创伤性脑损伤大鼠海马蛋白质差异表达研究

目的应用蛋白质组学方法分析研究大鼠创伤性脑损伤后海马组织差异表达蛋白质．为筛选脑损伤早期诊断的生物学标志物提供理论依据。方法采用双向凝胶电泳分离总蛋白．硝酸银染色，PDQuest7．0图像分析软件分析获得的差异蛋白质点，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDITOF—MS）对检测到的差异蛋白质点进行鉴定，获得肽质量指纹图谱，查阅蛋白质数据库得到所需蛋白质相关信息，分析大鼠创伤性脑损伤后4h、8h、12h、24h和48h海马组织中差异表达蛋白质．每组样品电泳重复3次，每帧图谱检测到1800余个蛋白质点；选择2个背景清晰、重复性及分辨力良好、在各组表达差异明显并呈现时序性变化的蛋白质点进行质谱分析。结果经双向凝胶电泳分离共获得18帧图．每组3帧，其中对照组及损伤后12h组蛋白质图谱显示分离效果良好，蛋白质点清晰，点染色程度较深，数目较多，横纹和纵纹较少，图谱平均匹配率〉80％。采用PDQuest7．0图像分析软件对蛋白质图谱进行定量分析证实，相对分子质量为58．00×10^3的差异蛋白质为葡萄糖调节蛋白（葡萄糖调节蛋白58），在损伤后4h、8h和12h表达水平上调；相对分子质量为28．40×10^3的差异蛋白质为蛋白酶体α亚单位3型，在损伤后4h、8h、12h、24h和48h表达水平均上调。结论葡萄糖调节蛋白58和蛋白酶体α亚单位3型可能与创伤性脑损伤的发生、发展密切相关，此为探讨脑损伤的发病机制提供了重要线索。

闭合性颅脑损伤早期大鼠海马差异蛋白质研究

【目的】研究大鼠闭合性颅脑损伤后24h海马中蛋白质表达的变化及其特点。【方法】选成年雄性sD大鼠随机分为手术对照组及损伤后24h组，复制Marmarou落体打击闭合性颅脑损伤大鼠模型，应用双向电泳技术分析大鼠脑损伤后24h海马中蛋白质表达的改变。【结果】双向电泳分离结果显示，采用pH3～10胶条，与手术对照组比较，损伤后24h有7个蛋白质点有表达量上的差异，并有2个蛋白质点消失，新出现1个蛋白质点；采用DH4～7胶条，与手术对照组比较，损伤后24h有7个蛋白质点有表达量上的差异，并有1个蛋白质点消失，新出现3个蛋白质点。【结论】大鼠闭合性颅脑损伤早期（24h）可引起海马蛋白质表达发生变化。

手术治疗59例三踝骨折疗效分析

踝关节是人体负重量最大的屈戌关节，其活动灵活、解剖结构复杂。它由多个骨骼、关节、韧带组成，发生骨折多属于关节内骨折，并伴有脱位、韧带损伤。三踝骨折（Cotton骨折）是踝部骨折的严重型，由内踝、外踝、后踝（胫骨后唇）骨折组成，同时伴有韧带和关节的破坏，手法复位很难恢复解剖结构，同时断裂韧带需手术修复，体现了手术治疗三踝骨折的重要性。

凝血酶敏感蛋白-1在液压冲击损伤体外培养大鼠海马神经细胞中的表达及意义

目的探讨凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)在液压冲击损伤大鼠体外培养海马神经细胞中的表达。方法建立体外原代培养神经细胞液压冲击损伤模型,采用甲苯胺蓝染色观察神经细胞损伤程度,免疫细胞化学染色和Western blot技术检测神经细胞中TSP-1的表达水平。结果液压冲击后,甲苯胺蓝染色显示,损伤组部分神经细胞胞体浓缩,细胞核固缩,呈深蓝色,多为坏死型损伤细胞。免疫细胞化学染色显示,对照组神经细胞内有一定量的TSP-1表达,损伤组神经细胞内TSP-1表达增多,阳性细胞数目增多。Western blot结果显示,对照组和损伤组光密度值分别为0.937±0.194与2.318±0.495,损伤组神经细胞TSP-1蛋白表达显著强于对照组(P<0.01)。结论体外培养大鼠海马神经细胞中TSP-1高表达可能在液压冲击损伤过程中起重要作用。

