抑制ABCC1/MRP1转运体下调IL-1β分泌的实验研究

目的:用体外巨噬细胞实验和全基因敲除小鼠,筛选IL-1β分泌相关的胞膜转运体。方法:分化THP-1细胞株得到人源性巨噬细胞,从人外周血获取巨噬细胞。获取同性别、同年龄的FVB野生型小鼠作为MRP1全基因敲除小鼠的对照,培养小鼠腹腔和骨髓巨噬细胞。使用ABCC1/MRP1、ABCG2/BCRP、ABCB1/P-gp、OATP1B1和MATE转运体抑制剂处理细胞,再使用脂多糖和腺苷三磷酸刺激细胞,采用ELISA、Western blot和细胞免疫荧光法检测IL-1β分泌水平。结果:人和小鼠巨噬细胞抑制剂实验表明,抑制ABCC1/MRP1转运体后,IL-1β分泌显著降低,而抑制其他4类转运体无效果。在动物实验中,MRP1全基因敲除小鼠的骨髓巨噬细胞分泌IL-1β的水平显著低于对照组。结论:ABCC1/MRP1转运体是一种新发现的IL-1β分泌途径,有望成为解决细胞因子释放综合征等临床问题的新靶标。

地西他滨联合DA方案诱导治疗新生儿难治性急性单核细胞白血病完全缓解1例

1病例资料患儿,女,22天,因“皮肤多发紫色硬结22天”于2022年3月18日入院。患儿出生后即发现颜面部、腹部、双下肢深紫色硬结,渐增大增多,伴气急,无发热。日龄12天皮肤科行左大腿皮肤活检示:肿瘤细胞呈小圆形,核分裂象多见,母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)首先考虑;免疫组化:CD20-TdT-CD3-Ki-67+MPO-CD34-ALK-CD30-EBER-CD21-CD4+CD163+CD8-CD56+BCL6+BCL2+Bcor-C-myc+CD123+,另一家三甲医院阅片亦诊断BPDCN,日龄12天外周白细胞20.98×10^(9)/L,淋巴细胞35.5%,血红蛋白183g/L,血小板179×10^(9)/L。

婴儿急性淋巴细胞白血病的预后因素分析及治疗研究进展

婴儿急性淋巴细胞白血病(IALL)作为一种特殊类型的白血病,随着社会经济的发展和医疗技术的不断进步受到更加广泛的关注。近年来,国际合作以及多项临床试验的开展进一步加深了对其的研究和了解,尽管总体生存率有所提高,但由于多种因素的影响,其预后仍不理想。本综述总结分析了与IALL相关的预后因素,并且回顾了其近年来治疗相关进展,为探讨更有效的治疗策略提供参考。

加强儿童噬血细胞综合征的早期诊断与干预研究

噬血细胞淋巴组织细胞增生症(hemophagocytic lymphohistiocytosis,HLH)是儿科临床上少见但病情凶险、病死率很高的疾病,分家族性、继发性和肿瘤相关性3种类型。其病因复杂,机制尚未完全阐明。有证据表明,该病的发生与编码免疫应答功能相关的蛋白基因缺陷有关,其基本发病机制是在免疫缺陷的基础上,伴有感染、肿瘤及坏死组织细胞等抗原的诱发下,导致细胞因子的大量释放,进而激活单核巨噬细胞发生吞噬现象和多脏器损伤。HLH-2004诊疗指南是当前诊治HLH的主要方法,细胞因子的快速测定有助于HLH的早期诊断。

免疫学诊断在小儿肿瘤中的应用

介绍采用抗人单克隆抗体(单抗)及多色多指标流式细胞术(FCM)对小儿白血病的免疫诊断与分型、人类造血干/祖细胞精确测定以及神经母细胞瘤诊断与随访的经验 ,以提高小儿恶性肿瘤的诊疗水平。

