青藤碱抗炎作用机理研究

【目的】通过观察青藤碱对人环氧化酶(COX)、白介素-1β(IL-1β)基因表达的影响,探讨青藤碱的抗炎作用机理。【方法】分离正常人外周血单核细胞(PBMC),体外加药培养,提取细胞总核糖核酸(RNA),采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察青藤碱对脂多糖(LPS)刺激和非LPS刺激状态下环氧化酶及IL-1β基因表达的影响。【结果】青藤碱对COX-1基因表达无明显影响,对COX-2基因表达仅有轻微的抑制作用,而对IL-1β基因表达的抑制作用较强。【结论】青藤碱可能是通过抑制炎症性细胞因子的产生而发挥其抗炎作用。

柚总黄酮抗炎作用的实验研究

目的:研究柚总黄酮的抗炎作用。方法:将NIH小鼠(70只)、SD大鼠(80只)随机分为空白对照组、消炎痛片组(或地塞米松组)及柚总黄酮高、中、低剂量组,分别采用小鼠耳二甲苯致炎试验、大鼠角叉菜胶足肿胀试验及大鼠棉球肉芽肿试验。结果:二甲苯所致的小鼠耳肿胀度试验:消炎痛片组、柚总黄酮高剂量组与空白对照组比较,差异均有非常显著性意义(P< 0．01),表明高剂量组可明显降低小鼠的耳肿胀度;大鼠角叉菜胶足肿胀试验:地塞米松组在致炎后1-5h的足肿胀度及柚总黄酮高、中剂量组在致炎后4h和5h的足肿胀度与空白对照组比较,差异均有非常显著性意义(P<0．01)。大鼠棉球肉芽肿试验:地塞米松组和柚总黄酮高、中剂量组大鼠棉球肉芽肿重量与空白对照组比较,差异均有非常显著性意义(P<0．01)。结论:柚总黄酮具有较好的抗炎作用。

柚总黄酮对中枢神经系统的一般药理作用观察

目的研究柚总黄酮对小鼠中枢神经系统的一般药理作用。方法分别观察不同剂量的柚总黄酮对小鼠自主活动（给药后40～125min内，1min活动次数）、协调运动（在16r／min的转棒上，1min内坠落的小鼠数）、戊巴比妥钠阈剂量（40mg／kg）入睡时间和睡眠持续时间和阈下剂量（30mg／kg）睡眠发生百分率的影响。结果柚总黄酮对小鼠的自主活动、协调运动、戊巴比妥钠阈剂量和阈下剂量催眠作用均无明显影响，与正常对照组比较，无显著性差异。结论柚总黄酮对小鼠中枢神经系统无明显影响。

青藤碱抗炎抗风湿作用机理研究

【目的】研究青藤碱抗炎、抗风湿作用机理。【方法】采用小鼠巨噬细胞林J774体外培养,观察药物对该细胞株增殖、一氧化氮(NO)合成以及肿瘤坏死因子-α信使核糖核酸(TNF-αmRNA)表达及生物合成的影响。[结果]青藤碱能够抑制该细胞株增殖,抑制脂多糖(LPS)刺激状态下的NO合成;对TNF-α蛋白合成具有抑制作用,但仅在高浓度时才对TNF-a mRNA表达具有轻微的抑制作用。[结论]青藤碱可能通过下调单核/巨噬细胞系统炎症介质和细胞因子合成发挥抗炎、抗风湿作用。

植物中药材总DNA提取方法的比较

随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术已经应用于中药材的鉴别，如何从多种中药材提取到总ＤＮＡ来进行相关性研究是一个关键的课题。从植物中提取基因组ＤＮＡ的方案众多，其中较为流行的方案有三类：（１）用苯酚－氯仿（变性蛋白）作为提取介质。（２）用ＣＴＡＢ（既能裂解细胞壁，又能去除多糖）作为提取介质。（３）用高盐低ｐＨ介质作为提取介质（有效的蛋白沉淀剂）。经过比较，我们认为第（３）套方案快捷、经济，比较适于基层单位应用。

青藤碱对人外周血单个核细胞IL-1β和IL-8细胞因子基因表达的影响

目的：从细胞因子基因调控研究青藤碱抗炎抗风湿的作用机理。方法：分离正常人外周血单个核细胞体外加药培养，提取各组细胞总ＲＮＡ，采用一步法、二步法ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测药物对ＬＰＳ刺激状态下该细胞ＩＬ－１β、ＩＬ－８ｍＲＮＡ表达的影响。结果：一步法ＲＴ－ＲＣＲ结果表明 １ ｍｍｏｌ／Ｌ青藤碱作用６ｈ，对ＩＬ－１βｍＲＮＡ表达抑制率分别约为（１５．７０±５．５２）％。二步法ＲＴ－ＲＣＲ结果表明，１ｍｍｏｌ／Ｌ、１００ｕｍｏｌ／Ｌ的青藤碱对ＩＬ－１βｍＲＮＡ表达抑制率分别约为（１７．０±７．６９）％、（２５．９９±１２．８４）％，对ＩＬ－８ｍＲＮＡ表达的抑制作用分别为（２．０１±７．７９）％、（１６．０４±７．５５）％。结论；青藤碱能通过下调人外周血单个核细胞 ＩＬ－１β、ＩＬ－８ｍ－ＲＮＡ表达发挥对类风湿性关节炎的治疗作用。

