四物汤促进造血功能成分的初步研究

目的 :初步探讨四物汤补血作用的物质基础。方法 :四物汤部位分离采用醇沉和萃取法。用辐射小鼠血虚证模型考察活性。结果 :首先将四物汤分离为A ,B ,C 3个部位 ,活性研究表明部位B和部位C具有提高模型小鼠外周血白细胞数的作用。进而将部位B和部位C分别分离为部位B1,B2 ,B3和部位C1,C2 ,C3,活性研究表明部位C2 ,C3和B3具有提高模型小鼠外周血白细胞数的作用。进一步考察部位C1,C2 ,C3,B和芍药苷对模型小鼠骨髓造血祖细胞的影响 ,结果表明部位C2 ,C3,B和芍药苷具有促进模型小鼠骨髓造血祖细胞增殖的作用。结论 :四物汤部位C2 ,C3,B和芍药苷与其促进造血功能的作用有关。

用色谱和ESI-MS方法考察四物汤提取部位的化学成分

目的 :为了探讨四物汤补血作用的物质基础 ,制备 3种不同极性的四物汤提取部位 (C1,C2 ,C3) ,对这3种部位的化学成分特点进行考察。方法 :综合运用高效薄层色谱 (HPTLC)、高效液相色谱 (HPLC)、电喷雾离子化质谱 (ESI MS) 3种方法对四物汤的C1,C2 ,C3部位及四味单药相应部位进行分析和比较。结果 :四物汤部位C1中含有种类丰富的成分 ,包括阿魏酸、芍药苷等 ,并且应含有藁本内酯 ,而糖类物质极少 ;C2的成分以芍药苷、单糖、二糖为主 ;C3的成分以单糖和二糖为主。结论 :综合运用色谱和直接输注ESI MS ,可以获得关于方剂提取部位组成的丰富信息。不同方法的结果可以相互比较 ,相互印证 ,使所获得的信息比单一方法更全面更确切。

四物汤中糖类物质对辐射小鼠造血功能的影响

目的初步探讨四物汤中糖类物质与四物汤补血作用的关系。方法四物汤部位分离采用醇沉法、萃取法和大孔吸附树脂法。用辐射小鼠血虚证模型考察活性。结果将前期发现的具有提高辐射血虚模型小鼠外周血白细胞数和促进骨髓造血祖细胞增殖作用的四物汤部位C 2(正丁醇部位),用吸附树脂法分离为C 2-1(糖部分)和C 2-2(非糖部分)两个部位。活性研究表明部位C 2-1具有提高模型小鼠外周血白细胞数和促进骨髓造血祖细胞增殖的作用,部位C 2-2仅显示促进骨髓造血祖细胞增殖的作用。按照部位C 2中糖类的组成和质量分数,将D-果糖、D-葡萄糖和蔗糖混合,活性研究表明混合糖具有促进模型小鼠骨髓造血祖细胞增殖的作用,但对外周血白细胞的作用不显著。结论单、双糖类物质对四物汤促进辐射小鼠造血功能的作用有一定贡献。

液相色谱/蒸发光散射测定四物汤煎液中单糖和双糖的含量

目的 建立液相色谱 /蒸发光散射 (HPL C- EL SD)测定四物汤煎液中 D-果糖、D-葡萄糖和蔗糖含量的方法。方法 对四物汤煎液进行稀释、醇沉等处理后采用 HPL C- EL SD法分析。结果 1m L 四物汤煎液中含 D-果糖(33.4± 1.5 ) mg,D-葡萄糖 (2 4 .2± 0 .9) m g,蔗糖 (112 .7± 6 .1) mg;D-果糖在 0 .15～ 3.75 m g/ m L,D-葡萄糖和蔗糖在 0 .15～ 5 m g/ m L ,具有良好的线性关系 ;回收率为 D-果糖 12 8.5 % ,D -葡萄糖 114 .7% ,蔗糖 12 4 .7% ;日内RSD为 D-果糖 3.0 % ,D-葡萄糖 3.2 % ,蔗糖 4 .4 %。结论 四物汤中含有丰富的单、双糖 ;HPL C- EL SD可用于四物汤中单、双糖类物质的分析。