闭合性脑损伤后血清和海马的蛋白质表达

目的研究大鼠脑损伤后血清和海马中蛋白质表达的差异。方法用雄性SD大鼠制造脑损伤模型,应用弱阳离子交换(WCX2)芯片和铜离子结合(IMAC-Cu)芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术,分析大鼠闭合性脑损伤后不同时间血清和海马中蛋白质表达谱的变化。结果 WCX2芯片在血清和海马样本中分别捕获436个和364个蛋白质峰,IMAC-Cu芯片在血清和海马样本中分别捕获229个和345个蛋白质峰。WCX2芯片在血清和海马中都能捕获的蛋白质峰为10个,IMAC-Cu芯片在血清和海马中都能捕获的蛋白质峰为13个。结论闭合性脑损伤可引起血清和海马蛋白质表达谱发生变化,且二者存在显著差异,同种芯片在血清和海马中检测到的差异蛋白质,可能是脑损伤生物标志蛋白。

临床医学专业学位硕士研究生培养模式的探索与实践

在临床医学专业学位硕士研究生培养过程中,我们从构筑专业理论基础、强化临床实践能力培养、科研能力培养和完善管理体系等方面入手,加强教学质量管控,注重培养实践技能,促进了我院专业学位研究生教育又好又快发展。

体外培养大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤的研究

目的:研究大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤后形态学及蛋白质组学表达变化。方法:建立体外培养星形胶质细胞液压冲击损伤模型。原代培养SD大鼠脑皮质星形胶质细胞,随机分为损伤组与对照组,对照组给予(0.2±0.01)MPa液压冲击损伤,损伤后不同时间点观察细胞形态学变化;双向凝胶电泳技术分析液压冲击损伤后蛋白质组学表达变化。结果:星形胶质细胞在液压冲击损伤后发生了显著的形态学改变,损伤后2h星形胶质细胞出现了细胞水肿、细胞皱缩、细胞连接断开和坏死,损伤后24h、48h细胞胞体肥大、突起增粗明显,部分区域细胞反应性增生明显。液压冲击损伤后,星形胶质细胞蛋白质表达谱发生了显著改变,损伤后有13个蛋白点表达发生显著改变,其中5种蛋白得到质谱鉴定,分别是肌动蛋白结合蛋白、破解蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、NADH脱氢酶10亚基和膜联蛋白1。结论:液压冲击损伤能够引起星形胶质细胞发生显著的形态学改变和蛋白质谱表达改变,损伤后表达改变的蛋白质可能与星形胶质细胞的损伤后应激反应相关。

创伤性膈肌破裂的诊断与治疗

目的探讨创伤性膈肌破裂(TDR)的诊断与治疗方法,以提高其救治效果。方法对2000年1月至2012年1月武警后勤学院附属医院收治的47例TDR患者的临床资料进行分析,探讨其死亡相关危险因素及TDR院内诊断治疗方法,建立合理有效的急救流程。结果 47例TDR患者中,左侧29例(62.0%),右侧17例(36.0%),双侧1例(2.0%);交通事故是本组病例第1位发病原因;早期诊断(24 h内确诊)41例(87.2%),延迟诊断(超过24 h确诊)6例(12.8%);术前确诊32例(68.1%),术中确诊15例(31.9%);经腹切口修补4例(8.5%),经胸切口修补43例(91.5%);死亡7例(14.9%),存活40例(85.1%)。死亡组患者年龄与存活组比较差异无统计学意义(P>0.05);死亡组休克指数及创伤严重程度评分(ISS)均高于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论机动车交通事故是当前TDR的首要发病原因;TDR病死率与入院ISS评分及休克程度有一定关系。

救援医学教育现状和改革发展初探

d救援医学是研究应对各种突发公共事件医学救援的规律及医学救援任务的组织、管理、实施等问题的科学，是“急诊医学”和“灾害医学”两者结合而成，其目的是“挽救生命、减轻伤残”，力求通过高效的医学救援行动，将各种危急情况对人类健康的损害程度控制在最低水平。急诊医学是研究与处理急、危重患者及伤员急救、途中监护治疗、

