水稻稻瘟病抗病基因Pi63顺式作用元件的载体构建

水稻稻瘟病抗性基因Pi63具有良好的田间抗性,且抗性与其表达量成正相关,但Pi63表达的调控机制尚未得到研究。为了研究Pi63的抗性机理,通过对Pi63启动子区域顺式作用元件的生物信息学分析,分段构建了4个含有不同顺式作用元件的缺失体,将上述缺失体转入植物双元表达载体pCAMBIA1391Z中。菌落PCR以及质粒DNA酶切鉴定后,经测序进一步确认。结果表明:以上4个缺失体载体构建成功。本研究为进一步研究启动子中不同顺式作用元件对于Pi63基因稻瘟病抗性的影响以及Pi63基因的表达特性奠定了基础。

胸腹水癌细胞形态学检验诊断的实践与体会

胸腹水脱落肿瘤细胞学检验诊断，长期来是检验医学中的弱项，其原因有三：其一为出版的相关专著绝大多数是用病理学方法和视角介绍的，不太适用于检验医学的细胞形态学诊断；其二是检验医学（包括院校）对胸腹水脱落细胞学检验诊断的基础、技能教学（育）和培养的投入不足；其三是胸腹水肿瘤细胞学，即使同一病例标本，常表现千姿百态形态，评估性诊断时，又需要一定的临床和病理为基础，故普遍性重视不够。临床上，恶性胸腹水中，最常见的是癌细胞侵犯，包括儿童患者，但对胸腹水标本送检的要求、处理的方法、镜检的要求和形态学的把握等，文献上报道的体会均有所不同。现将我们13年来的一些实践探索与体会作一介绍。

胸腹水癌细胞形态学诊断的实践与体会——镜检方法、腺癌鳞癌形态特征和免疫化学应用对诊断的影响

目的探讨胸腹水细胞学镜检方法中标本观察的区域、张数,低倍镜与油镜灵活使用的方法,常见腺癌细胞和鳞癌细胞形态特征和细胞免疫化学染色应用对形态学诊断的影响。方法 409例癌细胞胸腹水放置于EDTA-K2抗凝剂塑料带盖标识专用试管,离心后留取沉渣30μL,吸取6μL推制厚片,染色、镜检。结果 (1)60例阳性标本中,应用低倍镜寻找再用油镜确认观察推片尾部区域癌细胞检出率100%,高于体部区域检出率75%(χ2=83.64,P<0.01);6份标本(10.0%)至检查完3张时才确定偶见癌细胞(≤3个/片);(2)形态学检查与病理诊断符合率腺癌为95.7%,鳞癌为72.7%;(3)204例阳性标本免疫组化检测CEA阳性168例(84.4%),CK-H染色阳性22例(10.8%),与单一以形态学特征诊断相比,细胞免疫化学染色对腺癌的诊断率较高(χ2=5.11,P<0.05),鳞癌则无显著性差异(χ2=3.21,P>0.05)。结论镜检中重视标本尾部区域和增加观察标本张数可提高癌细胞的检出,熟练掌握腺癌和鳞癌形态特征可以对癌细胞作出进一步判断,应用细胞免疫化学染色使诊断率更高。