阳春砂的ITS序列分析

目的 用 ITS全序列鉴别各地产阳春砂及常见伪品。方法 从各地产阳春砂及常见伪品绿壳砂和海南砂中提取总 DNA,以核基因组通用引物 ITS为引物进行扩增 ,扩增产物经纯化后 ,用 PCR产物直接法进行测序。结果 各样品的 ITS序列总长度均为 6 2 6 bp,其中 ITS- 1序列长度为 2 48bp,5 .8S序列长度为 15 5 bp,ITS- 2序列长度为 2 2 3bp;6个阳春砂和绿壳砂的 ITS- 2序列完全一致 ,各样品的 5 .8S序列完全一致 ,在 ITS- 1中各样品却有不同的碱基位点。结论 ITS- 1序列可对阳春砂的道地性作出鉴别 ,明显区分其伪品。

阳春砂与几种常见姜科伪充品的RAPD分析

本文采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术研究了姜科植物几种常见的中药材。结果显示,扩增结果具有良好的分辨性。阳春砂与海南砂、绿壳砂、缩砂、草果、益智仁、白豆蔻、草豆蔻等常见的姜科近缘伪充品之间呈现明显指纹差异,呈现多态性的引物占所选的12.17%,根据这些多态性可进行鉴别。不同产地的阳春砂RAPD指纹基本一致。用NJ方法构建了分子系统树,揭示阳春砂与绿壳砂、海南砂亲缘关系较近,而与草豆蔻、草果等关系较远,此结果与传统的分类方法基本一致。

补肾健脾方药免疫药理作用比较

采用目前常用的醋酸氢化可的松致肾虚模型和大黄致脾虚模型，比较了传统经典方剂肾气汤（丸）和四君子汤对模型动物的淋巴细胞转化率、ＮＫ细胞活性、白介素１（ＩＬ－１）和溶血抗体产生能力的作用。结果表明，肾虚和脾虚模型动物免疫功能皆有显著下降（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），肾虚尤为明显。肾气汤对肾虚和脾虚模型均有明显的治疗作用（Ｐ＜０．０５），而四君子汤仅对脾虚模型有治疗作用。推测两种模型的成因和两种方剂的作用机理有所不同，同时提示如果在脾虚健脾治疗无效时。

四君子汤复方总多糖口服和注射给药对免疫功能影响的对比研究

目的 :研究四君子汤复方总多糖经口服和注射给药的免疫活性的差异。方法 :采用环磷酰胺造成免疫抑制模型 ,观察四君子汤复方总多糖对小鼠免疫器官重量、溶血素生成反应和迟发型超敏反应的影响 ,同时观察对正常淋巴细胞增殖的影响。结果 :四君子汤复方总多糖能够明显对抗由环磷酰胺诱导的免疫抑制 ,使小鼠免疫器官重量减轻 ,溶血素生成反应减弱和迟发型超敏反应降低明显改善 ,促进淋巴细胞增殖 ,且口服效果有优于注射的趋势。结论 :四君子汤复方总多糖对小鼠体液和细胞免疫功能具有促进作用 ,同时也提示多糖口服给药引起免疫效应有其独特性。文中还对口服多糖引起全身免疫反应的可能机理进行了探讨。

阳春砂与绿壳砂、海南砂的ITS-1测序鉴别

目的:从分子水平鉴别阳春砂及其伪充品。方法:从阳春砂及其常见伪充品绿壳砂、海南砂中提DNA,以核基因组通用引物ITS-1为引物进行扩增,扩增产物经纯化后,用PCR产物直接测序法进行测序。结果:样品ITS-1序列长度均为248bp,但绿壳砂有7个碱基与阳春砂不同,海南砂有12个碱基与阳春砂不同。结论:1序列可有效地鉴别阳春砂及其伪充品。

肾虚、脾虚造型动物免疫、内分泌器官超微结构的比较研究

采用对比研究的方法 ,在相同实验条件下 ,观察和比较了肾阳虚证、脾虚证实验动物的免疫器官脾、胸腺、内分泌器官的超微结构改变 ,及补肾方药肾气汤、补脾方药四君子汤对它们的影响。结果显示 :脾虚、肾阳虚证动物的脾脏、胸腺超微结构均有明显的破坏现象 ,肾阳虚证尤甚 ,且肾阳虚证动物的肾上腺超微结构也有明显的破坏现象。提示脾虚、肾阳虚证都有相应器官的超微病理学证据。补脾和补肾方药治疗可分别改善脾虚证、肾阳虚证动物已受破坏组织结构的实验结果 。

