转OMT/PGH基因猪外源基因整合及遗传特性研究

实验以转OMT／PGH基因猪的G0、G1、G2和G3代共8头猪为材料，应用同位素和非同位素标记的染色体原位来交技术，对外源OMT／PGH基因在猪染色体上整合位点进行研究。结果表明：（1）外源基因可以整合在染色体上，整合的位点是随机的；（2）整合在染色体上的外源基因可以遗传给子代；（3）整合在染色体上的外源基因在转基因动物世代过程中整合的位点是相对稳定的。

地毯草根际固氮菌的分离及鉴定

结合气相色谱仪,利用乙炔还原等方法对地毯草（Axonopus compressus）根际固氮菌进行分离和鉴定。结果表明,从地毯草根际土壤中分离获得6株固氮菌株,菌株的固氮酶活性相差较大（92.5 C2H4~295.2 C2H4nmol.mL-1.h-1）,菌株hnN2及hnN6具有较高的固氮酶活性（〉200 C2H4nmol.mL-1.h-1）;菌株经鉴定分属Bacillus（2株）、Azotobacte（r 3株）和Pseudomona（s 1株）3个属。

旱地冬小麦渗水地膜覆盖下温度及产量效应研究

采用地膜创新产品———渗水地膜,以普通地膜及露地为对照,对渗水地膜覆盖下麦田的土壤温度、产量及水分生产率进行了初步探讨。结果表明:渗水地膜在整个生育期内的保温、增温效果优于普通地膜,同时还可以降低午后极端高温,使土壤温度较为稳定;渗水地膜覆盖与普通地膜覆盖产量差异达0.01极显著水平,较普通地膜覆盖增产505.30 kg.hm-2,产量提高了13.20%;渗水地膜的水分生产率最高,露地最低。渗水地膜水分生产率比露地提高25.1%,比普通地膜提高8.6%。

渗水地膜覆盖冬小麦的生态效应研究

采用渗水地膜覆盖、普通地膜覆盖和露地3个处理,对比分析三者的生态效应。结果表明:全生育期内,渗水地膜的渗水、保墒、提墒作用均优于其它2种处理,其保墒、提墒效应在表土层最为明显,土壤含水量较普通地膜平均增加0.70个百分点;渗水地膜在整个生育期内的保温、增温效果优于普通地膜,同时还可以降低午后极端高温,使土壤温度较为稳定;由于渗水地膜的微通气作用,土壤容重降低,孔隙度提高,气相比例增加,土壤通透性增强。

渗水地膜覆盖对冬小麦生理抗逆性及产量影响研究

试验采用渗水地膜覆盖、普通地膜覆盖和露地三个处理,研究了三处理下冬小麦的生理、产量效应。结果表明:渗水地膜覆盖提高了小麦各器官含水量、叶片的叶绿素含量及硝酸还原酶活性,降低了叶片脯氨酸含量和细胞膜相对透性,这说明了渗水地膜覆盖冬麦土壤水分状况好,抵抗逆境能力增强;渗水地膜覆盖与普通地膜覆盖产量差异达0.01极显著水平,较普通地膜覆盖增产505.30 kg/hm2,产量提高了13.20%;渗水地膜的水分利用效率最高,露地最低。渗水地膜水分利用效率比露地提高25.1%,比普通地膜提高8.6%。

渗水地膜覆盖对冬小麦土壤水分及产量影响研究

试验采用渗水地膜覆盖、普通地膜覆盖和露地3个处理,研究了三者的水分、产量效应。结果表明:全生育期内渗水地膜的渗水、保墒、提墒作用均优于其它两种处理,其保墒、提墒效应在表土层最为明显,土壤含水量较普通地膜平均增加0.70个百分点;渗水地膜覆盖与普通地膜覆盖产量差异达0.01极显著水平,较普通地膜覆盖增产505.30kg/hm2,产量提高了13.20%;渗水地膜的水分利用效率最高,露地最低。渗水地膜水分利用效率比露地提高25.1%,比普通地膜提高8.6%。

猪早期胚胎在体内发育及分布的研究

猪是我国重要的家畜之一。然而过去对其胚胎早期发育过程的研究报道甚少。本项研究对猪受精后至192h前的早期胚胎发育过程以及在其生殖道内的分布进行了研究。结果表明,猪胚胎胚龄72h左右时,胚胎均分布在输卵管内,猪胚胎发育期为8细胞前期;72h至120h期间,猪胚胎已进入子宫角,分布比较集中于靠近宫管结合部。胚期已发育至桑椹期;120～192h胎龄的猪胚已发育形成囊胚;到192h时,胚胎已分布在整个子宫角内,此时胚胎分布已非常均衡。