白细胞新单克隆抗体ZCH-2B8a的表达谱分析及其意义

ZCH-2B8a(IgG2a)是作者研究室最近采用髓细胞性白血病细胞系KG1a作为免疫原自行研制的鼠抗人造血细胞分化抗原的单克隆抗体,已提交第8届国际人类白细胞分化抗原协作组会议(HLDA8)鉴定。根据HL-DA8总部反馈信息表明,该抗体识别的抗原性质不明,后者属国际上尚未认识的血细胞膜新的分化抗原。本研究旨在分析ZCH-2B8a单克隆抗体与正常人外周血细胞成分、骨髓及G-CSF动员的外周血CD34+造血干/祖细胞和血液肿瘤细胞系的反应规律及其意义。采用多参数流式细胞术分析2B8a抗体与正常及恶性肿瘤细胞表面的反应性,每种细胞成分重复实验3次,以阳性细胞数≥20%为阳性。结果表明:2B8a抗原在外周血B细胞上表达(3/3例,平均阳性细胞数为26.29%),而在T淋巴细胞和NK细胞上不表达(0/3例);在粒细胞和单核细胞上阳性表达均为2/3例,平均阳性细胞数分别是23.72%和59.84%;在DC细胞、红细胞和血小板上均不表达(0/3例)。2B8a抗原在骨髓CD34+细胞上的阳性表达是3/3例,平均阳性细胞数39.33%,而在G-CSF动员的外周血CD34+细胞上的阳性表达仅1/3例,平均阳性细胞数为1.25%。2B8a抗原在B系细胞系Raji、SMS-SB、Nalm-6和Nall-1上的平均阳性细胞数分别为98.78%、98.61%、94.93%和5.68%;在T系细胞系Molt-3上的平均阳性细胞数为31.40%,而在Molt-4、JM和CCRF-CEM细胞上不表达;在髓系细胞系U937、Meg-01、HL-60、K562、KG1a和HEL92.1.7上的平均阳性细胞数分别为67.78%、33.40%、29.70%、28.19%、16.23%和8.02%;在神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH、KCNR、BE、LAN-1和SK-N-AS细胞以及结肠癌细胞系HR8348细胞上均不表达,而在羊膜细胞系FL细胞上呈一定的阳性表达,平均阳性细胞数为45.03%。结论:在正常外周血,2B8a抗体主要与B淋巴细胞和单核巨噬细胞反应,在骨髓和外周血CD34+造血干/祖细胞中也有不同程度的反应性;在细胞系上,2B8a抗体主要与B系细胞系、单核巨噬细胞系及上皮性肿瘤细胞系反应,提示该抗体有可能用于上述肿瘤的免疫学诊断与治疗。

细胞表面标记分析对小儿白血病疑难病例的诊断意义

用单克隆抗体对83例初诊为急性白血病(急白)患儿的白血病细胞进行表面标记分析,发现9例形态学与免疫学分型诊断不一致,其中3例形态学诊断为ALL中,2例属于淋或T-髓系双表型急白,1例为极低分化型ANLL;形态学分类属于AUL的5例中,1例为AMKL,4例为AML,其中3例可能为定向于单核系的未分化型AML;形态学疑为肿瘤骨髓转移的1例,也证实是AML。作者认为细胞表面标记分析在小儿急白疑难病例的诊断中具有重要作用。

低分化型急性髓细胞性白血病

1987年,Lee等首先报告了10例低分化型急性非淋巴细胞白血病(MD-ANLL),认为它们是一型独特的白血病。国内对该型白血病尚未见报告。本院对196例急性白血病(急白)细胞表面标记和常规形态学(FAB)观察过程中,发现该型白血病8例(4％),现报告如下。材料与方法一、病例 1987年6月～1991年6月来本院诊治的儿童或外院送检细胞表面标记的成人病例各4例,均为男性。形态学诊断:急性淋巴细胞白血病(ALL)L_1型2例,L_2型4例,L_3型2例。二,标本 1例(例5)在当地医院经CODP(环磷酰胺+长春新碱+柔红霉素+泼尼松)

B细胞系特异性单克隆抗体ZCH－4－2E8的制备鉴定及其初步应用

本文报告一种识别Ｂ细胞系白血病相关抗原的鼠单克隆抗体ＺＣＨ－４２Ｅ８（ＩｇＧ１），免疫印迹试验示其所识别的抗原分子量为２４５ｋｄ。经多种细胞系、正常外周血细胞成分、骨髓单个核细胞、胚胎肝、脾、胸腺和１３８例急、慢性白血病细胞的鉴定结果表明，２Ｅ８为Ｂ细胞系特异性单抗，其反应谱与ＣＤ１９类似，但其尚能识别早至１８周龄的胚胎脾（Ｂ）细胞，阳性率为３１．９％（ＣＤ１９为０％）。作者认为：２Ｅ８是一种能用于分化早期Ｂ细胞系急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的诊断和急性未分化型白血病（ＡＵＬ）鉴别诊断的Ｂ细胞系特异性单抗。