用AMD技术和TLC ESI-MS离线联用技术分析四物汤中的糖类成分

目的:对具有补血活性的四物汤提取物C薄层色谱(TLC)中的糖类斑点进行定性分析。方法:用自动多次展开(AMD)方法获得了四物汤提取物C的TLC图谱,用TLC与电喷雾离子化质谱(ESI-MS)离线联用技术对其中4个主要斑点进行分析,并且用AMD技术对其中的单糖进行了分析。结果:4个斑点的构成物质分别主要为单糖、二糖、三糖、四糖,其中单糖主要由葡萄糖和果糖组成。结论:TLC ESI-MS离线联用方法能快速简便地对中药TLC图谱中糖类斑点进行定性。AMD单糖分析方法可实现在普通10 cm硅胶板上8种常见单糖的良好分离,并且展开过程自动化。AMD和TLC ESI-MS离线联用技术对糖类成分分析具有良好的应用价值。

直接输注电喷雾电离四极杆飞行时间质谱在十六种中药来源化合物定性分析中的应用(英文)

采用直接输注电喷雾电离质谱对十六种中药来源的化合物进行了分析。观察了它们的电喷雾电离质谱和串联质谱特征 ,以了解不同结构化合物的电离能力和裂解特点。观察表明 :为使样品成分尽可能多地被检测 ,必须同时进行正负两种模式的分析。化合物结构中羰基的存在似有利于化合物在正离子模式下形成准分子离子或其它分子加和离子。当采样锥电压为 3 0 V时 ,大多数化合物能形成准分子离子或其它分子加和离子。但改变采样锥电压似不能完全避免源内裂解。建议分析时同时考察不同采样锥电压 (如 1 0 V、3 0 V和 5 0 V)。串联质谱分析被证明是获得进一步结构信息的有效手段 ,因为对于所有被观察的准分子离子和其它分子加和离子 ,均能在串联质谱分析中检测到碎片离子。本研究在四物汤的研究中已经成功地运用了该方法。

高分辨电喷雾离子化质谱数据批量自动化预鉴别软件的研制

为了克服高分辨电喷雾离子化质谱数据预鉴别工作量大、繁琐的技术瓶颈,采用Microsoft Excel插件方式,研制了用于高分辨电喷雾离子化质谱数据批量自动化预鉴别的软件。此软件可根据用户指定的Ex-cel文件中数据库数据和待鉴别数据的位置,最小质荷比偏差等信息,自动鉴别并生成鉴别结果报告。实际测试表明,该软件与人工鉴别结果完全相同,既节省了人力,又能够极大地提高工作效率,并且操作简便,容错性好,具有实用性。

用MassLynx 4.1软件提取液相色谱质谱联用部分重叠色谱峰的质谱图

目的两个化合物A和X采用液相色谱质谱联用法实现部分分离,并形成部分重叠峰。尝试在不改变分离条件的情况下获得化合物X的"较纯的"质谱图。方法运用MassLynx 4.1软件的"谱图合并(Combine Spectra process)"功能,扣除化合物A的信号。结果与预期相符,所获得的质谱图明晰,提示X可能是A的脱氢类似物,后经验证,与A脱氢类似物纯品的质谱图一致。结论 Masslynx 4.1软件的"谱图合并"功能可以帮助分析者更容易地获得清晰的质谱信息,并有可能节省传统方法中优化色谱条件所花费的时间,是液相色谱质谱联用分析的有力工具。

药物高通量筛选分析技术

高通量筛选分析技术在药物研究中已有大量应用 ,除化合物的药理活性 ,还涉及药代动力学性质、不良反应等的检测分析。本文分类列述了一些近年在药物研究中应用的高通量筛选分析方法 ,对大多数方法的原理进行了简述。认为自动化技术、“同质”技术和报告基因技术等对实现高通量筛选分析具有重要意义。另外 ,对高通量筛选算法研究也进行了介绍。

白酒中乙酯类成分的比较

Quantitative analysis of Ethyl ester of acetic acid(A), butanoic acid(B), lactic acid(L), Pentanoic acid(p) and hexanoic acid(H) in three Chinese Spirits(Bai, Lu, Er) was performed with GC-MS. The result shows that There are more A, H, B, P in Bat, more A, L, H in Lu and little ester in Er.