猪ICM注人囊胚获得嵌合胚的研究

以湖北白猪囊胚为ICM供体,杜洛克猪囊胚为受体囊胚,进行嵌合胚的研究.采用免疫外科和显微外科两种方法,分离184枚供体囊胚的ICM.用酶将ICM分散,而后注入到受体囊胚的囊胚腔中,共获67枚嵌合胚,经体外短期培养,其中35枚嵌合胚恢复,恢复率为52.2%.将恢复的嵌合胚分别移入5头与供体囊胚猪同步的受体母猪子宫内,两头受孕,其中一头维持到分娩.产仔4头,但未见毛色嵌合现象.

从虚论治经行头痛临床观察

目的 从虚论治气血虚弱型经行头痛的临床效果。方法 将门诊70例气血虚弱型经行头痛患者按随机数字表法分成2组,各35例。观察组服人参养荣汤加减治疗,对照组服用盐酸氟桂利嗪胶囊治疗。对比2组治疗效果及治疗后3个月内头痛发作频次、持续时间、疼痛程度。结果 观察组(人参养荣汤)总有效率优于对照组,P=0.016,差异有统计学意义。治疗3个月后,在经行头痛发作频次、持续时间及疼痛程度方面,观察组(人参养荣汤)病情改善都优于对照组(P<0.05)。结论 从虚论治,采用人参养荣汤加减治疗气血虚弱型经行头痛临床疗效良好,值得临床推广。

中国转基因猪研究进展

中国的转基因猪研究始于八十年代末。湖北省畜牧兽医研究所与中国农业大学、中科院发育所,中国农科院兰州兽医研究所等单位合作,于1990年在国内首先获得了转基因猪。随后几年里,先后进行了五种结构基因的导入试验,共注射胚胎3108枚。其中3种是以提高生长为目的的基因,即PROMT/PGH、PSV/PGH、POMT/PGH-Microsatellite DNA,共注射胚胎2288枚,产仔291头,整合PGH基因52头,外源基因整合率17.87％(52/291),总效率2.27％(52/2288)。

中西医结合治疗胎萎不长临床观察

目的:观察中西医结合治疗胎萎不长的临床疗效。方法:64例随机分为治疗组和对照组各32例,两组均给予丹参及静脉营养治疗,治疗组加用中药口服。结果:治疗组宫高、腹围、胎儿双顶径以及出生后的新生儿体重及胎盘重量均高于对照组(P<0.05);足月低体重儿发生率治疗组的低于对照组(P<0.05)。结论:中西医结合治疗胎萎不长疗效满意。

钙离子载体和培养处理猪精子体外获能

本试验采用钙离子载体(I—A)和培养处理猪精子进行体外获能,(?)用体外成熟卵进行体外受精,通过获能效果和受精卵发育情况的观察来比较两种获能方法的优劣。试验结果表明I—A法和培养法的顶体反应与原精和洗涤精子的顶体反应差异极显著(P<0.01),表明两种方法均能使猪精子获能。精子的聚头能力,活力以及受精率差异均不显著(P>0.05),而用培养法体外获能精子与体外成熟卵共培养(受精过程)6小时后,其精子活力明显高于I—A法(P<0.05)。培养法获能精子使A级卵的分裂率差异不明显(P>0.05),但还是高7.32个百分点。

湖北白猪导入OMT/PGH基因的整合、表达和遗传

以湖北白猪为实验材料,显微注射OMT/PGH基因(绵羊启动子和猪生长激素的融合基因)于1125枚1～4细胞期的早期胚胎核内,共产仔167头,产仔率14.8%。Dot(斑点杂交)和Southern blot(印迹转膜杂交)检测,29头阳性,阳性率17.9%。通过传代进行转基因的遗传分析。G_0×G_0的配种组合,产仔63头,其中阳性20头,阳性率31.7%;G_0×非转基因猪的组合,产仔66头,其中阳性10头,阳性率15.2%。对11头G_0猪血清用放射免疫法测定的结果,其生长激素的浓度相当于对照组的2.03～6.70倍。16头G_0猪180日龄的生长速度比同窝对照提高11.8%;11头G_1猪比同窝对照提高14.8%,饲料转化率提高10%,瘦肉率有提高的趋势。