多参数流式细胞术观察251例白血病细胞CD14表达的意义

目的 探讨 CD14在白血病细胞的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义。方法 采用 CD45 /SSC参数设门多色流式细胞术分析 2 5 1例白血病细胞 CD14及其它白血病相关抗原的表达情况。结果 2 5 1例中有 19例 ( 7.5 % )白血病细胞表达 CD14,95例急性髓系白血病 ( AML )中 16例 ( 16 .8% )白血病细胞表达 CD14,130例淋系白血病未见 CD14阳性的病例。 M4和 M5b CD14的阳性率 ( 9/ 14;6 / 6 )明显高于 M2 ( 1/ 30 ) ( P=0 .0 0 1;P=3.6× 10 - 6 )及 M5a( 0 / 5 ) ( P=0 .0 3;P=2 .2× 10 - 3 )。标准 CD14单抗均不与 5例 M5a细胞反应 ,而自制 CD14新克隆 2 F9单抗则全部阳性。5例 M5a中 1例 CD15和 2 9例 M2 中 13例 CD11b的阳性率明显低于 M5b( 6 / 6 ,P=0 .0 2 ;6 / 6 ,P=0 .0 2 )。在 AML 组中 ,CD14的表达与 CD117呈负相关 ( r=- 0 .2 ,n=81,P=0 .0 3) ,与 CD11b、CD15及HL A- DR呈正相关 ( r=0 .5 ,n=93,P=0 .0 0 1;r=0 .4,n=95 ,P=0 .0 0 1;r=0 .2 ,n=95 ,P=0 .0 2 )。结论 CD14有助于淋巴系白血病、髓系白血病及其单核细胞相关性白血病的诊断与鉴别 ,其对单核细胞相关性白血病免疫分型诊断中的特异性为 96 .7% ,敏感性为 6 0 .0 %。

佛波酯对人外周血淋巴细胞CD3和CD4及CD8分子表达的作用

目的 :分析佛波酯 (PMA)对细胞表面 CD3、CD4和 CD8表达的影响 ,及与胞浆内细胞因子分泌的关系。方法 :取 10例健康儿童及 2 7例呼吸道感染患儿外周血单个核细胞作体外培养后 ,用不同浓度及时间 PMA刺激后作胞浆内细胞因子及细胞表面分子标记物分析。结果 :与未刺激组相比 ,PMA不同浓度 (5、10、2 0和 5 0 ng/ ml)刺激4 h后 CD4表达均有明显下降 ,分别从 4 1.0 3%、4 0 .18%、4 2 .2 9%及 4 2 .85 %下调至 2 8.2 2 %、2 4 .4 4%、2 6 .0 9%及2 5 .70 % ,10 ng/ ml浓度刺激 4、6 h后细胞表面 CD4也有显著下调 ,分别从 4 5 .5 4%及 4 0 .5 6 %下调至 2 8.88%及2 0 .0 3% ,且 CD4表达与胞浆内细胞因子分泌呈负相关 (r=- 0 .6 0 1,P<0 .0 0 1)。PMA对 CD3(刺激前后分别为4 9.5 7%及 5 1.5 4% )及 CD8(刺激前后分别为 13.0 2 %及 12 .85 % )表达差异无显著性 ,而在 CD3+ T淋巴细胞中 ,CD4 -CD8-细胞仅占 5 .5 2 %。结论 :PMA刺激对辅助性 T淋巴细胞 (Th)表面 CD4表达有显著下调作用 ,且 Th细胞胞浆内细胞因子分泌越多 ,CD4分子下调越明显 ,而 PMA对 CD3及 CD8无明显下调作用。可采用 CD3+ CD8-表面标记的方法间接定义 Th细胞 ,替代 CD4分子 ,以避免 PMA这种效应对 Th1/ Th2数量检测所带来的困难。