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响

目的 :观察四物汤对血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响 ,为阐明四物汤补血作用的分子机理提供理论和实验依据。方法 :采用 3.5Gy60Coγ射线全身 1次性照射 ,制备小鼠血虚证模型。利用双向电泳、图像分析、胶内酶切、质谱鉴定等蛋白质组学技术 ,结合生物信息学 ,分离、分析、鉴定蛋白质。结果 :四物汤可以逆转放射线致血虚证小鼠骨髓 10个上调和 5个下调的蛋白质。其中 8个蛋白质可能分别是淋巴细胞特异性蛋白质 1、蛋白酶体2 6SATP酶亚组分 4、造血细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶、H ras、3 磷酸甘油醛脱氢酶、生长因子受体结合蛋白 14及Lgals12。结论 :四物汤能调节骨髓蛋白质表达 ,并可能由此促进造血细胞的生长和分化 ,发挥补血作用。

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察四物汤对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo,G-CSF基因表达的影响,为阐明四物汤补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy60Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;检测外周血象;骨髓集落培养观察并计数CFU-GM,BFU-E,CFU-E,CFUmix;RTPCR检测骨髓Epo和G-CSF基因表达。结果:四物汤显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFUGM,BFUE,CFUE,CFUmix数量,上调骨髓Epo和GCSF基因表达。结论:四物汤促进骨髓细胞Epo和G-CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。

银杏内酯B通过激活孕烷X受体诱导CYP3A4的表达

目的研究银杏内酯B(ginkgolide B)对CYP3A4的诱导作用,进一步验证是否通过激活孕烷X受体实现对CYP3A4 mRNA和蛋白水平的诱导表达。方法用不同浓度银杏内酯B处理LS174T细胞,通过Q-PCR法检测CYP3A4 mRNA表达变化,进一步利用本实验室构建的PXRCYP3A4稳定转染HepG2工程细胞株,结合荧光素酶报告基因技术,显示检测银杏内酯B对PXR的转录激活活性的影响。蛋白质免疫印迹法检测CYP3A4蛋白水平表达的变化;利用siRNA技术敲低PXR的mRNA表达,检测在PXR低表达的条件下银杏内酯B对CYP3A4 mRNA和蛋白水平表达影响。结果银杏内酯B可以浓度依赖性的使CYP3A4基因及蛋白表达水平上调,报告基因结果显示,银杏内酯B能够浓度依赖性的增强PXR的转录激活活性,在PXR低表达的条件下,银杏内酯B对CYP3A4诱导作用明显低于正常表达组PXR。结论以上表明银杏内酯B通过激活PXR受体,促进其转录激活活性进而诱导CYP3A4表达上调,同时对PXR自身的表达无明显影响。

麦冬皂苷D通过降低自噬抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大

目的麦冬皂苷D是否抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所引起的心肌肥大及其可能机制。方法体外培养大鼠心肌细胞系H9c2,MTS法检测麦冬皂苷D的细胞毒性;其次将1μmol·L^(-1)的AngⅡ作用于H9c2细胞24h后引起心肌肥大,用不同浓度的麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OPD)共处理,BCA法检测总蛋白含量;实时荧光定量PCR技术检测标志性肥大基因BNP和β-MHC的mRNA表达;Western blot法检测自噬蛋白LC3B的表达,同时运用高内涵筛选技术检测心肌细胞自噬蛋白LC3B的表达以及线粒体膜电位的改变。结果细胞活力的检测结果显示,与对照组相比,AngⅡ不同浓度作用24 h后,对细胞活力无明显影响,而麦冬皂苷D的高浓度(50~100μmol·L^(-1))可明显抑制细胞的活性;AngⅡ作用于心肌细胞24h后,可引起心肌肥大,导致特异性肥大基因mRNA表达上调,并且明显增加细胞总蛋白含量;同时使心肌细胞自噬增强;线粒体膜电位降低,而麦冬皂苷D共处理能明显逆转上述指标。结论麦冬皂苷D对AngⅡ所诱导的心肌肥大有抑制作用。