猪基因导入研究中两种转基因方法的比较

供试受体母猪共87头,其中50头受体母猪用显微注射法获得转基因卵。37头受体母猪采用精子载体法通过人工手术输精使其受孕。其受胎率前者为63.24％,后者为30.87％;平均产仔数分别为5.38和6.18头;基因整合阳性率分别为17.9％和12.7％;转基因效率分别为2.7％和2.8％。两种方法,平均产仔数.基因整合阳性率及转基因效率之间差异不显著(P>0.05),而受胎率之间差异极显著(P<0.01)。用精子载体法导入外源基因,不需对胚胎进行体外显微操作,大大简化了生产转基因动物的程序.但此方法尚需逐步完善。

母猪超数排卵对胚胎发育和胚胎质量的影响

对湖北白猪青年母猪和经产母猪用孕马血清促性腺激素 (PMSG)和人绒毛膜促性腺激素 (HCG)进行超数排卵处理 ,发情后配种 ,手术采集胚胎并观察 ,实验发现 ,1 0IU/kg体重的PMSG能促进母猪的发情并显著提高青年母猪的排卵数 ,1 0IU/kg体重的PMSG对经产母猪的超排效果不明显。超数排卵影响胚胎的质量 ,自然发情母猪较超数排卵母猪排卵较快 。

猪导入人类促衰变因子(hDAF)的整合与表达

将人类促衰变因子 ( human decay accelerating factor,h DAF)基因显微注入 51 7枚猪的受精卵 ,移植到2 6头受体母猪的输卵管内。 2 1头怀孕 ,产仔 93头。产仔后 ,取仔猪的耳或尾组织 ,提取总 DNA。以 5′-TGGCGAGAAGGACTCAGTGATCT-3′和 5′-TGAACTGTTGGTGGGACCTTGGA-3′为引物 ,进行 PCR扩增 ,有 1 8头显示阳性。转基因效率为 3 .5%( 1 8/ 51 7)。对存活的 1 4头转基因猪用免疫荧光法进行检测 ,并采用 MPIAS-50 0多媒体彩色病理图文分析系统进行图像分析 ,其中有 7头的动脉肌肉层中显现有荧光 ,其平均灰度在 1 2 7.3～ 1 70 .

用显微注射法建立转bcl-x_l基因小鼠

建立转bcl xl基因小鼠 ,继而传代建系 ,用于缺血性脑血管疾病的研究。采用显微注射法 ,将人bcl xl基因注入昆明小白鼠受精卵获得子代鼠 ,然后作PCR ,Southern blot ,mRNA ,Western blot检测以获得阳性鼠。实验中注射受精卵 16 5 4枚 ,移植卵数 14 4 8枚 ,受体鼠 4 9只 ,怀孕鼠 7只 ,子代鼠 13只 ,整合数 4只并均有表达 ,植入受精卵的存活率 83% ,受精卵的总存活率 0 .78% ,移植鼠的怀孕率 14 .3% ,整合效率 30 .7% ,总有效率为 0 .2 4 %。初步获得了转bcl

猪ESR基因一个外显子片段的克隆与序列分析

参考人、鸡、鼠的ESR基因序列 ,设计一对引物 ,采用PCR技术扩增出猪ESR基因一段DNA片段 ,将该片段克隆到pGEM TEasy质粒中 ,重组质粒用PCR扩增和酶切分析进行阳性克隆鉴定 ,然后测定核苷酸序列 ,并推导其氨基酸序列。将测定的猪ESR基因的部分序列 (332bp)与人、鼠、鸡的序列进行比较 ,结果表明 :猪的核苷酸和氨基酸序列与人、鼠、鸡相比 ,同源性分别为90 0 6 %和 86 36 % ,85 54%和 88 18% ,74 10 %和 71 82 % ,显示了强的保守性 ,猪的核苷酸序列与人、鼠、鸡相比存在着 4处特有变异 ,氨基酸序列aa2 5～ 30存在高变异区。

原核注射法转基因猪外源基因整合位点的分布及其遗传规律

应用非同位素标记染色体原位杂交技术 ,对 9头不同世代的转 OMT- PGH基因猪和 6头原代转 h DAF基因猪外源基因整合位点的分布及其遗传规律进行了研究。结果表明 ,4头原代转 OMT- PGH基因猪外源基因分别整合在第7、13、2和 8号染色体上 ,6头原代转 h DAF基因猪外源基因分别整合在第 13、6、11、2、7和 7号染色体上 ,证实了用原核注射法转基因猪外源基因的整合是“随机”的。来自同一亲本、不同世代的 5头转 OMT- PGH基因猪 ,其外源基因均存在于第 13号染色体上 ,与共同祖先原代转基因猪的整合位点相一致 ,表明转基因猪外源基因可以传递给后代 。