高原脑水肿大鼠脑组织水通道蛋白-4表达的变化及意义

目的探讨高原脑水肿大鼠脑组织水通道蛋白-4(AQP4)表达的变化及意义。方法 16只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为缺氧水肿组和对照组,每组8只,制作大鼠高原缺氧损伤模型。检测2组大鼠脑组织水含量,并采用实时定量聚合酶链反应、免疫组织化学法、Western blot测定大鼠脑组织高原缺氧损伤24 h后AQP4 mRNA和蛋白表达变化。结果与对照组比较,缺氧水肿组大鼠脑组织水含量增加,水肿明显,AQP4 mRNA和蛋白表达量上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AQP4在高原缺氧脑水肿的形成过程中发挥了重要作用,提示对AQP4的干预可减轻高原脑水肿损伤。

血小板活化因子及相关因子在机械性颅脑损伤中的表达和意义

【目的】研究机械性颅脑损伤后PAFR、COX-2和GluR2之间的相互关系以及与脑损伤时序性变化的相关性。【方法】采用SD大鼠复制Marmarou’s闭合性颅脑损伤模型,于损伤后4、8、12、24和48 h用RT-PCR检测大鼠大脑海马中PAFR、COX-2和GluR2的基因表达情况。【结果】脑损伤后,PAFR和GluR2表达减弱,12 h达最低,损伤后各组与对照组相比差别均有显著性(P<0.01);COX-2表达增强,8 h达最高值,损伤后4、8、12和24 h组与对照组相比差别有显著性(P<0.01)。【结论】PAFR、COX-2和GluR2三者在闭合性颅脑损伤中表达的时序性变化特点基本一致,关系密切,共同参与脑损伤病理生理过程。

外固定支架复合交腿皮瓣修复胫骨粉碎性骨折合并皮肤坏死

目的:总结外固定支架复合交腿带蒂皮瓣治疗胫骨粉碎性骨折合并皮肤坏死的临床效果。方法:2006年6月至2011年6月,收治胫骨粉碎性骨折合并皮肤坏死28例,男20例,女8例,年龄20～56岁。其中车祸伤18例,压砸伤8例,坠落伤2例,合并骨折区周围皮肤坏死范围6 cm×3 cm～18 cm×8 cm。以外固定支架或结合少量内固定恢复胫骨稳定性,均采用对侧小腿交腿带蒂皮瓣对坏死创面在彻底清创下进行修复,供区创面采用游离植皮或直接缝合。结果:术后1例皮瓣创缘部分坏死继发感染,经换药处理后创缘Ⅱ期愈合,其余患者皮瓣均成活,供区植皮成活,创面愈合良好。术后患者均获随访,随访时间3个月皮瓣外形满意,质地优良。1例胫骨中下段粉碎性骨折延迟愈合,余患者胫骨骨折于术后3～4个月临床愈合,患肢功能基本恢复,能够部分负重行功能锻炼。结论:外固定支架复合交腿皮瓣是治疗胫骨粉碎性骨折合并皮肤坏死的安全有效方法。

低压低氧环境对大鼠心肌肌球蛋白重链表达的影响

【目的】研究模拟高原低压低氧环境对小鼠心肌肌球蛋白重链α、β亚型表达的影响。【方法】取清洁级SD大鼠20只,随机分成2组:常氧组和模拟高原6000m低压低氧组。记录各组大鼠心脏指数。制作各组心肌组织切片,常规HE染色观察心肌细胞形态改变。免疫荧光法检测各组心肌肌球蛋白重链α-MHC和β-MHC两种亚型蛋白的表达变化。【结果】常氧组和低压低氧组大鼠心脏指数差异不具有统计学意义(P>0.05)。HE染色可见低压低氧组大鼠心肌细胞水肿,心肌间质内小血管及毛细血管明显扩张充血。低压低氧组大鼠心肌中MHC蛋白质表达水平异常改变,即α-MHC蛋白表达量增高而α-MHC蛋白表达量下降。【结论】模拟高原6000m高原低压低氧可致大鼠心肌细胞形态异常改变同时可刺激心肌MHC亚型表达出现"由快到慢"的趋势,提示MHC表达异常参与了心脏重塑,可能是高原低压低氧致心力衰竭发生、发展的基础。