低T_3综合征对危重患者死亡的预测价值研究

目的探讨低三碘甲状腺原氨酸（triiodothyronine,T3）综合征对危重患者死亡的评估价值。方法按照甲状腺功能检查结果是否显示低T3综合征,将收治的危重患者68例分为低T3组（18例）和非低T3组（50例）,记录入院时急性生理与慢性健康状况评分（APACHEⅡ评分）,以及入院时与住院第3天的甲状腺功能,随访30d。统计分析危重患者低T3综合征的发生率、30d病死率,受试者工作特征（ROC）曲线判断T3水平对危重患者死亡的预后。结果 （1）随访30d,低T3组（44.4%,8/18）和非低T3组（28.0%,14/50）的病死率差异无统计学意义（χ^2=1.635,P=0.201）。（2）随访30d,低T3组和非低T3组死亡者的T3水平（0.22±0.04）、（0.89±0.12）ng/mL均显著低于两组存活者的（0.63±0.09）、（1.21±0.39）ng/mL,T3水平差异有统计学意义（P〈0.05）;而低T3组死亡与存活者的T3水平均显著低于非低T3组死亡与存活者（P〈0.05）。低T3组和非低T3组死亡者的APACHEⅡ评分（33.1±6.2）、（31.3±5.6）分均显著高于存活者的（28.2±2.4）、（28.1±2.1）分（P〈0.05）。（3）经ROC曲线对所有患者30d预后分析,T3水平、APACHEⅡ评分ROC曲线下面积分别为0.759（95%CI：0.622-0.886）、0.770（95%CI：0.648-0.896）,二者比较差异无统计学意义（P〉0.05）。T3值以0.40ng/mL为临界点,对死亡预后的敏感度为75.8%,特异度为77.6%。二者联合预测死亡时曲线下面积为0.836,与单独使用T3水平、APACHEⅡ评分预后之间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论伴发低T3综合征的危重患者病死率高,T3值可作为危重患者死亡的预测指标。

纯红系细胞白血病(FAB分型的AML-M6b)——附1例报告

纯红系细胞白血病过去称为急性红血病、DiGuglielmo综合征早期型。本病少见,约占急性白血病的0.8%,近年来这一亚型白血病在概念和诊断标准上都有了一些新的变化。现报道我们发现的一例病例,并就该病当前的进展作一讨论。1病例报告患者男,47岁,纳差伴乏力半个月。查体:贫血貌,肝、脾和浅表淋巴结未触及肿大;血常规检查血红蛋白62g/L、红细胞2.17×1012/L、MCV 89.2fl、MCH28.6pg、MCHC 320g/L、白细胞6.0×109/L、幼粒细胞2%。有核红细胞34个/100个白细胞,血小板52×109/L;骨髓涂片:有核红细胞异常增生,幼红细胞占有核细胞的88.5%。

急性巨核细胞白血病原巨核细胞形态学探讨

急性巨核细胞白血病最初由1931年Von Braos所描述．直至1978年Breton-Gorias等开创血小板过氧化酶（PPO）染色证实巨核细胞白血病存在后才得到公认．1985年FAB协作组把它列入AML亚型的M7，并对M7的细胞化学与免疫化学染色进行了一些探讨刚。现将我们确诊的M7病例就形态学的特点及诊断意义作一探讨。

血管外肺水指数结合血浆大内皮素-1对感染性休克并发ARDS患者预后的预测价值

目的分析血管外肺水指数(EVLWI)和血浆大内皮素-1(PIE-1)对感染性休克并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者预后的预测价值。方法选取2016年1月—2020年3月重庆市开州区人民医院重症医学科收治的感染性休克并发ARDS患者82例作为研究对象,根据28 d预后结局分为生存组45例,死亡组37例。比较2组EVLWI、血浆大内皮素-1水平。分析EVLWI、PIE-1水平对患者预后诊断价值及感染性休克并发ARDS患者预后的影响因素。结果死亡组患者PaO2/FiO2值显著低于生存组,APACHEⅡ评分、SOFA评分、EVLWI、血浆大内皮素-1水平显著高于生存组(t/P=2.267/0.026、7.142/0.000、3.440/0.001、2.685/0.009、7.493/0.000)。入院1~3 d生存组EVLWI、PIE-1水平均逐渐降低,而死亡组则逐渐升高(F/P=16.799/0.000、9.975/0.000;10.139/0.000、28.616/0.000),同一时点死亡组EVLWI、PIE-1水平均高于生存组(EVLWI:t/P=3.771/0.000、10.129/0.000、15.960/0.000;PIE-1:t/P=14.063/0.000、18.194/0.000、23.463/0.000)。死亡组患者EVLWI与血浆大内皮素-1水平呈正相关(r=0.421,P=0.009)。二者联合预测感染性休克并发ARDS患者死亡的曲线下面积为0.898,敏感度为81.10%,特异度为91.10%,约登指数为0.722。高APACHEⅡ评分、高SOFA评分、高EVLWI水平、高PIE-1水平是影响感染性休克并发ARDS患者死亡发生的独立危险因素(P<0.05)。结论EVLWI、PIE-1水平是感染性休克并发ARDS患者死亡的独立危险因素,二者联合检测对该疾病患者死亡预测价值较高。