诃子及其混淆品RAPD分析

目的 :对不同品种的诃子进行 DNA指纹图的鉴别研究 ,并对 RAPD在中药材鉴别中存在的一些问题进行研究。方法 :应用 RAPD技术对诃子及其常见混淆品进行 DNA指纹图多态性的比较。结果 :DNA指纹图显示 ,各样品间具有不同的遗传关系 ,根据这些差别可进行鉴别 ,同时对存在的若干问题提出了解决的方法。结论

青藤碱对RBL-2H3肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响

目的通过研究青藤碱对肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响,深入探讨青藤碱的抗炎作用机理。方法应用细胞培养,流式细胞术等方法,观察青藤碱等药物对体外培养的RBL-2H3肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响。结果青藤碱对肥大细胞增殖有明显的抑制作用,其IC50约为1mmol/L,并能促进肥大细胞凋亡,且对RBL-2H3肥大细胞活化脱颗粒有较强的抑制作用。结论青藤碱可能部分通过下调肥大细胞功能发挥抗炎抗风湿作用。

柚皮苷对前脂肪细胞3T3-L1增殖和诱导分化的影响

目的观察柚皮苷对前脂肪细胞3T3-L1增殖和分化的影响,并探讨其影响3T3-L1分化的可能作用机制。方法培养3T3-L1细胞,并用不同浓度的柚皮苷进行干预,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,用油红O染色和染色比色法分析脂肪细胞的分化程度。逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ2(PPARγ2)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA的表达。结果柚皮苷能抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化,并能抑制PPARγ2、C/EBPα基因的表达。结论柚皮苷可抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,并能通过下调分化相关基因的表达抑制分化。

商品西洋参DNA指纹图谱鉴别

运用ＲＡＰＤ 技术对来自不同产地的西洋参样品进行多态性分析。结果显示， 大部分引物能扩增出清晰的ＤＮＡ 指纹图， 西洋参真伪品之间的指纹图谱差别较大， 而各地产西洋参ＤＮＡ 指纹图基本一致。同时，发现个别产地样品的指纹图有不同程度的改变， 考虑有变异可能。

西红花的RAPD鉴别研究

西红花主产于欧洲及中亚地区 ,红花主产于我国 ,二者为不同科植物 ,由于外观及功效较为类似 ,故常被混用。采用随机引物对西红花及其伪冒品进行扩增 ,根据DNA指纹图谱的差异 。

两种雷公藤多苷片抗炎及免疫抑制作用的对比研究

【目的】比较两种雷公藤多苷片（TWP1、TWP2）的抗炎和免疫抑制作用。【方法】分别选用NIH小鼠和SD大鼠，随机分为模型组，TWP1高、低剂量组和TWP2高、低剂量组，大鼠取人用剂量的10、5倍，小鼠取人用剂量的20、10倍分别灌胃给药；采用角叉菜胶、棉球肉芽肿和二甲苯致炎法观察TWP1、TWP2对NIH小鼠和SD大鼠的抗炎作用；采用溶血素生成反应、迟发型超敏反应（DTH）、碳廓清指数、免疫器官质量等指标观察其免疫抑制作用。【结果】高、低剂量的TWP1、TWP2均可显著性抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀及小鼠溶血素生成反应，且TWP1的作用优于TWP2；TWP2高、低剂量均可显著性抑制大鼠角叉菜胶足肿胀和棉球肉芽肿，而TWP1无此作用；TWP1低剂量和TWP2高剂量均可显著性降低小鼠校正碳廓清指数，但两种TWP均对小鼠DTH反应和胸腺、脾脏质量无明显影响。【结论】在7.5-30 mg/kg剂量范围内，TWP2的抗炎效果较优，而TWP1的免疫抑制作用较强。

柚总黄酮祛痰、止咳作用研究

目的：研究柚总黄酮的祛痰、止咳作用。方法：采用酚红排泌量法、氨水及枸橼酸引咳法研究柚总黄酮的祛痰、止咳作用。结果：柚总黄酮0．2～0．4g／（kg·d）和0．05～0．2g／（kg·d）可分别显著增加小鼠和大鼠支气管酚红排泌量；0．1～0．4g／（kg·d）可明显延长氨水刺激小鼠咳嗽的潜伏期及3min内咳嗽次数；0．08g／（kg·d）可明显降低枸橼酸刺激豚鼠5min内咳嗽次数。结论：柚总黄酮具有较好的祛痰、止咳作用。