水通道蛋白4在高原脑水肿大鼠脑组织中的表达变化及意义

【目的】探讨水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)与高原脑水肿之间的关系。【方法】制作大鼠高原缺氧损伤模型,测脑组织含水量,采用RT-PCR、免疫组织化学、Western blotting技术测定脑组织缺氧损伤24 h后AQP4 mRNA和蛋白表达变化。【结果】缺氧损伤后,脑组织含水量增加,水肿明显;HE染色显示部分神经元肿胀或浓缩;缺氧24 h后,AQP4 mRNA和蛋白表达量均明显增加(P<0.05)。【结论】AQP4在高原缺氧脑水肿的形成过程中可能发挥了重要作用。

先天性甲状腺功能减退症大脑蛋白质双向电泳分析

目的:比较新生正常大鼠和先天性甲状腺功能减退症(CH)大鼠大脑蛋白质表达的差异,为探讨CH致脑发育障碍发病机制提供线索。方法:制作CH仔鼠动物模型,于出生时称体质量后处死仔鼠,取大脑皮质,应用双向电泳(2-DE)技术分析正常仔鼠与CH仔鼠大脑蛋白质表达的差异情况。放射免疫分析法检测2组大鼠血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平。结果:CH组仔鼠体质量、FT3、FT4水平均低于正常组仔鼠。建立了稳定的正常仔鼠与CH仔鼠大脑皮质2-DE图谱,发现2组共有8个蛋白质点存在差异。与正常仔鼠相比,CH仔鼠大脑有3个蛋白质点量上调,2个蛋白质点量下调,有3个蛋白质点仅出现于CH仔鼠组。结论:CH仔鼠大脑差异蛋白表达可能与CH致脑发育障碍的发生、发展密切相关。

新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡

目的研究新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法检测LGN抑制人肺腺癌细胞株A549增殖的情况,利用Giemsa染色、Hoechst染色、流式细胞仪、DNA ladder检测LGN诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的情况,利用反转录-聚合酶链反应检测凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、原癌基因bcl-2、促凋亡基因bax、p53等。结果 LGN对A549细胞有良好的抑制活性,半数抑制率明显优于阳性对照药依托泊苷,差异有统计学意义(P<0.05)。LGN可诱导A549细胞产生显著凋亡,并可增加A549细胞中p53、caspase-3及bax的mRNA表达,同时降低bcl-2的mRNA表达,并有良好的量效关系。结论鬼臼毒素新衍生物LGN可以诱导A549细胞发生凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因表达有关。

足背三叶草状皮瓣吻合移植修复相邻指皮肤缺损的疗效

目的探讨足背三叶草状皮瓣修复相邻指皮肤缺损的临床效果。方法对15例相邻指皮肤缺损患者应用足背三叶草状皮瓣修复治疗。结果患者均获得随访,时间6~12个月。13例皮肤缺损修复后愈合良好;2例皮瓣边缘部分坏死,经生肌膏换药3周后皮缘愈合。结论足背三叶草状皮瓣修复相邻指皮肤缺损具有较好的效果。

卡培他滨促进胃癌细胞凋亡的实验研究

【目的】研究卡培他滨促进胃癌细胞凋亡的分子机制。【方法】卡培他滨处理人胃癌细胞BGC-823;用透射电镜和琼脂糖凝胶电泳(DNA Ladder)检测细胞凋亡;RT-PCR方法检测caspase-3 mRNA表达;Western Blotting检测Caspase-3蛋白表达。【结果】不同剂量的卡培他滨均可促进胃癌细胞BGC-823凋亡;中、高浓度卡培他滨处理的胃癌细胞与对照组比较,caspase-3 mRNA及蛋白水平均表达上调(P<0.05)。【结论】卡培他滨可促进胃癌细胞BGC-823凋亡,机制可能是增加caspase-3 mRNA及蛋白表达,增强Caspases级联反应,从而促进凋亡的发生。