直标鼠抗人CD14单克隆抗体2F9-FITC的研制及鉴定

目的研制异硫氰酸荧光素(Fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记的直标单克隆抗体2F9-FITC,用于白血病的免疫分型诊断。方法2F9杂交瘤细胞的亚克隆,2F9腹水的制备、纯化、纯度鉴定按照常规方法进行;参考改良Marsshall氏法,制备FITC标记的2F9-FITC单抗;通过流式细胞术鉴定单抗亚型,比较2F9-FITC和标准CD14-FITC在不同类型白血病细胞上的表达情况。结果制备了大量高纯度的IgG1κ亚型2F9单抗,成功研制了直标单抗2F9-FITC,A495/A280比值为0.44;2F9-FITC与CD14-FITC在单核细胞上反应的阳性细胞百分数分别为84.50%及90.08%,而在淋巴细胞仅为0.52%和1.01%;2F9-FITC与标准CD14-FITC在各类白血病细胞上的阳性细胞百分数的差异不显著(n=23,t=0.922,P=0.367)。结论研制的2F9-FITC能够替代进口的同类高质量单抗试剂,用于单核细胞相关性白血病的免疫诊断。

CD117/CD11b在急性早幼粒细胞白血病不同病期的表达变化

为了了解CD117/CD11b在急性早幼粒白血病细胞初诊及治疗后的表达变化,探讨其表达变化对APL诊断和预后的意义,采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原分析,应用RT-PCR技术检测骨髓中PML/RARα融合基因的mRNA表达。结果表明APL与CML慢性期都高表达MPO、CD13和CD33,而几乎不表达CD34、HLA-DR及T,B淋巴系列标志。有14.5%的APL患者表达CD56,有48.2%的APL患者表达CD15,CD15在APL的表达明显低于CML慢性期(48.2%vs95.2%,P<0.01)。有78.3%的APL患者表达CD117,而在CML慢性期不表达CD117。CD11b在APL的表达率仅为16.9%,而在CML慢性期几乎都表达CD11b。有72.3%的APL患者呈CD117+CD11b-表型,而在CML慢性期患者细胞中均未见此表型,它几乎均呈CD117-CD11b+表型。11例表型为CD117+CD11b-的APL患者经治疗获完全缓解,在2个月以后CD117阳性细胞百分率均小于5%,同时细胞高表达CD11b,呈CD117-CD11b+表型。检测31例APL患者PML/RARα融合基因,25例该融合基因阳性,阳性率为80.6%,其中16例(64%)为PML/RARα基因L型,9例(36%)为S型。16例PML/RARα融合基因L型APL患者CD117表达有14例(87.5%),9例S型CD117表达有4例(44.4%),6例PML/RARα融合基因阴性APL患者CD117表达有2例(33.3%)。结论CD117/CD11b表型分析有助于APL与其它AML亚型及CML慢性期细胞的鉴别,CD117+CD11b-表型有助于APL细胞和APL患者缓解恢复期的良性髓系增生细胞的区分,对APL患者的治疗方案选择、预后判断以及发病机理的研究等均有重要价值。

小儿噬血细胞性淋巴组织细胞增生症41例诊断及预后分析

目的探讨小儿噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的诊断及预后情况。方法回顾性分析41例小儿噬血细胞性淋巴组织细胞增生症患儿的临床资料。结果41例中男20例,女21例;中位年龄2岁(23d～13岁),均符合诊断标准。2例继发严重心脏并发症。应用流式细胞仪检测血细胞因子9例,结果白介素2、4、6和肿瘤坏死因子正常或轻度增高,白介素10和γ干扰素均增高或显著增高,显著增高与预后不良有关。随访时间3个月～5年,至今好转或治愈23例(占56.1%),死亡11例(占26.8%),失访7例(占17.0%)。结论小儿噬血细胞性淋巴组织细胞增生症发病年龄多数较小,病死率高,可见严重心脏并发症;白介素10和γ干扰素显著增高可能与预后不良有关。

CD分子及其单克隆抗体在小儿血液肿瘤诊疗中的应用

直至第7届国际人类白细胞分化抗原协作组会议(HLDA7,2000.6,英国Harrogate市召开)为止,已有247个人类白细胞分化抗原(Cluster of Differentiation,简称CD)分子及其单克隆抗体被该国际组织鉴定和命名[1].在过去的近30年间,CD分子及其单抗的应用已使小儿血液肿瘤学的基础研究和临床应用取得了令人鼓舞的进展,人鼠嵌合型CD20单克隆抗体在淋巴瘤治疗中的成功应用,又掀起了导向治疗的热潮[2].以下就该领域在小儿血液肿瘤学诊疗中的应用及进展作一简单介绍.