癌症恶病质贫血患者血象和骨髓象特征分析

目的探讨癌症恶病质贫血患者的血象与骨髓象特征。方法对20例癌症恶病质贫血患者进行血细胞学检验、骨髓细胞形态学检验和骨髓活检,分析血象和骨髓象改变特点。结果 20例患者血象以轻度贫血为主,红细胞平均容积(MCV)和红细胞分布宽度(RDW)正常或轻度异常,锯齿状红细胞则增多明显,白细胞计数和血小板计数多为轻度减低。骨髓穿刺液呈不同程度的胶冻样外观,变性成分松脆而不易涂片,镜下Wright-Giemsa染色为圆泡状或条片状浅(紫)红色匀质性物质,部分匀质区域无有核细胞;造血细胞增生均为明显减低,其中4例检出小簇癌细胞。14例骨髓活检获取的组织均缺乏坚固的圆条形软组织,切片上有核细胞极少,造血主质区为多少不一的匀质性变性成分。结论癌症恶病质贫血有不同于其他贫血的血象和骨髓象特征,对进一步认识其病理生理有重要的临床意义。

急性有机磷中毒并发急性胰腺炎1例

患者,女,44岁,因空腹服敌敌畏50 mL,约10 min后出现呕吐、大汗、神志不清、呼吸困难,1 h后送当地医院洗胃、注射阿托品（量不详）,4 h后来我院急诊。就诊前无大量进食酒肉史,既往无胆胰疾病史。入院时体格检查体温测不到,脉搏116次/min,呼吸6次/min,血压73/43 mm Hg。深昏迷状,格拉斯哥昏迷评分3分。

探讨音乐疗法对ICU综合症的预防作用

目的:探讨音乐疗法对ICU综合症的预防作用。方法:选取某院接收的98例需重症监护(ICU)神智清楚的患者作为本次的研究对象,按随机数字表达法为依据将其分为观察组和对照组,每组49例,对照组采用常规治疗及护理,观察组患者则在此基础上采用音乐疗法进行治疗,比较两组患者的临床疗效。结果:观察组患者谵妄表评分及抑郁量表评分均明显优于对照组(P<0.05)。结论:在常规治疗及护理的基础上采用音乐疗法对ICU患者进行治疗可有效地减少ICU综合征的发生,有较高的应用价值,可推广应用。

银杏叶提取物治疗脑外伤的疗效分析

目的探讨银杏提取物对脑外伤患者的临床疗效。方法选取2010-09—2014-01脑外伤患者100例为研究对象,随机分为治疗组50例和对照组50例,对照组常规治疗,治疗组在常规治疗的基础上加用银杏提取物,观察2组患者治疗前后GCS评分的变化及病情改善情况。结果治疗组总有效率80%,对照组总有效率70%,2组相比差异有统计学意义(P<0.05);治疗后半年,治疗组的睁眼反应、语言反应、肢体运动及昏迷指数的积分均优于对照组(P<0.01),2组并发症发生率分别为10%、34%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论银杏提取物可改善脑外伤患者的病情程度且并发症少,临床疗效确切。

