米制剂对AD模型大鼠BDNF/TrkB途径的调节作用

目的探讨山茱萸纳米制剂对D-半乳糖(gal)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力下降的影响及BDNF/TrkB信号转导途径的作用机制。方法雄性SD大鼠40只,体重350～400 g,随机分为青年组、模型组、山茱萸水提组和山茱萸纳米水提组,采用D-gal连续侧腹部注射8 w制作AD模型,采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,山茱萸水提组和山茱萸纳米水提组大鼠经胃灌服等剂量山茱萸连续30 d。检测血清SOD活性和MDA含量,RT-PCR法检测大鼠海马BDNF、TrKB、SYP表达,Western印迹法检测海马p-ERK蛋白水平。结果模型组、山茱萸水提组和山茱萸纳米水提组血清SOD活性显著低于青年组(P<0.01),而MDA显著高于青年组(P<0.01),且山茱萸水提组和山茱萸纳米水提组SOD活性和MDA含量均较模型组明显改善(P<0.01)。山茱萸各组均能上调模型大鼠脑BDNF、TrkB、SYP mRNA表达水平,并可提高P-ERK表达水平,其中纳米水提组的上调作用好于水提组。结论 BDNF的低表达可降低TrkB的表达,山茱萸纳米制剂可通过有效提高SOD活性、上调BDNF/TrkB/ERK的表达水平,提高SYP表达,而改善AD模型大鼠学习记忆能力,其中纳米制剂组的效果好于水提液组。

秦川牛GH、INS的测定及体尺、体重分析

随机选取14头秦川牛(其中1.5岁的公、母牛各4头,2.0岁的公、母牛各3头),按性别分为两组。采用放射免疫法测定血液中生长激素(GH)、胰岛素(INS)的水平,并对每头牛的体高、体斜长、胸围、胸深、尻宽、腰角宽等体尺指标及体重进行测量并分析,结果表明:在1.5时公、母秦川牛体内的生长激素和胰岛素差异不显著(P>0.05);而在2.0岁时公、母秦川牛体内的生长激素和胰岛素差异显著(P<0.05);并且随着年龄的增加,秦川牛体内的生长激素呈下降趋势而胰岛素则呈增加趋势,且生长激素和胰岛素呈差异不显著的负相关(P>0.05)。通过对体尺指数进行分析得出:较1.5岁而言,2.0岁秦川牛体躯发育程度更大,胸围更宽,尻部增幅明显,骨骼等体躯部分生长速度相对减慢,而肌肉等体量部分增长速度则相对加快,符合肉牛的生长发育规律以及秦川牛中、晚熟的特点。将实测体重与经济性能划分标准比较,发现秦川牛仍属于役肉兼用型品种,但经过近几年的选育,体重有了很大的增加。

山茱萸纳米水提液对衰老小鼠脑组织p66^(shc)表达的影响

目的探讨山茱萸制剂对自然衰老小鼠脑组织的磷酸化酪氨酸信号适配蛋白(66kilodalton isoform of shcgene products,p66shc)表达的影响。方法人工饲养自然衰老小鼠11～12月龄36只、青年鼠8只,分6组:青年对照组、衰老对照组和给药组,给药组又分为山茱萸纳米水提液和醇提液的大剂量、小剂量组;各组给药30d,然后断头取小鼠肝组织做超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)检测,RT-PCR法测定小鼠脑组织p66shc的表达。结果山茱萸纳米水提和醇提液给药组SOD活性与衰老对照组相比显著升高(P<0.01),而MDA含量和脑p66shc的表达显著降低(P<0.01);山茱萸纳米制剂水提液小剂量、大剂量组和醇提液比较上述作用均更显著(P<0.01)。结论山茱萸能够明显降低衰老小鼠脑p66shc活性亚基的表达,从而影响p66shc活性起到延缓衰老的作用。山茱萸纳米水提取液小剂量组的作用优于山茱萸纳米醇提液各组。

齐墩果酸对白血病HL-60细胞PI3K、Akt表达的影响

目的研究齐墩果酸(Oleanic acid,OA)对人白血病HL-60细胞PI3K、Akt表达的影响。方法 OA作用HL-60细胞后,采用透射电镜观察细胞形态,RT-PCR法检测HL-60细胞PI3K、Akt的mRNA表达。结果 OA作用于HL-60细胞后,细胞形态改变明显,出现凋亡小体,且PI3K、Akt的mRNA表达下调(P<0.01)。结论 OA可抑制HL-60细胞增殖,这可能与其下调HL-60细胞中PI3K、Akt的表达有关。