人参皂苷Re对H9c2心肌细胞CYP450酶的影响

目的观察人参皂苷Re对H9c2心肌细胞色素P450酶的影响,旨在发现人参皂苷Re对心肌细胞作用的分子机制。方法实验分对照组、人参皂苷Re各剂量组(1、5、10、50、100μmol·L^(-1))处理组,人参皂苷Re作用6、24、36、48及60 h后提取RNA或蛋白进行测定。利用实时定量PCR法检测H9c2心肌细胞CYP2C11、CYP2J3、CYP4A1、CYP4A3、CYP4F4及ANP mRNA的表达;采用Western blot法检测心肌细胞CYP4A1和CYP2J3蛋白的表达。结果人参皂苷Re明显上调心肌细胞CYP2C11、CYP2J3 mRNA的表达至正常对照的1.6、1.8倍,明显下调CYP4A1、CYP4A3及CYP4F4 mRNA的表达至正常对照的0.4、0.15、0.3倍。人参皂苷Re明显上调ANP基因表达水平至正常对照的3.2倍。随着药物浓度的增加,人参皂苷Re对CYP4A1蛋白表达产生明显的下调作用,而对CYP2J3蛋白产生明显的上调作用。结论人参皂苷Re可影响心肌细胞的CYP450酶和ANP基因的表达。

复方丹参滴丸对大鼠肝细胞色素P450酶的影响

目的观察复方丹参滴丸及其单味药对大鼠肝细胞色素P450酶(CYP)主要亚型的影响。方法 SD大鼠分别ig给予复方丹参滴丸0.3258 g.kg-1,丹参0.27 g.kg-1,三七0.0528 g.kg-1和冰片0.003 g.kg-1,每天1次,连续28 d,取大鼠肝微粒体,与CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13,CYP2D2和CYP3A1特异性底物探针共孵育,用高效液相色谱-质谱联用仪(HPLC-MS/MS)测定底物的代谢产物,分析CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13,CYP2D2和CYP3A1酶活性,同时用PCR方法检测cyp1a2,cyp2b1/2,cyp2c11,cyp2e1和cyp3a1 mRNA表达的变化。结果与正常对照组相比,苯巴比妥(阳性对照)对CYP2D2和CYP3A1活性有明显抑制作用,对CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12和CYP2C13有明显诱导作用(P<0.05,P<0.01);复方丹参滴丸对CYP1A2和CYP2B6活性有明显抑制作用,对CYP2D2有诱导作用(P<0.05);丹参对CYP1A2和CYP2B6活性有明显抑制作用(P<0.05);三七对CYP1A2,CYP2B6,CYP2C13和CYP2D2活性有明显抑制作用(P<0.05);冰片明显抑制CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13和CYP2D2活性(P<0.01),且抑制强度高于复方丹参滴丸。与正常对照组相比,苯巴比妥对cyp1a2和cyp2b1/2 mRNA水平有明显诱导作用(P<0.05);复方丹参滴丸、丹参和三七对cyp1a2,cyp2b1/2,cyp2c11,cyp2e1和cyp3a1 mRNA水平无明显影响;冰片对cyp1a2,cyp2b1/2和cyp2c11 mRNA水平有明显抑制作用(P<0.05,P<0.01)。结论复方丹参滴丸中各单味药对CYP酶的影响强于全方对CYP酶的影响,其中以冰片对药物代谢酶的影响最为显著。

基于UPLC-Q-TOF/MS研究参附注射液的物质基础

目的对参附注射液中的人参皂苷和生物碱成分进行定性,并且对参附注射液中主要成分在大鼠体内的药物动力学过程进行研究。方法运用LC-MS对参附注射液中的成分进行定性,并测定大鼠血清中多种人参皂苷的浓度,计算其药动学参数。结果参附注射液中定性出16种人参皂苷成分和10种生物碱成分。人参皂苷Rd、Rg1、Rb1、Ro、Rc、Rb2的T12α分别为0.32±0.25、0.11±0.04、0.30±0.24、0.11±0.02、0.24±0.19、0.23±0.12 h,人参皂苷Rd、Rb1、Rc、Rb2的T12β分别10.25±0.39、21.31±3.64、13.95±2.56、15.06±1.54 h。结论该方法简便、灵敏、特异,适用于血清中6种人参皂苷成分的药物动力学研究;人参皂苷Rg1、Ro在大鼠体内的分布消除速度较快,Rd、Rb1、Rc、Rb2分布消除较慢。参附注射液体外、体内成分的分析为组分配伍研究建立了可靠的方法。

SPE-HPLC制备色谱法从当归挥发油中分离纯化Z-藁本内酯

采用固相萃取(SPE)预处理,HPLC制备色谱法从当归挥发油中分离制备Z-藁本内酯。二次色谱纯化所得Z-藁本内酯的纯度达99.6%。