甘蓝型油菜尿卟啉原Ⅲ合成酶基因BnHemd的克隆和功能分析

为探讨油菜尿卟啉原Ⅲ合成酶基因Bn Hemd的功能及其与叶绿素合成的关系,促进光合效率和产量的提升,利用基因编辑技术对甘蓝型油菜中双11号中该基因在A9和C8染色体上的两个拷贝进行编辑。从中双11号中克隆到基因Bn A09.Hemd和Bn C08.Hemd,CDS序列分别为885 bp和876 bp,均由9个外显子构成,各编码294和291个氨基酸残基。Bn Hemd蛋白性质与结构分析结果表明,甘蓝型油菜中基因Bn Hemd的两个拷贝的蛋白理化性质十分相似,均为不稳定蛋白,相对分子质量分别为31.97 k D和31.40 k D。系统进化树分析表明,Bn A09.Hemd和Bn C08.Hemd分别与白菜和甘蓝中的同源基因亲缘关系最近。荧光定量PCR结果表明,Bn Hemd在中双11号的根、茎、叶、花蕾、种子和角果皮中均有表达,在角果皮和花蕾中的表达量远高于根、茎、叶。初步的功能分析结果表明,中双11号中该基因两个拷贝同时编辑的植株表现为:叶绿素含量显著减少、光合速率降低、生长迟缓,表明甘蓝型油菜BnHemd对叶绿素合成起重要作用,同时影响光合效率和生长发育。

动态监测血清胆碱酯酶、降钙素原水平有助于重症肺炎患者的预后评估

目的:分析动态监测血清胆碱酯酶(CHE)、降钙素原(PCT)水平对ICU重症肺炎患者预后的评估价值。方法:选取2017年1月-2018年6月重庆市开州区人民医院ICU收治的重症肺炎患者92例,按照转出ICU或出院时病情转归分为好转组(53例)与恶化组(39例)。比较2组患者临床资料与血清CHE、PCT水平及APACHEⅡ评分等指标,采用Spersman等级相关性分析法分析血清CHE、PCT水平与APACHEⅡ评分的相关性,采用多因素Logistic回归分析ICU重症肺炎患者病情恶化的危险因素。结果:入院时,好转组患者MODS评分、C反应蛋白(CRP)以及空腹血糖均明显低于恶化组(P均<0.05);好转组住ICU时间、抗生素应用时间、机械通气及留置导尿管患者比例均明显低于恶化组(P均<0.05)。入院后3、7 d以及转归前,好转组CHE水平明显高于入院时,PCT水平及APACHEⅡ评分明显低于入院时(P均<0.05);恶化组CHE水平明显低于入院时,PCT水平及APACHEⅡ评分明显高于入院时(P均<0.05);入院时、入院后(24 h、3 d、7 d)及转归前,好转组CHE水平明显高于恶化组,PCT水平及APACHEⅡ评分明显低于恶化组(P均<0.05)。血清CHE水平与APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.531,P<0.05),血清PCT水平与APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.725,P<0.05),血清CHE水平与PCT水平呈负相关(r=-0.564,P<0.05)。APACHEⅡ评分、MODS评分、血清CHE、PCT、CRP、空腹血糖以及机械通气为ICU重症肺炎患者病情恶化的独立危险因素(P均<0.05)。结论:ICU重症肺炎患者血清CHE水平明显降低、PCT水平明显升高,动态监测血清CHE、PCT水平有助于ICU重症肺炎患者的预后评估。

一株产红色素真菌的鉴定及色素稳定性分析

分离得到一株可产生红色素的真菌,序列分析显示该真菌的18S rDNA与黑曲霉菌（Aspergillus niger）的重叠群序列An03c0110、An03c0100的一致性达到100%,因此将此真菌初步鉴定为黑曲霉菌。通过分析红色素特征吸光度的变化,研究了温度、p H变化对色素稳定的影响,结果显示该色素在温度10-100℃,pH 5-9条件下保持稳定。