智能图象目标识别与跟踪

论述了采用高速数字信号处理器研制的智能图象跟踪系统．对系统的软、硬件进行了设计，并进行了室内外目标跟踪实验．结果表明该系统有以下特点：对锁定目标能自动识别；同时跟踪多个目标；被遮挡目标能记忆跟踪；目标丢失能自动搜索；跟踪过程中对目标变化自适应决策；目标充满视场时跟踪原质心点；能自动识别、捕获预定目标．

脂肪酸合成酶系多基因表达载体的构建

目的利用独立表达盒法构建脂肪酸去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体进一步研究多基因表达载体中各个基因表达的相互影响。方法利用基因工程的方法扩增2个脂肪酸去饱和酶基因和2个延长酶基因,然后连接到pcDNA3.1(-)哺乳动物表达载体上,之后转化、筛选、酶切鉴定。最后脂质体法瞬时转染HK293T细胞,提取RNA检测这四个基因的表达情况。结果成功构建了含脂肪去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体pcDNA3.1-EF,并在HK293T细胞中成功表达。结论四基因表达载体pcDNA3.1-EF在HK293T细胞中成功表达,单个基因在表达载体中的次序对基因的表达没有明显影响。

慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响

本研究旨在探讨慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响。构建慢病毒重组表达载体pcDNA-EF1-CAV1,并与pPACK包装质粒混合物共转染至293TN细胞后,收集病毒液感染HL-60细胞,使CAV1基因在细胞中稳定转染并高表达。采用Western blot方法评价转染后HL-60 CAV1蛋白表达情况。采用CCK-8法、流式细胞术分别检测转染前后HL-60细胞的增殖活性和凋亡情况。结果表明:PCR阳性克隆筛选及核苷酸测序结果证实CAV1基因正确插入表达载体pcDNA-EF1-GFP中。重组慢病毒颗粒Lv-CAV1成功转染HL-60细胞,转染率达90%。Western blot检测结果显示,转染后48 h HL-60细胞中CAV1蛋白表达明显增高。CCK-8检测结果显示转染后48 h HL-60细胞增殖活性降低(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示转染后HL-60细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论:CAV1过表达对HL-60细胞具有抑制细胞的增殖活性、促进细胞凋亡的作用。

血小板、血红蛋白、血浆纤维蛋白原及D二聚体联合检测对产后出血的预测价值

目的探讨血小板（PLT）、血红蛋白（Hb）、血浆纤维蛋白原（Fbg）及D二聚体（D-D）检测对产后出血的预测价值。方法选取2013年1月-2014年8月在我院门诊按期产检并在本院分娩的产妇,产前行PLT、Hb、Fbg及DD检测并观察产后出血情况。结果正常产妇组PLT和Fbg均高于产后出血组和严重出血组,而D-D低于产后出血组和严重出血组,差异有统计学意义（P〈0.05）;产妇产前（孕33～34周）Fbg水平与产后出血量之间呈负相关（r=-0.463,P〈0.05）,产前（孕33～34周）D-D水平与产后出血量之间呈正相关（r=0.482,P〈0.05）,而PLT与产后出血量之间无相关性（P〉0.05）。结论产前（孕33～34周）检测Fbg及D-D对孕妇产后出血有一定的预测价值,而检测PLT和Hb预测价值不明确。

子宫内膜样腺癌中KLK7、E-Cad的表达及其与病情的相关性

目的探讨人角化层糜蛋白酶(KLK7)和E-钙黏蛋白(E-Cad)在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与病情的相关性。方法采用Western印迹检测10例增生期子宫内膜、10例不典型增生子宫内膜、30例子宫内膜样腺癌标本中KLK7、E-Cad蛋白的表达,分析其与各临床病理指标的相关性。结果 (1)KLK7、E-Cad在子宫内膜样腺癌中的蛋白表达与年龄无关;随着临床分期增高、组织分化降低、深肌层浸润、患者手术时有淋巴结转移,KLK7蛋白的阳性表达率呈上升趋势(P<0.01),而E-Cad的阳性表达率呈下降趋势(P<0.01,P<0.05)。(2)在子宫内膜样腺癌中KLK7蛋白和E-Cad表达呈负相关(P<0.05)。结论 KLK7蛋白在子宫内膜样腺癌中呈高表达,E-Cad在子宫内膜样腺癌中表达下降,两者可能与子宫内膜癌的病情进展及侵袭转移相关;KLK7蛋白和E-Cad在子宫内膜样腺癌组织中表达呈负相关,在子宫内膜癌侵袭转移中可能有协同效应。