微藻高效基因枪转化方法的建立

基因枪法是外源基因导入微藻细胞的重要手段。然而,发展至今,微藻细胞基因枪转化效率一直偏低(10~50个转化子/μg DNA),高价低效的转化方法阻碍了基于高通量转化子的基因功能分析。为了提高基因枪的转化效率,本研究以三角褐指藻为材料,从抗生素选择培养基的改良,微载体的选择、制备、包埋、点膜和轰击参数的优化,以及受体细胞的处理等方面进行了系统研究。结果显示,采用50%海水盐度f/2培养基可以提高博来霉素的效价,f/2固体培养基中2216E营养物质的加入能缩短1/3的平板筛选时间。微载体制备应选择对金(钨)粉没有吸附作用的离心管,制备量/管应少于3.5 mg。微载体轰击量每次大约为0.75 mg,过量将会造成一个轰击死亡圈,过少将导致轰击成本上升。当轰击间距A为6.35 mm,间距B为11 mm,间距C为6 cm时,可以获得最多的转化细胞。109个受体细胞铺成较厚的多细胞层能显著提高转化效率。经过上述优化与改进,本研究将现有文献报道的转化效率提高了4.7~30倍,达到295±60个转化子/μg DNA。该方法除适用于三角褐指藻外,也可广泛应用于其他微藻(杜氏盐藻、小球藻)的基因枪转化研究,可以为微藻基因工程研究提供快速,高效和可靠的操作技术。

关于裙带菜全人工苗种与半人工苗种相结合的几点建议

裙带菜ＵｎｄａｒｉａＰｉｎｎａｔｉｆｉｄａ是藻类养殖的重要品种之一。目前国内外都在进行养殖，各养殖单位都在努力提高质量与产量，并已认识到全人工苗种的优越性，但在实际生产安排中又出现了全人工苗种与半人工苗种如何合理搭配的问题。本文通过近几年大连水产养殖公司海珍品场利用全人工苗种与半人工苗种总结的经验，综合裙带菜生长习性，制定了一个全人工苗种与半人工苗种结合的方案，为促进裙带菜养殖事业的发展提供一些经验。