姜黄素减轻过氧化氢诱导皮层神经细胞凋亡的JAK信号通路机制研究

目的分析姜黄素减轻过氧化氢诱导皮层神经细胞凋亡的JAK信号通路机制,为相关新药开发及临床治疗提供参考。方法在37℃、5%CO2条件下体外培养胎鼠大脑皮层神经细胞至生长良好。将皮层神经细胞随机分为四组:对照组、过氧化氢组、姜黄素组及S1491组。姜黄素组(40μmol/L)及S1491(20μmol/L)组细胞预先给予相应浓度药物预处理4 h,对照组给予生理盐水处理。然后除对照组给予生理盐水外,其余各组细胞给予400μmol/L的过氧化氢共培养8 h。分析各组细胞经相应的处理后细胞的增殖抑制率,采用q PCR法和WB法分析各组皮层神经细胞Caspase3、Caspase6、JAK通路蛋白水平表达。结果与对照组相比,过氧化氢组细胞增殖被明显抑制(P<0.05),细胞凋亡蛋白Caspase3、Caspase6及JAK通路蛋白JAK1和JAK2表达明显增强(P<0.05),而姜黄素组及S1491组细胞的上述异常得到明显地恢复(P<0.05)。结论姜黄素能有效减轻过氧化氢诱导皮层神经细胞凋亡过程,且其可能是通过抑制JAK信号转导通路发挥作用。

稻瘟病抗性基因Pita^2的克隆及其介导的防御相关基因表达分析

为了克隆位于水稻12号染色体着丝粒区域具有广谱抗性的稻瘟病抗性基因Pita^2,研究构建并筛选了该基因供体品种PiNo.4的Fosmid文库,构建Pita^2候选区域的物理图谱并互补验证了5个候选基因,克隆得到了稻瘟病抗性基因Pita^2,确认了该基因就是Ptr基因.一组基因型接近、对Pita^2致病性相反的稻瘟病菌菌株对水稻进行离体接种,接种前后相关防御基因的表达量分析结果表明,Pita^2基因在稻瘟病菌侵染后均成功激活了水杨酸和茉莉酸抗病信号通路,主要通过参与水稻水杨酸信号通路赋予水稻抗性,该研究为利用Pita^2培育持久广谱抗性水稻提供了一定的理论基础.

分级管理模式在重症患者中的应用效果研究

目的探讨分级管理模式在重症患者中的应用效果。方法选取2013年1月至2014年10月我院开展分级管理期间ICU住院患者256例为观察组,2011年12月至2012年12月未开展分级管理期间ICU住院患者260例为对照组。比较两组患者的救治成功率、住ICU时间、医疗费用、患者满意度和护理时间等。结果观察组救治成功率为92.96%,明显高于对照组的85.00%,而抢救时间和并发症发生率均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者护理满意率为97.65%,明显高于对照组的87.31%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者住ICU时间、医疗费用和护理时间均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组发生ICU内不良事件4起,分别为患者自行拔除胆囊穿刺管1次,腹腔穿刺管脱出2次、用错药1次。观察组未发生不良事件。结论实行ICU分级管理模式既有利于重症患者的临床救治,又有利于中心ICU与各专科ICU协调发展,可提高患者满意率,降低住院费用、护理时间和入住ICU时间。

稻瘟病抗性基因Pi63启动子4个构建体的表达及抗性分析

利用农杆菌介导法获得带有不同长度启动子区域的稻瘟病抗性基因Pi63全长基因的转基因水稻,并采用实时荧光定量PCR方法鉴定了T1代阳性植株的基因拷贝数,进一步测定了单拷贝转基因植株在接种稻瘟病菌前后Pi63基因的表达量变化.结果表明:接种后4个分别带有不同长度启动子的Pi63转基因植物T1代中Pi63基因的表达量均升高,其抗病相关的顺式作用元件处于P1与P2中间的区域,P0到P1的区域存在负调控元件.此结果可为进一步揭示水稻稻瘟病抗性基因Pi63的分子机理奠定基础.